CN104284667A - 采用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素和子宫收缩剂的产后出血的治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及某种硫酸化的葡糖胺聚糖用于治疗或预防产后出血的用途。所述硫酸化的葡糖胺聚糖具有降低的抗凝血活性并且与至少一种能够促进子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂联合施用，由此压迫血管和终止出血。

Description

采用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素和子宫收缩剂的产后出血的治疗
技术领域
本发明涉及某种硫酸化的葡糖胺聚糖用于预防和治疗产后出血(PPH)的用途。
背景技术
产后出血(PPH)是产妇死亡率的主要因素并且可以引起数种与快速失血有关的严重并发症。关于PPH有多种定义，但是通常与失血超过500-1000ml有关。在PPH后面和对于在分娩后24小时内到来的主要出血存在数种潜在原因，最常见的包括宫缩无力、胎盘滞留、凝结障碍和子宫脱出，见CW Su；Prime Care Clin OfficePart,Vol.39,2192,pp167-187。临床上最常见的原因是宫缩无力，其导致子宫肌层纤维的不充分收缩和导致不受控出血的螺旋动脉的不充分闭塞。CW Su所引用的文章列出导致宫缩无力的若干危险因素，其中之一为常规被施用于引产或治疗分娩停滞(labor arrest)的催产素的持续使用。高水平的催产素和PPH之间的关系进一步被J Belghetti等人阐述于British medical Journal,2100,Vol.1,pp 1-9。
采用子宫收缩剂干预PPH是临床接受的治疗，并且催产素被频繁作为第一手药剂施用以改变子宫紧张，见CW Su；Prime Care Clin Office Part,Vol.39,2192,pp167-187。其它用于增强子宫收缩性的药剂包括麦角类生物碱和前列腺素类，例如甲基麦角新碱(metheargine)、卡前列素和地诺前列酮和米索前列醇。然而，当宫缩无力对该类型药物治疗不充分应答时(频繁存在的状况)，需要紧急手术干预。
肝素是天然存在的葡糖胺聚糖，其在肥大细胞中被合成和细胞内存储。肝素治疗的主要潜在副作用是其抗凝血特性引起的出血并发症和低的生物利用度。硫酸乙酰肝素具有葡糖胺和糖醛酸作为重复的二糖并且由N-乙酰化和N-硫酸化的二糖组成。硫酸乙酰肝素还具有依赖于特定抗凝血五糖存在的抗凝血活性，然而明显不如肝素。
低分子量肝素或解聚肝素是线性寡糖，其主要由交替的N-硫酸化葡糖胺和IdoA残基组成，并且常包含抗凝血五糖。它们可以通过特定的化学或酶裂解由肝素制备。它们的主要临床功能是加强由凝固因子Xa的抗凝血酶产生的抑制作用，产生抗血栓形成作用。具有选择性抗凝血活性的肝素片段及其制备方法在美国专利号4,303,651中有描述。根据欧洲药典(PharmEur)，肝素如果被称为低分子量肝素(低分子质量肝素)应当具有不在70IU(国际单位)/mg以下的抗因子Xa活性和8 000Da以下的Mw。
WO 03055499教导硫酸化的葡糖胺聚糖，例如肝素，具有100BP单位/mg或更少的抗凝血活性，通常能够有效预防性启动或治愈性治疗宫颈和子宫平滑肌以在妇女中建立有效的分娩。该文献提示硫酸化的葡糖胺聚糖可以联合催产素用于低内源性催产素水平情况下的子宫平滑肌的启动。然而，其没有提示当并发症出现要求直接治疗功效时，硫酸化的葡糖胺聚糖可用于直接干预治疗。
Acta Obstetricia et Gynecologica,2009,88,984-989(Ekman-Ordeberg等人)中的临床前实验证明采用具有或不具有抗凝血活性的低分子量肝素的预处理增强催产素收缩从剖腹产术(cesarian section)获得的子宫肌层条的作用。作者提示预防性治疗可能是一种新的用于滞产的可能的治疗。然而，该文献也没有提示当并发症出现要求直接治疗功效时，低分子量的肝素可用于直接干预治疗。
因此，需要发现通过有效和可靠地诱导子宫肌层收缩能够控制PPH的治疗。
发明内容
本发明涉及产后出血(PPH)的治疗和预防，其凭借将化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与能够促进子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂联合施用，所述化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性。
附图说明
图1A-1D显示当接受催产素和根据本发明定义的化学修饰的肝素(DF01)联合治疗时，子宫肌细胞中钙离子流入。
具体实施方式
应理解本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不旨在为限制本发明。
必须指出的是，如在本说明书和所附权利要求书中使用的，单数形式一(“a)”，“一(an)”和“该(the)”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。
此外，在适用的情况下，术语“约”是用于表示一个给定值的+/-2％的偏差，优选数值的+/-5％的偏差，最优选数值的+/-10％的偏差。
在本发明的一个方面中，术语“产后出血(PPH)”被定义为阴道分娩之后约500ml或更多的失血和剖腹产之后约1000ml或更多的失血。在本发明另一方面中，术语产后出血“(PPH)”被定义为阴道分娩之后约1000ml或更多的失血和剖腹产之后约1000ml或更多的失血。PPH通常与宫缩无力和分娩之后子宫的无效收缩有关。PPH的其它原因是创伤、胎盘滞留和凝血障碍。
宫缩无力是子宫肌肉中组织张力的丧失。正常地，子宫肌肉收缩压迫血管并且减少血流。这增加了凝固的可能性并且阻止出血。因此，子宫肌肉收缩的缺失可以导致急性出血。许多因素可以导致子宫肌肉张力的丧失，包括但不限于：子宫的过度伸张、多胎妊娠、羊水过多、巨大胎儿、难产包括引产和/或分娩停滞、后足月妊娠、催产素加强分娩、多产(已生育过5次或更多次)、急速分娩(分娩持续少于3小时)、硫酸镁治疗先兆子痫、绒毛膜羊膜炎、卤代麻醉剂和子宫平滑肌瘤。
术语“子宫收缩剂”是指临床上用于诱导子宫肌层收缩或子宫的更强张力的药剂。常规地，子宫收缩剂既用于引产、治疗分娩停滞又用于降低产后出血。催产素是公认的子宫收缩剂。一般来说，子宫收缩剂还延伸至催产素类似物这类的药剂或通过促进其分泌可以间接影响催产素水平的药剂，例如血清素作用剂。进一步，用于根据本发明的子宫收缩剂的非限制性例子是麦角类生物碱、前列腺素类或前列腺素类的类似物。卡波森(Carbocetin)是有用的催产素类似物。有用的前列腺素类的例子是卡前列素、米索前列醇、地诺前列酮和前列腺素F2α类似物，而麦角类生物碱的例子是甲基麦角新碱和麦角新碱。本发明还涉及其中使用一种以上子宫收缩剂的方法和用途。
