CN104262243B - 用于治疗与淀粉状蛋白有关的疾病或用于治疗眼部疾病的2,6‑二氨基吡啶化合物 - Google Patents

用于治疗与淀粉状蛋白有关的疾病或用于治疗眼部疾病的2,6‑二氨基吡啶化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及可用于治疗与淀粉状蛋白有关的一组紊乱和异常以及与淀粉样蛋白有关的一组疾病或病症的2,6‑二氨基吡啶化合物。本发明的化合物还可以用于治疗与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病。

Description

用于治疗与淀粉状蛋白有关的疾病或用于治疗眼部疾病的2, 6-二氨基吡啶化合物
本申请是申请日为2010年10月14日、优先权日为2009年10月15日的中国发明专利申请第201080056685.1号的分案申请。
技术领域
本发明涉及新的化合物，所述化合物可用于治疗与淀粉状蛋白有关的一组紊乱和异常、特别是眼部紊乱如青光眼或年龄相关性黄斑变性(AMD)以及用于治疗与淀粉样蛋白有关的疾病或病症。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在制备用于治疗与淀粉样物质(amyloid)或淀粉样蛋白有关的疾病或病症的药剂中的用途。还公开了治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症的方法。
本发明的化合物还可以用于治疗或预防与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病，特别是与视觉系统的组织中β-淀粉状蛋白相关性病理学异常/改变如神经元退化有关的眼部疾病。所述的病理学异常可以例如发生在不同的眼部组织中，例如：视皮质，导致皮质视觉缺乏；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，导致由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障；玻璃体，导致眼部淀粉样变；视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性如年龄相关性黄斑变性；视神经，导致视神经玻璃疣(drusen)、视神经病和视神经炎；和角膜，导致格子状营养不良。
背景技术
许多老年性疾病基于淀粉样物质或淀粉样蛋白或者与其有关，这些疾病的特征部分地在于可导致疾病发病以及发展的淀粉样物质或淀粉样物质的细胞外沉积的积累。
那些神经变性疾病包括中枢神经系统紊乱和外周神经系统紊乱、特别是眼部紊乱。
这类紊乱包括但不限于：神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症如轻度认知缺损(MCI)、卢伊体痴呆(Lewy body dementia)、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变(荷兰型)；关岛型帕金森-痴呆复合症(Guam Parkinson-Dementia complex)。基于淀粉样蛋白或与其有关的其它紊乱有：进行性核上麻痹、多发性硬化；克-雅(Creutzfeld Jacob)病、帕金森病、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、包涵体肌炎(IBM)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤和其它疾病，包括靶向于眼部不同组织的与淀粉样物质有关的眼部疾病，例如靶向于视皮质(包括皮质视觉缺乏)、前房和视神经(包括青光眼)、晶状体(包括由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障)、玻璃体(包括眼部淀粉样变)、视网膜(包括原发性视网膜变性和黄斑变性、特别是年龄相关性黄斑变性)、视神经(包括视神经玻璃疣、视神经病和视神经炎)和角膜(包括格子状营养不良)。
β-淀粉状蛋白(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)中是老年斑的主要组分。那些老年斑是由淀粉状前体蛋白(APP)异常加工所引起的，并且已经参与了AD神经病。近来，Aβ还已经通过视网膜神经节细胞(RGC)细胞凋亡而参与了眼部紊乱如青光眼的发展。在使用还显示出与典型青光眼性改变如视神经病和视觉功能损伤有关的RGC缺失的AD患者进行的数项研究中证明了青光眼和AD之间的关系。
青光眼是以视神经病的特征模式发生的一组涉及视网膜神经节细胞(RGC)缺失的视神经疾病。青光眼经常、但不是总伴有眼压升高，眼压升高是由于房水循环或其排出阻塞引起的。
尽管眼内压升高是发生青光眼的重要风险因素，但是未能确定对于引起青光眼而言决定性的眼内压阈值。
损伤还可以由于对重要视神经纤维的血液供应差、神经结构脆弱和/或神经纤维自身的健康问题所引起。
未经治疗的青光眼可导致永久性视神经损伤和所引起的视野损失，这可以发展为失明。
RGC是将视觉信号从眼传送至脑的神经细胞。胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-8是细胞凋亡过程中的两种主要的酶，它们在导致RGC细胞凋亡的过程中被激活。胱天蛋白酶-3裂解淀粉状前体蛋白(APP)，产生神经毒性片段、包括β-淀粉状蛋白。没有APP的保护作用，β-淀粉状蛋白在视网膜神经节细胞层中的积聚则导致RGC死亡和不可逆的视力丧失。
不同类型的青光眼分为开角型青光眼(如果病症是慢性的)或闭角型青光眼(如果突然发生急性青光眼)。青光眼通常影响双眼，但是该疾病可以在一只眼中比在另一只眼中发展更加迅速。
