CN104330431B - 一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，属于核磁共振检测方法技术领域。该方法以廉价易得化合物为内标，与已知液相色谱归一化含量的莫西克汀样品一同溶解于氘代试剂中，经过相同氘代试剂稀释至一定浓度后，转移至核磁样品管中进行核磁共振氢谱测试，然后分别对谱图中内标物及莫西克汀的定量峰进行积分，所得数据代入计算公式计算即可得到莫西克汀含量，与欧洲药典提供的液相色谱外标检测方法结果相符。本发明提供一种新的测定莫西克汀含量的方法，该方法具有内标物廉价易得、简单准确及重复性好等优点。

Description

一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法

技术领域

本发明涉及核磁共振检测方法技术领域，具体涉及一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，该方法适用于莫西克汀含量为70wt.％以上的样品的检测。

背景技术

莫西克汀是由链霉菌发酵产生的成分单一、半合成的大环内酯类药物，有着良好的驱虫活性，同时具有长效、安全等特性，是一种目前广泛应于兽医临床的广谱、高效、新型大环内酯类驱虫抗生素(参见：Parasites&Vectors 2009,2(Suppl2)，S5)。莫西克汀的含量目前一直采用已知含量的标准品作外标进行高效液相色谱测定(参见：欧洲药典，第7版，2010，2529-2531；CN103399115，2013)。由于标准样品价格昂贵，长期使用成本高，而且在存放过程中标准样品即使发生少量吸潮、污染或者降解等变化都会严重影响测定结果。因此，开发一种避免使用莫西克汀标准品的替代测试方案非常必要。

核磁共振氢谱(¹H-NMR)技术主要用于有机化合物的结构测定，它也是一种药物定量分析的重要手段，其基本原理是¹H-NMR中的共振峰面积与该共振峰包含氢原子个数成正比，该法的优点是无需引入任何校正因子、速度快、简单准确。自从广泛应用超导傅立叶变换核磁共振谱仪以来，仪器性能得到极大改善，其定量分析的精确度、准确度和重现性达到或接近高效液相色谱仪。目前很多国家和地区药典已收录核磁定量分析方法，2010年修订的中国药典也增加了核磁共振波谱的定量方法(参见：中华人民共和国药典二部，第二版，2010，附录81)。

因此，利用¹H-NMR技术，选择廉价稳定的内标物替代需要使用标准品作外标的高效液相色谱法进行莫西克汀含量测定是一项非常有意义的研究工作。

发明内容

为了克服现有高效液相色谱测量莫西克汀含量方法中存在的不足之处，本发明提供一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，该方法利用核磁共振氢谱内标法测定莫西克汀含量，具有内标物廉价易得、简单准确及重复性好等优点。

本发明采用的技术方案是：

一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，包括如下步骤：

(1)称量质量为m_s的莫西克汀样品和质量为m_i的内标物至样品瓶中，然后在样品瓶中加入氘代溶剂，通过超声波震荡使莫西克汀样品和内标物溶解，得到浓度为C1的莫西克汀溶液；

(2)从步骤(1)样品瓶中取出所需质量的溶液，加入装有相同氘代溶剂的另一样品瓶中，在另一样品瓶中配制浓度为C2的莫西克汀溶液；

(3)将步骤(2)中浓度为C2的莫西克汀溶液转移至核磁样品管中进行核磁共振氢谱测试；测试完毕，选择莫西克汀与内标物定量峰进行积分并分别得到积分面积A_S及积分面积A_i，将以上数据带入公式(1)求得莫西克汀含量。

其中：P为莫西克汀含量；P_MOX为莫西克汀样品的液相色谱归一化含量；A_S为莫西克汀定量峰的积分面积；A_i为内标物定量峰的积分面积；n_s为莫西克汀定量峰包含的氢个数；n_i为内标物定量峰包含的氢个数；m_s为莫西克汀样品质量；M_s为莫西克汀摩尔质量(639.82g/mol)；m_i为内标物的质量；M_i为内标的摩尔质量；W_i为内标物的纯度。

所述莫西克汀样品是指含有莫西克汀的物质，本发明适用于莫西克汀含量为70～100wt.％的莫西克汀样品。

所述内标物为1,3,5-三甲苯、对苯二酚、1,3,5-三氧六环、1,2,4,5-四氯苯、1,4-二硝基苯、对苯二酸、苯甲酸苄酯和顺丁烯二酸酐中的一种或两种。

步骤(1)中，所述内标物加入量m_i应使其在核磁共振氢谱中的定量峰积分面积为莫西克汀定量峰积分面积的0.7至1.3倍之间。

步骤(1)中，所得莫西克汀溶液的浓度C1为10～300mg/mL。

所述氘代溶剂包括氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代水、氘代甲醇、氘代二氯甲烷、氘代乙腈和氘代丙酮中的一种或两种的混合溶剂。

步骤(2)中，所得莫西克汀溶液的浓度C2为0.5～20mg/mL。

所述莫西克汀样品的液相色谱归一化含量是指按照欧洲药典莫西克汀含量测定的标准方法进行测试所得结果。

本发明优点及有益效果如下：

1、本发明利用¹H-NMR技术，选择廉价稳定的内标物替代需要使用标准品作外标的高效液相色谱法进行莫西克汀含量测定，所得莫西克汀含量与欧洲药典提供的液相色谱外标检测方法结果相符。