术语“联合(in combination)”是指包含根据本发明描述的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素联合至少一种有效促进或刺激子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂的治疗。
在本发明的一个方面中，本文要求保护的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素作为添加治疗(add-on therapy)施用至已经受子宫收缩剂治疗的妇女。
在本发明的另一方面中，本文定义的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与子宫收缩剂同时施用。
在本发明的另一方面中，本文定义的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与子宫收缩剂相继施用。
术语“PPH的治疗”是指自提供来自于施用文本要求保护的和描述的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素的应答的治疗。在一方面，在施用触发导致有效的子宫的子宫肌层收缩的建立和PPH治疗的过程之后，作为干预施用进行根据本发明的PPH的治疗。
本发明的一方面涉及在有风险的妇女中预防PPH。在该方面，患者(妇女)在分娩之后和出血发生之前直接施用，其触发导致有效的子宫的子宫肌层收缩的建立的过程，由此抵消PPH事件。这类患者的例子是已经确定经受或预期经受宫缩无力和不充分子宫收缩的妇女，其可能有风险如果患者已经接触子宫过度伸张、子宫收缩剂的持续使用、急速或延长分娩、多胎产、初期PPH和绒毛膜羊膜炎(chloroamnionitis)。特别地，目标的或合适的患者是那些已经受子宫收缩剂从而引产，或治疗分娩停滞，或既引产又治疗分娩停滞的患者，确定为对子宫收缩剂的施用不应答的患者，或采用高剂量子宫收缩剂治疗的患者。本发明的方法可以涉及文本要求保护的和描述的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素的皮下施用或局部施用，例如阴道内施用。
在本发明文本中，“引产”通常被定义为干预，其直接或间接启动从子宫的子宫肌层收缩至导致分娩和孩子诞生过程的完成的充分有效的分娩。
可以若干本领域技术人员公知的方式诱导分娩。用于引产的方法的例子为物理刺激方法；施用催产素、前列腺素E或其衍生物，例如米索前列醇和地诺前列醇(dinoprostol)；使羊膜囊破裂；扩张宫颈，和施用宫颈内汽球。还可以使用这些引产方法的组合。
本发明文本中使用的术语“分娩停滞”特征在于从孕妇具有重复的子宫收缩开始的分娩的全过程的分娩中的异常。正常的分娩过程被定义为有规律的子宫的子宫肌层收缩，导致至少每小时约1cm的宫颈扩张直至扩张10cm。在本发明文本中，正常的分娩过程还被定义为有效分娩。
分娩停滞被定义为下列状况：从慢于正常过程(即，在1小时期间、在1-2小时期间或至少2小时期间约1cm以下的宫颈扩张)变化至彻底缺乏宫颈成熟的过程和子宫的子宫肌层收缩。妇女可以在分娩的不同阶段进入分娩停滞。早期的分娩停滞(有时称为“初级停滞(primary arrest)”)通常归因于受损的宫颈扩张，并且在分娩的晚期(即当妇女扩张≥5-6cm时，具有正常过程初始cm和称为“次级停滞(secondary arrest)”)的分娩停滞归因于受损的或不充分的子宫的子宫肌层收缩。在本文中分娩停滞的含义延伸至临床上常见术语，如在已经历重复子宫收缩之后发生的难产、分娩过程缓慢、分娩的停滞、过程完全停止、功能障碍性分娩失败和头盆不称。
具有低抗凝血作用(例如抗因子Xa活性200IU/mg以下)的硫酸化的葡糖胺聚糖在本文中被公开用于治疗或预防PPH。在PPH治疗中，将硫酸化的葡糖胺聚糖与至少一种能够促进子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂联合施用。所述葡糖胺聚糖为硫酸化的葡糖胺聚糖，其选自硫酸乙酰肝素、解聚的硫酸乙酰肝素、肝素、解聚的肝素(例如，低分子量肝素)硫酸皮肤素、硫酸皮肤素、硫酸软骨素和解聚的硫酸软骨素。
在本发明的个一方面中，将有效量的至少一种具有30IU/mg以下的抗因子IIa活性和30IU/mg以下的抗因子Xa活性的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与至少一种能够促进子宫的子宫肌层收缩的药剂联合施用于遭受PPH的妇女。在本发明的另一方面中，在本发明方法中使用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有10IU/mg或更少的抗因子Xa活性和10IU/mg或更少的抗因子IIa活性。
在一方面中，根据本发明的用途被施用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有30 000Da或更少的平均分子量(Mw)。在另一方面中，根据本发明施用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有20 000Da以下的平均分子量(Mw)。在另一方面中，根据本发明施用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有10000Da或更少的平均分子量(Mw)。在另一方面中，根据本发明施用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有不高于8 000Da的平均分子量(Mw)。在另一方面中，根据本发明施用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有不高于7 000Da的平均分子量(Mw)。
肝素、低分子量肝素和其它肝素衍生物的抗凝血活性通常以它们通过抗凝血酶增强凝血因子Xa和因子IIa的抑制的能力被测量。测量抗因子Xa-和抗因子IIa活性的方法对本领域技术人员而言是已知的，还描述于药典中，例如欧洲药典(Pharm Eur)和美国药典(USP)。
