CN104351262A - 毛大丁草提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了毛大丁草提取物及其制备方法与应用。本发明所提供的毛大丁草提取物及其制备方法与应用中，所述毛大丁草提取物为下述A1)-A7)中的任一种：A1)毛大丁草95％乙醇提取物；A2)毛大丁草石油醚萃取物；A3)毛大丁草乙酸乙酯萃取物；A4)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；A5)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；A6)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；A7)毛大丁草乙酸乙酯洗脱物。实验证明，本发明的毛大丁草提取物对植物病原真菌有抑制作用，可直接用于抑制对植物病原真菌，也可制备植物病原真菌抑制剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域中毛大丁草提取物及其制备方法与应用。
背景技术
植物病原真菌广泛分布于世界各地，引起农作物、林木、蔬菜、经济作物、观赏作物病害，常造成植物早期失绿、叶枯、落叶、枯萎和腐烂，严重影响植物生长发育、产量及品质，给农业生产和人民生活带来严重损失。目前植物真菌病害防治仍以有机合成的化学药剂防治为主,但大量化学农药的使用,带来了很大的负面生态影响,且容易使植物产生药害和抗药性,严重影响抗植物病原真菌制剂在农业生产中的应用。近年来，随着日光温室、塑料大棚、地膜覆盖等保护措施的改进，果蔬的真菌病害严重，已经成为制约我国水果和蔬菜高效、安全生产的主要原因，常使国家经济和人民生活遭受严重损失。随着无公害农产品生产规模的逐步扩大和化学农药使用产生的抗药性、农药残留等问题的日益严重，寻找和使用无毒，高效的新型植物源农药越来越受到人们的重视。
毛大丁草(Gerbera piloselloides)为菊科大丁草属植物,多年生、被毛草本，生于林缘、草丛中或矿野荒地上。产于西藏、云南、四川、贵州、广西、广东、湖南、湖北、江西、江苏、浙江和福建等省区。毛大丁草全草药用,具有清热利湿、解毒消肿、宣肺、止咳等作用，最早药用记载可溯至明代的《滇南本草》。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何用毛大丁草抑制植物病原真菌。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用。
本发明提供的毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用；所述毛大丁草提取物为下述A1)-A5)中的任一种：
A1)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；
A2)毛大丁草乙酸乙酯萃取物；
A3)毛大丁草石油醚萃取物；
A4)毛大丁草95％乙醇提取物；
A5)毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；
所述毛大丁草95％乙醇提取物按照包括下述A41)步骤的方法制备：
A41)用95％乙醇水溶液提取毛大丁草，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到所述毛大丁草95％乙醇提取物；
所述毛大丁草石油醚萃取物按照包括下述A31)步骤的方法制备：
A31)将所述毛大丁草95％乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取该混悬液，得到石油醚相和水相，除去所述石油醚相中的石油醚即得到所述毛大丁草石油醚萃取物；
所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物按照包括下述A21)步骤的方法制备：
A21)用乙酸乙酯萃取所述水相，得到乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物按照包括下述A11)步骤的方法制备：
A11)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；所述硅胶柱层析包括：用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物按照包括下述A51)步骤的方法制备：
A51)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析包括：先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，再用乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯洗脱液，除去所述乙酸乙酯洗脱液中的乙酸乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；
所述乙酸乙酯-石油醚为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物；
所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量大于等于1％且小于100％；
所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌和马铃薯干腐病菌这五种中的五种、四种、三种、二种或一种。
上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用中，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-50％。
上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用中，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-20％。
上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用中，
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为下述B1)-B3)中的任一种：
B1)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；
