CN104306955A - 多肽zl-m-1在制备抗肿瘤药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种抗肿瘤多肽的活性及其应用。本发明对蜂毒素进行改造，缩短其氨基酸，并将原有的不稳定的氨基酸脯氨酸替换为带有正电荷的赖氨酸，增加其稳定性，同时保留了其N端的活性中心部位，采用固相化学合成法获得具有较高抗肿瘤活性多肽ZL-M-1。体内外药效学实验结果表明，多肽ZL-M-1可以显著抑制人肝癌细胞SMMC7721肿瘤的生长并能提高荷瘤鼠体内IL-2的分泌，表明多肽ZL-M-1可能作为一种抗肿瘤治疗的药物。

Description

多肽ZL-M-1在制备抗肿瘤药物中的用途
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种免疫调节多肽的及其应用，本发明的多肽具有抗肿瘤活性。
背景技术
蜂毒是工蜂毒腺和附腺分泌出的具有芳香气味的一种透明毒液，贮存在毒囊中，蛰刺时由蛰针排出。其化学成分比较复杂,含碳、氢、硫、磷、钙、氯、氮等元素，呈酸性反应，包括多肽类、酶类和非肽类物质。蜂毒的主要有效成分是蜂毒素、蜂毒神经肽、磷脂酶A2、透明质酸酶、多巴胺和组织胺等。研究表明，蜂毒是具有高度药理学和生物学活性的复杂混合物，其中，蜂毒素(Melittin)是蜂毒的主要活性成分，占蜂毒干重的50％，是由26个氨基酸残基构成的一种小分子多肽生物毒素，为一种非特异性细胞毒性肽，具有很高的生物活性。药理学研究表明它具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、抑制血小板凝集、抗艾滋病等多种活性。
目前，对具有天然活性多肽的进行改造成为研究的热点，但是现阶段多肽的发展存在三大瓶颈：(1)多肽的生产合成成本高；(2)多肽的毒性较大；(3)多肽对蛋白酶体的稳定性差。因此，从设计上改善原有的多肽结构，保留其活性位点，缩减肽链，减少多肽的生产成本成为研究者关注的主要方面。在设计新型多肽时，需要考虑到其的毒性及稳定性等因素，使其与原有的多肽在毒性及稳定性方面保持一致，通过统筹电荷、疏水性、二级结构等诸因素，使其更加低毒高效稳定。
发明内容
本发明对蜂毒素的部分氨基酸的氨基酸序列进行缩短，采用固相化学合成法获得具有较高抗肿瘤活性抗肿瘤多肽ZL-M-1。本发明多肽ZL-M-1，氨基酸序列如SEQ ID：No.1所示，其氨基酸全序列为：赖氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-丙氨酸-缬氨酸-亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-亮氨酸-苏氨酸-苏氨酸。其分子量为1326.7，等电点为10.3。图1计算机模拟的氨基酸序列示意图。药效学实验表明，多肽ZL-M-1体内外显著抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长，表明ZL-M-1可能作为一种抗肿瘤治疗的药物。
附图说明
图1计算机模拟的氨基酸序列示意图。
图2多肽ZL-M-1体外对人肝癌细胞SMMC7721生长的影响。
图3多肽ZL-M-1对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤小鼠瘤体积的影响。
图4多肽ZL-M-1对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤小鼠瘤重的影响。
图5多肽ZL-M-1对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤小鼠抑瘤率的影响。
图6多肽ZL-M-1对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤小鼠血清IL-2分泌的影响。
具体实施方式
一、ZL-M-1体外对人肝癌细胞SMMC7721生长的影响
取对数生长期的人肝癌细胞SMMC7721，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基调整细胞浓度为5×104个/ml，于96孔培养板中加入细胞悬液100μl，并加入用培养液稀释的不同浓度ZL-M-1，(20μl/孔；终浓度分别为：0、2、4、8、10、12、14、16μg/ml)，37℃、5％CO2分别培养24、48、72小时后，吸上清，每孔加入80μl新鲜培养液，然后每孔加入20μl 5mg/ml的MTT，继续培养4小时，离心，吸去上清，每孔加入150μl DMSO，轻轻振荡以使甲臜完全溶解，在490nm波长处用酶标仪测吸光值。细胞活率按文献计算，细胞活率(％)＝(加药组吸光度平均值/空白对照组吸光度平均值)×100。
实验结果如附图2所示，多肽ZL-M-1可以体外显著抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长，并呈时间及剂量依赖关系。在24、48、72小时，多肽ZL-M-1对人肝癌细胞SMMC7721的半数抑制浓度(IC50)大约为7.01、3.12、2.08μg/ml。
二、ZL-M-1对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤小鼠的体内抑制活性研究
取对数生长期的人肝癌SMMC7721细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。待肿瘤生长至100-300mm3后将动物随机分为4组：肿瘤模型组，Zl-M-1低、中、高剂量(0.5、1、2mg/kg)治疗组，每组6只。Zl-M-1治疗组小鼠腹腔注射给药，每次注射100ul,肿瘤模型组每次注射等量生理盐水。隔天给药一次，共计三周。给药期间，每天观察老鼠活动情况，肿瘤直径的测量次数为每3天测1次测量瘤体积。末次给药后，颈椎脱臼处死小鼠，剖瘤,称瘤重，计算抑瘤率。根据文献报道，计算公式如下：
肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长宽。
实验结果如附图3、4、5所示，多肽ZL-M-1对人肝癌细胞SMMC7721细胞体内抑制作用明显，其主要表现在，与模型组相比，多肽ZL-M-1注射组小数的瘤体积随着给药时间延长显著缩小(附图3)并且荷瘤鼠的瘤重明显降低(附图4)。多肽ZL-M-1低、中、高三个剂量组的抑瘤率(附图5)分别为17.1％、39.2％、57.6％，瘤重与模型组相比具有统计学差异(**P<0.01)。
三、ZL-M-1对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤小鼠血清中IL-2分泌的影响
收集实验各组小鼠的血清。IL-2的检测实验按小鼠IL-2单克隆抗体的ELISA试剂盒说明书指示操作。具体步骤如下：从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条；除空白孔外，分别将标本或不同浓度标准品(100μl/孔)加入相应孔中，用胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育90分钟；洗板4次；除空白孔外，加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)。用胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育60分钟；洗板4次；除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。用胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30分钟；洗板4次；加入显色剂100μl/孔，避光37℃孵箱孵育10-15分钟；加入终止液100μl/孔，混匀后即刻测量OD450值(5分钟内)。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，由各组OD450值绘制标准曲线。各试验孔的IL-2浓度即可由其相应的OD450值根据标准曲线算出。
由附图6可以看出，多肽ZL-M-1可以显著提高人肝癌SMMC-7721荷瘤鼠血清中的IL-2的分泌，并随着给药剂量的提高，IL-2的分泌呈剂量依赖关系，与模型组相比具有相比具有统计学差异(*P<0.05；**P<0.01)。