慢性开角型青光眼(COAG)还称为原发性开角型青光眼(POAG)，它是最常见类型的青光眼。COAG是由小梁网中微小阻塞所引起的，小梁网中微小阻塞减少房水外流排入到施莱姆管中并升高眼内压(IOP)。POAG通常影响双眼，它与年龄和阳性家族史密切相关。其频率在老年人群中增加，因为眼排出机制随年龄增加而逐渐变得阻塞。在患有慢性开角型青光眼的对象中眼内压升高不伴有任何症状，直到在中枢视觉区上感到损害。
急性闭角型青光眼(AACG)或闭角型青光眼是相对稀少类型的青光眼，其以眼内压突然升高到35至80mmHg为特征，可导致严重的疼痛和不可逆的视力丧失。压力突然升高是由过滤角闭合和排出通道阻塞所引起的。具有狭窄角的个体发生角突然闭合的风险增加。AACG通常在一只眼中发生，但是风险在两只眼中都存在。年龄、白内障和假性脱落也是风险因素，因为它们与晶状体增大以及角挤塞或狭窄有关。青光眼突然发作可以伴有严重的眼痛和头痛、眼睛发炎、恶心、呕吐和视力模糊。
混合型或联合机制型青光眼是开角型和闭角型青光眼的混合或复合。它影响在激光虹膜切开术后角开放、但是继续需要给药来控制IOP的急性ACG患者以及逐渐发展角狭窄的患有POAG或假性剥脱性青光眼的患者。
正常眼压性青光眼(NTG)还称为低眼压性青光眼(LTG)，其特征是进行性视神经损伤和周边视觉丧失，这与在其它类型的青光眼中所见到的类似；然而，眼内压在正常范围内或者甚至低于正常值。
先天性(婴儿)青光眼是相对稀少的遗传类型的开角型青光眼。排出区域的发育不足引起眼内压力升高，这可导致由于视神经损伤所致的视力丧失和导致眼增大。早期诊断和治疗对于受该疾病影响的婴儿和儿童的视力保护是至关重要的。
继发性青光眼可以由以下因素引起：眼损伤、眼虹膜炎症(虹膜炎)、糖尿病、白内障或在类固醇敏感的个体中使用类固醇。继发性青光眼还可以伴有视网膜脱离或者视网膜静脉闭塞或阻塞。
色素性青光眼以色素颗粒从虹膜中脱离为特征。颗粒可引起眼排出系统阻塞，从而导致眼内压升高和视神经损伤。
剥脱性青光眼(假性剥脱)以片状物质在前囊上和眼角中沉积为特征。片状物质积聚可阻塞排出系统和升高眼压。
可以使用各种试验进行青光眼的诊断。眼压测量法通过测定眼表面的张力或硬度来测定眼内压。数种类型的眼压计可用于该试验，最常见的是压平眼压计。厚度测量仪测定角膜的厚度，这转而测定眼内压。前房角镜检查法允许检查眼的过滤角和排出区域。前房角镜检查法还可以确定异常血管是否正在阻塞房水从眼中排出。检眼镜检查法允许检查视神经并且可以检测视神经盘中神经纤维层下降或改变或者该结构的凹入(陷凹)，这可以由眼内压升高或轴突掉出所引起。前房角镜检查法还可用于评价由血流差或眼内压升高所引起的神经损伤。视野检查可主观地将视野绘图，它可以检测视神经的青光眼损伤的指标。这可通过视野损失的特定模型来表示。眼相干断层成像是神经纤维层损失的客观测定法，它通过经由光透过受损轴突组织的示差来观察视神经纤维层的厚度(在青光眼中有改变)而进行。
黄斑变性是导致黄斑恶化的常见眼病，黄斑是视网膜的中心区域(位于眼后部的薄如纸的组织，其中感光细胞将视觉信号传递给脑)。锐利、清晰、“向前直行”的视觉通过黄斑进行加工。黄斑损伤导致出现盲点以及视力模糊或视觉变形。年龄相关性黄斑变性(AMD)在美国是视觉损伤的主要原因，对于年龄超过65岁的人而言，它是高加索人中法定盲的主要原因。大约180万年龄在40岁及以上的美国人患有晚期AMD，另外730万患有中期AMD的人处于视力丧失的巨大风险中。政府估计，到2020年将有290万人患有晚期AMD。AMD的受害者惊讶地发现对于该致盲病症的原因和治疗所知如此之少并且感到灰心。
有两种形式的黄斑变性：干性黄斑变性和湿性黄斑变性。其中黄斑的细胞缓慢开始破裂的干性形式在85％的黄斑变性病例中被确诊。两只眼睛通常都会受到干性AMD的影响，尽管一只眼睛可能失去视力而另一只眼睛保持不受影响。玻璃疣(为视网膜下的黄色沉积物)是干性AMD的常见早期征兆。当玻璃疣的数量或尺寸增加时，发生晚期干性AMD或湿性AMD的风险增加。干性AMD可能发展并引起视力丧失而不会转变为该疾病的湿性形式；然而，早期干性AMD也可能突然转变为湿性形式。
湿性形式尽管只占病例的15％，但是导致90％的失明，该形式被认为是晚期AMD(没有湿性AMD的早期或中期)。湿性AMD之前总是发生干性形式的AMD。当干性形式恶化时，一些人开始在黄斑后有异常血管生长。这些血管非常脆弱，它们将漏出液体和血液(因此称为“湿性”黄斑变性)，导致黄斑迅速损伤。
AMD的干性形式最初通常将引起轻微的视力模糊。然后视觉中央特别可以变得模糊，当该疾病发展时该区域变大。如果只有一只眼受到影响，则可能注意不到症状。在湿性AMD中，直线可能看起来像波形，中央视觉丧失可以迅速出现。
黄斑变性的诊断通常包括眼扩张检查、视敏度测试和采用称为眼底镜检查的方法对眼后部进行观察来帮助诊断AMD，如果怀疑是湿性AMD，还可以进行荧光素血管造影术。如果干性AMD到达晚期，则目前没有治疗方法来阻止视力丧失。然而，特别的高剂量配方的抗氧化剂和锌可以延缓或阻止中期AMD发展为晚期。(哌加他尼钠注射液)、激光凝固法和光动力学治疗可以控制异常的血管生长和黄斑出血，这有助于一些患有湿性AMD的人；然而，已经丧失的视力不会通过这些技术而恢复。如果视力已经丧失，存在有助于改善生活质量的低视力辅助器。
年龄相关性黄斑变性(AMD)的最早征兆之一是细胞外沉积物积聚，其已知为在视网膜色素上皮(RPE)的基底层和布鲁赫膜(BM)之间的玻璃疣。Anderson等人最近进行的研究已经证实玻璃疣含有β-淀粉状蛋白。(Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。
朊病毒导致神经变性疾病，例如羊瘙痒病、牛海绵状脑病和人克-雅病。颗粒的唯一已知的组分是蛋白质的羊瘙痒病同工型PrPSc。尽管朊病毒增加，但是没有证据表明它们含有核酸。PrPSc通过翻译后过程而衍生自非感染性的细胞蛋白PrPC，在该过程中PrPC经历了深度的构象改变。
羊瘙痒病蛋白PrPSc在神经元变性中具有至关重要的作用，在疾病的发展过程中它经历了如下三个阶段的转变：PrPC(蛋白质的正常细胞同工型)–PrPSc：感染形式(蛋白质的羊瘙痒病同工型)–蛋白质PrP27-30。
