CN104341316A

CN104341316A - 一类二芳酰胺类衍生物及其制备方法、药物组合物及用途

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Publication number: CN104341316A
Application number: CN201310330570.2A
Authority: CN
Inventors: 胡立宏; 沈旭; 刘鹏; 陈莉莉; 雷敏; 陈静
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2013-07-31
Filing date: 2013-07-31
Publication date: 2015-02-11
Anticipated expiration: 2033-07-31
Also published as: CN104341316B

Abstract

本发明提供了一种如下式（I）所示结构的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其制备方法，包含其的组合物及其医药用途。本发明所述式（I）所示结构的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐对FXR具有拮抗作用，整体动物试验表明，该类化合物具有降血糖、降血脂之功效。该类化合物可用于治疗高血脂和2型糖尿病。

Description

一类二芳酰胺类衍生物及其制备方法、药物组合物及用途

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体而言，涉及一种二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其制备方法，包含其的组合物及其医药用途，更具体而言，涉及拮抗法尼脂X受体（FXR）的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其制备方法，以及其药物组合物和医药用途。

背景技术

糖尿病作为一种慢性代谢性疾病，其发病率日益增高，据世界卫生组织统计，2000年全世界糖尿病患者人数为1.71亿，到2030年将达到3.66亿。目前我国的糖尿病患者已有3980万，位居全球第二。据预测，到2025年，中国糖尿病患者将达到5900万人。由糖尿病并发症引起的死亡人数在发达国家已经列第3位（心脑血管和癌症之后），糖尿病已成为世界三大疾病之一，因此对该病的防治研究已经成为各国医药学界的重要课题。糖尿病主要分为1型和2型，后者占患者群体的90%以上。2型糖尿病是终身性疾病，许多患者伴有高血压、糖尿病肾病、血脂代谢紊乱或视网膜病变等多种并发症。目前普遍认为胰岛素抵抗（Insulin Resistance，IR）是引发2型糖尿病的主因。因此，增加胰岛素敏感性为治疗2型糖尿病的主攻方向之一。近年来，糖尿病患者出现年轻化的趋势，20岁以下人群中糖尿病患者由1980年的1.0%上升到1996年的3.2%，患病人数约占全球糖尿病病人的1/5。由于糖尿病诊断分型的病理生理不同，在进行药效学研究时应根据适应症的不同选择不同的药效学试验方案。由此可见，研制用于糖尿病防治的药物一直是新药开发中的热点和难点之一。世界卫生组织预测，如果不采取措施，在未来的10年中，仅糖尿病、心脏病、中风就将给中国带来至少5500亿美元的经济损失。因此，寻找糖尿病的治疗方案已经成为各大制药公司和医药研究机构的重要研究方向之一。针对这类疾病研究创新药物，对实现我国人口与健康领域的国家目标及构建和谐社会具有重要的意义，也是我国经济发展的紧迫需求。

目前国内外开发糖尿病治疗药物的主要靶标可以分为四类：一是糖代谢调控因子，如与葡萄糖代谢相关的葡萄糖激酶(GK)，果糖-1,6-二磷酸酯酶（FBP），糖原磷酸酶（GP），将葡萄糖输送入血的葡萄糖转运子（SGLT），调节葡萄糖内稳态的AMP激活的激酶（AMPK）等；二是脂肪细胞和脂质水平调节因子，如调控脂质分解的激素敏感脂质分解酶（HSL），脂质受体（游离脂肪酸受体GPR40），调控脂肪组织功能的肾上腺素受体（β3AR）；三是调控糖、脂代谢的调控因子，多为核受体，如可与众多核受体形成同源或异源二聚体的维甲酸X受体（RXR），过氧化物酶体增殖激活受体（PPAR），肝X受体（LXR），法尼脂X受体（FXR），糖皮质激素受体（GR）等。这些受体信号激活不同的基因表达，对糖、脂代谢具有重要的作用；四是调节胰岛素敏感性和炎症反应的因子，如胰岛素受体酪氨酸激酶（IRTP），磷酸化酪氨酸磷酸酶（PTP-1B），糖原合成激酶（GSK3β），γ-B激酶抑制因子（IKKβ）等。尽管目前使用的一线药物在糖尿病治疗上显示了一定疗效，但均有不同程度的毒副作用（如63%的患者无法达到HbA-1c水平低于7%的标准，并发症的几率仍然较高，患者无法避免胰腺功能的降低等），使得临床上迫切需要新一代更加有效、更加安全的抗糖尿病药物。

在众多的核受体中，FXR由于参与胆固醇、糖、脂代谢过程，已成为治疗代谢性疾病潜在的重要靶点之一。FXR在肝脏、小肠、肾脏等器官高表达，在脂肪组织也有表达。FXR的结构主要包括3部分，N端的转录激活模块（Activation function-1,AF-1）、中间的DNA结合区（DNA-binding domain,DBD）和C端的配体结合区（Ligand-binding domain,LBD）。通常情况下，FXR与RXR形成异源二聚体，与靶基因的FXR反应元件(FXRresponse element,FXRE)结合调节下游靶基因的转录。同时，FXR也可以单体形式与非经典序列结合调控下游靶基因。在胆固醇代谢中，抑制FXR能够激活胆固醇降解关键酶CYP7A-1的表达，降低血清中胆固醇的含量，因此FXR拮抗剂具有降胆固醇的作用。在脂代谢过程中，固醇调节元件结合蛋白-1c（Sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c）是调控脂肪酸合成的关键核受体，可直接调控脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase,FAS）等重要脂质合成基因的表达。FXR能够通过小异源二聚体伴侣受体-肝受体同源物-1（SHP-LRH-1）途径抑制SREBP-1c的表达，从而减少脂质的合成。另外，FXR还能够直接抑制肝脂肪酶的表达从而维持脂的稳态平衡。近年来，越来越多的证据表明FXR也参与糖代谢。流行病学的统计表明，2型糖尿病患者比正常人更容易患胆囊方面的疾病。葡萄糖能上调FXR的表达；生理状态的改变（饥饿与进食状态的转换）也会影响FXR的表达。FXR激动剂GW4064能够通过抑制糖异生重要调控蛋白磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK）和促进糖原合成降低糖尿病小鼠中的血糖。因此，以FXR为靶点研发新型药物对代谢性疾病进行有效的干预和治疗具有重要的现实意义，也是当前的研究热点。

现有的研究结果表明：FXR的配体主要有两类，一为FXR激动剂，如甾体类激动剂，鹅去氧胆酸(chenode-oxycholic acid,CDCA)及其衍生物、MFA-1等；非甾体类激动剂，如异噁唑类化合物GW4064及其衍生物、Fexaramine类化合物、氮杂并吲哚XL335(WAY-362450)及其衍生物等。二为FXR拮抗剂，如甾体类化合物，包括Guggulsterone（GS）、CDRI/80-574、sulfated sterol和scalarane sesterterpene等；非甾体化合物，包括AGN34、troglitazone和substituted-isoxazole衍生物。通过配体调控FXR会导致一系列复杂的生理反应。如合成激动剂GW4064，对改善糖尿病症状具有明显的作用，可降低糖尿病小鼠db/db血糖和血脂水平，通过抑制肝糖异生基因[磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶（PEPCK）、葡萄糖6磷酸酶（Glucose6-phosphatase,G6Pase）]，促进肝糖原合成和肝糖原含量，从而增加胰岛素的敏感性。但FXR的激活也会有产生一些副作用，最常见的是抑制胆汁酸合成，影响胆固醇分泌。而FXR拮抗剂能降低体内胆固醇的含量，但可增加体内甘油三酯水平，减少胆汁酸的运输，可能会造成胆汁酸的大量积累而对肝细胞形成毒害。因此，选择性FXR调节剂（FXR modulators,FXRM）通过激活/抑制与糖、脂代谢相关的某些特定基因，而不影响其它基因的表达，这类配体具有潜在的临床应用价值。如直接诱导胆汁盐输出泵(Bile Salt Export Pump,BSEP)和/或其它基底和泪小管运输转运体（如MRP4）的表达，而对SHP无作用的选择性FXR调节剂，对治疗胆汁淤积性疾病会有很好的疗效。同样，靶向SREBP1c而不减少胆汁酸合成的选择性FXR调节剂，可治疗糖、脂代谢紊乱所引起的高血脂。另外，调控脂蛋白代谢具有不同的分子机制，因此寻找靶向特定基因群的选择性FXR调节剂对于代谢性疾病的治疗具有重要的意义。

发明内容

通过随机筛选发现化合物A-1为FXR拮抗剂，它能降低HepG2细胞中糖异生基因PEPCK和G6Pase的基因表达。口服A-1能降低db/db小鼠的空腹血糖、糖化血红蛋白水平、血清甘油三酯水平、低密度脂蛋白胆固醇LDLC水平、血清中的NEFA含量。口服A-1能降低高胆固醇小鼠肝脏内胆固醇的含量。我们以A-1为先导结构进行系统的结构修饰，发现了二芳酰胺类衍生物为强效FXR拮抗剂。

本发明的目的为提供一种如下式(I)所示的结构的具有降血脂和抗2型糖尿病作用的新二芳酰胺类衍生物，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一目的为提供式(I)所示的结构的二芳酰胺类衍生物的制备方法。

本发明的再一目的为提供包含上述二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

本发明的又一目的为提供上述二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗高血脂和/或2型糖尿病的药物中的用途。

根据本发明的技术方案，本发明提供了一类下式（I）所示的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，

其中，

R₁和R₂可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、C₁～C₆烷基和用C₁～C₆烷基取代的氨基；优选为氢或卤素；最优选为氢、氯或氟；

R₃为氢；卤素；硝基；取代或未取代的5～8元芳基，所述取代的5～8元芳基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；取代或未取代的5～8元杂芳基，所述取代的5～8元杂芳基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；取代或未取代C₁～C₆烷基，所述取代C₁～C₆烷基的取代基优选为羟基或C₁～C₄烷基取代的氨基；或为下式所示结构；

R₃优选为氢；卤素；硝基；取代或未取代的苯基，所述取代的苯基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；未取代或被羟基取代的C₁～C₄烷基；或如下所示结构：

R₃最优选为氯、溴、氟、硝基、苯基、对氯苯基或羟基甲基或如下所示结构：

其中，

R₇和R₈相同或不同，并且各自独立地为氢；C₁～C₆烷基；取代或未取代的C₃～C₈环烷基，所述取代的C₃～C₈环烷基的取代基优选为羟基、胺基；取代或未取代的3～8元饱和杂环基，所述取代的3～8元饱和杂环基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；3～8元饱和杂环基C₁～C₄烷基，所述取代的3～8元饱和杂环基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元芳基C₁～C₄烷基，所述5～8元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基C₁～C₄烷基，所述5～8元杂芳基非必需地被卤代苯基或C₁～C₄烷基取代；5～8元芳基磺酰基，所述5～8元芳基非必需地被C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基磺酰基，所述5～8元杂芳基非必需地被C₁～C₄烷基取代；或C₁～C₆烷基磺酰基；5～8元芳基酰基，所述5～8元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基酰基，所述5～8元杂芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；或C₁～C₆烷基酰基；或者R₇和R₈与其连接的氮原子一起形成3～8元饱和杂环基；

R₇和R₈优选为氢；C₁～C₄烷基；C₄～C₇环烷基；苯基C₁～C₂烷基，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；吡啶基C₁～C₂烷基，所述吡啶基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；异噁唑基C₁～C₂烷基，所述异噁唑基非必需地被卤代苯基或C₁～C₄烷基取代；苯基磺酰基，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；C₁～C₄烷基磺酰基；或C₁～C₄烷基酰基；或者R₇和R₈与其连接的氮原子一起形成饱和的5～6元杂环基；

R₇和R₈最优选为氢、甲基、乙基、丙基、环戊基、环己基、环庚基、4-哌啶基、2-吡咯烷甲基、2-哌啶甲基、4-哌啶甲基、3-吡啶甲基、4-吡啶甲基、2-噻吩甲基、苄基、3-（2,6-二氯苯基）-5异丙基异噁唑-4-甲基、甲磺酰基或对甲苯磺酰基；或者R₇和R₈与其连接的氮原子一起形成哌啶环基和哌嗪环基；

X为氧或者硫；

R₉为氢；C₁～C₆烷基；取代或未取代的5至12元芳基，所述取代的5至12元芳基的取代基为卤素或C₁～C₆烷基氧酰基；5至12元芳基C₁～C₄烷基，其中，所述5至12元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；

R₉优选为氢、C₁～C₄烷基；取代或未取代苯基，所述取代的苯基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基氧酰基；取代或未取代萘基，所述取代的萘基的取代基为卤素；或苯基C₁～C₂烷基，其中，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；

R₉最优选为甲基、对氟苯基、对溴苯基、3-(甲氧基酰基)苯基、苄基或1-萘基；

R₁₀为氢；C₁～C₆烷基；5至8元芳基C₁～C₄烷基，其中，所述5至8元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；取代或未取代的5至8元芳基，所述取代的5至8元芳基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基；

R₁₀优选为氢；C₁～C₄烷基；苯基C₁～C₂烷基，其中，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；取代或未取代的苯基，所述取代的苯基的取代基为卤素或C₁～C₂烷基；

R₁₀最优选为氢、苄基或对氯苯基；

R₁₁为羟基；未取代或者被C₁～C₆烷基取代的氨基；5至8元芳基氨基，所述5至8元芳基非必需地被C₁～C₄烷基取代；3至7元饱和杂环基；优选为羟基；未取代或被C₁～C₄烷基取代的氨基；苯基氨基，所述苯基非必需地被C₁～C₄烷基或卤素取代；4至6元饱和杂环基；最优选为羟基、二甲胺基、丙胺基、异丁胺基、吗啉-4-基、吡咯烷-1-基、苯胺基、苄胺基或2,4,6-三甲基苯胺基；

R₄为氢、卤素或C₁～C₆烷基；优选为氢或卤素；最优选为氢或溴；

R₅为氢；C₁～C₆烷基；C₃～C₈环烷基；C₃～C₈环烷基C₁～C₄烷基；C₃～C₈饱和杂环基C₁～C₄烷基；取代或未取代芳基C₁～C₄烷基，所述取代芳基C₁～C₄烷基中的芳基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；取代或未取代杂芳基C₁～C₄烷基，所述取代杂芳基C₁～C₄烷基中的杂芳基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；

R₅优选为氢、C₁～C₆烷基；C₄～C₇环烷基；C₄～C₇环烷基C₁～C₂烷基；C₄～C₇饱和杂环基C₁～C₂烷基；苯基C₁～C₂烷基，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；或吡啶基C₁～C₂烷基，所述吡啶基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；

