CN104312988A - 一种甘蔗渣液体培养基及其制备方法和应用 - Google Patents

一种甘蔗渣液体培养基及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种甘蔗渣液体培养基及其制备方法和在葡萄糖氧化酶发酵生产中的应用。该培养基由甘蔗渣和培养基辅料构成；所述培养基的制备方法包括甘蔗渣预处理、培养基辅料的配制和混匀三个步骤；将所述培养基用于葡萄糖氧化酶的发酵生产，可获得高活性的葡萄糖氧化酶。本发明将甘蔗渣作为碳源取代葡萄糖用于葡萄糖氧化酶的发酵生产，降低了生产成本，即充分利用生物废弃资源，廉价易得，为葡萄糖氧化酶的工业化生产提供新的途径。

Description

一种甘蔗渣液体培养基及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种甘蔗渣液体培养基、其制备方法和该培养基在葡萄糖氧化酶发酵生产中的应用。
背景技术
甘蔗是一种重要的糖类作物，主要用作生产蔗糖。甘蔗在我国种植面积约为120万公顷，每年会产生900万吨蔗渣。甘蔗渣的主要成分是纤维素和半纤维素，是重要的生物质资源。
葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase，E.C.1.1.3.4，简称GOD)能够在有氧条件下催化葡萄糖产生葡萄糖酸和过氧化氢，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用，广泛应用于食品、饲料、医药等行业。葡萄糖氧化酶分布于动物、植物和微生物体内，但由于微生物具有生长繁殖速度快、代谢速率高、提取方便、利于工业化生产等特点，微生物发酵法已成为生产酶制剂的主要方法。目前，工业上主要利用黑曲霉或青霉发酵生产葡萄糖氧化酶。
甘蔗渣常用于生物乙醇的生产，但采用甘蔗渣液体培养基进行葡萄糖氧化酶的发酵生产尚未见有相关报道。
发明内容
本发明的内容是一种甘蔗渣液体培养基，及其制备方法和该培养基在葡萄糖氧化酶发酵中的应用。本发明提供的技术方案为：
一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于，所述甘蔗渣液体培养基由甘蔗渣和培养基辅料组成，甘蔗渣与培养基辅料的质量比为1:10～1:60。
作为优选，所述甘蔗渣与所述培养基辅料的质量比为1:35。
作为优选，所述甘蔗渣与所述培养基辅料的质量比为1:45。
作为优选，所述培养基辅料包括以下组分：蛋白胨1～5g/L，磷酸氢二钾1～3g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，氯化钾0.5～2g/L，余量为蒸馏水。
作为优选，所述培养基辅料包括以下组分：蛋白胨1g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾1g/L，余量为蒸馏水。
作为优选，所述培养基辅料包括以下组分：蛋白胨3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁1g/L，氯化0.5g/L，余量为蒸馏水。
本发明还公开了一种木薯叶固体培养基的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)甘蔗渣预处理：将甘蔗渣烘干后进行粉碎处理，筛分得粒度在20～80目间的甘蔗渣粗粉；
(2)培养基辅料的配制：称取蛋白胨1～5g/L，磷酸氢二钾1～3g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，氯化钾0.5～2g/L，余量为蒸馏水，调pH为5.5～7.0；
(3)混匀：将步骤(1)所得甘蔗渣与步骤(2)所得培养基辅料充分混合，即得所述培养基。
另外，本发明还提供了该甘蔗渣液体培养基在发酵生产葡萄糖氧化酶中的应用。
本发明的有益效果
本发明提供一种甘蔗渣为碳源的液体培养基的制备方法，所述培养基制备简单，原料廉价易得，为农业生物质的可持续发展提供新途径，降低了环境污染，将该培养基用于橘青霉的液体发酵生产可获得大量高活性的葡萄糖氧化酶。
具体实施方式
结合具体实施例，对本发明做进一步的阐述。下列实施例中所用橘青霉(Penicillium cilrinum)CICC40277由申请人自中国工业菌种微生物保藏中心购买，甘蔗渣购买于广西贵糖股份有限公司。
实施例1：甘蔗渣液体培养基的制备
将新鲜的甘蔗渣置于70℃的烘箱中3天后烘干，进行粉碎处理后，筛分得粒度在20～80目的甘蔗渣粗粉。盐溶液的成分为:蛋白胨2g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾1.5g/L，余量为蒸馏水，PH 6.0。将所得的甘蔗渣粗粉和盐溶液按1:35的比例充分混合，即得所述液体培养基。
实施例2：甘蔗渣液体培养基用于葡萄糖氧化酶的发酵生产
葡萄糖氧化酶的发酵生产步骤为:
(1)液体培养基的配制：将新鲜的甘蔗渣置于60℃的烘箱中4天后烘干，进行粉碎处理后，筛分得粒度在20～80目间的甘蔗渣粗粉。称取1g甘蔗渣粗粉于三角瓶中，按1:45的比例添加盐溶液，盐溶液的成分为:蛋白胨3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁1g/L，氯化钾0.5g/L，余量为蒸馏水，PH 6.0；
(2)灭菌：将步骤(1)所述液体培养基于121℃条件下灭菌20min，冷却；
(3)接种：取橘青霉(Penicillium cilrinum)孢子悬浮液(106个/ml)接种于步骤(2)所得液体培养基中，接种量为10％(v/v)。
(4)培养：将三角瓶置于摇床中震荡培养4天，培养温度为28℃，摇床转速为200rpm。
(5)酶的提取：发酵液进行过滤，滤液于4℃，10000×g下离心20min,收集上清液得葡萄糖氧化酶粗酶液。所得葡萄糖氧化酶粗酶液的酶活力为46U/mL。
实施例3：甘蔗渣液体培养基用于葡萄糖氧化酶的发酵生产
(1)液体培养基的配制：将新鲜的甘蔗渣置于70℃的烘箱中4天后烘干，进行粉碎处理后，筛分得粒度在20～80目间的甘蔗渣粗粉。称取1.5g甘蔗渣粗粉于三角瓶中，按1:35的比例添加盐溶液，盐溶液的成分为:蛋白胨1g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾1g/L，余量为蒸馏水，PH 6.5；
(2)灭菌：将步骤(1)所述液体培养基于121℃条件下灭菌20min，冷却；
(3)接种：取橘青霉(Penicillium cilrinum)孢子悬浮液(106个/mL)接种于步骤(2)所得液体培养基中，接种量为15％(v/v)。
(4)培养：将三角瓶置于摇床中震荡培养5天，培养温度为28℃，摇床转速为180rpm。
(5)酶的提取：发酵液进行过滤，滤液于4℃，10000×g下离心20min，收集上清液得葡萄糖氧化酶粗酶液。所得葡萄糖氧化酶粗酶液的酶活力为55U/mL。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (8)