B2)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；
B3)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物按照包括下述B11)步骤的方法制备：
B11)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；所述硅胶柱层析包括：用乙酸乙酯-石油醚＝9％进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物按照包括下述B21)步骤的方法制备：
B21)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；所述硅胶柱层析包括：先用乙酸乙酯-石油醚＝9％进行洗脱，再用乙酸乙酯-石油醚＝20％进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物按照包括下述B31)步骤的方法制备：
B31)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；所述硅胶柱层析包括：先用乙酸乙酯-石油醚＝9％进行洗脱，再用乙酸乙酯-石油醚＝20％进行洗脱，然后用乙酸乙酯-石油醚＝50％进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；
所述乙酸乙酯-石油醚＝9％为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物，所述混合物中所述乙酸乙酯和所述石油醚的体积比为9:91；
所述乙酸乙酯-石油醚＝20％为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物，所述混合物中所述乙酸乙酯和所述石油醚的体积比为20:80；
所述乙酸乙酯-石油醚＝50％为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物，所述混合物中所述乙酸乙酯和所述石油醚的体积比为50:50。
上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用中，所述毛大丁草可为毛大丁草全草。
为解决上述技术问题，本发明还提供了毛大丁草提取物的制备方法。
本发明所提供的毛大丁草提取物的制备方法，为下述M)-Q)的任一种：
M)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草95％乙醇提取物；所述毛大丁草95％乙醇提取物的制备方法包括权利要求1所述A41)；
N)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草石油醚萃取物；所述毛大丁草石油醚萃取物的制备方法包括权利要求1所述A31)；
O)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物的制备方法包括权利要求1所述A21)；
P)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物的制备方法包括权利要求1所述A11)；所述乙酸乙酯-石油醚为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物；所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量大于等于1％且小于100％；进一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-50％；更进一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-20％；
Q)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的制备方法包括权利要求1所述A51)。
上述毛大丁草提取物的制备方法中，所述P)为下述R)或S)或T)；
R)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的制备方法包括所述B11)；
S)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的制备方法包括所述B21)；
T)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的制备方法包括所述B31)。
为解决上述技术问题，本发明还提供了毛大丁草提取物。
本发明所提供的毛大丁草提取物，为利用上述毛大丁草提取物的制备方法得到的毛大丁草95％乙醇提取物和/或毛大丁草石油醚萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物具体可为毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物。
为解决上述技术问题，本发明还提供了毛大丁草在制备植物病原真菌抑制剂中的应用。
本发明所提供的毛大丁草在制备植物病原真菌抑制剂中的应用中，所述植物病原真菌抑制剂的活性成分为上述毛大丁草提取物；所述毛大丁草提取物可为毛大丁草95％乙醇提取物和/或毛大丁草石油醚萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物具体可为毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物。
上述毛大丁草在制备植物病原真菌抑制剂中的应用中，所述植物病原真菌可为马铃薯干腐病病菌、李干腐病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌这五种中的五种、四种、三种、二种或一种。
为解决上述技术问题，本发明还提供了植物病原真菌抑制剂。
本发明所提供的植物病原真菌抑制剂，所述植物病原真菌抑制剂的活性成分为上述毛大丁草提取物；所述毛大丁草提取物可为毛大丁草95％乙醇提取物和/或毛大丁草石油醚萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物具体可为毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物。