通过例如选择性高碘酸盐氧化(见例如Fransson LA和Lewis W,Relationshipbetween anticoagulant activity of heparin and susceptibility,to periodate oxidation,FEBS Lett.1979,97:119-23；Lindahl等人,Proc Natl Acad Sci USA,1980；77(11):6551-6555)和本领域技术人员已知的其它方式可以消除抗凝血活性。
在本发明的另一方面中，化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素的二糖结构基本上不含非硫酸化的葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸单元并且具有10IU/mg或更少的抗因子Xa活性和10IU/mg或更少的抗因子IIa活性。
在本发明的另一方面中，化学修饰的肝素为低抗凝血的肝素，其具有10IU/mg或更少的抗因子Xa活性和不高于8 000Da或者不高于7 000Da的平均分子量。
在一方面中，本发明涉及化学修饰的肝素的用途，其中通过高碘酸盐处理以消除抗凝血酶结合力已经根除了肝素的抗凝血作用。获得该类化学修饰的肝素的一个非限制性方式为高碘酸盐氧化，然后进行产物的碱性β消除。该方法导致抗凝血活性的消除。美国专利4,990,502(Lormeau等人)公开的方法阐明了一种处理天然肝素以选择性裂解负责抗凝血作用的五糖序列和随后的解聚的方式，其得到平均分子量5.8至7.0kDa的低抗凝血肝素。
在本发明的一个方面，根据本发明用途的化学修饰的肝素具有约4.6至约6.9kDa的平均分子量(Mw)。
本发明一个方面为一种化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性，其包含：
(i)基本上不含调节抗凝血作用的化学完整的糖序列的多糖链；和
(ii)对应于1.2至12kDa之间的分子量的多糖链，所述多糖链具有根据(式I)的主要出现的二糖，
式(I)
其中，
n是2至20的整数
其用于与至少一种子宫收缩剂联合在治疗或预防产后出血中的用途。
在本文中，化学修改的肝素或硫酸肝素，其包含基本上不含调节抗凝血作用的化学完整的糖序列的多糖链，意味着多糖链已经被化学处理以基本上修饰全部的通过抗凝血酶(AT)特异性调节抗凝血作用的五糖。
这类化学修饰的肝素的主要出现的多糖链具有6至12个之间的3.6-7.2kDa分子量的二糖单元，而至少70％的多糖链具有至少3kDa以上的分子量。多糖分布及其对应的表示为重量累积％的分子质量可以是根据下表：
此外，所述多糖包含具有如式I所示的还原末端残基的糖链，并且基本上不含有完整的非硫酸化的艾杜糖醛酸和/或葡萄糖醛酸。
在一方面中，所述化学修饰的肝素包含修饰的葡糖胺，其信号存在于1H-NMR光谱的5.0至6.5ppm之间，其强度(比例％)相比于来自于天然肝素的5.42ppm处的信号在4％以下。这些葡糖胺信号可以存在于5.95ppm和6.15ppm处。在一方面中，葡糖胺总量的1％以下被修饰。
在本文中，“修饰的葡糖胺”是指具有残基结构的葡糖胺，所述残基结构不预期出现在肝素产品或低分子量肝素产品(解聚的肝素)的1H-NMR光谱中。修饰的葡糖胺的出现可以归因于用于氧化非硫酸化的艾杜糖醛酸和/或葡萄糖醛酸从而基本上消除抗凝血作用的化学修饰过程。合意的是使修饰的葡糖胺的存在最小化，因为它们可能代表化学修饰的肝素产品的不可预测性质，例如非特异性解聚。
在一方面中，化学修饰的肝素包含在非还原性末端具有不饱和键的修饰的葡糖胺。这类修饰的葡糖胺信号存在于1H-NMR光谱的5.95ppm和6.15ppm处。
本发明涉及采用本文描述的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与一种或多种能够促进或刺激子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂联合施用于在分娩之后和由于宫缩无力导致不充分血管压迫的妇女的治疗。在本发明的一方面中，子宫收缩剂为催产素。因此，当化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素作为催产素的辅助剂施用于时，其促进了催产素诱导的子宫的子宫肌层收缩。当化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与催产素联合施用时，由熟练的治疗医生或人员依据目前的实践，优选与催产素的临床惯例相适合来确定治疗方案。在本发明的一方面中，化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素多达每小时施用一次或多达每两小时施用一次。在本发明的一方面中，施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素1-24次/24小时。在本发明的另一方面中，施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素12-24次/24小时。在本发明的另一方面中，施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素1-36次/36小时。在本发明的另一方面中，施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素18-36次/36小时。可以静脉内和/或皮下进行所述施用。在一方面中，通过持续输注施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。在目前临床实践中，静脉内施用催产素。
在本发明一方面中，所述妇女接受每剂量直至360mg的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。在另一方面中，所述妇女接受每剂量直至250mg的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。在另一方面中，所述妇女接受每剂量直至200mg的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。
在本发明的一个方面中，所述妇女每24小时接受直至约2.0g的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。在另一方面中，所述妇女每24小时接受直至约1.5g的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。作为非限制性例子，1.5g以250mg剂量施用6次。
在本发明的一个方面中，子宫收缩剂(当选择催产素时)的剂量可以为1至80IU。在一方面中，催产素以直至10IU的剂量施用4-5次/24小时。