R₅最优选为氢、甲基、环己基、环己基甲基、哌啶-4-甲基、苄基或吡啶-3-甲基；

R₆为氢、C₁～C₄烷基，或者取代或未取代芳基C₁～C₄烷基，所述取代芳基C₁～C₄烷基的取代基为卤素或C₁～C₂烷基；优选为氢或C₁～C₄烷基；最优选为氢或甲基。

在本发明中，表示取代基从该处连接至化合物主体部分。

在一个优选的实施方式中，上述式（I）的化合物选自下面式II所示的化合物：

其中，R₁、R₃、R₄和R₅的定义与上述相同。

在本发明中，术语“5～12元芳基”是指不含杂原子的5～12元芳香族环基，如苯基、萘基或联苯基；所述取代的5～12元芳基的实例包括但不限于对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、3-羧酸甲酯基苯基、3-羧酸基苯基、苄基、1-萘基、2-萘基或2,4,6-三甲基苯基；优选对氟苯基、对溴苯基、3-羧酸甲酯基苯基、苄基、1-萘基或2,4,6-三甲基苯基。术语“5～8元芳基”具有类似的含义。

在本发明中，术语“C₁～C₆烷基”是指主链上具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等；优选甲基、乙基、丙基、异丁基。术语“C₁～C₄烷基”和术语“C₁～C₂烷基”具有类似的含义。

在本发明中，术语“C₃～C₈环烷基”是指在环上具有3至8个碳原子的饱和环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基；优选环戊基、环己基和环庚基；术语“C₄～C₇环烷基”具有类似的含义。

在本发明中，术语“3至8元饱和杂环基”是指具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的3～8元饱和杂环烷基，非限制性地包括吡咯烷基、四氢咪唑基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基等；优选吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基。术语“4至6元饱和杂环”具有类似的含义。

在本发明中，术语“5～7元杂芳基”是指在环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的5～7元芳香族环基，非限制性地包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、吡唑基和吡啶基；优选噻吩基、噁唑基和吡啶基。

本说明书中所述的“药学上可接受的盐”具体地可列举与磷酸、硫酸、盐酸等无机酸，或与酒石酸、枸橼酸、苹果酸、对-甲苯磺酸、马来酸、富马酸、乳酸、扁桃酸等有机酸形成的盐。

优选地，根据本发明的二芳酰胺类衍生物选自下列化合物：

本发明的一类二芳酰胺类衍生物可通过如下的合成方法之一合成：

方法一：

使结构式A所示的邻叔丁基苯酚与亚硝酸发生亚硝化反应，生成结构式B所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式A所示的邻叔丁基苯酚溶于溶剂（例如，乙醇、甲醇、异丙醇等）中并加入浓盐酸，降温至例如-20℃左右，再加入亚硝酸钠，保温反应。反应结束后，加入冷水中剧烈搅拌后过滤得到结构式B所示的化合物，重结晶得纯品。

使结构式B所示的化合物在例如钯碳的催化剂存在下发生还原反应生成结构式C所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式B所示的化合物溶于溶剂（例如，乙醇、甲醇、异丙醇等）中并加入三氟乙酸，室温下加入例如钯碳的催化剂并通入氢气。反应结束后，过滤得到结构式C所示的化合物重结晶得纯品。

使结构式D所示的取代苯甲酸与氯化亚砜发生取代反应生成结构式E所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式D取代苯甲酸溶于溶剂（例如，二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯等）中并加入氯化亚砜，升温至回流并保温反应。反应结束后，蒸干溶剂和氯化亚砜得到结构式E所示的化合物。

使结构式E所示的取代苯甲酰氯与结构式C所示的4-氨基邻叔丁基苯酚三氟乙酸盐发生酰化反应生成结构式F所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式C所示的4-氨基邻叔丁基苯酚溶于溶剂（例如，二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯等）中并加入有机碱（例如，三乙胺，二异丙基乙胺等）或无机碱（例如，碳酸钾，碳酸钠，氢氧化钠等），接着加入结构式E所示的取代苯酰氯。反应结束后，柱层析分离得到结构式F所示的化合物。

使结构式F所示的苯甲酰胺类化合物与烷基卤素发生取代反应生成结构式G所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式F所示的取代苯甲酸溶于无水溶剂（例如，无水四氢呋喃、无水乙醚等）中并降低温度至0℃，在此温度下加入烷基锂试剂（例如，正丁基锂、异丁基锂等）。加完后继续反应0.5小时左右，接着加入烷基卤素并保温反应。反应结束后，蒸干溶剂柱层析得到结构式G所示的化合物。

使结构式G所示的N-取代苯甲酰胺类化合物与烷基卤素发生取代反应生成通式I所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式G所示的取代苯甲酰胺溶于无水溶剂（例如，无水四氢呋喃、无水乙醚等）中并降低温度至0℃，在此温度下加入烷基锂试剂（例如，正丁基锂、异丁基锂等）。加完后继续反应0.5小时左右，接着加入烷基卤素并保温反应。反应结束后，蒸干溶剂柱层析得到通式I所示的化合物。

方法二：

使结构式H所示的对硝基甲苯与氯气发生取代反应生成结构式J所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式H所示的对硝基甲苯于三口玻璃瓶中，升温至65℃使其溶解，加入例如三氯化锑的催化剂。在此温度下通入氯气使其反应。反应结束后，柱层析得到结构式J所示的化合物。

使结构式J所示的对2,6-二氯-4-硝基甲苯发生溴代反应生成结构式K所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式J所示的2,6-二氯-4-硝基甲苯溶于四氯化碳中，升温至70℃左右，分批加入例如N-溴代丁二酰亚胺（NBS）的溴代试剂。加完后继续反应至结束。反应结束后，柱层析得到结构式K所示化合物。

使结构式K所示的对2,6-二氯-4-硝基苄基溴发生水解反应生成结构式L所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式K所示的2,6-二氯-4-硝基苄基溴溶于有机溶剂（例如，四氢呋喃，1,4-二氧六环等）与水的混合溶剂中，升温至90℃左右，分批加入例如碳酸钙的水解试剂。加完后继续反应至结束。反应结束后，柱层析得到结构式L所示化合物。

使结构式L所示的对2,6-二氯-4-硝基苄醇发生氧化反应生成结构式M所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式L所示的2,6-二氯-4-硝基苄醇溶于有机溶剂（例如，丙酮，1,4-二氧六环等）中，于室温下分批加入例如三氧化铬硫酸溶液（Jones试剂）的氧化试剂。加完后继续反应至结束。反应结束后，柱层析得到结构式M所示化合物。

使结构式M所示的取代苯甲酸与结构式C所示的4-氨基邻叔丁基苯酚发生缩合反应生成结构式N所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式M所示的化合物溶于溶剂（例如，四氢呋喃、二氯甲烷等）中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、4-二甲氨基吡啶（DMAP）和有机碱（例如，二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）等），然后加入结构式C所示的化合物于室温下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式N所示的化合物。

使结构式N所示的化合物与铁粉发生还原反应生成结构式O所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式N所示的化合物溶于溶剂（例如，甲醇、乙醇、异丙醇等）中并加入饱和氯化铵和铁粉，加完后升温至回流反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式O所示的化合物。

其中，R和R’相同或不同，并且各自独立地为氢；C₁～C₆烷基；取代或未取代的C₃～C₈环烷基，所述取代的C₃～C₈环烷基的取代基优选为羟基、胺基；取代或未取代的3～8元饱和杂环基，所述取代的3～8元饱和杂环基的取代基优选为卤素或C₁～C₄烷基；3～8元饱和杂环基C₁～C₄烷基，所述取代的3～8元饱和杂环基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元芳基C₁～C₄烷基，所述5～8元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基C₁～C₄烷基，所述5～8元杂芳基非必需地被卤代苯基或C₁～C₄烷基取代；

使结构式O所示的化合物与酮或醛发生还原氨化反应生成结构式P所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式O所示的化合物溶于溶剂（例如，甲醇、乙醇、异丙醇等）中并加入酮或醛，并加入氰基硼氢化钠与室温反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式P所示的化合物。

R’’为非必需地被C₁～C₄烷基取代的5～8元芳基；非必需地被C₁～C₄烷基取代的5～8元杂芳基磺酰基；或C₁～C₆烷基；

使结构式O所示的化合物与磺酰氯发生磺酰化反应生成结构式Q所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式O所示的化合物溶于溶剂（例如，四氢呋喃、乙酸乙酯等）中并加入三乙胺，然后加入加入磺酰氯并于室温反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式Q所示的化合物。

其中，R₉为氢；C₁～C₆烷基；取代或未取代的5至12元芳基，所述取代的5至12元芳基的取代基为卤素或C₁～C₆烷基氧酰基；5至12元芳基C₁～C₄烷基，其中，所述5至12元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；

X为氧或硫；

使结构式O所示的化合物与异氰酸酯或异硫氰酸酯发生缩合反应生成结构式R所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式O所示的化合物溶于溶剂（例如，四氢呋喃、乙醚等）中并加入三乙胺，然后加入异氰酸酯或异硫氰酸酯，然后升温至回流反应。反应结束后，柱层析分离得到R。

使结构式M所示的化合物与甲醇发生酯化反应生成结构式S所示的化合物。

具体而言，取结构式M所示的化合物溶于甲醇中并加入少量硫酸，然后升温至回流反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式S所示的化合物。使结构式S所示的化合物与还原剂发生还原反应生成结构式T所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式S所示的化合物溶于溶剂（例如，甲醇、乙醇等）中并加入饱和氯化铵，然后加入例如铁粉的还原剂，再升温至回流反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式T所示的化合物。

使结构式T所示的化合物与亚硝酸钠，溴化氢发生重氮化溴代反应生成结构式U所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式T所示的化合物溶于48%的氢溴酸溶液中，降温至-10℃左右，在此温度下加入亚硝酸钠，保温反应1小时。然后加入溴化铜升温至回流反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式U所示的化合物。

使结构式U所示的化合物发生水解反应，生成结构式X所示的化合物。

具体而言，取结构式U所示的化合物溶于溶剂（例如，甲醇、乙醇等）中，加入例如氢氧化钠的碱，于室温下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式X所示的化合物。

使结构式X所示的化合物与结构式C所示的化合物发生缩合反应，生成结构式Y所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式X所示的化合物溶于溶剂（例如，四氢呋喃、二氯甲烷等）中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、4-二甲氨基吡啶（DMAP）和有机碱（例如，二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）等），然后加入结构式C所示的化合物于室温下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式Y所示的化合物。

其中，R’’’’为氢、卤素或C₁-C₆烷基；

使结构式Y所示的化合物与结构式Z所示的化合物发生偶联反应，生成结构式AA所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式Y所示的化合物溶于溶剂（例如，甲苯、四氢呋喃、甲醇等）中，加入结构式Z所示的化合物和四三苯基膦钯以及无机碱（例如，碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯等），然后升温至80℃左右反应。反应结束后，柱层析分离得到AA。

R’’’’定义与上述相同。

使结构式Y所示的化合物与结构式AB所示的化合物发生偶联反应，生成结构式AC所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式Y所示的化合物溶于例如吡啶的溶剂中，加入结构式AB所示的化合物和氧化铜，然后升温至80℃左右反应。反应结束后，柱层析分离得到AC。

使结构式T所示的化合物与亚硝酸钠发生重氮化羟基化反应，生成结构式AD所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式T所示的化合物溶于48%的氢溴酸中，降温至-10℃左右，加入亚硝酸钠，保温反应1～2小时，然后加入沸腾的水中反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AD所示的化合物。

使结构式AD所示的化合物发生水解反应，生成结构式AE所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式AD所示的化合物溶于溶剂（例如，甲醇、乙醇等）中，于室温下加入例如氢氧化钠的催化剂，保温反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AE所示的化合物。

使结构式AE所示的化合物与结构式C所示的化合物发生缩合反应，生成结构式AF所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式AE所示的化合物溶于溶剂（例如，四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷等）中，于室温下加入EDCI、DMAP和有机碱（例如，二异丙基乙胺、三乙胺、DBU等），然后再加入结构式C所示的化合物，于室温下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AF所示的化合物。

使结构式AF所示的化合物与卤代烃发生醚化反应，生成结构式AG所示的化合物。

具体而言，在惰性气体保护下，取结构式AE所示的化合物溶于溶剂（例如，四氢呋喃、丙酮等）中，加入碱（例如，碳酸钾、碳酸钠、二异丙基乙胺、三乙胺等），然后再加入卤代烃，升至60℃左右反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AG所示的化合物。

使结构式AH所示的化合物与盐酸羟肟发生缩合反应，生成结构式AI所示的化合物。

具体而言，取结构式AE所示的化合物溶于溶剂（例如，甲醇、乙醇等）中，加入碱（例如，氢氧化钾、氢氧化钠等），然后再加入盐酸羟肟，升至90℃左右反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AI所示的化合物。

使结构式AI所示的化合物与N-氯代丁二酰亚胺（NCS）发生取代反应，生成结构式AJ所示的化合物。

具体而言，取结构式AI所示的化合物溶于溶剂（例如，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亚砜（DMSO）等）中，加入NCS，于室温下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AJ所示的化合物。

使结构式AJ所示的化合物与异丁酰乙酸甲酯发生缩合反应，生成结构式AL所示的化合物。

具体而言，取结构式AK所示的化合物异丁酰乙酸甲酯溶于例如甲醇的溶剂中，加入甲醇钠反应2～3小时，在0℃下将此溶液加入到结构式AJ所示的化合物的甲醇溶液中并于室温下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AL所示的化合物。

使结构式AL所示的化合物与二异丁基氢化铝（DIBAL-H）发生还原反应，生成结构式AM所示的化合物。

具体而言，取结构式AL所示的化合物溶于无水四氢呋喃中，在0℃下加入DIBAL-H，保温并于此温度下反应。反应结束后，柱层析分离得到结构式AM所示的化合物。

使结构式AN所示的化合物与(1,1,1-三乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮（Dess-Martin试剂）发生氧化反应，生成结构式AN所示的化合物。

具体而言，取结构式AN所示的化合物溶于例如无水二氯甲烷的无水溶剂中，在室温下加入Dess-Martin试剂，此温度下反应2～3h。反应结束后，柱层析分离得到结构式AN所示的化合物。

使结构式AN所示的化合物与结构式N所示的化合物发生还原氨化反应，生成结构式A-40所示的化合物。

具体而言，取结构式AN所示的化合物溶于例如甲醇的醇类溶剂中，在室温下加入结构式N所示的化合物，接着加入例如乙酸、甲酸等的有机酸并紧接着加入还原试剂（比如氰基硼氢化钠、三乙酰基硼氢化钠等）此温度下反应2～3h。反应结束后，柱层析分离得到结构式A-40所示的化合物。