Claims (1)

1.多肽ZL-M-1在制备抗肿瘤药物中的用途，其氨基酸序列如SEQ ID：No.1所示。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107583109A (zh) * 2017-09-22 2018-01-16 吉林大学 一种真皮深层填充物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1667707A1 (en) * 2002-12-02 2006-06-14 The University Of British Columbia Methods of stimulating innate immunity using cationic peptides
CN103948910A (zh) * 2014-02-24 2014-07-30 张家港市第一人民医院 免疫调节多肽zl-1在制备抗肿瘤药物中的用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1667707A1 (en) * 2002-12-02 2006-06-14 The University Of British Columbia Methods of stimulating innate immunity using cationic peptides
CN103948910A (zh) * 2014-02-24 2014-07-30 张家港市第一人民医院 免疫调节多肽zl-1在制备抗肿瘤药物中的用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DOORI PARKA等: "Functional characterization of naturally occurring melittin peptideisoforms in two honey bee species, Apis mellifera and Apis cerana", 《PEPTIDES》 *
黄舒然等: "蜂毒素抗肿瘤作用的研究进展", 《江苏中医药》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107583109A (zh) * 2017-09-22 2018-01-16 吉林大学 一种真皮深层填充物及其制备方法和应用
CN107583109B (zh) * 2017-09-22 2020-09-25 吉林大学 一种真皮深层填充物及其制备方法和应用

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