这类事件级联在以下疾病的发展过程中发生：克-雅病(CJD)、库鲁病、Gerstmann-Straussler-Scheinker综合征(GSS)、人致死性家族性失眠症、绵羊和山羊瘙痒病、貂脑病和牛海绵状脑病。
细胞无毒蛋白(PrPC)是分子量为33000至35000的唾液酸糖蛋白，它主要在神经元中表达。在上述疾病中，PrPC转化为改变形式(PrPSc)，该形式由于其对蛋白酶消化的相对抗性而不同于其正常同源物。PrPSc在受影响的动物和个体的中枢神经系统中积聚，其抗蛋白酶核芯在细胞外聚集。
淀粉样变不是单一的疾病实体，而是不同的进行性疾病进程，其特征是称为淀粉样物质的蜡样、淀粉样蛋白在细胞外组织中沉积，其可以在一个或多个器官或身体系统中积聚。当淀粉样沉积物积累时，它们开始干扰器官或身体系统的正常功能。有至少15种不同类型的淀粉样变。主要形式是没有已知先行疾病的原发性淀粉样变、在一些其它病症之后发生的继发性淀粉样变和遗传性淀粉样变。
继发性淀粉样变在患有如下疾病的人群中发生：慢性感染性或炎性疾病，例如结核病、称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠炎症(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻风病。
视神经玻璃疣是蛋白质和钙盐的球形凝结物，它们被认为代表通过影响轴突神经纤维层的先天性改变的血管结构而产生的分泌物。这些积聚在周围神经纤维层中发生，被认为通过压迫而直接地或者通过破坏对神经纤维层的血管供应而间接地损伤神经纤维层。在受影响的个体中，在生命的第一个十年后它们通常是可见的。它们最常发生在双眼中，但是也可以影响一只眼，它们可以导致周边视觉多年轻度丧失。
视神经病是以由脱髓鞘、血液供应阻断、营养缺乏或毒素引起的视神经损伤为特征的疾病。脱髓鞘视神经病(参见以下的视神经炎)通常由潜在的脱髓鞘过程如多发性硬化而引起。称为缺血性视神经病的血液供应阻断可以导致视神经细胞死亡或功能障碍。非动脉炎性缺血性视神经病通常在中年人中发生。风险因素包括高血压、糖尿病和动脉粥样硬化。动脉炎性缺血性视神经病通常在老年人中在动脉炎症(动脉炎)、特别是颞动脉(颞动脉炎)之后发生。视力丧失可以迅速发生或者历经2至7天逐渐发展，可以损伤一只眼或双眼。在患有由接触毒素或营养缺乏而导致的视神经病的人群中，双眼通常都会受到影响。
患有非动脉炎性缺血性视神经病的人有40％随时间推移会自发改善。非动脉炎性缺血性视神经病可通过控制血压、糖尿病和胆固醇水平进行治疗。动脉炎性缺血性视神经病可使用高剂量的皮质类固醇进行治疗，以防止第二只眼睛视力丧失。
视神经炎伴有一只眼或双眼轻度或重度视力丧失，它可以由以下因素引起：系统性脱髓鞘过程(见上)、病毒感染、疫苗接种、脑膜炎、梅毒、多发性硬化和眼内炎症(眼色素层炎)。眼运动可能是疼痛的，视力可由于反复发作而恶化。诊断包括检查瞳孔的反应和确定视神经盘是否肿胀。磁共振成像(MRI)可以显示出多发性硬化的证据，或者罕见地显示出肿瘤压迫视神经的证据，在该情况中，一旦肿瘤压力减轻，视力就得到改善。大多数视神经炎病例不经治疗历经数个月可得到改善。在一些情况下，使用静脉内注射皮质类固醇进行治疗是必需的。
白内障是在眼晶状体或其包膜中发展的不透明。白内障通常引起进行性视力丧失，如果不进行治疗，则可以导致失明。在莫尔加尼白内障中，白内障皮层渐进地液化形成乳白液体，如果晶状体囊破裂和泄漏，则可以导致严重的炎症。如果不进行治疗，白内障还可能引起白内障膨胀期继发性青光眼(phacomorphic glaucoma)。白内障在性质上可以是先天性的，或者可以由以下因素引起：遗传因素、老年、长期暴露于紫外线、暴露于辐射、糖尿病、眼损伤或躯体创伤。
囊外(ECCE)手术是治疗白内障的最有效治疗。在该手术中，晶状体被摘除，但是晶状体囊大部分保持完整。晶状体乳化法(在角膜侧面上的小切开术)通常用于在摘除前使晶状体破裂。
眼部淀粉样变是与I型家族性淀粉样多神经病(FAP)有关的遗传性紊乱，其特征是结膜血管异常、干燥性角结膜炎、瞳孔异常以及在一些情况下是玻璃体混浊和继发性青光眼。I型FAP与转甲状腺素蛋白(TTR)中的突变有关，转甲状腺素蛋白是一种在肝脏、视网膜色素上皮2和脑脉络丛中合成的四聚血浆蛋白(前白蛋白)。不同的突变使转甲状腺素蛋白聚合成淀粉样物质原纤维的折叠结构，导致遗传性淀粉样变。最常见的突变是TTR-met303，其中甲硫氨酸替换转甲状腺素蛋白的30位处的缬氨酸。
IV型FAP与格子状角膜营养不良(LCD)有关。格子状角膜营养不良是遗传性、原发性、通常为双侧的角膜淀粉样变，其特征是在角膜基质中存在可折射的网格线伴有双轮廓线。I型LCD(Biber-Haab-Dimmer)是常染色体显性的双侧对称性角膜疾病，其特征是在中心基质的浅层和中间层中存在许多半透明的细网格线伴有白点和模糊的混浊。症状在生命的第一个或第二个十年开始，引起进行性视力丧失。大多数患者到40岁时需要角膜移植。II型LCD与全身性淀粉样变(梅雷托耶综合征)有关，其特征是在边缘、中心角膜和基质中存在粗网格线。视力直到生命后期都不会受到影响。III型LCD影响中年人，其特征是存在从边缘延伸至边缘的粗网格线。IIIA型LCD的特征是淀粉样沉积物在基质中积聚以及在基质和鲍曼层之间存在淀粉样物质的条带，III A型LCD不同于III型LCD，因为它存在角膜糜烂、出现白色和具有常染色体显性遗传模式。
对于青光眼尚无治愈方法。对青光眼的大多数治疗被设计成降低和/或控制眼内压(IOP)，这可以损伤将视觉信息传递给脑的视神经。青光眼滴眼剂通常是优于青光眼手术的首选，并且可以非常有效地控制IOP以防止眼损伤。用于治疗青光眼的药物按照其活性化合物被分类，并且可以以以下类别列出(括号中所示为目前被批准的药物)：
–β-阻断剂(Timoptic、Betoptic、Istalol、Timolol)，它们通过减少眼中液体(房水)生成而起作用。