根据本发明，本发明提供包含治疗有效剂量的一种或多种根据本发明的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐的药物组合物，该组合物可以任选包括药学上的常规辅料，例如赋形剂、甜味剂等。

本发明的二芳酰胺类衍生物，具有拮抗FXR的活性，可用于制备用于治疗2型糖尿病的药物。因此，本发明提供了所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗高血脂和2型糖尿病的药物中的用途。

本发明还提供了一种治疗高血脂和2型糖尿病的方法，该治疗方法包括向病人给予治疗有效量的根据本发明的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐。

有益效果

本发明所述的二芳酰胺类衍生物对FXR具有拮抗作用，整体动物试验表明，该类化合物具有降血糖、降血脂之功效。该类化合物可用于治疗高血脂和2型糖尿病。本发明化合物合成简单，易于制备，且合成原料丰富。

附图说明

图1显示时间分辨荧光方法检测A-1对阳性化合物CDCA引起FXRα_LBD招募共激活因子SRC1能力的影响。A表明A-1能够浓度依赖性地抑制50μM CDCA引起的FXRα_LBD招募SRC1的作用。B为利用Origin7.5软件拟合出的半数抑制浓度（IC₅₀），IC₅₀值为25.5μM，其中###p<0.001与DMSO比较；**p<0.01，***p<0.001与CDCA比较；上述符号均为统计学差异标识。

图2显示利用SPR技术检测A-1与FXRα_LBD的结合能力；不同浓度的A-1流经偶联有FXRα_LBD蛋白的CM5芯片表面，检测的传感图显示A-1浓度依赖性地与FXRα_LBD结合。通过Biacore的BIAeval软件中1：1结合的Langmuir模型对其结合常数进行拟合，得到其KD值为29.2μM。

图3显示通过报告基因的方法，在HEK293T细胞中检测不同浓度的A-1对FXR转录活性的影响。在HEK293T细胞中瞬转入pcDNA3.1-RXRα,pcDNA3.1-FXRα,pGL3-FXRE-Luc和pRL-SV40质粒，将不同浓度的A-1与50μM CDCA共孵育24小时后检测荧光素酶活性。###p<0.001与DMSO对照比较；*p<0.05，***p<0.001与CDCA处理的样品比较；上述符号均为统计学差异标识。

图4显示A-1可降低db/db小鼠空腹血糖，A为A-1每周降db/db小鼠空腹血糖情况的曲线图；B为A-1对db/db小鼠空腹血糖影响的曲线下面积图(AUC±SD)。其中*P<0.05,***P<0.001,与溶剂对照组相比；上述符号均为统计学差异标识。

图5显示A-1可降低db/db小鼠糖化血红蛋白的含量，*P<0.05,***P<0.001,与溶剂对照组相比；上述符号均为统计学差异标识。

图6显示A-1可降低db/db小鼠血清中TG的含量。*P<0.05,与溶剂对照组相比；上述符号为统计学差异标识。

图7显示A-1可降低db/db小鼠血清中LDLC的含量，**P<0.01,***P<0.001，与溶剂对照组相比；上述符号均为统计学差异标识。

图8显示A-1可降低db/db小鼠血清中NEFA的含量，***P<0.001,与溶剂对照组相比；上述符号为统计学差异标识。

图9显示A-1可提高db/db小鼠的胰岛素敏感性，A为A-1对db/db小鼠的胰岛素耐量的影响；B为A-1对db/db小鼠胰岛素耐量影响曲线的曲线下面积图，*P<0.05,**P<0.001，与溶剂对照组相比；上述符号为统计学差异标识。

图10显示A-1可降低小鼠肝脏内胆固醇的含量，###p<0.001高胆固醇饲料溶剂组与普通饲料溶剂组相比，*P<0.05,**P<0.001，与高胆固醇饲料溶剂组相比；上述符号为统计学差异标识。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明不局限于此。

下述制备例中，¹H-NMR用Varian Mercury AMX300，400，500型仪器测定。MS用VG ZAB-HS或VG-7070型以及Esquire3000plus-01005测定。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得。除另有说明外，所有反应均是在氩气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程。产品的纯化除另有说明外均使用硅胶的柱色谱法，所使用的硅胶为200～300目，GF₂₅₄为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。

制备实施例

实施例1：化合物A-1的合成

化合物B的合成

取邻叔丁基苯酚（A）（6g，40mmol）溶于乙醇（30mL）中，接着搅拌下加入浓盐酸（40mL），然后将体系降至-20℃。于半小时内加入亚硝酸钠（4.2g，60mmol）同时维持体系在-20℃到-10℃之间。在该温度下继续反应2～3h，TLC检测反应结束。结束后将体系倾入1000mL冰水中，有大量固体析出。过滤得一棕色固体，接着用饱和碳酸钠水溶液溶解所得固体，活性炭脱色，稀盐酸调节pH到2左右，过滤得淡黄色固体，用正己烷和甲苯重结晶得无色晶体的化合物B，2-叔丁基-2,5-环己二烯-1,4-二酮-4-肟（4.6g，65%），熔点132～134℃。

化合物C的合成

将上步所得的2-叔丁基-2,5-环己二烯-1,4-二酮-4-肟（化合物B）（1.79g，10mmol）溶于甲醇（30mL）中，接着加入三氟乙酸（2.28g，20mmol）和催化量10%的Pd/C，用Ar₂置换3次，然后置换氢气，室温搅拌过夜，TLC检测反应。结束后，蒸干甲醇得深红色固体，用50mL乙酸乙酯清洗，得白色固体的化合物C，对氨基-2-叔丁基苯酚的三氟乙酸盐（2.05g，73%），熔点204～206℃。

化合物A-1的合成。

取2,4-二氯苯甲酸（191mg，1mmol）溶于二氯亚砜（5mL）中，回流反应10小时后，蒸除二氯亚砜得到2,4-二氯苯甲酰氯，不处理直接投入下一步。

将对氨基-2-叔丁基苯酚的三氟乙酸盐（280mg，1mmol）加入二氯甲烷（10mL）中，加入三乙胺（150mg，1.5mmol），室温搅拌使对氨基-2-叔丁基苯酚盐溶解，然后用恒压滴定漏斗加入之前制备好的2,4-二氯苯甲酰氯的二氯甲烷（5mL）溶液，加完后继续反应1h，点板显示反应结束。结束后，蒸除溶剂用乙酸乙酯和水分层，油层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱纯化得到产物化合物A-1（200mg，63%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(d,J=8.3Hz,1H),7.68(s,1H)7.45(d,J=2.0Hz,1H),7.44(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.35–7.32(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),7.33(d,J=2.5Hz,1H),6.66(d,J=8.5Hz,1H),4.82(s,1H),1.39(s,9H)。ESI-MS((m/z)339，[M+H]⁺）。

实施例2：化合物A-2的合成

化合物A-2的合成方法与A-1类似，用2-氯-4-氟苯甲酸（174mg，1mmol）替代2,4-二氯苯甲酸得到目标化合物A-2（234mg，73%）。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.83(dd,J=8.7,6.1Hz,1H),7.76(s,1H),7.49(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.36(d,J=2.5Hz,1H),7.22(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),7.12(td,J=8.7,2.4Hz,1H),6.71(d,J=8.5Hz,1H),4.96(s,1H),1.44(s,9H).ESI-MS((m/z)322，[M+H]⁺)。

实施例3：化合物A-3的合成

化合物A-3的合成与A-1类似，用2,4-二氟苯甲酸（158mg，1mmol）替代2,4-二氯苯甲酸，得到目标化合物A-3（238mg，78%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.31–8.17(m,2H),7.47(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),7.39(d,J=2.6Hz,1H),7.06(td,J=8.3,2.4Hz,1H),7.00–6.91(m,1H),6.70(d,J=8.4Hz,1H),4.92(s,1H),1.44(s,9H).ESI-MS（(m/z)306，[M+H]⁺）。

实施例4：化合物A-4的合成

化合物A-4的合成与A-1类似，用2-氟-4-氯苯甲酸（174mg，1mmol)替代2,4-二氯苯甲酸得到目标化合物A-4（246mg，77%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.83(dd,J=8.7,6.1Hz,1H),7.76(s,1H),7.49(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.36(d,J=2.5Hz,1H),7.22(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),7.12(td,J=8.7,2.4Hz,1H),6.71(d,J=8.5Hz,1H),4.96(s,1H),1.44(s,9H).ESI-MS((m/z)322，[M+H]⁺)。

实施例5：化合物A-5的合成

化合物7的合成

将对硝基甲苯（13.7g，0.1mol）加入50mL三口瓶中，加入10%的三氯化锑。接着升温至65℃，对硝基甲苯溶解，搅拌下通入氯气。每隔1h点板跟踪，原料首先转化成单氯取代的产物，然后会有双氯的生成，当原料几乎完全转化为双取代产物时，停止通入氯气。待温度降至室温时，加入乙酸乙酯溶解用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离得到2,6-二氯-4-硝基甲苯(7)（14g，68%）。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.20(s,2H),2.58(s,3H)。

化合物8的合成

将2,6-二氯-4-硝基甲苯（2.08g，10mmol）溶于吡啶（12mL）中，加入20mL的水，搅拌升温至100℃，接着关闭加热分批加入8g的高锰酸钾，反应1h后，再补加3g的高锰酸钾，升至回流温度，继续反应过夜。反应结束后加入稀盐酸中和吡啶，然后用50mL的乙酸乙酯萃取。油层用饱和碳酸氢钠溶液洗，取水层用稀盐酸调制酸性，后用乙酸乙酯萃取，油层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。得到目标化合物2,6-二氯-4-硝基苯甲酸(8)（500mg，21%）。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.40(s,2H)。

化合物A-5的合成

取2,6-二氯-4-硝基苯甲酸（236mg，1mmol）溶于5mL二氯亚砜中，回流反应过夜后蒸除二氯亚砜得到相应的酰氯，不纯化直接投下一步。

将对氨基-2-叔丁基苯酚的三氟乙酸盐（280mg，1mmol）加入10mL二氯甲烷中，加入三乙胺（150mg，1.5mmol），室温搅拌下对氨基-2-叔丁基苯酚盐溶解，然后用恒压滴定漏斗加入之前制备好的2,6-二氯-4-硝基苯甲酰氯的二氯甲烷溶液，加完后继续反应1h，TLC检测反应。反应结束后，蒸除溶剂用乙酸乙酯和水分层，油层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱纯化得到产物A-5（220mg，56%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.26(s,2H),7.55(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),7.32(s,1H),7.31(d,J=2.6Hz,1H),6.74(d,J=8.4Hz,1H),4.99(s,1H),1.44(s,9H)。ESI-MS（(m/z)384，[M+H]⁺）。

实施例6：化合物A-6的合成

将（560mg，10mmol）铁粉加入50mL二口瓶中,加入1mL饱和NH₄Cl水溶液和5mL乙醇，升至回流温度，在此温度下加入化合物A-5（393mg，1mmol）的5mL乙醇溶液，继续回流反应，5h后，TLC检测反应。反应结束后，用硅藻土过滤除去铁泥，蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱纯化，得到300mg左右的产物A-6（80%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.08(s,1H),9.16(s,1H),7.44(dd,J=8.6,2.5Hz,1H),7.41(d,J=2.5Hz,1H),6.70(d,J=8.6Hz,1H),6.60(s,2H),5.84(s,2H),1.33(s,9H)。ESI-MS（(m/z)354，[M+H]⁺）。

实施例7：化合物A-7的合成

将化合物A-5（383mg，1mmol）溶于10mL的无水四氢呋喃中，然后降温至-10℃，在此温度下滴加2N的丁基锂四氢呋喃溶液（1.2mL，2.4mmol），加完后搅拌0.5h左右。将碘甲烷（213mg，1.5mmol）溶于5mL无水四氢呋喃溶液中，并将此溶液用恒压滴定漏斗加入上述体系中，加完后继续反应6h左右，TLC检测反应，反应无变化后，用1N的稀盐酸调制酸性，蒸干溶剂用乙酸乙酯和水分层，盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离，得到目标化合物A-7（222mg，56%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.00(s,2H),7.22(d,J=2.4Hz,1H),7.07(dd,J=8.5,2.4Hz,1H),6.52(d,J=8.5Hz,1H),4.94(s,1H),3.49(s,3H),1.29(s,9H).ESI-MS((m/z)398，[M+H]⁺)。

实施例8：化合物A-8的合成

化合物A-8的合成同A-6类似，用A-7（397mg，1mmol）替代A-5得目标化合物A-8（304mg，83%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.42(s,1H),6.99–6.93(m,2H),6.63(d,J=8.3Hz,1H),6.37(s,2H),5.66(s,2H),3.27(s,3H),1.21(s,9H)。

实施例9：化合物A-9的合成

将化合物A8（367mg，1mmol）溶于10mL甲醇中，于室温下加入甲醛水溶液（300mg，3mmol），乙酸（60mg，1mmol），氰基硼氢化钠（63mg，1mmol），在此温度下继续反应25h左右，反应过程用TLC检测，结束后将溶剂蒸干，加入乙酸乙酯用饱和碳酸钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱分离提纯。得到纯品化合物A-9，265mg（67%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.42(s,1H),6.99(dd,J=8.4,2.5Hz,0H),6.95(d,J=2.5Hz,1H),6.62(d,J=8.4Hz,1H),6.51(s,2H),3.29(s,3H),2.83(s,6H),1.19(s,9H)。ESI-MS（(m/z)396，[M+H]⁺）。

实施例10：化合物A-10的合成

反应条件同A-9的合成类似，用环己酮替代甲醛溶液，反应48h。柱层析得到目标化合物A-10（251mg，52%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.40(s,1H),6.98(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.91(d,J=2.6Hz,1H),6.64(d,J=8.5Hz,1H),6.38(s,2H),6.04(d,J=8.2Hz,1H),3.28(s,3H),3.21–3.07(m,1H),1.86–0.71(m,19H).ESI-MS((m/z)450，[M+H]⁺)。

实施例11：化合物A-11的合成

化合物A-11的合成方法类似于A-7化合物的合成，用溴化苄代替碘甲烷得到目标化合物A-11（305mg，64%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.98(s,2H),7.31(m,5H),6.92(d,J=2.4Hz,1H),6.87(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),6.40(d,J=8.4Hz,1H),5.06(s,2H),4.94(s,1H),1.17(s,9H).ESI-MS((m/z)474，[M+H]⁺)。