1.一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于，所述甘蔗渣液体培养基由甘蔗渣和培养基辅料组成，甘蔗渣与培养基辅料的质量比为1:10～1:60。
2.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于：所述甘蔗渣与所述培养基辅料的质量比为1:35。
3.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于：所述甘蔗渣与所述培养基辅料的质量比为1:45。
4.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于：所述培养基辅料包括以下组分：蛋白胨1～5g/L，磷酸氢二钾1～3g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，氯化钾0.5～2g/L，余量为蒸馏水。
5.根据权利要求4所述的一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于：所述培养基辅料包括以下组分：蛋白胨1g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾1g/L，余量为蒸馏水。
6.根据权利要求4所述的一种甘蔗渣液体培养基，其特征在于：所述培养基辅料包括以下组分：蛋白胨3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁1g/L，氯化0.5g/L，余量为蒸馏水。
7.如权利要求1所述的木薯叶固体培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)甘蔗渣预处理：将甘蔗渣烘干后进行粉碎处理，筛分得粒度在20～80目的甘蔗渣粗粉；
(2)培养基辅料的配制：称取蛋白胨1～5g/L，磷酸氢二钾1～3g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，氯化钾0.5～2g/L，余量为蒸馏水，调pH为5.5～7.0；
(3)混匀：将步骤(1)所得甘蔗渣与步骤(2)所得培养基辅料充分混合，即得所述培养基。
8.如权利要求1-6任一权利要求所述的一种甘蔗渣液体培养基在发酵生产葡萄糖氧化酶中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1587375A (zh) * 2004-08-26 2005-03-02 华南理工大学 金龟子绿僵菌固态发酵的培养方法
CN102093959A (zh) * 2010-12-13 2011-06-15 华南农业大学 一种重组多功能纤维素酶的生产方法
CN102127532A (zh) * 2010-12-30 2011-07-20 华南农业大学 一种转基因灰盖鬼伞高效表达重组酶的方法
CN103966179A (zh) * 2014-05-27 2014-08-06 河北省微生物研究所 葡萄糖氧化酶制剂的制备方法及其利用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1587375A (zh) * 2004-08-26 2005-03-02 华南理工大学 金龟子绿僵菌固态发酵的培养方法
CN102093959A (zh) * 2010-12-13 2011-06-15 华南农业大学 一种重组多功能纤维素酶的生产方法
CN102127532A (zh) * 2010-12-30 2011-07-20 华南农业大学 一种转基因灰盖鬼伞高效表达重组酶的方法
CN103966179A (zh) * 2014-05-27 2014-08-06 河北省微生物研究所 葡萄糖氧化酶制剂的制备方法及其利用

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