–碳酸酐酶抑制剂(Trusopt、Azopt、Diamox、Naptazane、Daranide)，它们降低房水生成的速率。
–α-肾上腺素能激动剂(Alphagan、Alphagan-P、lopidine)，它们也降低房水生成的速率。
–前列腺素药物(Xalatan、Lumigan、Travatan Z、Rescula)，它们在眼后部改变房水通过不同途径排出，由此降低眼压的升高。
–拟副交感神经药(Carbachol、Pilocarpine)，它们通过增加房水从眼中流出、由此增加眼内液的排出而起作用。
–肾上腺素，它降低房水生成的速率和增加房水从眼中的流出。
除了旨在控制IOP的药物外，还有一些研究性的青光眼治疗聚焦于保护视神经。阿尔茨海默病药物美金刚目前正在被研究作为神经保护剂用于青光眼适应症。但是，N-甲基-d-天冬氨酸(NMDA)拮抗剂美金刚在开角型青光眼中的随机临床研究未显示出显著的效能。
另外的青光眼治疗是包括小梁成形术在内的激光手术，小梁成形术是一种帮助房水更有效地离开眼的方法。根据青光眼基金会的报道，近80％患者对这种方法反应良好，足以延缓或避免进一步手术。然而，根据国家眼科研究所(National Eye Institute)的报道，在激光手术后2年内，所有患者中有一半患者的眼内压再次升高。如果药物和最初的激光治疗不能成功地降低眼内压，则进行切开手术。一种类型的手术是小梁切除术，它在眼壁内产生开口以便房水可以排出。然而，根据青光眼基金会的报道，约三分之一的小梁切除术患者在5年内形成白内障。如果小梁切除术失败，则另外的切开方法包括将排液管置于眼中角膜和虹膜之间以及使用激光或冷冻治疗以破坏产生房水的眼内组织。手术可以挽救患者的剩余视力，但是它不能改善视力。实际上视力在手术后可能会更糟。
目前对青光眼的治疗力求通过降低和控制眼内压来延缓视野损失的发展。如上所述，这可以使用降低IOP的药物或通过激光小梁成形术来完成。降低IOP的作用的长期研究已经被证明可有效地延缓一些患者的疾病发展。不幸的是，仍然有患者尽管他们的IOP降低、但是仍然继续丧失视野或者对降低IOP的药物根本没有反应。因此，需要开发靶向于不同于眼内压的特征的新治疗。这类新的目标是RGC的神经保护。
年龄相关性黄斑变性(AMD)是年龄超过65岁的高加索人失明的主要原因。虽然近来黄斑变性研究已经有了很大进展，但是还没有救援在该疾病的过程中发生的神经细胞死亡的治疗方法。对于与β-淀粉状蛋白相关向神经元退化有关的其它眼病也没有明确的治疗方法，所述的其它眼病例如有皮质视觉缺乏、视神经玻璃疣、视神经病、视神经炎、眼部淀粉样变和格子状营养不良。
淀粉样沉积物通常含有三种组分。淀粉状蛋白原纤维占淀粉样物质的约90％，它们包含数种不同类型的蛋白质中的一种。这些蛋白质能够折叠成所谓的“β-折叠”原纤维，这是一种显示出刚果红的结合位点、从而使淀粉状蛋白具有独特染色性质的独特蛋白构型。此外，淀粉样沉积物与淀粉状蛋白P(五边形)组分(AP)(与正常血清淀粉状蛋白P(SAP)有关的糖蛋白)和与硫酸化糖胺聚糖(GAG)(结缔组织的复合碳水化合物)密切相关。
对于与淀粉状蛋白有关的紊乱和异常或者与淀粉样蛋白有关的病症如阿尔茨海默病和朊病毒病的治疗的一项进展是已经设计了分别与Aβ和PrP的异常β-折叠构象结合、由此阻止这些分子积聚的分子。肽的β-折叠构象的特征是在相邻氨基酸链之间以规则模式形成氢键。这种排列产生了稳定的三维结构。H-键受体(C＝O基团)和H-键供体(NH基团)在天然存在的β-折叠肽中与被键合的原子(大致在一条线内)交替存在。在每条氨基酸链内，相邻的H-键供体和H-键受体之间的距离在特定的范围内。特别地，在一个氨基酸残基内H-键供体(NH基团)和H-键受体(C＝O基团)之间的距离为3.5至一个氨基酸残基的H-键受体(C＝O基团)和参与链间键合的下一个氨基酸残基的H-键供体(NH基团)之间的距离为2.6至换言之，在一条氨基酸链内相邻的H-键供体和H-键受体之间的距离在以下范围内交替：
H-键供体(氨基酸1)–H-键受体(氨基酸1)＝3.5至
H-键受体(氨基酸1)–H-键供体2(氨基酸2)＝2.6至
被设计成与β-折叠理想地结合的配体具有的H-键供体和H-键受体的顺序与β-折叠的氨基酸链中H-键供体和H-键受体的顺序互补。
在WO 03/095429和Rzepecki等人,Synthesis(2003)12,1815-1826中描述了合成分子，据报道它们能够与Aβ或PrP的β-构象结合，由此阻止其积聚。为此目的，合成了含有两个或更多个通过含有羰基的连接基连接的氨基吡唑部分的某些分子，例如“AmpOx”和“Trimer”。
WO 03/095429中描述了一些分子，据报道在两项生物物理学试验中它们对Aβ积聚的形成具有抑制作用。根据Rzepecki等人,Synthesis(2003)12,1815-1826的报道，其中描述的分子之一能够减少重组PrPC在溶液中积聚。然而，在这些研究中没有研究物理化学性质。
WO 2008/061795描述了适于治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病的某些杂环化合物。
物理化学性质在通过神经病疗法穿过血脑屏障中起着关键性作用。已经对与CNS药物的成功有关的因素进行了综述(H.Pajouhesh和G.R.Lenz,J.Am.Soc.Exp.Neurother.(2005)第2卷,541)。这些因素包括水和正辛醇之间的分配系数(LogP)，即本质上是化合物的亲脂性。在WO 03/095429和Rzepecki等人,Synthesis(2003)12,1815-1826中描述的一些化合物具有不利的LogP计算值，因此预期它们不能通过血脑屏障。特别地，“AmpOx”具有低于零的LogP计算值。
在以上文件中描述的其它化合物所具有的性质使它们不适合施用于患者，因为它们具有有害的副作用。例如，“Trimer”是致突变的、致癌的和在代谢上是不稳定的。
发明内容