实施例12：化合物A-12的合成

化合A-12的合成同A-6的合成相似。用A-11替代A-5得到目标化合物A-12（380mg，86%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.36(s,1H),7.33–7.22(m,5H),6.83(d,J=8.4Hz,1H),6.78(s,1H),6.52(d,J=8.4Hz,1H),6.37(s,2H),5.65(s,2H),4.95(s,2H),1.11(s,9H).ESI-MS((m/z)444，[M+H]⁺)。

实施例13：化合物A-13的合成

化合物A-13的合成同A-9的合成，用A-12替代A-8得到目标化合物A-13（385mg，82%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.41–7.22(m,5H),6.93(d,J=2.2Hz,1H),6.87(dd,J=8.4,2.2Hz,1H),6.40(d,J=8.4Hz,1H),6.36(s,2H),5.06(s,2H),4.92(s,1H),2.85(s,6H),1.19(s,9H).ESI-MS（(m/z)471，[M+H]⁺）。

实施例14：化合物A-14的合成

取化合物A-7（397mg，1mmol）溶于10mL无水THF中，降温至0℃并用氩气保护，然后在搅拌下加入2N的正丁基锂四氢呋喃溶液（0.6mL，1.2mmol），加完后保温反应1-1.5h。然后加入碘甲烷（282mg，2mmol）的四氢呋喃溶液（2mL），加完后缓慢升至室温并于室温下继续反应24h，反应过程中用TLC检测。反应结束后加水淬灭，调节pH到酸性，蒸干四氢呋喃，用乙酸乙酯和水分层，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到目标化合物A-14（312mg,76%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.00(s,2H),7.21(d,J=2.7Hz,1H),7.17(dd,J=8.6,2.7Hz,1H),6.70(d,J=8.6Hz,1H),3.79(s,3H),3.50(s,3H),1.26(s,9H).ESI-MS((m/z)412，[M+H]⁺)。

实施例15：化合物A-15的合成

化合物A-15的合成同A-6的合成，用A-14替代A-5得到目标化合物A-15（297mg,78%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.17(d,J=2.5Hz,1H),7.11(dd,J=8.6,2.5Hz,1H),6.66(d,J=8.6Hz,1H),6.53(s,2H),1.25(s,9H).ESI-MS（(m/z)382，[M+H]⁺）。

实施例16：化合物A-16的合成

取化合物A-6（383mg，1mmol）溶于10mL四氢呋喃中，向其中加入三乙胺（200mg，2mmol）并于室温下搅拌，然后在搅拌下加入甲磺酰氯（171mg，1.5mmol）加完后于室温下继续反应4-5h，TLC检测反应。反应结束后，蒸干溶剂，用稀盐酸和乙酸乙酯分层，盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离纯化得到目标化合物A-16（310mg，72%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.36(s,1H),10.31(s,1H),9.25(s,1H),7.45(dd,J=8.5,2.4Hz,1H),7.40(d,J=2.4Hz,1H),7.29(s,2H),6.74(d,J=8.5Hz,1H),3.15(s,3H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)432，[M+H]⁺）。

实施例17：化合物A-17的合成

化合物A-17的合成同A-16的合成，用对甲基苯磺酰氯(TsCl)替代MsCl得到目标化合物A-17（344mg,68%）。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),10.26(s,1H),9.24(s,1H),7.76(d,J=8.3Hz,2H),7.46–7.38(m,3H),7.34(d,J=2.3Hz,1H),7.17(s,2H),6.72(d,J=8.6Hz,1H),2.38(s,3H),1.32(s,9H).ESI-MS（(m/z)508，[M+H]⁺）。

实施例18：化合物A-18的合成

取化合物A-6（383mg，1mmol）溶于10mL四氢呋喃中，向其中加入二异丙基乙胺（260mg，2mmol）并于室温下搅拌，用氩气保护，并在氩气保护下加入苄基异氰酸硫酯（300mg，2mmol），然后升温至回流温度并在此温度下回流反应24h。反应过程用TLC检测，结束后蒸干溶剂，用乙酸乙酯和稀盐酸分层，有机层用盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离纯化，得到目标化合物A-18(310mg,62%)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),9.97(s,1H),9.25(s,1H),8.59(s,1H),7.73(s,2H),7.46(dd,J=8.5,2.4Hz,1H),7.41(d,J=2.4Hz,1H),7.38–7.26(m,5H),6.74(d,J=8.5Hz,1H),4.76(d,J=5.2Hz,2H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)502，[M+H]⁺）。

实施例19：化合物A-19的合成

化合物A-19的合成同A-18类似，用4-溴苯基异硫氰酸酯（428mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-19（272mg，48%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.36(s,1H),10.21(s,1H),10.11(s,1H),9.22(s,1H),7.72(s,2H),7.56(d,J=8.8Hz,2H),7.51–7.39(m,4H),6.75(d,J=8.6Hz,1H),1.35(s,9H)。ESI-MS（(m/z)568，[M+H]⁺）。

实施例20：化合物A-20的合成

化合物A-20的合成同A-18类似，用3-甲氧基羰基苯基异硫氰酸酯（386mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-20（300mg，55%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.37(s,1H),10.30(s,1H),10.18(s,1H),9.23(s,1H),8.11(s,1H),7.77(dd,J=7.8,1.7Hz,2H),7.73(s,2H),7.53(t,J=7.8Hz,1H),7.47(dd,J=8.5,2.4Hz,1H),7.42(d,J=2.4Hz,1H),6.75(d,J=8.5Hz,1H),3.88(s,3H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)546，[M+H]⁺）。

实施例21：化合物A-21的合成

化合物A-21的合成同A-18类似，用1-萘基异氰酸酯（340mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-21（313mg，68%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.30(s,1H),9.44(s,1H),9.23(s,1H),8.97(s,1H),8.11(d,J=8.5Hz,1H),7.97(d,J=8.0Hz,1H),7.94(d,J=7.4Hz,1H),7.72(d,J=8.2Hz,1H),7.65–7.55(m,2H),7.51(t,J=8.0Hz,1H),7.47(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.43(d,J=2.5Hz,1H),6.75(d,J=8.5Hz,1H),1.35(s,9H).ESI-MS((m/z)522，[M+H]⁺)。

实施例22：化合物A-22的合成

化合物A-22的合成同A-18类似，用4-溴苯基异氰酸酯（340mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-22（418mg，76%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.28(s,1H),9.30(s,1H),9.21(s,1H),9.18(s,1H),7.62(s,2H),7.51–7.43(m,5H),7.42(d,J=2.5Hz,1H),6.74(d,J=8.6Hz,1H),1.35(s,9H).ESI-MS((m/z)552，[M+H]⁺)。

实施例23：化合物A-23的合成

化合物A-23的合成同A-18类似，用3-甲氧基羰基苯基异硫氰酸酯（340mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-23（270mg，51%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.29(s,1H),9.21(s,1H),9.20(s,1H),9.16(s,1H),8.22(s,1H),7.69–7.60(m,4H),7.50–7.40(m,3H),6.74(d,J=8.5Hz,1H),3.87(s,3H),1.35(s,9H).ESI-MS((m/z)530，[M+H]⁺)。

实施例24：化合物A-24的合成

化合物A-24的合成同A-18类似，用4-氟苯基异氰酸酯（274mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-24（352mg，72%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.35(s,1H),10.11(s,1H),10.02(s,1H),9.22(s,1H),7.73(s,2H),7.51–7.45(m,3H),7.42(d,J=2.5Hz,1H),7.21(t,J=8.8Hz,2H),6.75(d,J=8.6Hz,1H),1.35(s,9H).ESI-MS((m/z)490，[M+H]⁺)。

实施例25：化合物A-25的合成

化合物A-25的合成同A-18类似，用甲基异硫氰酸酯（146mg，2mmol）代替苄基异硫氰酸酯。柱层析得到目标化合物A-25（306mg，72%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),9.90(s,1H),9.25(s,1H),8.11–8.04(m,1H),7.70(s,2H),7.46(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.41(d,J=2.5Hz,1H),6.74(d,J=8.5Hz,1H),2.95(d,J=3.9Hz,2H),1.34(s,9H).ESI-MS((m/z)426，[M+H]⁺)。

实施例26：化合物A-26的合成

将化合物A-6（363mg，1mmol）溶于10mL的甲醇中，加入10mmol的环戊酮，0.1mL的乙酸和63mg的氰基硼氢化钠（1mmol）与室温下搅拌，反应1d后，点板显示反应大部分转化为产物。结束后将溶剂蒸干，加入乙酸乙酯用饱和碳酸氢钠洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱分离提纯。得到纯品化合物A-26（180mg，42%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.55(dd,J=8.4,2.5Hz,1H),7.28(d,J=2.5Hz,1H),7.25(s,1H)6.69(d,J=8.4Hz,1H),6.51(s,2H),5.06(s,1H),4.00(d,J=6.1Hz1H),3.76(m,1H),2.12–1.98(m,2H),1.78–1.68(m,4H),1.52–1.43(m,2H),1.43(s,9H)。ESI-MS（(m/z)421，[M+H]⁺）。

实施例27：化合物A-27的合成

化合物A-27的合成与A-26类似，用环己酮（1g，10mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-27，212mg（48%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.08(s,1H),9.16(s,1H),7.44(dd,J=8.4,2.5Hz,1H),7.41(d,J=2.5Hz,1H),6.70(d,J=8.4Hz,1H),6.61(s,2H),6.22(d,J=8.0Hz,1H),3.3（m,1H）1.88–1,83(m,2H),1.75–1.65(m,2H),1.33(s,9H),1.27–1.12(m,6H)。ESI-MS（(m/z)435，[M+H]⁺）。

实施例28：化合物A-28的合成

将化合物A-27（212mg，0.5mmol）溶于10mL的甲醇中，加入10mmol的37%的甲醛水溶液，0.1mL的乙酸和63mg的氰基硼氢化钠（1mmol）与室温下搅拌，反应1d后，反应结束。结束后将溶剂蒸干，加入乙酸乙酯用饱和碳酸氢钠洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱分离提纯。得到纯品化合物A-28，138mg（62%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.50(dd,J=8.5,2.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.28(d,J=2.4Hz,1H),6.70(d,J=8.5Hz,1H),6.63(s,2H),5.81(s,0H),3.57–3.45(m,1H),2.79(s,3H),1.92–1.84(m,2H),1.80–1.67(m,4H),1.56–1.34(m,13H)。ESI-MS（(m/z)449，[M+H]⁺）。

实施例29：化合物A-29的合成

化合物A-29的合成与A-26类似，用环庚酮（1.1g，10mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-29，65mg（14%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.53(dd,J=8.5,2.1Hz,1H),7.27(m,2H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),6.45(s,2H),5.20(s,1H),3.98(s,1H),3.43(s,1H),2.11–1.90(m,4H),1.75–1.33(m,8H),1.27(s,9H)。ESI-MS（(m/z)449，[M+H]⁺）。

实施例30：化合物A-30的合成

化合物A-30的合成与A-26类似，用2-噻吩醛（224mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-30，（291mg，65%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.11(s,1H),9.17(s,1H),7.43(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.40(m,2H),7.08(d,J=2.5Hz,1H),7.04(t,J=6.1Hz1H),6.99(dd,J=5.0,3.4Hz,1H),6.70(m,3H),4.53(d,J=6.1Hz,2H),1.33(s,9H)。ESI-MS（(m/z)449，[M+H]⁺）。

实施例31：化合物A-31的合成

化合物A-31的合成与A-26类似，用3-吡啶甲醛（214mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-31，265mg（60%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.09(s,1H),9.16(s,1H),8.59(d,J=1.5Hz1H),8.47(dd,J=4.7,1.5Hz,1H),7.74(d,J=7.8Hz,1H),7.43(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.38(m,2H),7.05(t,J=6.1Hz1H),6.70(d,J=8.5Hz,1H),6.67(s,2H),5.76(s,1H),4.39(d,J=6.1Hz,2H),1.32(s,9H)。ESI-MS（(m/z)444，[M+H]⁺）。

实施例32：化合物A-32的合成

化合物A-32的合成与A-26类似，用4-吡啶甲醛（214mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-32，250mg（56%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.10(s,1H),9.16(s,1H),8.53(d,J=5.7Hz,2H),7.43(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.39(d,J=2.5Hz,1H),7.33(d,J=5.7Hz,2H),7.12(t,J=6.3Hz,1H),6.70(d,J=8.5Hz,1H),6.62(s,2H),4.41(d,J=6.3Hz,2H),1.32(s,9H)。ESI-MS（(m/z)444，[M+H]⁺）。

实施例33：化合物A-33的合成

化合物A-33的合成与A-26类似，用苯甲醛（214mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-33，298mg（67%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56(dd,J=8.6,2.6Hz,1H),7.54(d,J=2.6Hz,1H),7.45–7.30(m,5H),7.23(s,1H),6.70(d,J=8.6Hz,1H),6.58(s,2H),4.92(s,1H),4.35(d,J=4.8Hz,2H),1.43(s,9H)。ESI-MS（(m/z)443，[M+H]⁺）。

实施例34：化合物A-34的合成

化合物A-34的合成与A-26类似，用甲醛水溶液（200mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-34，165mg（45%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.09(s,1H),9.18(s,1H),7.45(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.42(d,J=2.5Hz,1H),6.72(d,J=8.5Hz,1H),6.58(s,2H),6.40(q,J=4.9Hz,1H),2.71(d,J=4.9Hz,2H),1.34(s,9H)。ESI-MS（(m/z)367，[M+H]⁺）。

实施例35：化合物A-35的合成

化合物A-35的合成与A-26类似，用乙醛水溶液（200mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-35，133mg（35%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.10(s,1H),9.17(s,1H),7.44(dd,J=8.5,2.3Hz,1H),7.41(d,J=2.3Hz,1H),6.71(d,J=8.5Hz,1H),6.34(t,J=5.3Hz,1H),3.10–3.03(m,2H),1.33(s,9H),1.14(t,J=7.1Hz,3H)。ESI-MS（(m/z)381，[M+H]⁺）。

实施例36：化合物A-36的合成

化合物A-36的合成与A-26类似，用丙醛（120mg，2mmol）替代环戊酮得到目标化合物A-36，217mg（55%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.09(s,1H),9.19(s,1H),7.45(dd,J=8.5,2.3Hz,1H),7.42(d,J=2.3Hz,1H),6.72(d,J=8.4Hz,1H),6.61(s,2H),6.37(t,J=5.5Hz,1H),3.07–2.96(m,2H),1.67–1.45(m,2H),1.34(s,9H),0.94(t,J=7.4Hz,3H)。ESI-MS（(m/z)395，[M+H]⁺）。