2、本发明提供的测定莫西克汀含量的方法，该方法具有内标物廉价易得、简单准确及重复性好等优点。

附图说明

图1是实施例1中核磁共振氢谱谱图。

图2是实施例2中核磁共振氢谱谱图。

图3是实施例3中核磁共振氢谱谱图。

图4是实施例4中核磁共振氢谱谱图。

图5是实施例5中核磁共振氢谱谱图。

图6是莫西克汀样品核磁共振氢谱谱图。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

称量莫西克汀样品99.20mg、1,3,5-三甲苯17.90mg至样品瓶中，加入CDCl₃1mL，超声波震荡1分钟使之溶清，然后从中取出74.0mg溶液至0.5mL CDCl₃中，混合均匀后转移至核磁样品管中进行¹H-NMR测试。

实施例2

称量莫西克汀样品99.86mg、对苯二酚12.80mg至样品瓶中，加入d⁶-DMSO1mL，超声波震荡2分钟使之溶清，然后从中取出65.0mg溶液至0.5mL d⁶-DMSO中，混合均匀后转移至核磁样品管中进行¹H-NMR测试。

实施例3

称量莫西克汀样品100.10mg、1,3,5-三氧六环8.06mg至样品瓶中，加入d⁶-DMSO1mL，超声波震荡2分钟使之溶清，然后从中取出65.0mg溶液至0.5mL d⁶-DMSO中，混合均匀后转移至核磁样品管中进行¹H-NMR测试。

实施例4

称量莫西克汀样品101.16mg、对苯二酚13.81mg、1,3,5-三氧六环8.48mg至样品瓶中，加入d⁶-DMSO 1mL，超声波震荡2分钟使之溶清，然后从中取出65.0mg溶液至0.5mL d⁶-DMSO中，混合均匀后转移至核磁样品管中进行¹H-NMR测试。

实施例5

称量莫西克汀样品100.25mg、对苯二酚12.97mg至样品瓶中，加入d⁶-DMSO 1mL，然后超声波震荡2分钟使之溶清，然后从中取出65.0mg溶液至0.5mL d⁶-DMSO中，混合均匀后转移至核磁样品管中进行¹H-NMR测试。

上述实施例1-5所用氘代试剂及内标物参数如表1，实施例1-5及莫西克汀样品¹H-NMR测试谱图如图1-6所示，各实施例莫西克汀含量计算参数及实施公式(1)的计算结果如表2所示。

表1实施例1-5中所用氘代试剂及内标物参数

表2实施例1-5莫西克汀含量计算参数及结果

Claims (3)

1.一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

(1)称量质量为m_s的莫西克汀样品和质量为m_i的内标物至样品瓶中，然后在样品瓶中加入氘代溶剂，通过超声波震荡使莫西克汀样品和内标物溶解，得到浓度为C1的莫西克汀溶液；

(2)从步骤(1)样品瓶中取出所需质量的溶液，加入装有相同氘代溶剂的另一样品瓶中，在另一样品瓶中配制浓度为C2的莫西克汀溶液；

(3)将步骤(2)中浓度为C2的莫西克汀溶液转移至核磁样品管中进行核磁共振氢谱测试；测试完毕，选择莫西克汀与内标物定量峰进行积分并分别得到积分面积A_S及积分面积A_i，将以上数据带入公式(1)求得莫西克汀含量；

$P=\frac{A_s/n_s}{\left(\frac{m_s/M_s}{W_i{m}_i/M_i}\right)A_i/n_i}{P}_{MOX}\×100\%---\left(1\right)$

其中：P为莫西克汀含量；P_MOX为莫西克汀样品的液相色谱归一化含量；A_S为莫西克汀定量峰的积分面积；A_i为内标物定量峰的积分面积；n_s为莫西克汀定量峰包含的氢个数；n_i为内标物定量峰包含的氢个数；m_s为莫西克汀样品质量；M_s为莫西克汀摩尔质量；m_i为内标物的质量；M_i为内标的摩尔质量；W_i为内标物的纯度；

所述莫西克汀样品中莫西克汀含量为70～100wt.％；

所述内标物为1,3,5-三甲苯、对苯二酚、1,3,5-三氧六环、1,2,4,5-四氯苯、1,4-二硝基苯、对苯二酸、苯甲酸苄酯和顺丁烯二酸酐中的一种或两种；

上述步骤(1)中，所述内标物加入量应使其在核磁共振氢谱中的定量峰积分面积为莫西克汀定量峰积分面积的0.7至1.3倍之间；

上述步骤(1)中，所得莫西克汀溶液的浓度C1为10～300mg/mL；

上述步骤(2)中，所得莫西克汀溶液的浓度C2为0.5～20mg/mL。

2.根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述氘代溶剂包括氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代水、氘代甲醇、氘代二氯甲烷、氘代乙腈和氘代丙酮中的一种或两种的混合溶剂。

3.根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述莫西克汀样品的液相色谱归一化含量为按照欧洲药典莫西克汀含量测定的标准方法进行测试所得结果。