发明概述
本发明的目的是提供可以用于治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症、包括淀粉样变、但是特别是眼部疾病如青光眼的化合物。这些化合物应当能够穿过血脑屏障。而且，它们应当是可药用的，特别是它们应当不具有致突变或致癌性质或者在代谢上不是不稳定的。这些化合物应当具有适当高的水溶性，同时保持它们的生物活性。
本发明的另一个目的是给患有眼部疾病的对象提供改善的治疗选择，所述的眼部疾病与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关，特别是与视觉系统的组织中β-淀粉状蛋白相关性病理学异常/改变如神经元退化有关。所述的病理学异常可以例如发生在不同的眼部组织中，例如：视皮质，导致皮质视觉缺乏；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，导致由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障；玻璃体，导致眼部淀粉样变；视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性如年龄相关性黄斑变性；视神经，导致视神经玻璃疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致格子状营养不良。
本发明人已经惊奇地发现这些目的可以通过如下文描述的通式(I)化合物而实现。因此，本发明涉及通式(I)化合物。
另一方面，本发明涉及包含通式(I)化合物的药物组合物。
本发明的另一方面涉及通式(I)化合物在制备用于治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症、包括淀粉样变的药剂中的用途。
本文还公开了治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症的方法，该方法包括给需要这类治疗的对象施用有效量的通式(I)化合物。
在优选的实施方案中，疾病或病症是眼部疾病或病症。更优选疾病是青光眼，甚至更优选疾病选自：慢性(特发性)开角型青光眼、瞳孔阻滞性青光眼、发育性青光眼、与其它眼部疾病有关的青光眼、与浅层巩膜静脉压升高有关的青光眼、与炎症和创伤有关的青光眼、眼内手术后的青光眼、高压型青光眼、常压型青光眼、急性闭角型青光眼、亚急性闭角型青光眼、慢性闭角型青光眼、联合机制型青光眼(combined mechanism glaucoma)、先天性(婴儿)青光眼、无虹膜青少年青光眼(juvenile glaucoma aniridia)、与角膜内皮疾病有关的青光眼、与虹膜和睫状体疾病有关的青光眼、与晶状体疾病有关的青光眼、与视网膜、脉络膜和玻璃体疾病有关的青光眼、与视网膜脱离和玻璃体视网膜异常有关的青光眼、新生血管性青光眼、色素性青光眼、剥脱综合征、晶状体引起的开角型青光眼、与晶状体膨大和脱位有关的青光眼、与角膜炎、巩膜外层炎和巩膜炎有关的青光眼、睫状体阻滞性(恶性)青光眼、无晶状体和假晶状体、上皮、纤维和内皮增殖性的青光眼、与角膜手术有关的青光眼以及与玻璃体视网膜手术有关的青光眼。
本发明的另一方面涉及通式(I)化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病或减轻其影响。
本文还公开了治疗与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病或减轻其影响的方法，该方法包括给需要这类治疗的对象施用有效量的通式(I)化合物。
与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病特别与视觉系统的组织中β-淀粉状蛋白相关性病理学异常/改变如神经元退化有关。所述的病理学异常可以例如发生在不同的眼部组织中，例如：视皮质，导致皮质视觉缺乏；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，导致由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障；玻璃体，导致眼部淀粉样变；视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性如年龄相关性黄斑变性；视神经，导致视神经玻璃疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致格子状营养不良。
在一项优选的实施方案中，眼部疾病或病症选自：青光眼、神经元退化、皮质视觉缺乏、由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障、眼部淀粉样变、原发性视网膜变性、黄斑变性如年龄相关性黄斑变性、视神经玻璃疣、视神经病、视神经炎和格子状营养不良。
另一方面，本发明涉及混合物(例如药物组合物)，它包含本发明的化合物以及任选的至少一种其它生物学活性化合物和/或可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。其它生物学活性物质可以是用于由淀粉样物质或淀粉样蛋白引起或与其有关的疾病和紊乱的药物治疗的已知化合物。