实施例37：化合物A-37的合成

将A-6（363mg，1mmol）溶于10mL的甲醇中，加入10mmol的37%的甲醛水溶液，0.1mL的乙酸和63mg的氰基硼氢化钠（1mmol）与室温下搅拌，反应1d后，反应结束。结束后将溶剂蒸干，加入乙酸乙酯用饱和碳酸氢钠洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱分离提纯。得到纯品化合物A-37，285mg（75%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.57(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.30(d,J=2.5Hz,1H),7.24(s,1H),6.70(d,J=8.5Hz,1H),6.61(s,2H),4.81(s,1H),3.01(s,6H),1.43(s,9H)。ESI-MS（(m/z)382，[M+H]⁺）。

实施例38：化合物A-38的合成

将A-6（363mg，1mmol）溶于10mL的甲醇中，加入2mmol的二氯乙胺盐酸盐，搅拌溶解。接着加入3mmol的DBU，升温至回流。TLC跟踪反应过程。结束后将溶剂蒸干，加入乙酸乙酯用0.1N盐酸洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱分离提纯。得到纯品化合物A-38，147mg（35%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.17(s,1H),9.20(s,1H),7.45(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),7.42(d,J=2.4Hz,1H),6.99(s,2H),6.72(d,J=8.4Hz,1H),3.23–3.14(m,4H),2.86–2.79(m,4H),1.34(s,9H)。ESI-MS（(m/z)422，[M+H]⁺）。

实施例39：化合物A-39的合成

化合物A-39的合成与A-26类似，用戊二醛溶液（2mL，5mmol）替代环戊酮得到目标化合物得到纯品化合物A-39，147mg（35%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.17(s,1H),9.19(s,1H),7.45(dd,J=8.5,2.3Hz,1H),7.42(d,J=2.2Hz,1H),6.97(s,2H),6.72(d,J=8.5Hz,1H),3.31–3.24(m,4H),1.85–1.63(m,4H),1.46–1.36(m,2H),1.34(s,9H)。ESI-MS（(m/z)421，[M+H]⁺）。

实施例40：化合物A-40的合成

2,6-二氯苯甲肟（AI）的合成

将2,6-二氯苯甲醛（AH）（25g，0.14mol）溶于200mL的乙醇中，接着在搅拌下加入11g盐酸羟胺（0.16mol）和6.3g氢氧化钠（0.16mol）的100mL水溶液。然后体系升温至90℃，在该温度下反应2-3h后，TLC检测反应。反应结束后，将溶剂蒸至30mL左右，会有大量固体析出，过滤，固体用水洗，烘干得到24g产物2,6-二氯苯甲肟（AI）（89%）。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.35(s,1H),7.55(s,1H),7.35(m，3H),7.2-7.3(m，2H)。

2,6-二氯苯甲肟氯（AJ）的合成

取2,6-二氯苯甲肟13g（70mmol）于250mL两口瓶中，加入150mL的DMF溶解，然后分批加入9.2g NCS（70mmol）。加完后，继续反应2-3h，TLC显示反应完全。然后将体系加入200mL冰水中，会有针状固体产生，加入乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥得到12g左右的产物2,6-二氯苯甲肟氯（AJ）（80%）。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.3–7.4(m，3H),2-2.2(m，2H)。

3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲酸甲酯（AL）的合成

将异丁酰乙酸甲酯2g（15.6mmol）加入31.5mL的0.5M甲醇钠甲醇溶液中，室温搅拌3h。然后将该混合物加入到溶有3.5g2,6-二氯苯甲肟氯的5mL THF中，室温反应过夜，点板显示原料反应完全。反应结束后，蒸干溶剂，加入乙醚和水分层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，粗品通过硅胶柱纯化，得到1.8g产物3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲酸甲酯（AL）（36%）。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.3-7.4(m,3H),3.85(m,1H),3.65(s,3H),1.4(d,J=7.0Hz,6H)。

3-2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲醇（AN）的合成

将3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲酸甲酯840mg（2.7mmol）溶于6mL的THF中，降温至0℃并用氩气保护，然后加入二异丁基氢化铝（3.8mL，1.5M甲苯溶液），继续反应并自然升至室温，然后在室温下继续反应10h左右，点板显示反应结束。然后加入少量甲醇和水淬灭，接着加入3mL2N的氢氧化钠溶液，过滤除去固体。溶液用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱纯化得到3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲醇（AN）（600mg，78%）。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.35–7.46(m，3H),3.35(m,1H),4.35(m,1H),1.4(d,J=7.0Hz,6H)。

3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲醛（AO）的合成

将3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲醇286mg（1mmol）溶于5mL无水二氯甲烷中，与室温下加入Dess-Martin氧化剂424mg（1mmol），室温搅拌2h左右，点板显示反应结束。反应结束后，蒸干溶剂用乙酸乙酯溶解水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱纯化，得到220mg的3-（2,6-二氯苯基）-5-异丙基-4异恶唑甲醛（AO）（78%）。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.92(s,1H),7.68–7.68(m，3H),3.82(m,1H),1.4(d,J=7.0Hz,6H)。

化合物A-40的合成

将A-6（73mg，0.2mmol）溶于2mL的甲醇中，加入0.4mmol的3-(2,6-二氯苯基)-5-异丙基异恶唑-4-甲醛（AO），0.02mL的乙酸和12mg（0.2mmol）的氰基硼氢化钠与室温下搅拌，反应2d后，反应结束。结束后将溶剂蒸干，加入乙酸乙酯用饱和碳酸氢钠洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。粗品用硅胶柱分离提纯。得到纯品20mg的化合物A-40（15%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.04(s,1H),9.18(s,1H),7.65–7.53(m,3H),7.43(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.39(m,1H),6.71(d,J=8.5Hz,1H),6.46(s,2H),6.42(t,J=5.5Hz,1H),3.98(d,J=5.5Hz,2H),3.47(m,1H),1.34(m,15H)。ESI-MS（(m/z)622，[M+H]⁺）。

实施例41：化合物A-41的合成

取化合物C（4-氨基-2叔丁基苯酚的三氟乙酸盐）（238mg，1mmol）溶于甲醇（10mL）中，加入环己酮（200mg，2mmol）于室温下搅拌。然后加入氰基硼氢化钠（95mg，1.5mmol），加完后于室温下继续反应5-8h。反应过程中用TLC检测反应，以化合物C完全转化为反应终点。反应结束后，蒸干溶剂，用乙酸乙酯和水分层，有机层干燥蒸干后直接用于下一步。

取化合物8（2,6-二氯-4-硝基苯甲酸）（235mg，1mmol）溶于二氯亚砜与二氯甲烷的混合溶液（SOCl₂，2mL；DCM，3mL）中，接入回流冷凝管，加热至回流并保温8h左右，反应结束。反应结束后减压蒸除溶剂，加入5mL二氯甲烷并再次蒸干溶剂，如此反复三次确保二氯亚砜完全蒸干。最后用5mL二氯甲烷溶解，并缓慢滴入上步得到的4-环己胺基-2-叔丁基苯酚的5mL二氯甲烷溶液中，加完后加入三乙胺（200mg，2mmol）继续反应2h左右，TLC检测反应完全结束。反应结束后，向体系中加入1N稀盐酸分层，二氯甲烷层用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干后柱层析得到中间体（N-（3-叔丁基-4羟基苯基）-N-环己基-2,6-二氯-4-硝基苯甲酰胺）（180mg，40%）。

取N-（3-叔丁基-4羟基苯基）-N-环己基-2,6-二氯-4-硝基苯甲酰胺（464mg，1mmol）溶于甲醇（20mL）中，加入去离子水（2mL），饱和氯化铵水溶液（2mL）和锌粉（640mg，10mmol），然后接入冷凝管，加热至回流温度并保温8-10h。反应过程中用TLC检测，

反应结束后，蒸干溶剂用乙酸乙酯和水分层，有机层用食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干得粗品。

上步所得粗品直接溶于甲醇（10mL）中，加入37%的甲醛水溶液（500mg，5mmol），乙酸（0.1mL）和氰基硼氢化钠（95mg，1.5mmol）并与室温下反应过夜（20h）。反应结束后，蒸干溶剂用乙酸乙酯萃取，柱层析分离得到目标化合物A-41（220mg，46%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.46(s,1H),7.03(d,J=2.3Hz,1H),6.93(dd,J=8.4,2.3Hz,1H),6.58(d,J=8.4Hz,1H),6.45(s,2H),4.55–4.40(m,1H),2.80(s,6H),1.98–1.64(m,4H),1.71–1.46(m,1H),1.43–1.27(m,2H),1.22(s,9H),1.27–0.83(m,3H).ESI-MS((m/z)463，[M+H]⁺)。

实施例42：化合物A-42的合成

化合物A-42的合成方法与A-41类似，用3-吡啶甲醛替换环己酮得到目标化合物A-42（总收率23%）。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ8.90(d,J=2.0Hz,1H),8.88(d,J=5.4Hz,1H),8.75–8.70(m,1H),8.18(dd,J=8.1,5.8Hz,1H),7.01(dd,J=8.4,2.7Hz,1H),6.98(d,J=2.6Hz,1H),6.60(d,J=8.4Hz,1H),6.58(s,2H),5.31(s,2H),2.91(s,6H),1.22(s,9H).ESI-MS((m/z)472，[M+H]⁺)。

实施例43：化合物A-43的合成

化合物A-43的合成方法与A-41类似，用环己基甲醛替换环己酮得到目标化合物A-43（总收率18%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.17(d,J=2.6Hz,1H),7.02(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.54(d,J=8.4Hz,1H),6.35(s,2H),5.76(s,1H),3.75(d,J=7.4Hz,2H),2.85(s,6H),1.86(d,J=12.6Hz,2H),1.77–1.49(m,4H),1.29(s,9H),1.22–0.94(m,5H).ESI-MS((m/z)477，[M+H]⁺)。

实施例44：化合物A-44的合成

化合物A-44的合成与A-41类似，用N-Boc-4-哌啶甲醛替代环己酮得到目标化合物A-44（总收率13%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.62(s,1H),9.00(s,1H),8.83(s,1H),7.03–6.93(m,2H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),6.50(s,2H),3.75–3.66(m,2H),3.25(d,J=12.3Hz,2H),3.16(s,2H),2.81(s,6H),1.94–1.71(m,3H),1.55–1.38(m,2H),1.20(s,9H).ESI-MS((m/z)478，[M+H]⁺)。

实施例45：化合物A-45的合成

化合物A-45的合成分为两步，第一步为A-12与N-Boc-4哌啶甲醛还原氨化得到，操作类似于A-13的合成，用N-Boc-4哌啶甲醛替代甲醛得到中间体。

第二步为成盐反应，将中间体（54mg，0.1mmol）溶于5mL乙酸乙酯中，接着于室温下加入1mL饱和的盐酸乙醇溶液，于室温下搅拌0.5h左右。TLC检测反应完全转化为目标化合物，减压下蒸除溶剂得目标化合物A-45（67%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),8.82(d,J=9.0Hz,1H),8.57–8.45(m,1H),7.38–7.19(m,7H),6.85(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.78(d,J=2.6Hz,1H),6.56(d,J=8.5Hz,1H),6.43(s,2H),4.96(s,2H),3.22(d,J=11.3Hz,2H),2.86(d,J=6.8Hz,2H),2.82–2.69(m,2H),1.79(d,J=12.8Hz,2H),1.35–1.18(m,3H),1.10(s,9H).ESI-MS((m/z)540，[M+H]⁺)。

实施例46：化合物A-46的合成

化合物A-46的合成为上步的中间体与甲醛的还原胺化并酸化得到。还原胺化的操作方法同化合物A-13，酸解成盐的反应同A-45合成方法的第二步类似得到目标化合物（45%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.60(s,1H),9.18(d,J=11.6Hz,1H),8.85(d,J=13.8Hz,1H),7.35–7.22(m,5H),6.85(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.77(d,J=2.6Hz,1H),6.64(d,J=8.5Hz,1H),6.52(s,2H),4.96(s,2H),3.18(d,J=7.6Hz,4H),2.82(s,3H),2.78–2.60(m,2H),1.82(s,1H),1.61(d,J=12.4Hz,2H),1.39–1.26(m,2H),1.09(s,9H).ESI-MS((m/z)554，[M+H]⁺)。

实施例47：化合物A-47的合成

化合物A-47的合成类似于A-45，用N-Boc-2-哌啶甲醛替换N-Boc-4-哌啶甲醛得到目标化合物A-47（75%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.51(s,1H),9.09–8.88(m,2H),7.44–7.13(m,5H),6.85(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.79(d,J=2.6Hz,1H),6.72(s,1H),6.58(d,J=8.5Hz,1H),6.53(dd,J=4.5,2.0Hz,2H),4.96(s,2H),3.33–3.10(m,3H),3.03(s,1H),2.79(dd,J=23.5,12.4Hz,1H),1.85–1.50(m,4H),1.48–1.32(m,2H),1.11(s,9H).ESI-MS((m/z)540，[M+H]⁺)。

实施例48：化合物A-48合成

化合物A-48的合成类似于A-45，用（S）N-Boc-2-脯氨醛替换N-Boc-4-哌啶甲醛得到目标化合物（58%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),9.19(s,1H),8.82(s,1H),7.35–7.18(m,5H),6.85(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.80(d,J=2.6Hz,1H),6.60(t,J=4.9Hz,1H),6.56(d,J=8.5Hz,1H),6.52(s,2H),4.96(s,2H),3.61–3.46(m,1H),3.32–3.04(m,5H),2.05–1.94(m,1H),1.90–1.79(m,2H),1.61–1.46(m,1H),1.11(s,9H).ESI-MS((m/z)526，[M+H]⁺)。

实施例49：化合物A-49的合成

化合物A-49的合成类似于A-46，经过还原胺化和酸水解得到目标化合物。（68%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.52(s,1H),9.17(s,1H),9.09(s,1H),7.48–7.19(m,5H),6.87(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.80(d,J=2.5Hz,1H),6.65(dd,J=11.6,2.3Hz,2H),6.57(d,J=8.5Hz,1H),4.96(s,2H),3.69–3.45(m,2H),3.28–3.02(m,3H),2.90(s,3H),2.08–1.75(m,3H),1.61–1.47(m,1H),1.10(s,9H).ESI-MS((m/z)540，[M+H]⁺)。