上述植物病原真菌抑制剂中，所述植物病原真菌可为马铃薯干腐病病菌、李干腐病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌这五种中的五种、四种、三种、二种或一种。
上文中，所述95％乙醇水溶液是乙醇体积百分含量为95％的水溶液。
实验证明，本发明的毛大丁草提取物对植物病原真菌有抑制作用：毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物对番茄灰霉病菌的抑菌率为58.7％±3.1％、对白菜黑斑病菌的抑菌率为58.1％±0.7％、对桃褐腐病菌的抑菌率为67.9％±4.3％、对李干腐病菌的抑菌率可达72.0％±4.1％；毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物对番茄灰霉病菌的抑菌率为56.3％±5.4％、对白菜黑斑病菌的抑菌率为65.9％±2.8％、对桃褐腐病菌的抑菌率达76.7％±1.8％、对李干腐病菌的抑菌率为44.8％±0.7％；毛大丁草乙酸乙酯萃取物对番茄灰霉病菌的抑菌率为58.0％±0.7％、对白菜黑斑病菌的抑菌率为40.6％±0.7％、对桃褐腐病菌的抑菌率达77.6％±3.1％；毛大丁草石油醚萃取物对桃褐腐病菌的抑菌率为51.1％±0.6％、对李干腐病菌的抑菌率为56.9％±4.6％；毛大丁草95％乙醇提取物对番茄灰霉病菌的抑菌率为42.3％±2.9％、对桃褐腐病菌的抑菌率为50.5％±1.7％、对李干腐病菌的抑菌率为32.5％±10.7％；毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物对白菜黑斑病菌的抑菌率为44.7％±1.4％、对桃褐腐病菌的抑菌率为42.2％±6.1％；毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对桃褐腐病菌的抑菌率为33.3％±2.5％。
结果表明，毛大丁草提取物对上述被测植物病原菌有不同的抑制作用，其中，乙酸乙酯-石油醚＝9％毛大丁草洗脱物和乙酸乙酯-石油醚＝20％毛大丁草洗脱物对番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病菌、桃褐腐病菌和李干腐病菌的抑制作用明显，毛大丁草提取物可直接用于抑制对植物病原真菌，也可制备植物病原真菌抑制剂。本发明以中草药毛大丁草为原料开发了一种环境友好、高效、低毒的潜在新型和谐农药，对生态长远发展、人类的健康和病害的综合治理都具有深远的意义。与传统的农药相比，本发明的毛大丁草提取物具有以下的特点：本发明的毛大丁草提取物，对番茄灰霉病病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌和白菜黑斑病菌具有明显的抑制作用，可作为一种植物源农药开发；本发明所使用的毛大丁草在我国分布广泛，原材料易获得；毛大丁草为菊科植物，毒性小。
附图说明
图1为毛大丁草95％乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、乙酸乙酯-石油醚＝20％毛大丁草洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物和毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对桃褐腐病菌的抑制作用。
图中，A为不含毛大丁草提取物的对照培养基平板上桃褐腐病菌的生长状况，B为含有0.1mg/mL毛大丁草95％乙醇提取物的带药培养基平板上桃褐腐病菌的生长状况，C为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的带药培养基平板上桃褐腐病菌的生长状况，D为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的带药培养基平板上桃褐腐病菌的生长状况，E为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的带药培养基平板上桃褐腐病菌的生长状况，F为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的带药培养基平板上桃褐腐病菌的生长状况。
图2为毛大丁草95％乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物和毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对番茄灰霉病菌的抑制作用。
图中，A为不含毛大丁草提取物的对照培养基平板上番茄灰霉病菌的生长状况，B为含有0.1mg/mL毛大丁草95％乙醇提取物的带药培养基平板上番茄灰霉病菌的生长状况，C为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的带药培养基平板上番茄灰霉病菌的生长状况，D为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的带药培养基平板上番茄灰霉病菌的生长状况，E为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的带药培养基平板上番茄灰霉病菌的生长状况，F为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的带药培养基平板上番茄灰霉病菌的生长状况。
图3为毛大丁草95％乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物和毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对白菜黑斑病菌的抑制作用。
图中，A为不含毛大丁草提取物的对照培养基平板上白菜黑斑病菌的生长状况，B为含有0.1mg/mL毛大丁草95％乙醇提取物的带药培养基平板上白菜黑斑病菌的生长状况，C为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的带药培养基平板上白菜黑斑病菌的生长状况，D为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的带药培养基平板上白菜黑斑病菌的生长状况，E为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的带药培养基平板上白菜黑斑病菌的生长状况，F为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的带药培养基平板上白菜黑斑病菌的生长状况。