在一项实施方案中，其它生物学活性化合物优选选自：β-阻断剂、碳酸酐酶抑制剂、α-或β-肾上腺素能激动剂、前列腺素药物、拟副交感神经药、胆碱酯酶抑制剂、乙酰胆碱合成、贮存或释放促进剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、用于治疗淀粉样变的化合物、对抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂如哌仑西平(pirenzepin)和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸盐(1,3PDS)、α-分泌酶(α-secretase)激活剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、神经递质、β-折叠断裂剂、清除/消耗β-淀粉状蛋白的细胞组分的引诱剂、N-末端截短的β-淀粉状蛋白、包括焦谷氨酸化β-淀粉状蛋白3-42的抑制剂、抗炎分子或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)如他克林、利凡斯的明、多奈哌齐和/或加兰他敏、M1激动剂、其它药物、包括任意的修饰淀粉样物质的药物和营养补充剂、抗体、疫苗。
在另一项优选的实施方案中，其它生物学活性化合物选自：青眼露(timoptic)、倍他洛尔眼液(betoptic)、istalol、噻吗洛尔(timolol)、曲索特(trusopt)、azopt、丹木斯(diamox)、naptazane、达拉奈(daranide)、阿法根(alphagan)、阿法根-p、iopidine、适利达(xalatan)、lumigan、travatan Z、rescula、卡巴胆碱、毛果芸香碱、肾上腺素和美金刚。
在另一项优选的实施方案中，其它生物学活性化合物是抗体，优选单克隆抗体，包括任意在功能上等同的抗体或其功能部分。优选抗体、更优选单克隆抗体可以包括任意在功能上等同的抗体或其功能部分，它是与β-淀粉状蛋白结合的抗体。优选抗体、更优选单克隆抗体(可以包括任意在功能上等同的抗体或其功能部分)是这样的抗体：当与淀粉样单体和/或聚合可溶性淀粉状肽共同孵育时，例如与β-淀粉状单体肽如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41或1-42和/或包含多个Aβ单体单元的聚合可溶性β-淀粉状肽共同孵育时，尤其是与Aβ1-42单体和/或包含多个Aβ1-42单体单元的Aβ聚合可溶性淀粉状肽共同孵育时，该抗体抑制Aβ单体积聚成高分子聚合原纤维或纤丝(filaments)，此外，当与通过淀粉状单体肽、特别是β-淀粉状单体肽、例如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41或1-42、尤其是Aβ1-42单体肽的积聚而预先形成的高分子聚合淀粉状原纤维或纤丝共同孵育时，该抗体还能够使形成的聚合原纤维或纤丝解聚。在一项实施方案中，抗体可以是嵌合抗体或其功能性部分或者人源化抗体或其功能性部分。在另一项实施方案中，抗体可以是单克隆抗体，其选自具有由如下杂交瘤细胞系产生的抗体的特性的抗体：
a)分别于2005年12月1日和2005年12月9日作为DSM ACC2752保藏的FP 12H3；
b)分别于2005年12月1日和2005年12月9日作为DSM ACC2750保藏的FP 12H3-C2；
c)分别于2005年12月1日和2005年12月9日作为DSM ACC2751保藏的FP 12H3-G2；
d)于2005年12月8日作为DSM ACC2755保藏的ET 7E3；和
e)于2005年12月8日作为DSM ACC2756保藏的EJ 7H3。
在另一项实施方案中，抗体可以是显示出如国际申请号PCT/US2007/073504的SEQID No.2和SEQ ID No.4中所描述的轻链和重链的人源化抗体。
在另一项实施方案中，抗体可以是显示出如国际申请号PCT/US2007/073504的SEQID No.1和SEQ ID No.3中所描述的轻链可变区和重链可变区的人源化抗体。
在另一项实施方案中，其它生物学活性化合物可以是由来自Aβ肽的N-末端部分的多个相邻氨基酸残基的单一或重复延伸、特别是13至15个相邻氨基酸残基的延伸组成的Aβ抗原肽片段。Aβ抗原肽片段可以是Aβ1-15肽抗原，例如在脂质体中重建的肽的每个末端通过共价连接的棕榈酰残基、特别是2至4个、更特别是4个残基修饰的棕榈酰化Aβ1-15肽抗原。
其它生物学活性物质或化合物可以通过与本发明的化合物相同或相似的机制或者通过不相关的作用机制或者通过多种相关和/或不相关的作用机制而发挥其生物学作用。
在本发明的所有实施方案中，本发明的化合物和/或其它生物学活性化合物优选以治疗有效量使用。
还公开了采集用于在样品或患者中诊断淀粉样物质相关性疾病或病症的数据的方法，该方法包括：
(a)使被怀疑含有淀粉状蛋白的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触；
(b)允许该化合物与淀粉状蛋白结合；
(c)检测与所述蛋白结合的化合物；和
(d)任选地，将是否存在与淀粉状蛋白结合的化合物与在样品或者特定身体部分或区域中是否存在淀粉状蛋白相关联。
本发明的另一项实施方案是测定组织和/或体液中致淀粉样蛋白斑负荷的程度的方法，该方法包括：
(a)提供代表处于研究中的组织和/或体液的样品；
(b)用本发明的化合物对样品中淀粉状蛋白的存在进行测试；
(c)测定与淀粉状蛋白结合的化合物的量；和
(d)计算组织和/或体液中的斑负荷。
在优选的实施方案中，进行步骤(c)中的测定以便是否存在与淀粉状蛋白结合的化合物与是否存在淀粉状蛋白相关联。
另一方面涉及采集用于测定患者中淀粉样物质相关性疾病或病症的素因、包括检测本发明的化合物与淀粉状蛋白在样品中或原位地特异性结合的数据的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使被怀疑含有淀粉状蛋白的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触，该化合物特异性地与淀粉状蛋白结合；
(b)允许该化合物与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物；
(c)检测化合物/蛋白质复合物的形成；
(d)任选地，将是否存在化合物/蛋白质复合物与在样品或者特定身体部分或区域中是否存在淀粉状蛋白相关联；和