实施例50：化合物A-50的合成

化合物A-50的合成类似于化合物A-45，用（R）N-Boc-2-脯氨醛替换N-Boc-4-哌啶甲醛得到目标化合物A-50（65%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.48(s,1H),9.14(s,1H),8.78(s,1H),7.36–7.19(m,5H),6.85(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.80(d,J=2.6Hz,1H),6.59(s,1H),6.56(d,J=8.4Hz,1H),6.52(s,2H),4.96(s,2H),3.59–3.41(m,1H),3.34–3.19(m,2H),3.21–3.02(m,2H),2.09–1.94(m,1H),1.93–1.73(m,2H),1.62–1.45(m,1H),1.11(s,9H).ESI-MS((m/z)526，[M+H]⁺)。

实施例51：化合物A-51的合成

化合物A-51的合成类似于A-45，用N-Boc-4-哌啶酮替代N-Boc-4-哌啶甲醛得到目标化合物A-51（35%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.51(s,1H),9.08–8.86(m,2H),7.34–7.20(m,5H),6.85(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),6.76(d,J=2.5Hz,1H),6.59(d,J=8.5Hz,1H),6.49(s,2H),4.96(s,2H),3.52–3.40(m,1H),3.22(d,J=12.8Hz,2H),2.97–2.85(m,2H),1.89(dd,J=13.8,2.6Hz,2H),1.55–1.43(m,2H),1.10(s,9H).ESI-MS((m/z)526，[M+H]⁺)。

实施例52：化合物B-1，B-2的合成

取2,6-二氯-4-硝基苯甲酸（236mg，1mmol）溶于10mL甲醇中，滴加一滴浓硫酸回流反应4h左右，TLC检测，反应结束后蒸干甲醇，用乙酸乙酯溶解饱和碳酸氢钠调至碱性，有机层用盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干后直接用10mL乙醇溶解，加入铁粉（560mg，10mmol）和1mL饱和氯化铵溶液。加热至回流反应4-5h，TLC检测反应几乎完全。结束后蒸干溶剂，加乙酸乙酯溶解并滤去铁泥，乙酸乙酯用盐水洗，无水硫酸钠干燥，得到目标化合物粗品化合物T（198mg，90%）。

取上步所得粗品化合物T（220mg，1mmol）加入48%的氢溴酸（20mL）中，微热使其溶解，然后降温至-10～-5℃区间，有白色粉末状固体析出，剧烈搅拌下分批加入亚硝酸钠（76mg，1.1mmol），在加入过程中控制反应温度在-5℃以下。加完后，保温搅拌1h，然后加入溴化亚铜粉末（144mg，1mmol），加完后缓慢升至回流温度，并在回流温度下反应1～2h，过程中TLC检测。反应结束后，加乙酸乙酯萃取，有机层用饱和碳酸钠调至碱性，盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到单溴和双溴的混合物（150mg），硅胶柱难以分离。

取上步得到的混合物（150mg）溶于5mL甲醇中，加入1N氢氧化锂溶液，微热于50℃反应10h，TLC检测原料完全转化。结束后蒸干溶剂调至酸性乙酸乙酯萃取，盐水洗，无水硫酸钠干燥得到粗品的混合物（138mg）。

将上步得到的粗品溶于THF（5mL）中，加入2-叔丁基-4-氨基苯胺三氟乙酸盐（150mg，0.6mmol），EDCI（191mg，1mmol），DIPEA(260mg，2mmol)并于室温下搅拌。反应过程中用TLC检测至无明显变化。后处理蒸干溶剂，稀酸和乙酸乙酯分层，有机层用盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到目标产物的混合物。混合物有反相硅胶柱（洗脱剂为75%的甲醇水）分离纯化得到单溴产物B-1（96mg，0.23mmol）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.40(s,1H),9.27(s,1H),7.91(s,2H),7.44(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.39(d,J=2.4Hz,1H),6.75(d,J=8.6Hz,1H),1.35(s,9H).)（ESI-MS(m/z)(417，[M+H]⁺)）；双溴产物B-2（50mg,0.1mmol）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),9.30(s,1H),8.13(s,1H),7.43(dd,J=8.5,2.4Hz,1H),7.37(d,J=2.3Hz,1H),6.76(d,J=8.5Hz,1H),1.35(s,9H).ESI-MS((m/z)495，[M+H]⁺)。

实施例53：化合物B-3的合成

取化合物B-1（417mg，1mmol）溶于5mL甲苯中，加入苯硼酸（242mg，2mmol），碳酸钾（280mg，2mmol），四三苯基膦钯（23mg，0.02mmol）并于室温下搅拌，氩气保护然后缓慢升温至回流温度。在此温度下反应4～5h，反应过程中用TLC检测反应。反应结束后蒸干甲苯，用乙酸乙酯和水分层，有机层用盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离得到目标化合物B-3（370mg，90%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.69–7.39(m,9H),7.32(d,J=2.5Hz,1H),6.73(d,J=8.5Hz,1H),5.26(s,1H),1.43(s,9H).ESI-MS((m/z)414，[M+H]⁺)。

实施例54：化合物B-4的合成

操作步骤同化合物B-3的合成，用对氯苯硼酸（312mg，2mmol）代替苯硼酸。柱层析得到目标化合物B-4（380mg，85%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),9.27(s,1H),7.89(s,2H),7.84(d,J=8.6Hz,2H),7.57(d,J=8.6Hz,2H),7.47(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.43(d,J=2.5Hz,1H),6.76(d,J=8.5Hz,1H),1.35(s,9H).ESI-MS((m/z)448，[M+H]⁺)。

实施例55：化合物B-5的合成

取化合物B-1（417mg，1mmol）溶于5mL吡啶中，加入对氯苯酚（256mg，2mmol），氧化铜（240mg，3mmol），碳酸钾（280mg，2mmol）用氩气保护，然后缓慢升温至回流温度。在此温度下反应48h，反应过程中用TLC检测反应。反应结束后蒸干吡啶，用乙酸乙酯和稀盐酸分层，有机层用盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离得到目标化合物B-5（106mg，23%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.55(s,2H),7.37–7.31(m,4H),7.22(s,1H),7.06(d,J=2.4Hz,1H),7.04(d,J=8.9Hz,2H),5.86(s,1H),1.46(s,9H).ESI-MS（(m/z)464，[M+H]⁺）。

实施例56：化合物B-6的合成

将2,6-二氯-4-氨基苯甲酸甲酯（220mg，1mmol）溶于10mL48%氢溴酸中，微热溶解后降温至-5℃左右，加入亚硝酸钠（76mg，1.1mmol），加完后保温0.5h，然后将混合溶液加入回流的沸水中，回流反应2～3h，反应过程用TLC检测，结束后用乙酸乙酯萃取，盐水洗，无水硫酸钠干燥，得到粗品。

将上步的粗品溶于10mL丙酮中，加入溴化苄（171mg，1mmol），碳酸钾（280mg，2mmol）回流反应10h，反应过程用TLC检测，反应结束后蒸干丙酮，用乙酸乙酯和水分层，有机相用盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到2，6-二氯-4-苄氧基苯甲酸甲酯。

将上步所得的产物溶于5mL甲醇中，加入1N氢氧化锂溶液（2mL）与室温下反应24h左右，反应过程中用TLC检测，反应结束后蒸干溶剂调至酸性，用乙酸乙酯萃取，然后用饱和碳酸氢钠分层，取水相调至酸性，再用乙酸乙酯萃取，盐水洗，无水硫酸钠干燥得到粗品。

将粗品溶于5mL四氢呋喃中，加入2-叔丁基-4-氨基苯酚三氟乙酸盐（130mg，0.5mmol），EDCI(190mg，1mmol)，二异丙基乙胺（260mg，2mmol）于室温下搅拌24h。反应过程中用TLC检测，结束后蒸干溶剂用乙酸乙酯和稀盐酸分层，有机相用盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离纯化得到目标化合物B-6（93mg，四步总收率21%）。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.57(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),7.49–7.34(m,6H),7.24(s,1H),6.99(s,2H),6.71(d,J=8.5Hz,1H),5.11(s,2H),4.87(s,1H),1.44(s,9H).ESI-MS((m/z)444，[M+H]⁺)。

实施例57：化合物B-7的合成

将上步所得产物B-6(110mg,0.25mmol)溶于5mL甲醇中，氩气置换后加入催化量的10%钯碳，然后用氢气置换，并于室温下继续反应24h。反应过程用TLC检测，结束后滤去钯碳，蒸干溶剂用乙酸乙酯和水分层，柱层析分离得到目标化合物B-7（78mg，88%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.57(s,1H),10.21(s,1H),9.21(s,1H),7.45(dd,J=8.6,2.6Hz,1H),7.41(d,J=2.6Hz,1H),6.89(s,2H),6.73(d,J=8.6Hz,1H),1.34(s,9H).ESI-MS((m/z)354，[M+H]⁺)。

实施例58：化合物C-1的合成

1）3,5-二氯-4-甲酰基苯甲酸的合成。

取3,5-二氯苯甲酸（191mg，1mmol）溶于5mL无水四氢呋喃中，并用氩气保护，接着降温至-78℃。在此温度下，缓慢滴加2N二异丙氨基锂（LDA）的四氢呋喃溶液（0.6mL，1.2mmol）。滴加完毕后继续搅拌0.5～1h。然后缓慢滴加溶有0.5mL DMF的2mL四氢呋喃溶液，加完后继续反应2h，TLC检测，反应几乎结束。后处理用1N的稀盐酸淬灭，蒸干溶剂，用乙酸乙酯和水分层，乙酯层用柱层析分离纯化得到目标化合物3,5-二氯-4-甲酰基苯甲酸（175mg，80%）。

2）3,5-二氯-4-甲酰基本甲酸甲酯的合成。

去上步产物（219mg，1mmol）溶于10mL的甲醇中，加入2滴浓硫酸，升温至回流，回流温度下反应4～5h，TLC检测反应几乎完全。蒸干甲醇，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液分层，蒸干有机层，直接投下一步。

3）2,6-二氯-4-甲氧羰基苯甲酸的合成。

将上步得到的产物溶于5mL丙酮和0.3mL水的混合溶剂中，在冰浴条件下滴加Jones试剂，滴加完毕，继续反应10h，TLC检测，反应结束后，蒸干丙酮，体系用乙酸乙酯和水分层。乙酸乙酯层用柱层析分离纯化，得到目标化合物2,6-二氯-4-甲氧羰基苯甲酸（150mg，60%）。

4）4-（3-叔丁基-4-羟基-苯基氨基甲酰基）-3,5-二氯苯甲酸甲酯的合成。

取2,6-二氯-4-甲氧羰基苯甲酸（250mg，1mmol）溶于10mL无水四氢呋喃中，加入EDCI（230mg，1.2mmol,DIPEA(193mg,1.5mmol),DMAP(24mg,0.2mmol)和4-氨基邻叔丁基苯酚的三氟乙酸盐（238mg，1mmol），于室温下搅拌过夜，TLC检测反应，结束后，用乙酸乙酯和水分层，乙酯层柱层析分离纯化，得到目标化合物（258mg，65%）。

5）取4-（3-叔丁基-4-羟基-苯基氨基甲酰基）-3,5-二氯苯甲酸甲酯（397mg，1mmol）溶于10mL甲醇中，加入1N的氢氧化锂溶液（3mmol），加热至50℃，反应过程用TLC跟踪，结束后，调至酸性，乙酸乙酯和水分层，乙酯层用柱层析分离纯化得到目标化合物C-1（314mg，82%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.59(s,1H),10.49(s,1H),9.30(s,1H),7.97(s,2H),7.47(d,J=8.7Hz,1H),7.40(s,1H),6.76(d,J=8.7Hz,1H),1.35(s,9H)。ESI-MS（(m/z)380，[M–1]^–）。

实施例59：化合物C-2的合成

取4-（3-叔丁基-4-羟基-苯基氨基甲酰基）-3,5-二氯苯甲酸甲酯（397mg，1mmol）溶于10mL无水四氢呋喃中，冰浴降温至0℃，在0℃下加入2N DIBAL-H的四氢呋喃溶液（1.2mL，2.4mmol）加完后继续反应4～5h，TLC点板检测，结束后蒸干四氢呋喃，用乙酸乙酯和水分层，乙酸乙酯层通过柱层析分离得到目标化合物C-2（265mg，71%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.37(s,1H),9.27(s,1H),7.47(dd,J=1.9,8.5Hz,1H),7.46(s,1H),7.42(d,J=1.9Hz,1H),6.74(d,J=8.5Hz,1H),5.54(t,J=5.9Hz,1H),4.55(d,J=5.9Hz,2H),1.34(s,9H).ESI-MS（(m/z)368，[M+H]⁺）。

实施例60：化合物C-3的合成

取化合物2,6-二氯-4-甲氧羰基苯甲酸（382mg，1mmol）溶于10mL二氯甲烷中，加入2mL氯化亚砜，回流反应5h，然后蒸干溶剂，并再次用5mL二氯甲烷溶解并蒸干以确保氯化亚砜的完全除去。蒸干后得到无色油状物。将无色油状物溶于10mL二氯甲烷中，并缓慢滴加入溶有吗啡啉（174mg，2mmol）和三乙胺（203mg，2mmol）的20mL二氯甲烷中，加完后继续反应2h，TLC检测，反应结束后柱层析分离纯化，得到目标化合物C-3（349mg，77%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),9.29(s,1H),7.63(s,2H),7.47(dd,J=8.4,2.1Hz,1H),7.39(d,J=2.1Hz,1H),6.75(d,J=8.4Hz,1H),3.72–3.53(m,8H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)451，[M+H]⁺）。

实施例61：化合物C-4的合成

反应步骤同化合物C-3的合成，用二甲胺盐酸盐（162mg，2mmol）代替吗啡啉。柱层析得到目标化合物C-4（278mg，68%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),9.29(s,1H),7.61(s,2H),7.47(d,J=8.5Hz,1H),7.40(s,1H),6.75(d,J=8.6Hz,1H),2.96(d,J=27.8Hz,6H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)409，[M+H]⁺）。

实施例62：化合物C-5的合成

反应操作同化合物C-3的合成，用四氢吡咯（142mg，2mmol）代替吗啡啉。得到目标产物C-5（357mg，82%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.44(s,1H),9.29(s,1H),7.68(s,2H),7.47(d,J=8.5Hz,1H),7.40(s,1H),6.75(d,J=8.5Hz,1H),3.44(dd,J=22.0,6.2Hz,4H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)436，[M+H]⁺）。

实施例63：化合物C-6的合成

反应操作同化合物C-3的合成，用苯胺（186mg，2mmol）代替吗啡啉。得到目标产物C-6（357mg，75%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.52(s,1H),10.49(s,1H),9.34(s,1H),8.11(s,2H),7.79(d,J=8.0Hz,2H),7.47(dd,J=8.5,1.8Hz,1H),7.45–7.35(m,3H),7.16(t,J=7.4Hz,1H),6.77(d,J=8.5Hz,1H),1.36(s,9H).ESI-MS（(m/z)455，[M+H]⁺）。