图4为毛大丁草95％乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物和毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对李干腐病菌的抑制作用。
图中，A为不含毛大丁草提取物的对照培养基平板上李干腐病菌的生长状况，B为含有0.1mg/mL毛大丁草95％乙醇提取物的带药培养基平板上李干腐病菌的生长状况，C为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的带药培养基平板上李干腐病菌的生长状况，D为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的带药培养基平板上李干腐病菌的生长状况，E为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的带药培养基平板上李干腐病菌的生长状况，F为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的带药培养基平板上李干腐病菌的生长状况。
图5为毛大丁草95％乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物和毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对马铃薯干腐病菌的抑制作用。
图中，A为不含毛大丁草提取物的对照培养基平板上马铃薯干腐病菌的生长状况，B为含有0.1mg/mL毛大丁草95％乙醇提取物的带药培养基平板上马铃薯干腐病菌的生长状况，C为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的带药培养基平板上马铃薯干腐病菌的生长状况，D为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的带药培养基平板上马铃薯干腐病菌的生长状况，E为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的带药培养基平板上马铃薯干腐病菌的生长状况，F为含有0.1mg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的带药培养基平板上马铃薯干腐病菌的生长状况。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)(朱建兰.番茄灰霉病菌的生物学特性研究，甘肃农业大学学报，1995，30(1)，73-78.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称番茄灰霉病菌。
下述实施例中的桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)(胡海文，杨海清，王朋，刘素花，赵晓燕，刘正坪.桃褐腐病菌拮抗细菌的分离筛选与鉴定中国农学通报，2009,25(12):195-200)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称桃褐腐病菌。
下述实施例中的李干腐病菌(Polvporus hirsutus)(任娜敏，马焕普，刘志民.拮抗放线菌F1发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院学报，2012,27(1),32-35.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称李干腐病菌。
下述实施例中的白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)(任娜敏，马焕普，刘志民.拮抗放线菌F1发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院学报，2012,27(1),32-35.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称白菜黑斑病菌。
下述实施例中的马铃薯干腐病菌(Pythium coeruleum)(卜春亚等.瑞香狼毒中抑制植物病原真菌活性物质研究.植物保护.北方园艺.2013(19)：120-123)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称马铃薯干腐病菌。
下述实施例中的毛大丁草，产地湖北，购买自安徽亳州中药材市场。
下述实施例中的95％乙醇水溶液是乙醇体积百分含量为95％的水溶液。下述实施例中毛大丁草提取物的制备均在20-25℃进行。
下述实施例中乙酸乙酯-石油醚＝9％均为乙酸乙酯和石油醚按照9:91的体积比混合得到的混合物；
下述实施例中乙酸乙酯-石油醚＝20％均为乙酸乙酯和石油醚按照20:80的体积比混合得到的混合物；
下述实施例中乙酸乙酯-石油醚＝50％均为乙酸乙酯和石油醚按照50:50的体积比混合得到的混合物。
实施例1、毛大丁草提取物的制备及其抑制植物病原真菌实验
1、毛大丁草提取物的制备
本步骤制备了下述八种毛大丁草提取物：毛大丁草95％乙醇提取物、毛大丁草石油醚萃取物、毛大丁草乙酸乙酯萃取物、毛大丁草水溶物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯洗脱物。具体制备方法如下：
1)将毛大丁草全草在液氮中研磨粉碎后，加入95％乙醇水溶液进行提取，收集提取液，减压浓缩除去所述提取液中的乙醇得到浸膏，该浸膏即为毛大丁草95％乙醇提取物；
2)将步骤1)的毛大丁草95％乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取该混悬液，分别收集石油醚相和水相，减压浓缩除去该石油醚相中的石油醚即得到毛大丁草石油醚萃取物；
3)用乙酸乙酯萃取步骤2)的水相，分别收集乙酸乙酯相和水相，减压浓缩除去该乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到毛大丁草乙酸乙酯萃取物，减压浓缩除去该水相中的水即得到毛大丁草水溶物；