(e)任选地，将化合物/蛋白质复合物的量与正常对照值相比较。
本发明的另一方面是采集用于监测在用抗体或疫苗组合物治疗后患者中微小残留疾病的数据的方法，其中该方法包括：
(a)使被怀疑含有淀粉状蛋白的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触，该化合物特异性地与淀粉状蛋白结合；
(b)允许该化合物与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物；
(c)检测化合物/蛋白质复合物的形成；
(d)任选地，将是否存在化合物/蛋白质复合物与在样品或者特定身体部分或身体区域中是否存在淀粉状蛋白相关联；和
(e)任选地，将化合物/蛋白质复合物的量与正常对照值相比较。
还描述了采集用于预测正在用抗体或疫苗组合物治疗的患者的响应性的数据的方法，该方法包括：
(a)使被怀疑含有淀粉状蛋白的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触，该化合物特异性地与淀粉状蛋白结合；
(b)允许该化合物与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物；
(c)检测化合物/蛋白质复合物的形成；
(d)任选地，将是否存在化合物/蛋白质复合物与在样品或者特定身体部分或身体区域中是否存在淀粉状蛋白相关联；和
(e)任选地，将化合物/蛋白质复合物的量与正常对照值相比较。
本发明的另一方面是包含本发明的化合物的用于检测和诊断淀粉样物质相关性疾病或病症的试剂盒。优选地，测试试剂盒包含容纳一种或多种本发明的化合物的容器以及将化合物用于如下目的的说明书：与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物和检测化合物/蛋白质复合物的形成，以便将是否存在化合物/蛋白质复合物与是否存在淀粉状蛋白相关联。
定义
在本申请的含义之内，应用了以下定义：
“烷基”指由碳和氢原子组成的饱和有机部分。适宜的烷基的实例具有1至6个碳原子、优选1至4个碳原子，包括甲基、乙基、丙基和丁基。
“亚烷基”指二价烷基。以上对“烷基”的注释类似地应用于该实施方案。
“环烷基”指由碳和氢原子组成的环状有机部分。适宜的环烷基的实例具有5至10个碳原子、优选5或6个碳原子，包括环戊基和环己基。
“杂环烷基”指其中碳原子之一已经被杂原子、例如选自N、O或S的杂原子或含有杂原子(例如N、O和/或S)的部分所替换的如上定义的环烷基。可能的杂环烷基的实例包括吡咯烷、四氢呋喃、哌啶等。
“链烯基”指由碳和氢原子组成且包括至少一条双键的有机部分。适宜的链烯基的实例具有2至6个碳原子、优选2至4个碳原子，包括丙烯基和丁烯基。
“炔基”指由碳和氢原子组成且包括至少一条三键的有机部分。适宜的炔基的实例具有2至6个碳原子、优选2至4个碳原子，包括丙炔基和丁炔基。
“芳基”指由碳和氢原子组成的芳香族有机部分，它优选具有5至10个碳原子、更优选5或6个碳原子。实例有苯基环。
“杂芳基”指其中碳原子之一已经被杂原子、例如选自N、O或S的杂原子或含有杂原子(例如N、O和/或S)的部分所替换的如上定义的芳基。可能的杂芳基的实例包括吡啶等。
“烷氧基”指基团–O–烷基。
“氨基亚烷基”指基团–亚烷基–NR14R15。
如果基团被定义为“任选被取代”，则它可以具有一个或多个选自Hal、C1–6烷基或C1–6烷氧基的取代基。
“Hal”指F、Cl、Br和I。优选的Hal有F和Cl，更优选F。
具有一个或多个旋光活性碳的本发明的化合物可以作为外消旋物和外消旋混合物、非对映异构混合物和单独的非对映异构体、对映异构混合物和单一的对映异构体、互变异构体、阻转异构体和旋转异构体而存在。本发明包括所有异构形式。含有烯双键的本发明的化合物包括E和Z几何异构体。本发明还包括所有盐形式、多晶型物、水合物和溶剂合物。
在“定义”-部分中所给的优选的定义适用于下文所述的所有实施方案，另有说明除外。
发明详述
在第一项实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物：
吡啶环A、B和C独立地是未取代的或者被一个或多个取代基所取代，所述的取代基独立地选自：C1–6-亚烷基–C(＝NR13)–NHR14、C1–6-亚烷基–C(O)–NH–CN、C1–6-亚烷基–C(O)–NR16–C1–6-亚烷基–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–OR13、C1–6-亚烷基–NR16–C(＝NR13)–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)–OR14、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)–R14、C1–6-亚烷基–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–SO2–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–SO2R14、C(＝NR13)–NHR14、C(O)–NH–CN、C(O)–NR16–C1–6-亚烷基–NR14R15、C(O)–NR16–NR14R15、C(O)–NR14R15、C(O)–OH、C(O)–OR13、C(O)–R13、CHal3、CN、Hal、NO2、NR13–C(＝NR13)–NR14R15、NR16–C(O)–NR14R15、NR16–C(O)–OR14、NR16–C(O)–R14、NR14R15、NR16–SO2–NR14R15、NR16–SO2R14、O–C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、O–C(O)–NR14R15、O–C(O)–R13、OR13、S(O)t–C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、S(O)t–C(O)–OR13、S(O)tR13、SO2–NR14R15、C1–6-烷基、C5–10-环烷基、C5–10-环烷基-C1–6-亚烷基、5至10元杂环烷基、具有1至6个碳原子的卤代烷基、6至10元杂环烷基-C1–6-亚烷基、C2–6-链烯基、C2–6-炔基、C5–10-芳基、5至10元杂芳基、C5–10-芳基-C1–6-亚烷基、5至10元杂芳基-C1–6-亚烷基、C1–6-烷氧基-C1–6-亚烷基和其中亚烷基具有1至6个碳原子的氨基亚烷基，其中烷基、环烷基、环烷基亚烷基、杂环亚烷基、杂环烷基亚烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳基亚烷基、杂芳基亚烷基、烷氧基亚烷基和氨基亚烷基可以任选被取代。