实施例64：化合物C-7的合成

反应操作同化合物C-3的合成，用苄胺（214mg，2mmol）代替吗啡啉。得到目标产物C-7（325mg，66%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.47(s,1H),9.34(t,J=5.8Hz,1H),9.31(s,1H),8.02(s,2H),7.46(dd,J=8.7,2.3Hz,2H),7.40(d,J=2.3Hz,1H),7.37–7.25(m,6H),6.76(d,J=8.7Hz,1H),4.51(d,J=5.8Hz,2H),1.35(s,9H).ESI-MS（(m/z)469，[M+H]⁺）。

实施例65：化合物C-8的合成

反应操作同化合物C-3的合成，用正丙胺（120mg，2mmol）代替吗啡啉。得到目标产物C-8（327mg，77%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.46(s,1H),9.31(s,1H),8.79–8.73(m,1H),7.97(s,2H),7.46(d,J=8.6Hz,1H),7.40(s,1H),6.76(d,J=8.6Hz,1H),3.25–3.16(m,2H),1.56(m,2H),1.35(s,9H),0.90(t,J=7.3Hz,3H).ESI-MS（(m/z)423，[M+H]⁺）。

实施例66：化合物C-9的合成

反应操作同化合物C-3的合成，用2,4,6-三甲基苯胺（270mg，2mmol）代替吗啡啉。得到目标产物C-9（271mg，54%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.48(s,1H),9.98(s,1H),9.31(s,1H),8.11(s,2H),7.47(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.42(d,J=2.5Hz,1H),6.96(s,2H),6.77(d,J=8.6Hz,1H),2.27(s,3H),2.13(s,6H),1.36(s,9H).ESI-MS（(m/z)499，[M+H]⁺）。

实施例67：化合物C-10的合成

反应操作同化合物C-3的合成，用异丁胺（146mg，2mmol）代替吗啡啉。得到目标产物C-10（286mg，65%）。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.46(s,1H),9.30(s,1H),8.76(t,J=6.3Hz,1H),7.98(s,2H),7.46(dd,J=8.6,2.4Hz,1H),7.40(d,J=2.4Hz,1H),6.76(d,J=8.6Hz,1H),3.11(t,J=6.3Hz,2H),1.85(m,1H),1.35(s,9H),0.90(d,J=6.7Hz,6H).ESI-MS（(m/z)437，[M+H]⁺）。

以上二芳酰胺类衍生物的制备例作参考，其它的二芳酰胺类衍生物也可以参照上述方法制得。

试验实施例

试验实施例1:均相时间分辨荧光方法（HTRF）测定化合物A-1及其衍生物的拮抗活性

本发明测试化合物A-1及其衍生物是否为FXR的配体。若为激动剂是否能促进FXR配体结合区蛋白（FXRα_LBD）与类固醇受体共激活因子1（Steroid receptor coactivator1,SRC1）的结合，若为拮抗剂是否能拮抗FXR阳性激动剂CDCA引起的FXRα_LBD与SRC1的相互作用。

1)实验原理

均相时间分辨荧光的原理基于荧光共振能量转移（Fluorescence Resonance EnergyTransfer，FRET）方法。FRET是指两个荧光发色基团足够靠近时，当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态，在该电子回到基态前，通过偶极子相互作用，实现了能量向邻近的受体分子转移（即发生能量共振转移）。荧光试验法的灵敏度常常受到测试试剂或容器背景信号干扰的限制。而时间分辨荧光光谱法则引入了第三个参数：荧光寿命。本试验HTRF技术结合了镧系元素铕（Eu）的荧光寿命长及铕供体与合适受体XL665激发后能量转移的斯托克斯频移（stokes shift）（即荧光团激发峰和发射峰之间的差异）大而明显的特点，在314nm光激发下，可检测668nm，620nm处的荧光信号，其中668nm处是两分子相互作用的特征荧光信号，620nm处是本底荧光。在本试验中，GST-FXRα_LBD可被镧系元素Eu标记的Anti-GST所识别，Biotin-SRC-1能被Streptavidin-XL665所识别，单独加待测化合物或同时加CDCA和待测化合物时，检测FXRα_LBD与SRC-1相互作用产生的荧光共振能量转移信号，可筛选FXRα_LBD的激动剂或拮抗剂。

2)实验材料

GST-FXRα_LBD蛋白由本实验室表达纯化，生物素标记的多肽Biotin-SRC1(aa568–780)由生工生物上海工程技术有限公司合成，纯度达到98%以上。Glutathione-Sepharose4B resin亲和纯化树脂购自GE公司。SDS-PAGE低分子量Marker购自Amersham公司。浓缩蛋白装置Ultra4（截留分子量为10kDa）购自Millipore公司。Isopropyl β-D-thiogalactoside（IPTG）购自Promega公司。Eu-labbled anti-GST，Streptavidin-XL665购自CISbio公司。氟化钾（KF）、二甲亚砜（DMSO）、CDCA、GS购自Sigma公司。化合物A-1由本实验室自行合成。

3)实验方法

a)GST-FXRα_LBD蛋白的表达、分离、纯化

将表达菌株BL21(DE3)/pGEX-6p-1-FXRα_LBD涂布至含氨苄(终浓度为100μg/mL)的LB固体平板上，将平板倒置放37℃培养箱培养过夜，随后从平板上挑取单克隆转移至20mL LB液体培养基中(含100μg/mL氨苄)，37℃，220r/min培养12小时。取10mL菌液转接于1L的LB培养基中，37℃，220rpm/min振荡培养至OD600值为1.0时，加入IPTG至终浓度0.5mM，20℃、220rpm/min继续培养6小时，离心收集菌体。用裂解缓冲液（50mM Tris,500mM NaCl,5mM DTT,pH8.0）重悬再离心收集菌体，-80℃冷冻保存。将冻存的菌体重悬于裂解缓冲液中，在冰上超声破碎，经4℃、12000rpm离心25分钟后，将上清液(蛋白粗提液)注入预先用裂解缓冲液平衡过的谷胱甘肽-S-转移酶（GST）树脂中，先用20mL洗脱缓冲液（50mM Tris,300mM NaCl,5mM DTT,pH8.0）洗脱杂蛋白，再用15mL50mM还原性谷胱甘肽洗脱GST-FXRα_LBD蛋白，经SDS-PAGE鉴定蛋白纯度。纯化好的GST-FXRα_LBD蛋白透析至缓冲液（20mM Tris,50mM NaCl,1mM DTT,pH8.0）中，用Ultra4(截留分子量为10kDa)进行浓缩，紫外分光光度计法测定蛋白浓度，用于下一步的化合物筛选及活性测定实验。

b)基于HTRF的化合物筛选及活性测定

每个化合物测试体系包括100μL反应液(100mM HEPES,125mM KF,0.125%(w/v)CHAPS,0.05%奶粉,10nM GST-FXRα_LBD,0.03nM anti-GST-(Eu)K,100nMBiotin-SRC1,1.66nM SA/XL665)，加入1μL DMSO或待筛化合物于96孔或384孔板中，室温反应30min，检测314nm光激发后665nm和620nm处的荧光强度。拮抗剂的筛选方法类似，在反应体系中同时加入FXR阳性激动剂CDCA与待筛化合物，检测荧光强度的变化。IC₅₀值的测定是在反应体系中加入不同浓度的活性化合物与CDCA共孵育30min，测定荧光强度的变化。根据化合物不同浓度下的抑制率与浓度的关系，用Origin7.5软件拟合出IC₅₀值。

4)实验结果

通过HTRF方法测定了A-1及其衍生物抑制50μM CDCA引起FXRα_LBD与SRC-1相互作用的IC₅₀值，实验结果见表1。化合物A-1的拮抗活性的浓度效应曲线，如附图1（A）所示，A-1可抑制50μM CDCA引起的FXR招募共激活因子SRC1的作用，这种抑制作用具有浓度依赖性。用Origin7.5软件对其抑制率进行拟合，得到其半数抑制率IC₅₀值为25.5μM，见附图1（B）。

表1：化合物A-1及其衍生物的IC₅₀值

样品	IC₅₀(μM)	样品	IC₅₀(μM)
				A-1	25.50	A-34	13.90
A-6	5.28	A-35	28.72
				A-7	2.17	A-36	14.80
A-12	4.55	A-37	7.21
				A-13	1.59	A-40	13.80
A-15	1.67	A-45	4.90
				A-17	12.50	A-46	6.1
A-19	4.50	A-47	4.6
				A-24	5.60	A-48	4.8
A-26	0.30	A-49	5.2
				A-27	2.53	A-50	5.2
A-29	5.25	A-51	6.8
				A30	4.93	B-1	9.90
A31	3.66	B-2	3.60
				A-33	9.31

试验实施例2:表面等离子共振（Surface plasmon resonance,SPR）方法测定化合物A-1的结合活性

用SPR方法测定化合物A-1和蛋白FXRα_LBD的结合活性。

1)实验原理

SPR技术被广泛应用于分子间相互作用研究，其原理是当入射光以临界角入射到两种不同透明介质（玻璃与空气）的界面时将产生全反射，且反射强度在各个角度上都应相同，但若在介质表面镀上一层金膜后，由于入射光可引起金属中自由电子的共振，从而导致反射光在一定角度内大大减弱，使反射光完全消失的角度称作共振角。共振角会随金属薄膜表面通过的液相的折射率的变化而改变，折射率的变化（以共振单位Resonance Unit,RU表示）与金属表面结合的分子质量成正比。因此，金属表面是产生SPR的物理条件，SPR检测靠近传感器表面液体层的质量变化，即折射率的变化。当溶液中的分子与靶分子结合时，质量增加，解离时则质量减少。这一简单理论形成了传感图的基础——连续、实时检测相互作用分子的结合和解离。传感图提供了待测样品与大分子实时结合的特性，通过分析软件对传感图进行拟和，可得到两分子相互作用的动力学和亲和力常数。基于这一原理，SPR技术可用于筛选小分子化合物、测定蛋白-蛋白、蛋白-小分子、蛋白-DNA的相互作用。实验时将目标蛋白偶联在芯片上，待测样品流经芯片表面，得到的共振信号与蛋白表面结合样品的分子量成正比。根据浓度依赖性曲线，经过数据分析可得到详细的结合动力学结果，包括解离平衡常数（KD），结合速率常数（ka），解离速率常数（kd）,得到待测样品结合强度的信息。

2)实验材料

Glutathione-Sepharose4B resin亲和纯化树脂、PreScission Protease购自GE公司。SDS-PAGE低分子量Marker购自Amersham公司。浓缩蛋白装置Ultra4（截留分子量为10kDa）购自Millipore公司。Biacore3000、CM5芯片、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)、乙醇胺盐酸盐均购自Biacore AB公司。DMSO购自Sigma公司。化合物A-1由本实验室自行合成。

3)实验方法

a)FXRα_LBD蛋白的纯化

FXRα_LBD蛋白的表达、分离、纯化方法同上，结合在树脂上的GST-FXRα_LBD蛋白加入50μL PreScission Protease4℃孵育16小时，收集洗脱液，得到纯化的FXRα_LBD蛋白。此蛋白溶液透析至PBS缓冲液（NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na₂HPO₄4.3mmol/L，KH₂PO₄1.4mmol/L，pH7.4）中，用Ultra4(截留分子量为10kDa)进行浓缩，紫外分光光度计法测定蛋白浓度，用于下一步的SPR实验。

b)FXRα_LBD蛋白的偶联及动力学实验

FXRα_LBD新鲜制备，通过标准氨基偶联的方法偶联到芯片CM5(Biacore AB,Uppsala,瑞典)表面上，所有的实验都在25℃进行。具体步骤如下：首先，配制HBS-EP工作缓冲液(10mM Hepes,150mM NaCl,3.4mM EDTA,0.005%(v/v)表面活性剂P₂₀,pH7.4)，平衡机器至基线平稳。偶联时，0.2M EDC和50mM NHS1：1混和，以5μL/min进样7分钟活化芯片表面。FXRα_LBD用10mM(pH4.2)的乙酸钠溶液稀释至终浓度为25μg/mL，以5μL/min流速进样固定在芯片表面。最后，1M乙醇胺盐酸盐(pH8.5)以5μL/min流速进样7分钟，封闭芯片表面活化的氨基，至最终的偶联量为6000RU。FXRα_LBD偶联完成后，平衡过夜至基线平稳，进行化合物动力学研究。

c)动力学实验

A-1溶解在100％的DMSO中，母液浓度为40mM。将A-1配成不同的浓度梯度，以30μL/min进样2min，然后在相同缓冲液中解离2min，可得到一系列不同浓度的化合物与FXRα_LBD相互作用的传感图。在分析数据时，使用Biacore的BIAeval软件中的1∶1Langmuir结合模型进行拟合，得到确切的动力学常数。

4)实验结果

FXRα_LBD偶联至CM5芯片上，不同浓度的A-1流经芯片表面，检测其与FXRα_LBD蛋白的结合信号如附图2所示，随着A-1浓度的增加，A-1与FXRα_LBD结合的RU值也相应增加，说明A-1与FXRα_LBD可直接结合，用Biacore的BIAeval软件中的1∶1Langmuir结合模型进行拟合，其K_D值为29.2μM，说明A-1可结合到FXRα_LBD蛋白上。

试验实施例3:细胞水平测试化合物A-1为FXRα的拮抗剂

在细胞水平上通过FXR顺式反应元件（FXRE）调控的荧光素酶报告基因测定的方法测试A-1对FXRα:RXRα异源二聚体的反式激活活性的影响。

1)实验原理

在细胞质中，FXRα与RXRα形成异源二聚体并招募共激活因子，当激动剂结合到FXRα-LBD上，FXRα/RXRα异源二聚体入核，作用于靶基因的FXRE上从而启动该基因的转录。将FXRE克隆到pGL3-启动子载体中构建重组载体pGL3-FXRE-Luc，在该重组载体中，萤火虫荧光素酶基因的转录只受到反应元件FXRE的调控。因此，萤火虫荧光素酶的活性就相当于FXRα的转录活性。将pCDNA3.1-FXRα，pCDNA3.1-RXRα，pGL3-FXRE-Luc及内参质粒pRL-SV40共转染到细胞中，通过分别测定萤火虫荧光素酶及内参荧光素酶活性，二者的比值即表征FXRα的转录活性。