4)将步骤3)的毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物、毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析的洗脱是依次乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱，然后用乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱，再用乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱，最后用乙酸乙酯洗脱，收集上述四部分的洗脱液，得到毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物，毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物，毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物和毛大丁草乙酸乙酯洗脱物。具体方法如下：
采用瑞典biotage公司的色谱仪(SP1-B2B0)、采用瑞典biotage公司的目录号为FSK0-1107-0100的SNAP Cartridge KP-Sil 100g的层析柱进行硅胶柱层析。其中，色谱仪带有紫外检测器，目录号为FSK0-1107-0100的SNAP Cartridge KP-Sil100g的层析柱的柱长为16cm，内径为4cm，层析介质为硅胶(200-300目)，该层析柱中的硅胶质量为100g，该层析柱的柱床体积为145ml。
将步骤3)的毛大丁草乙酸乙酯萃取物与硅胶(200-300目)按质量比1:1拌样，将该样品上完样后，用上述乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱至254nm不再出现色谱峰，共用13个柱体积的乙酸乙酯-石油醚＝9％洗柱，流速为20ml/min，收集该13个柱体积的乙酸乙酯-石油醚洗脱出的液体，将该液体称为毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱液，减压浓缩除去该毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱液中的乙酸乙酯-石油醚，得到毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；接着再用乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱至254nm不再出现色谱峰，共用15个柱体积的乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱，流速为20ml/min，收集该15个柱体积的洗脱液，将该液体称为毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱液，减压浓缩除去该毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱液中的乙酸乙酯和石油醚，得到毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；然后用乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱至254nm不再出现色谱峰，共用12个柱体积的乙酸乙酯-石油醚＝50％洗柱，流速为20ml/min，收集该12个柱体积的乙酸乙酯-石油醚洗脱出的液体，将该液体称为毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱液，减压浓缩除去该毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱液中的乙酸乙酯和石油醚，得到毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；最后用乙酸乙酯洗脱至254nm不再出现色谱峰，共用10个柱体积的乙酸乙酯洗柱，流速为20ml/min，收集该10个柱体积的乙酸乙酯脱出的液体，将该液体称为毛大丁草乙酸乙酯洗脱液，减压浓缩除去该毛大丁草乙酸乙酯洗脱液中的乙酸乙酯，得到毛大丁草乙酸乙酯洗脱物。
2、毛大丁草提取物抑制植物病原真菌的活性
分别以番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌和马铃薯干腐病菌这五种真菌菌株中的一种菌株为供试菌株，按照下述实验方法测定步骤1的8种毛大丁草提取物抑制植物病原真菌的活性：
将步骤1中8种毛大丁草提取物中的每一种毛大丁草提取物分别单独溶于二甲基亚砜(DMSO)中，使每一种毛大丁草提取物的浓度均为10mg/ml，得到浓度均为10mg/ml的以下8种毛大丁草提取物二甲基亚砜溶液：10mg/ml的毛大丁草95％乙醇提取物的二甲基亚砜溶液、10mg/ml的毛大丁草石油醚萃取物的二甲基亚砜溶液、10mg/ml毛大丁草乙酸乙酯萃取物二甲基亚砜溶液、10mg/ml毛大丁草水溶物的二甲基亚砜溶液、10mg/ml毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的二甲基亚砜溶液、10mg/ml毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的二甲基亚砜溶液,10mg/ml毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的二甲基亚砜溶液、10mg/ml毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的二甲基亚砜溶液。
吸取浓度为10mg/ml的一种毛大丁草提取物的二甲基亚砜溶液1ml加到装有100ml融化的PDA培养基(45℃)的三角瓶中混匀，得到101ml药品培养基，将该101ml培养基平均倒入5个灭菌培养皿(直径9cm)中，制成该种毛大丁草提取物的含量为0.1mg/ml的带药培养基平板。
吸取1ml二甲基亚砜加到装有100ml融化的PDA培养基(45℃)的三角瓶中混匀，得到101ml对照培养基，该101ml对照培养基平均倒入5个灭菌培养皿(直径9cm)中，制成对照培养基平板。