在一方面中，根据本发明使用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素被包含于试剂盒中，所述试剂盒具有至少一种能够促进子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂。化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素和至少一种子宫收缩剂可以适合于不同临床状况的单剂量或多剂量形式提供。例如，子宫收缩剂和化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素制剂可以试剂盒形式提供，所述试剂盒包含不同剂量的预装填注射剂或安瓶。熟练的治疗人员或医生可以依据临床实践选择剂量。例如，治疗妇女的熟练医生或人员可以选择初始低剂量的子宫收缩剂，例如1至10IU的催产素，以及直至360mg剂量的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。制剂可以包括组合的或分别的子宫收缩剂和化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。在收缩应答不充分的情况下，从试剂盒选择高剂量，例如具有高浓度的催产素或与补充的子宫收缩剂联合的催产素。优选地，适合于急性状况的制剂适宜静脉内施用。
在一方面中，根据本发明使用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与多剂量形式的至少一种子宫收缩剂(适宜以数个剂量施用)一起包含在试剂盒中。在一个例子中，所述试剂盒包含多剂量形式的催产素，并且将化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素与初始低剂量或标准剂量的催产素联合施用。如果患者停留在PPH中，可以施用一次或数次催产素，以多剂量形式控制剂量直至建立子宫的子宫肌层收缩。
根据本发明的方法和用途可以包含施用具有如本说明书和权利要求书任何其它部分定义的特征的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。
根据本发明使用的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素可以作为药物组合物通过胃肠外施用而系统地施用，例如通过皮下或静脉内注射。在一方面中，对于急性状况可以胃肠外施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素和子宫收缩剂。在另一方面中，当用途是预防性时，可以皮下或局部施用化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素和子宫收缩剂。而且，数种子宫收缩剂可以与化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素一起施用，例如催产素和前列腺素一起。对于胃肠外施用，化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素和/或子宫收缩剂可以合并入溶液剂或混悬剂，所述溶液剂或混悬剂还含有一种或多种佐剂，例如无菌稀释剂如注射用水、生理盐水、固定油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶剂、抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、缓冲剂和调节渗透度的试剂。可以在安瓶、小瓶、一次性注射器中或作为输液装置递送胃肠外制剂。
在一方面中，本发明涉及具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其用于与至少一种能够促进子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂联合在治疗PPH中的用途。在另一方面中，本发明涉及具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素联合至少一种能够促进子宫的子宫肌层收缩的子宫收缩剂在制备用于治疗PPH的药物中的用途。
本发明涵盖本发明公开的实施方案和方面的任何组合。
下列非限制性实例进一步公开本发明。在以下段落中描述和列举的方法包括抵消或消除非特异性解聚的不同方面。
实施例
以下实施例1至9作为例子说明如何生产根据本发明用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素。
从肝素钠制备物质。所述制备涉及用高碘酸盐选择性氧化在肝素中的非硫酸化的糖醛酸残基，包括结合于AT的五糖序列中的葡萄糖醛酸部分。破坏该残基的结构毁坏了与AT的高亲合性相互作用，并且因此基本上消除抗凝血作用(以a-FXa或a-FIIa测定)。随后的碱处理，β消除反应导致聚合物在已经被高碘酸盐氧化的非硫酸化糖醛酸位点上裂解。同时，这些操作处理导致抗凝血活性的丧失和肝素链的充分解聚。
另外，用NaBH4还原所得到的裂解位点处的还原末端端子，其将末端醛转化为相应的更稳定的二醇。然后，通过用乙醇的反复沉淀、过滤和离心除去添加剂、杂质和副产物。然后通过真空干燥和加热获得粉末形式的物质。将药物物质溶解于无菌水性缓冲液中以得到药物产品，其旨在用于静脉内或皮下施用。
目前为止描述的过程通常包括氧化、聚合物裂解(碱水解)和还原步骤。开发根据本发明的方法以抵消或消除肝素链的任何类型的非特异性解聚。在这种情况下，非特异性解聚通常指与特定的碱性β消除反应无关的解聚。非特异性解聚导致产物的结构不稳定，其可能产生纯化的产品在储存期间进一步的解聚和变色。另外，其可能有助于平常在肝素中没有发现的，在NMR光谱中出现的，非典型物种的出现。
实施例1
非硫酸化葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸(残基)的氧化，AT-结合五糖和抗凝血 活性的删除
将约3000克肝素溶解于净化水中以得到10-20％w/v的溶液。将该溶液的pH调节至4.5-5.5。然后，将偏高碘酸钠(NaIO4)加入到生产溶液中；高碘酸盐的量为肝素重量的15-25％。再次将pH调节至4.5-5.5。避光进行反应。在保持13-17℃的温度下，在连续搅拌下，使生产溶液反应18-24小时，其中在最后的两个小时中将温度降至5℃。
氧化反应的终止和含碘化合物的除去
于5-25℃的温度，伴随着温和的搅拌，将乙醇(95-99.5％)经0.5-1小时添加入反应混合物中。添加的乙醇的体积在1-2体积乙醇/生产溶液体积的范围内。然后使氧化的肝素沉淀并沉积15-20小时，然后倾倒出并弃除母液。