2)实验材料

细胞培养：HEK293T细胞（人源胚胎肾细胞，购自美国ATCC公司），用DMEM培养基（加10%血清）在24孔板里培养（培养条件为37℃，5%CO₂）。本实验所用化合物CDCA，GS购自sigma公司；CaCl₂-BBS钙转试剂购自碧云天生物技术研究所；DualLuciferase Assay System Kit试剂盒（Luc试剂盒）购自Promega公司。pCDNA3.1-FXRα、pCDNA3.1-RXRα、pGL3-FXRE-Luc及内参质粒pRL-SV40为根据本领域常规技术由本实验室构建。化合物A-1由本实验室自行合成。

3)实验方法

HEK293T细胞于24孔板中生长至40～60%汇合度，将培养基更换为无抗生素的含10%血清的DMEM培养基。FXR全长质粒pCDNA3.1-FXRα（400ng/孔）,荧光素酶报告基因质粒pGL3-FXRE-Luc（400ng/孔）和内参质粒pRL-SV40（100ng/孔）用CaCl₂-BBS钙转试剂（40μL/孔）转染于细胞中，5～6小时后换为DMEM完全培养基，同时加药处理细胞，继续培养18～24小时。萤火虫荧光素酶和内参荧光素酶的活性参照Luciferase试剂盒说明书（Promega）进行测定。

4)实验结果

结果如附图3所示，CDCA可有效促进相应的荧光素酶的表达，即CDCA与FXRα_LBD结合，促进了FXR的转录活性。化合物A-1与CDCA共同孵育，则能拮抗CDCA对FXR的激动作用，呈浓度依赖性。研究结果表明，A-1可浓度依赖性地拮抗CDCA引起的FXRα的转录活性。

试验实施例4:动物水平测试化合物A-1降血糖、血脂功能

1)实验原理

本实验采用2型糖尿病db/db小鼠，观察化合物A-1口服用药后小鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、果糖胺、胰岛素耐量、游离脂肪酸、总胆固醇、甘油三酯（血清和肝脏中）、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血清胰岛素、血压、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总蛋白、白蛋白、总胆红素等各项糖尿病相关指标，以评价A-1对2型糖尿病的治疗作用。

2)实验材料

化合物A-1由本实验室自行合成；阳性化合物文迪雅(马来酸罗格列酮片，Ros)由葛兰素史克公司生产，白色片剂（批号：10055183），4mg/片；DMSO、Tween80购自Sigma公司；BKS.Cg-m+/+Leprdb/J小鼠，引自Jackson公司（美国），由本实验室自行繁育。

3)实验方法

db/db小鼠（6～7周龄）饲养于SPF级动物房中，适应性驯养一周后。根据测定禁食6小时后空腹血糖结果的均值将小鼠分为溶剂对照组、阳性对照组和受试物组，每组8只。各组小鼠每日早上10：00～11：00分别灌胃给予溶剂（5%Tween80），10mg/kg阳性化合物（罗格列酮），20mg/kg A-1。每周监测血糖、进食量等指标，5周后进行胰岛素耐量测试，处死后检测A-1对db/db小鼠血清及肝脏中糖、脂代谢的影响。

4)实验结果

用db/db小鼠模型综合评价了20mg/kg的A-1口服给药后对小鼠血糖、胰岛素抵抗、血脂调节等方面的药效。结果显示A-1表现出明显的降血糖、血脂作用，并且可显著改善胰岛素敏感性。主要研究结果如下：

a)A-1对db/db小鼠空腹血糖的影响

db/db小鼠（6～7周龄）饲养于SPF级动物房中，适应性驯养一周后。根据测定禁食6小时后空腹血糖结果的均值将小鼠分为溶剂对照组、阳性对照组和受试物组，每组8只。各组小鼠每日早上10：00～11：00分别灌胃给予溶剂（5%Tween80），10mg/kg阳性化合物文迪雅(马来酸罗格列酮片，Ros)，20mg/kg A-1。空腹血糖给药期间每周监测一次，糖化血红蛋白（HbA-1c）分组前测定一次，实验结束监测一次。附图4A结果显示：溶剂对照组小鼠实验期间空腹血糖一直维持在相对较高水平。阳性对照组的空腹血糖一直处于溶剂组下方，这种现象一直持续到实验结束。A-1组的血糖从第一周就开始处于溶剂组下方，一直持续到实验结束，表现出明显的降血糖效果。从血糖变化的曲线下面积图中可以看到，A-1组空腹血糖与溶剂对照组相比有降低，并具有显著性差异（图4B）。

b)A-1对db/db小鼠糖化血红蛋白的影响

给药前，糖化血红蛋白值在溶剂对照组、阳性组、A-1组各组间没有显著性差异的差别，给药结束后，阳性组的糖化血红蛋白与溶剂对照组相比显著下降，A-1组与溶剂对照组也表现出明显下降糖化血红蛋白含量的作用（图5）。

c)A-1对db/db小鼠血脂调节效果评价

给药结束后，检测了A-1调节血脂的效果。如附图6所示，给药前，各组小鼠甘油三酯（TG）水平没有显著性差异，给药后检测小鼠的TG水平，与溶剂对照组相比，A-1组给药可以显著性降低TG。

检测给药前、后小鼠的低密度脂蛋白（LDLC）水平，见附图7，与溶剂对照组相比，A-1组给药可以显著性降低血清中的LDLC含量。

给药前、后检测小鼠的非酯化脂肪酸（NEFA）水平，见附图8，与溶剂对照组相比，A-1组给药可以显著性降低血清中的NEFA含量。

d)A-1对db/db小鼠胰岛素耐量的影响

各组小鼠于给药后第5周进行胰岛素耐量实验。给db/db小鼠腹腔注射1.5U/kg的胰岛素，于给胰岛素前和给胰岛素后15、30、45、60、90和120min测定血糖值。A-1组小鼠在给胰岛素前和给胰岛素后15、30、45、60、90和120min的血糖值与溶剂对照组相比有降低趋势，并具有显著性差异，因此表现出明显的胰岛素敏感性（图9A）。从血糖变化的曲线下面积图中可以看到，A-1组空腹血糖与溶剂对照组相比有降低，并具有显著性差异（图9B）。

试验实施例5:动物水平测试化合物A-1降胆固醇功能

1)实验原理

本实验采用高胆固醇诱导的小鼠模型，观察化合物A-1口服用药后是否降低小鼠肝脏中胆固醇的含量，以评价A-1作为FXR拮抗剂降胆固醇的效果。

2)实验材料

化合物A-1由本实验室自行合成；DMSO、Tween80购自Sigma公司；C57BL/6小鼠、高胆固醇饲料（普通饲料加入2%胆固醇）购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。

3)实验方法

C57BL/6小鼠（8周龄）饲养于SPF级动物房中，适应性驯养一周后，根据体重将小鼠随机分为4组，分别为普通饲料组、高胆固醇饲料组和受试物组，每组9只。除了普通饲料组外，其它各组小鼠均饲喂高胆固醇饲料。A-1（20、60mg/kg）以含2%DMSO,8%Tween80的生理盐水配制。各组小鼠每日早上10：00～11：00分别灌胃给予溶剂（含2%DMSO,8%Tween80的生理盐水），20、60mg/kg A-1，10天后处死小鼠检测A-1对小鼠肝脏中胆固醇的影响。

4)实验结果

本实验用高胆固醇小鼠模型评价了20、60mg/kg的A-1口服给药后对小鼠肝脏降胆固醇方面的药效。结果显示：高胆固醇饲喂组小鼠，肝脏内胆固醇水平显著增加，A-1口服给药10天后，能明显降低小鼠肝脏内胆固醇的含量（图10）。

Claims

1.一种下式（I）所示的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，

其中，R₁和R₂相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、C₁～C₆烷基和用C₁～C₆烷基取代的氨基；

R₃为氢；卤素；硝基；取代或未取代的5～8元芳基，所述取代的5～8元芳基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基；取代或未取代的5～8元杂芳基，所述取代的5～8元杂芳基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基；取代或未取代C₁～C₆烷基，所述取代C₁～C₆烷基的取代基为羟基或C₁～C₄烷基取代的氨基；或为下式所示结构；

其中，

R₇和R₈相同或不同，并且各自独立地为氢；C₁～C₆烷基；取代或未取代的C₃～C₈环烷基，所述取代的C₃～C₈环烷基的取代基为羟基或胺基；取代或未取代的3～8元饱和杂环基，所述取代的3～8元饱和杂环基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基；3～8元饱和杂环基C₁～C₄烷基，所述取代的3～8元饱和杂环基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元芳基C₁～C₄烷基，所述5～8元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基C₁～C₄烷基，所述5～8元杂芳基非必需地被卤代苯基或C₁～C₄烷基取代；5～8元芳基磺酰基，所述5～8元芳基非必需地被C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基磺酰基，所述5～8元杂芳基非必需地被C₁～C₄烷基取代；或C₁～C₆烷基磺酰基；5～8元芳基酰基，所述5～8元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；5～8元杂芳基酰基，所述5～8元杂芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；或C₁～C₆烷基酰基；或者R₇和R₈与其连接的氮原子一起形成3～8元饱和杂环基；

X为氧或者硫；

R₉为氢；C₁～C₆烷基；取代或未取代的5至12元芳基，所述取代的5至12元芳基的取代基为卤素或C₁～C₆烷氧甲酰基；5至12元芳基C₁～C₄烷基，其中，所述5至12元芳基非必需地被卤素或C₁～C₄烷基取代；

R₁₁为羟基；未取代或者被C₁～C₆烷基取代的氨基；5至8元芳基氨基，所述5至8元芳基非必需地被C₁～C₄烷基取代；3至7元饱和杂环基；

R₄为氢、卤素或C₁～C₆烷基；

R₅为氢；C₁～C₆烷基；C₃～C₈环烷基；C₃～C₈环烷基C₁～C₄烷基；C₃～C₈饱和杂环基C₁～C₄烷基；取代或未取代芳基C₁～C₄烷基，所述取代芳基C₁～C₄烷基中的芳基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基；取代或未取代杂芳基C₁～C₄烷基，所述取代杂芳基C₁～C₄烷基中的杂芳基的取代基为卤素或C₁～C₄烷基；

R₆为氢、C₁～C₄烷基、或者取代或未取代芳基C₁～C₄烷基，所述取代芳基C₁～C₄烷基的取代基为卤素或C₁～C₂烷基。

2.根据权利要求1所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其中，

R₁和R₂为氢或卤素；

R₃为氢；卤素；硝基；取代或未取代的苯基，所述取代的苯基的取代基为卤素、C₁～C₄烷基；未取代或被羟基取代的C₁～C₄烷基；或如下所示结构：

R₄为氢或卤素；

R₅为氢、C₁～C₆烷基；C₄～C₇环烷基；C₄～C₇环烷基C₁～C₂烷基；C₄～C₇饱和杂环基C₁～C₂烷基；苯基C₁～C₂烷基，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；或吡啶基C₁～C₂烷基，所述吡啶基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；

R₆为氢或C₁～C₄烷基。

3.根据权利要求1所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其中，

R₇和R₈为氢；C₁～C₄烷基；C₄～C₇环烷基；苯基C₁～C₂烷基，所述苯基非必需地被卤素、C₁～C₂烷基取代；吡啶基C₁～C₂烷基，所述吡啶基非必需地被卤素、C₁～C₂烷基取代；异噁唑基C₁～C₂烷基，所述异噁唑基非必需地被卤代苯基或C₁～C₄烷基取代；苯基磺酰基，所述苯基非必需地被卤素、C₁～C₂烷基取代；C₁～C₄烷基磺酰基；或C₁～C₄烷基酰基；或者R₇和R₈与其连接的氮原子一起形成饱和的5～6元杂环基；

R₉为氢、C₁～C₄烷基；取代或未取代苯基，所述取代的苯基的取代基为卤素或C₁～C₄烷氧甲酰基；取代或未取代萘基，所述取代的萘基的取代基为卤素；或苯基C₁～C₂烷基，其中，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；

R₁₀为氢；C₁～C₄烷基；苯基C₁～C₂烷基，其中，所述苯基非必需地被卤素或C₁～C₂烷基取代；取代或未取代的苯基，所述取代的苯基的取代基为卤素或C₁～C₂烷基；

R₁₁为羟基；未取代或被C₁～C₄烷基取代的氨基；苯基氨基，所述苯基非必需地被C₁～C₄烷基或卤素取代；4至6元饱和杂环基。

4.根据权利要求1所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其中，

R₇和R₈各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、环戊基、环己基、环庚基、4-哌啶基、2-吡咯烷甲基、2-哌啶甲基、4-哌啶甲基、3-吡啶甲基、4-吡啶甲基、2-噻吩甲基、苄基、3-（2,6-二氯苯基）-5异丙基异噁唑-4-甲基、甲磺酰基或对甲苯磺酰基；或者R₇和R₈与其连接的氮原子一起形成哌啶环基和哌嗪环基；

R₉为甲基、对氟苯基、对溴苯基、3-(甲基氧酰基)苯基、苄基或1-萘基；

R₁₀为氢、苄基或对氯苯基；

R₁₁为羟基、二甲胺基、丙胺基、异丁胺基、吗啉-4-基、吡咯烷-1-基、苯胺基、苄胺基或2,4,6-三甲基苯胺基。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其中，式（I）的化合物选自下面式II所示的化合物：

其中，R₁、R₃、R₄和R₅的定义与相应权利要求中的定义相同。

6.根据权利要求1所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐，其中，所述二芳酰胺类衍生物选自下列化合物：

编号结构编号结构

7.一种根据权利要求1～6中任一项所述的二芳酰胺类衍生物的制备方法，其中，所述二芳酰胺类衍生物可通过如下的合成方法之一合成：

方法一：

使结构式A所示的邻叔丁基苯酚与亚硝酸发生亚硝化反应生成结构式B所示的化合物；

使结构式B所示的化合物在催化剂存在下发生还原反应生成结构式C所示的化合物；

使结构式D所示的取代苯甲酸与氯化亚砜发生取代反应生成结构式E所示的化合物；

使结构式E所示的取代苯酰氯与结构式C所示的4-氨基邻叔丁基苯酚发生酰化反应生成结构式F所示的化合物；

使结构式F所示的苯甲酰胺类化合物与烷基卤素发生取代反应生成结构式G所示的化合物；

使结构式G所示的N-取代苯甲酰胺类化合物与烷基卤素发生取代反应生成通式I所示的化合物，

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅和R₆与相应权利要求中的定义相同。

8.一种药物组合物，其包含：治疗有效剂量的一种或多种根据权利要求1～6中任一项所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐；和任选地，药学上的常规辅料。

9.根据权利要求1～6中任一项所述的二芳酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗高血脂和2型糖尿病的药物中的用途。