每一种供试菌株的测定方法均如下：供试菌株在PDA培养基中于25℃培养5天后在菌落边缘菌丝生长旺盛处用打孔器打取直径为0.8cm的菌饼，分别接种于每个带药培养基平板和每个对照培养基中央(有菌丝的一面向下)。每个带药培养基平板和每个对照培养基平板各放一个菌饼，每处理设三个重复(每个重复一个平板)，25℃培养箱中培养7天后，采用十字交叉法测定菌落直径，按以下公式计算抑菌率：抑菌率＝(对照培养基平板菌落直径-0.8)-(带药培养基平板菌落直径-0.8)/(对照培养基平板菌落直径-0.8)。
其中，PDA培养基按照如下方法配制：马铃薯200g(去皮的马铃薯切成小块，煮沸30分钟过滤去滤液)、葡萄糖20g，琼脂18-20g，用蒸馏水定容至1000ml，121℃蒸气灭菌20min。
结果如表1所示，毛大丁草提取物对植物病原真菌有抑制作用：毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物对番茄灰霉病菌的抑菌率为58.7％±3.1％、对白菜黑斑病菌的抑菌率为58.1％±0.7％、对桃褐腐病菌的抑菌率为67.9％±4.3％、对李干腐病菌的抑菌率可达72.0％±4.1％；毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物对番茄灰霉病菌的抑菌率为56.3％±5.4％、对白菜黑斑病菌的抑菌率为65.9％±2.8％、对桃褐腐病菌的抑菌率达76.7％±1.8％、对李干腐病菌的抑菌率为44.8％±0.7％；毛大丁草乙酸乙酯萃取物对番茄灰霉病菌的抑菌率为58.0％±0.7％、对白菜黑斑病菌的抑菌率为40.6％±0.7％、对桃褐腐病菌的抑菌率达77.6％±3.1％；毛大丁草石油醚萃取物对桃褐腐病菌的抑菌率为51.1％±0.6％、对李干腐病菌的抑菌率为56.9％±4.6％；毛大丁草95％乙醇提取物对番茄灰霉病菌的抑菌率为42.3％±2.9％、对桃褐腐病菌的抑菌率为50.5％±1.7％、对李干腐病菌的抑菌率为32.5％±10.7％；毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物对白菜黑斑病菌的抑菌率为44.7％±1.4％、对桃褐腐病菌的抑菌率为42.2％±6.1％；毛大丁草乙酸乙酯洗脱物对桃褐腐病菌的抑菌率为33.3％±2.5％。结果表明，毛大丁草提取物可直接用于抑制对植物病原真菌，也可制备植物病原真菌抑制剂。
表1、毛大丁草提取物对植物病原真菌的抑菌率(％)
Claims (10)
1.毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的应用；所述毛大丁草提取物为下述A1)-A5)中的任一种：
A1)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；
A2)毛大丁草乙酸乙酯萃取物；
A3)毛大丁草石油醚萃取物；
A4)毛大丁草95％乙醇提取物；
A5)毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；
所述毛大丁草95％乙醇提取物按照包括下述A41)步骤的方法制备：
A41)用95％乙醇水溶液提取毛大丁草，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到所述毛大丁草95％乙醇提取物；
所述毛大丁草石油醚萃取物按照包括下述A31)步骤的方法制备：
A31)将所述毛大丁草95％乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取该混悬液，得到石油醚相和水相，除去所述石油醚相中的石油醚即得到所述毛大丁草石油醚萃取物；
所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物按照包括下述A21)步骤的方法制备：
A21)用乙酸乙酯萃取所述水相，得到乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物按照包括下述A11)步骤的方法制备：
A11)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；所述硅胶柱层析包括：用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物按照包括下述A51)步骤的方法制备：
A51)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析包括：先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，再用乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯洗脱液，除去所述乙酸乙酯洗脱液中的乙酸乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；
所述乙酸乙酯-石油醚为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物；
所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量大于等于1％且小于100％；
所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌和马铃薯干腐病菌这五种中的五种、四种、三种、二种或一种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-50％。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-20％。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为下述B1)-B3)中的任一种：
B1)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；
B2)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；
B3)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物按照包括下述B11)步骤的方法制备：
B11)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；所述硅胶柱层析包括：用乙酸乙酯-石油醚＝9％进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物按照包括下述B21)步骤的方法制备：