然后，将沉积物溶解于净化水中以获得15-30％w/v生产溶液。加入NaCl以获得生产溶液中0.15-0.30mol/升的浓度。在保持5-25℃的温度同时继续搅拌另外的0.5-1小时。然后在搅拌下，将1.0-2.0体积乙醇(95-99.5％)/生产溶液体积经0.5-1小时加入到该溶液中。从该溶液中沉淀出产物。
通过碱性β消除过程的多糖链的解聚
倾倒出并弃除母液后，将沉积物于约7升的水中搅拌直至完全溶解，溶液的浓度现在为15-30％。在保持5-25℃的温度同时缓慢加入4M NaOH溶液直至获得10.5-12的pH。引发并进行反应15-95分钟。此时，记录溶液的pH并缓慢添加4MHCl直至获得5.5-7的pH。
还原性末端端子的还原
在保持13-17℃的温度同时，将溶液的pH调节至5.5-6.5。然后将130-150克硼氢化钠加入至溶液中，此时pH将升至10-11，继续反应14-20小时。这段反应时间后，缓慢加入稀酸以调节pH值至4，这降解剩余的硼氢化钠。维持4的pH值45-60分钟后，使用稀的NaOH溶液将溶液的pH调节至7。
根据实施例5继续纯化。
实施例2
葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸(残基)的氧化，抗凝血活性的删除
将约3000克肝素溶解于净化水中以得到10-20％w/v的溶液。将该溶液的pH调节至4.5-5.5。然后，将偏高碘酸钠(NaIO4)加入到生产溶液中；高碘酸盐的量为肝素重量的15-25％。再次将pH调节至4.5-5.5。避光进行反应。在保持13-17℃的温度下，在连续搅拌下，使生产溶液反应22-26小时，其中在最后的两个小时中将温度降至5℃。测定并记录反应期结束时的pH。
氧化反应的终止和含碘化合物的除去
于5-25℃的温度，伴随着温和的搅拌，将乙醇(95-99.5％)经0.5-1小时添加入反应混合物中。添加的乙醇的体积在1-2体积乙醇/生产溶液体积的范围内。然后使氧化的肝素沉淀并沉积15-20小时，然后倾倒出并弃除母液。
通过碱性β消除过程的多糖链的解聚
倾倒出并弃除母液后，将沉积物于约7升的水中搅拌直至其外表显示完全溶解。在保持20-25℃的温度同时缓慢加入4M NaOH溶液直至获得10.5-12的pH，因此允许引发的反应进行15-95分钟。此时，记录溶液的pH并缓慢添加4M HCl直至获得5.5-7的pH。
还原性末端端子的还原
倾倒出并弃除母液后，通过添加净化水溶解沉积物直至获得15-30％w/v的生产溶液浓度。在保持13-17℃的温度同时，将溶液的pH调节至5.5-6.5。然后将130-150克硼氢化钠加入至溶液中并使其溶解，pH立即升至pH 10-11，继续反应14-20小时。记录该反应时间段之前和之后的溶液的pH。这段反应时间后，缓慢加入稀酸以调节pH值至4，这降解剩余的硼氢化钠。维持4的pH值45-60分钟后，使用稀的NaOH溶液将溶液的pH调节至7。
根据实施例5继续纯化。
实施例3
葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸(残基)的氧化，抗凝血活性的删除
将约3000克肝素溶解于净化水中以得到10-20％w/v的溶液。将该溶液的pH调节至4.5-5.5。然后，将偏高碘酸钠(NaIO4)加入到生产溶液中；高碘酸盐的量为肝素重量的15-25％。再次将pH调节至4.5-5.5。避光进行反应。在保持13-17℃的温度下，在连续搅拌下，使生产溶液反应18-24小时，其中在最后的两个小时中将温度降至5℃。
通过碱性β消除过程的多糖链的解聚
在保持5-25℃的温度同时，缓慢加入4M NaOH溶液直至获得10.5-12的pH。引发并进行反应15-95分钟。此时，记录溶液的pH并缓慢添加4M HCl直至获得5.5-7的pH。
还原性末端端子的还原
在保持13-17℃的温度同时，将溶液的pH调节至5.5-6.5。然后将130-200克硼氢化钠加入至溶液中，此时pH将升至10-11，继续反应14-20小时。这段反应时间后，缓慢加入稀酸以调节pH值至4，这降解剩余的硼氢化钠。维持4的pH值45-60分钟后，使用稀的NaOH溶液将溶液的pH调节至7。
还原的产物的沉淀和含碘化合物的初始去除
于5-25℃的温度，伴随着温和的搅拌，将乙醇(95-99.5％)经0.5-1小时添加入反应混合物中。添加的乙醇的体积在1-2体积乙醇/生产溶液体积的范围内。然后使氧化的肝素沉淀并沉积15-20小时，然后倾倒出并弃除母液。
然后，将沉积物溶解于净化水中以获得15-30％w/v生产溶液。加入NaCl以获得生产溶液中0.15-0.30mol/升的浓度。
根据实施例5继续纯化。
实施例4
葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸(残基)的氧化，抗凝血活性的删除
将约3000克肝素溶解于净化水中以得到10-20％w/v的溶液。将该溶液的pH调节至4.5-5.5。然后，将偏高碘酸钠(NaIO4)加入到生产溶液中；高碘酸盐的量为肝素重量的15-25％。再次将pH调节至4.5-5.5。避光进行反应。在保持13-17℃的温度下，在连续搅拌下，使生产溶液反应18-24小时，其中在最后的两个小时中将温度降至5℃。然后，加入丙三醇以淬灭反应，即，将残余高碘酸盐转化为碘酸盐，加入150-200ml 85％的丙三醇溶液并搅拌下反应30-60分钟。
沉淀产物，除去含碘化合物和淬灭/反应产物
于5-25℃的温度，伴随着温和的搅拌，将乙醇(95-99.5％)经0.5-1小时添加入反应混合物中。添加的乙醇的体积在1-2体积乙醇/生产溶液体积的范围内。然后使氧化的肝素沉淀并沉积15-20小时，然后倾倒出并弃除母液。
然后，将沉积物溶解于净化水中以获得15-30％w/v生产溶液。加入NaCl以获得生产溶液中0.15-0.30mol/升的浓度。在保持5-25℃的温度同时继续搅拌另外的0.5-1小时。然后在搅拌下，将1.0-2.0体积乙醇(95-99.5％)/生产溶液体积经0.5-1小时加入到该溶液中。从该溶液中沉淀出产物。
通过碱性β消除过程的多糖链的解聚
倾倒出并弃除母液后，将沉积物于约7升的水中搅拌直至其外表显示完全溶解。在保持5-25℃的温度同时缓慢加入4M NaOH溶液直至获得10.5-12的pH，因此允许引发的反应进行60-95分钟。此时，记录溶液的pH并缓慢添加4M HCl直至获得5.5-7的pH。
还原性末端端子的还原
倾倒出并弃除母液后，通过添加净化水溶解沉积物直至获得15-30％w/v的生产溶液浓度。在保持13-17℃的温度同时，将溶液的pH调节至5.5-6.5。然后将130-150克硼氢化钠加入至溶液中并使其溶解，pH立即升至pH 10-11，继续反应14-20小时。记录该反应时间段之前和之后的溶液的pH。这段反应时间后，缓慢加入稀酸以调节pH值至4，这降解剩余的硼氢化钠。维持4的pH值45-60分钟后，使用稀的NaOH溶液将溶液的pH调节至7。
根据实施例5继续纯化。
实施例5
产物的纯化
过程添加剂和杂质的去除，反离子的添加和过滤
根据如下概括的方法处理来自由硼氢化物还原末端端子的最终化学修饰步骤的根据实施例1-4的生产溶液。
然后，将一体积的生产溶液添加入1.5-2.5体积的乙醇(95-99.5％)，然后于＜20℃，于＞2000G离心20-30分钟，随后倾倒出并弃除上清液。
然后将离心获得的产物糊状物溶解于净化水中以获得10-20％w/v的产物浓度。然后加入NaCl以获得0.20-0.35mol/升的浓度。然后，每体积生产溶液添加1.5-2.5体积的乙醇(95-99.5％)，其从溶液中沉淀出产物。如上所述离心。
然后，向剩余的糊状物中添加净化水以溶解。现在的产物浓度在10-20％w/v的范围内。现在将产物溶液的pH调节至6.5-7.5。然后过滤溶液以除去任何颗粒。然后，向一体积的生产溶液中添加1.5-2.5体积的乙醇(95-99.5％)。然后于＜20℃，于＞2000G，进行离心20-30分钟，然后倾倒出并弃除上清液。
沉淀糊状物的脱水和粒径的降低
向反应器中填充入乙醇约2升体积。在搅拌乙醇下，同时加入沉淀糊状物。机械搅拌固化糊状物并用乙醇替换存在的水得到同质颗粒混悬液。1-2小时后停止搅拌，然后使颗粒沉积。移除过量的液体后，使颗粒过筛或研磨以获得较小的且均匀大小的颗粒。
产物的干燥
将产物均匀地分布于托盘上，并置于真空箱中。施用真空并于35-40℃进行加热。此时，在保持干燥器内低压同时，氮气蒸汽通过干燥器。当产物获得稳定的重量时，即没有发现进一步的蒸发，视为完成干燥。包装产品并防湿保存。
实施例6
葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸(残基)的氧化，抗凝血活性的删除
将约3000克肝素溶解于净化水中以得到10-20％w/v的溶液。将该溶液的pH调节至4.5-5.5。然后，将偏高碘酸钠(NaIO4)加入到生产溶液中；高碘酸盐的量为肝素重量的15-25％。再次将pH调节至4.5-5.5。避光进行反应。在保持13-17℃的温度下，在连续搅拌下，使生产溶液反应18-24小时，其中在最后的两个小时中将温度降至5℃。
通过碱性β消除过程的多糖链的解聚
在保持5-25℃的温度同时缓慢加入4M NaOH溶液直至获得10.5-12的pH，因此允许引发的反应进行15-95分钟。此时，记录溶液的pH并缓慢添加4M HCl直至获得5.5-7的pH。
还原性末端端子的还原
倾倒出并弃除母液后，通过添加净化水溶解沉积物直至获得15-30％w/v的生产溶液浓度。在保持13-17℃的温度同时，将溶液的pH调节至5.5-6.5。然后将130-200克硼氢化钠加入至溶液中并使其溶解，pH将立即升至pH 10-11，继续反应14-20小时。记录该反应时间段之前和之后的溶液的pH。这段反应时间后，缓慢加入稀酸以调节pH值至4，这降解剩余的硼氢化钠。维持4的pH值45-60分钟后，使用稀的NaOH溶液将溶液的pH调节至7。然后向溶液中加入净化水直至获得15-20mS/cm的反应溶液导电性。
通过离子交换色谱法纯化产物
将直径500mm的色谱柱用介质、DEAE-Sepharose或QAE-Sepharose填装至对应于10-15cm床高的25-30升体积。进行色谱法3-4轮以消耗所有的产物。
然后制备缓冲液，
平衡缓冲液，缓冲液A，15mM磷酸盐，150mM NaCl
洗脱缓冲液，缓冲液B，2M NaCl溶液
装备缓冲液，0.5M NaOH
于15-25℃，以≤200cm/小时或约350升/小时的流速，进行该色谱法步骤。
将柱用平衡缓冲液平衡直至洗脱液具有15-20mS/cm的导电性。然后将氧化的肝素溶液泵入色谱柱中。施加的粗产物的量相当于＜40g/升的色谱法介质。
平衡缓冲液后进行等度(isocratic)冲洗，并当UV 210-254nm达到基线时停止冲洗。典型地，需要5床体积的缓冲液来达到基线。除去添加入过程中的化学品和这些化学品形成的产物。
然后，通过进行梯度洗脱，线性增加应用于色谱柱上的缓冲液的离子强度。缓冲液A从100％降至0％，而被超过5床体积的100％缓冲液B替换。当UV吸收为＞0.1AU时收集产物(洗脱物)，并且当信号＜0.1AU时停止收集。然后进行柱的保洁，随后再次准备色谱柱以用于下一轮色谱法。合并所有轮次的洗脱物并保存于15-25℃。
产物的脱盐
于15-25℃，连续搅拌下，向一体积前述步骤中获得的合并的洗脱物添加3体积的95-99.5％乙醇。从该溶液中沉淀出产物。允许产物沉积＞3小时。然后，将沉积物溶解于净化水中达到15-25％的浓度。然后将溶液添加入95-99.5％的冷乙醇(＜-5℃)，典型地消耗5体积乙醇/一体积产物溶液。然后，于＞2000G，以连续模式离心，然后收集并制得产物糊状物以干燥。
产物的干燥
将产物均匀地分布于托盘上，并置于真空箱中。施用真空并于35-40℃进行加热。此时，在保持干燥器内低压同时，氮气蒸汽通过干燥器。当产物获得稳定的重量时，即没有发现进一步的蒸发，视为完成干燥。粉碎产物并得到同质性，然后包装产品并防湿保存。
实施例8
使根据实施例1和3制备的低抗凝血肝素经历1H-NMR分析并与天然肝素的光谱比较。
表II阐明了产生于非还原性末端不饱和葡糖胺的5.00ppm至6.50ppm之间的信号不存在于天然肝素中。表II的结果显示能够从天然肝素降低这样的不被预测存在于光谱中的化合物的存在至一个很低的水平。作为对比，对于5.70-8.00ppm区域内的任何信号，目前适用于肝素质量控制的限制(EDQM的专题7)为与5.42ppm的信号相比＜4％。
表II、关于异常信号的低抗凝血肝素的定量结果。1H-NMR光谱中信号6.15和5.95ppm的信号强度
另外，通过合并1H-NMR和13C-NMR光谱评估(HSQC)还定量了非还原性末端不饱和葡糖胺的存在，并以总葡糖胺的mol％证明(表III)。
另外，通过以下的NMR二维(2D)方法分析样品，所述NMR二维方法涉及如前所述的质子和碳NMR光谱(HSQC)的联合应用(参见Guerrini M.,Naggi A.,Guglieri S,Santarsiero R,Torri G.Anal Biochem 2005；337,35-47)。
表III阐明了与低抗凝血肝素的葡糖胺的总量相比的修饰的葡糖胺的部分(％)，其以1H-NMR光谱中的5.95ppm和6.15ppm处的信号存在。
表III：总葡糖胺的异常信号5.95ppm、6.15ppm的定量测定结果
实施例9
可以通过常规的无菌工艺将根据上述任何一个实施例生产的产品制成药物产品，例如pH 6-8的含有150mg/mL的活性产物和15mM磷酸钠的溶液。如此获得的药物产品主要旨在用于皮下施用，但也适用于静脉内施用。