B21)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；所述硅胶柱层析包括：先用乙酸乙酯-石油醚＝9％进行洗脱，再用乙酸乙酯-石油醚＝20％进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；
所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物按照包括下述B31)步骤的方法制备：
B31)将所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；所述硅胶柱层析包括：先用乙酸乙酯-石油醚＝9％进行洗脱，再用乙酸乙酯-石油醚＝20％进行洗脱，然后用乙酸乙酯-石油醚＝50％进行洗脱，收集洗脱出的液体，将该洗脱出的液体称为乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱液，除去所述乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；
所述乙酸乙酯-石油醚＝9％为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物，所述混合物中所述乙酸乙酯和所述石油醚的体积比为9:91；
所述乙酸乙酯-石油醚＝20％为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物，所述混合物中所述乙酸乙酯和所述石油醚的体积比为20:80；
所述乙酸乙酯-石油醚＝50％为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物，所述混合物中所述乙酸乙酯和所述石油醚的体积比为50:50。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述毛大丁草为毛大丁草全草。
6.权利要求1-3中任一所述的毛大丁草提取物的制备方法，为下述M)-Q)的任一种：
M)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草95％乙醇提取物；所述毛大丁草95％乙醇提取物的制备方法包括权利要求1所述A41)；
N)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草石油醚萃取物；所述毛大丁草石油醚萃取物的制备方法包括权利要求1所述A31)；
O)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物的制备方法包括权利要求1所述A21)；
P)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物的制备方法包括权利要求1所述A11)；所述乙酸乙酯-石油醚为由乙酸乙酯和石油醚组成的混合物；所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量大于等于1％且小于100％；进一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-50％；更进一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的体积含量为9％-20％；
Q)所述毛大丁草提取物为所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯洗脱物的制备方法包括权利要求1所述A51)。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述P)为下述R)或S)或T)；
R)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为权利要求4所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脱物的制备方法包括权利要求4所述B11)；
S)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为权利要求4所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脱物的制备方法包括权利要求4所述B21)；
T)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脱物为权利要求4所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脱物的制备方法包括权利要求4所述B31)。
8.由权利要求6或7所述的制备方法制备的毛大丁草提取物。
9.毛大丁草在制备植物病原真菌抑制剂中的应用，所述植物病原真菌抑制剂的活性成分为权利要求8所述的毛大丁草提取物；所述植物病原真菌为马铃薯干腐病病菌、李干腐病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌这五种中的五种、四种、三种、二种或一种。
10.植物病原真菌抑制剂，所述植物病原真菌抑制剂的活性成分为权利要求8所述的毛大丁草提取物；所述植物病原真菌为马铃薯干腐病病菌、李干腐病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌这五种中的五种、四种、三种、二种或一种。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 肖瑛等: "毛大丁草化学成分的研究", 《中草药》, vol. 34, no. 2, 28 February 2003 (2003-02-28), pages 2 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107496485A (zh) * | 2017-09-29 | 2017-12-22 | 北京健旭康技术有限公司 | 毛大丁草的益肝作用及应用技术 |
| CN108685964A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-10-23 | 贵州医科大学 | 毛大丁草提取物的应用及其有效组分制备方法 |
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