得到的产品是具有设计的4.6-6.9kDa平均分子量并基本上没有抗凝血活性的肝素的解聚形式。
所述产品具有对应于1.2-15kDa的分子量的n为2-20范围内的多糖聚合物的粒径分布。主要的大小是对应于3.6-9.6kDa分子量的6-16个二糖单元。
通过用TSK 2000和TSK 3000SW串联柱进行的GPC-HPLC测定分子量。使用折射率来评估。对于LMWH使用第一国际校准物。
下面呈现分子质量分布和总重量累积百分比的相应部分。
表IV、几个批次的多糖的分布及以重量累积％表示的其对应的分子质量
重均分子量的对应值，Mw落入4.6-6.9kDa的范围内。
实施例10
在环境温度，研究了根据实施例1至3制备的和根据实施例9配制的化学修饰的肝素的药物物质(粉末)和溶解于磷酸盐水性缓冲溶液中的药物产品的稳定性达36个月。初始产品为纯白色至浅黄色溶液，在400nm(10％w/v溶液)具有0.14吸光度，pH为7.0和渗透度为658mOsm/kg，平均分子量为5.6kDa且含量为150mg/ml。
36个月之后，药物产品具有相同的视觉外观，在400nm(10％w/v溶液)具有0.13吸光度，pH为7.1和渗透度为657mOsm/kg，平均分子量为5.4kDa且含量为153mg/ml。
实施例11
皮下施用
将通过实施例1公开的方法制备的化学修饰的肝素采用氚标记并且施用于斯普拉-道来氏(Sprauge Dawley)大鼠和狗。
结果：
对于大鼠以2、8和24mg肝素/kg/天以及对于狗以3、15和45mg肝素/kg/天皮下施用后，迅速吸收并且通常在大鼠和狗中分别在0.5和1.5小时内达到最大血浆浓度。在大鼠和狗中皮下生物利用度约为90％。令人感兴趣地，肝素的对应的生物利用度约为10％。
实施例12
在晚期妊娠采用DF01的治疗
研究设计
这是随机、双盲、安慰剂对照、多中心研究以评价在晚期妊娠采用DF01预处理减少分娩时间的安全性和疗效。瑞典的十八个研究中心参与了本研究。
DF01为根据本发明的化学修饰的肝素，其是低抗凝血肝素，且其依据实施例1和9，通过来自猪的肠粘膜的肝素的高碘酸盐氧化，接着进行产物的β消除而产生。
协议规定每名受试者进入日常门诊，从孕龄38+0周至高达40+0周开始治疗直到分娩，接受皮下注射研究的医药产品。对每名受试者参与本研究的预期持续时间为1-28天(+筛选期和随访期)。所有妇女必须最迟在妊娠42+0周引产。提供最长28天的治疗[最多28个剂量的研究的医药产品(IMP)]。分娩之后8-16周进行随访。
治疗
DF01和匹配的安慰剂提供为用于皮下注射的溶液。
DF01的药物制剂为用于皮下注射的溶液，8mL分散于橡皮塞密封的和覆盖着剥除型铝盖的玻璃小瓶。
每mL的DF01溶液包含下列成分：
□DF01，150mg
□磷酸盐缓冲液，0.015M
□苄醇，14mg。
用苄醇保藏的无菌生理学氯化钠溶液作用安慰剂。八(8)mL安慰剂以如药物产品相同的方式提供于小瓶中。
每mL的安慰剂溶液包含下列成分：
□氯化钠，9mg
□苄醇，14mg。
受试者接受60mg/天的DF01(0.4mL)(对应于60kg受试者中1.00mg/kg/天)或安慰剂(0.4mL)。
通过每天皮下注射施用所述产品，治疗开始于孕龄38+0周至40+0周，且治疗持续直至分娩。如果在42+0周任然没有分娩，则进行引产。治疗最长持续时间为28天。日常注射之间的允许的时间间隔为24+/-6小时，即18-30小时。如果时间限制偶尔没有满足或者剂量错过，所述治疗仍会继续。
结果
在研究中包括总计252名妇女。这些妇女中，84名接受催产素和安慰剂且94名接受催产素和DF01。
表V、所有分娩都施用了催产素(包括剖腹产)
表VI、所有分娩都施用了催产素(不包括剖腹产)
从表V和VI可以看出，接受DF01联合催产素的妇女分娩后出血少于接受催产素和安慰剂的妇女。在接受DF01联合催产素的妇女中，与安慰剂组的85％相比，93％不经历PPH。15％(13％1000-2000ml和2％2000-3000ml)的安慰剂治疗的妇女经历PPH，而DF01治疗妇女中相应的数值仅为7％(6％1000-2000ml和1％2000-3000ml)。将通过剖腹产手术分娩孩子的妇女排除在外给出了相同的结果(见表VI)。
实施例13
培养中建立人子宫平滑肌细胞。采用钙指示剂染料Fluo-4测量细胞内Ca2+并建立了用于细胞的采用共聚焦显微镜的肝细胞影像。采用催产素处理细胞，且证明Ca2+流入至细胞溶质(图1B)。
效应是剂量依赖性的，最大效应已在0.05IU/ml催产素处。使用如实施例1描述的DF01用于实验。
图1A显示单独的DF01不影响Ca2+浓度。然而，当DF01与催产素一起施用时，相比于单独的催产素，获得了增加的和持续的Ca2+水平(图1B和C)。剂量应答类型，见图1D，显示Ca2+峰的数量与DF01的浓度相关联。该结果证明了DF01如何通过促进和维持催产素的作用而发挥子宫收缩的作用的机理。通过采用10μM维拉帕米预孵育子宫平滑肌30分钟进一步研究所述机理。维拉帕米不影响由催产素或由催产素和DF01联合诱导的Ca2+流入。因此可以推断不涉及L通道。
进一步研究主要的肌醇-3磷酸盐(IP3)的运输机理是否刺激内质网的Ca2+运输。为了研究该途径，在以100μM浓度孵育30分钟之后，测试2-氨基乙氧二苯硼酸酯(2-APB)对Ca2+的作用。该抑制剂强烈减少催产素和催产素/DF01刺激的Ca2+运输。
为了进一步表征催产素和DF01之间的相互作用，使用催产素受体拮抗剂阿托西班的作用，并且经受DF01的细胞增强了催产素对Ca2+运输的作用。10-6M浓度的阿托西班明显抑制催产素以及催产素/DF01的联合的作用。
这些结果表明DF01本身不影响Ca2+运输。然而，与催产素联合，注意到增强Ca2+运输刺激的清楚的剂量应答。DF01使催产素的作用稳定，导致更长刺激周期。该作用不涉及L通道，但是涉及在催产素信号中刺激Ca2+流入的IP3。催产素拮抗剂的作用提示DF01的作用对催产素受体水平起作用。
子宫肌层细胞内Ca的流入直接与子宫肌层的收缩活性的力相关联(Arrowsmith等人,PLOSone,2012,vol.7,p.1-11)。因此可推断根据本发明的DF01和化学修饰的肝素是有用的药剂，其施用用于改善子宫肌层收缩和治疗与不充分或缺乏子宫的子宫肌层收缩有关的并发症，例如PPH中的宫缩无力。总之，DF01和类似的化学修饰的肝素和硫酸乙酰肝素被认为是所需的通过建立有效的子宫的子宫肌层收缩来治疗或预防PPH的有效的干预治疗。
尽管本文详细描述了特别的实施方案，其是以实施例的形式完成的，仅用于阐述目的，并且其并不意味着限制了附上的权利要求的范围。特别地，发明人预期本发明可以作出各种替换、变化、和修饰而不偏离由权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

Claims (25)

1.一种化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性，其包含：
(i)基本上不含调节抗凝血作用的化学完整的糖序列的多糖链；和
(ii)对应于1.2至12kDa之间的分子量的多糖链，所述多糖链具有根据(式I)的主要出现的二糖，
其中，
n是2至20的整数，
其用于与至少一种子宫收缩剂联合在治疗产后出血(PPH)中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中PPH出现在遭受宫缩无力的妇女中。
3.根据权利要求1或2所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中PPH出现在已经被引产的妇女中。
4.根据权利要求1或2所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中PPH出现在已经历分娩停滞的妇女中。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述子宫收缩剂选自催产素或催产素类似物、麦角类生物碱、前列腺素或前列腺素类似物。
6.根据权利要求5所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述子宫收缩剂为催产素或催产素类似物。
7.根据权利要求6所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述子宫收缩剂为催产素。
8.根据权利要求6所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述催产素类似物为卡波森。
9.根据权利要求5所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述子宫收缩剂为前列腺素或前列腺素类似物。
10.根据权利要求5所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述子宫收缩剂为麦角类生物碱。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素具有约4.6至6.9kDa的平均分子量(Mw)。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述主要出现的多糖链具有6至12个之间的分子量从3.6至7.2kDa的二糖单元。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中至少70％的所述多糖链具有至少3kDa以上的分子量。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有根据下表的多糖分布及其对应的表示为重量累积％的分子质量：
15.根据权利要求1-14中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述多糖包含具有如式I所示的还原末端残基的糖链。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其包含非还原性末端不饱和的葡糖胺，所述葡糖胺信号存在于1H-NMR光谱的5.0至6.5ppm之间，其强度(比例％)相比于来自于天然肝素的5.42ppm处的信号在4％以下。
17.根据权利要求16所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述葡糖胺信号存在于5.95ppm和6.15ppm处。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中葡糖胺总量的1％以下被修饰。
19.根据权利要求17-18中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述葡糖胺包含非还原性末端不饱和的葡糖胺。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述葡糖胺信号存在于1H-NMR光谱的5.95ppm和6.15ppm处。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中所述化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素基本上不含完整的非硫酸化的艾杜糖醛酸和/或葡萄糖醛酸。
22.根据权利要求1-18中任一项所述的用途的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其中至少一种化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素以胃肠外药物制剂形式施用。
23.一种化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性，其包含：
(i)基本上不含调节抗凝血作用的化学完整的糖序列的多糖链；和
(ii)对应于1.2至12kDa之间的分子量的多糖链，所述多糖链具有根据(式I)的主要出现的二糖，
式(I)
其中，
n是2至20的整数，
其用于与至少一种子宫收缩剂联合在预防产后出血中的用途。
24.一种治疗产后出血(PPH)的方法，其包括向患者胃肠外施用具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性的化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其包含：
(i)基本上不含调节抗凝血作用的化学完整的糖序列的多糖链；和
(ii)对应于1.2至12kDa之间的分子量的多糖链，所述多糖链具有根据(式I)的主要出现的二糖，
式(I)
其中，
n是2至20的整数，
其与至少一种子宫收缩剂联合。
25.一种化学修饰的肝素或硫酸乙酰肝素，其具有10IU/mg以下的抗因子IIa活性和10IU/mg以下的抗因子Xa活性，其包含：
(i)基本上不含调节抗凝血作用的化学完整的糖序列的多糖链；和
(ii)对应于1.2至12kDa之间的分子量的多糖链，所述多糖链具有根据(式I)的主要出现的二糖，
式(I)
其中，
n是2至20的整数，
其用于与至少一种子宫收缩剂联合在制备用于治疗产后出血的药物中的用途。
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