在优选的实施方案中，吡啶环A、B和C独立地是未取代的或者被一个或两个取代基所取代。在优选的实施方案中，取代基独立地选自：C1–6-烷基、具有1至6个碳原子的卤代烷基、Hal或OR13，更优选它们独立地选自：C1–6-烷基或OH。最优选吡啶环A、B和C是未取代的。
L1和L2独立地选自具有式(a)或(b)的部分：
其中L1或L2中至少一个具有式(b)。这确保了具有通式(I)的化合物包括2,6-二氨基吡啶部分。
在式(a)中，R3选自C(＝NOR13)–R14、C(＝NR13)–NR14R15、C(O)–C(＝NR13)–NR14R15、C(O)–NR14R15、C(O)–OR13、R13、S(O)tNR14R15和S(O)tR13。在优选的实施方案中，R3是R13。在更优选的实施方案中，R3选自氢和C1–6-烷基。在甚至更优选的实施方案中，R3是氢。
R4、R5、R6和R7独立地选自氢、C1–6-亚烷基–C(＝NR13)NHR14、C1–6-亚烷基–C(O)–NH–CN、C1–6-亚烷基–C(O)–NR16–C1–6-亚烷基–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–NR16–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–OR13、C1–6-亚烷基–NR16C(＝NR13)NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)OR14、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)R14、C1–6-亚烷基–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–SO2–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–SO2–R14、C(＝NR13)NHR14、C(O)–NH–CN、C(O)–NR16–C1–6-亚烷基–NR14R15、C(O)–NR16–NR14R15、C(O)–NR14R15、C(O)–OH、C(O)–OR16、CHal3、CN、CO–NR14R15、CO–R13、Hal、NO2、NR16C(＝NR13)NR14R15、NR16–C(O)–NR14R15、NR16–C(O)–OR14、NR16–C(O)–R14、NR14R15、NR16–SO2–NR14R15、NR16–SO2–R13、O–C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、O–C(O)–NR14R15、OC(O)–R13、OR13、S(O)t–C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、S(O)t–C1–6-亚烷基–C(O)–OR13、S(O)t–C(O)–NR14R15、S(O)t–C(O)–OR13、S(O)tR13、SO2–NR14R15和SO2OR13。在优选的实施方案中，R4、R5、R6和R7独立地选自氢和C1–6-烷基。在甚至更优选的实施方案中，R4、R5、R6和R7是氢。
p是1或2。在优选的实施方案中，p是1。
在式(b)中，R12选自C(＝NOR13)–R14、C(＝NR13)–NR14R15、C(O)–C(＝NR13)–NR14R15、C(O)–NR14R15、C(O)–OR13、R13、S(O)tNR14R15和S(O)tR13。在优选的实施方案中，R12是R13。在更优选的实施方案中，R12选自氢和C1–6-烷基。在甚至更优选的实施方案中，R12是氢。
R8、R9、R10和R11独立地选自氢、C1–6-亚烷基–C(＝NR13)NHR14、C1–6-亚烷基–C(O)–NH–CN、C1–6-亚烷基–C(O)–NR16–C1–6-亚烷基–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–NR16–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、C1–6-亚烷基–C(O)–OR13、C1–6-亚烷基–NR16C(＝NR13)NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)OR14、C1–6-亚烷基–NR16–C(O)R14、C1–6-亚烷基–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–SO2–NR14R15、C1–6-亚烷基–NR16–SO2–R14、C(＝NR13)NHR14、C(O)–NH–CN、C(O)–NR16–C1–6-亚烷基–NR14R15、C(O)–NR16–NR14R15、C(O)–NR14R15、C(O)–OH、C(O)–OR16、CHal3、CN、CO–NR14R15、CO–R13、Hal、NO2、NR16C(＝NR13)NR14R15、NR16–C(O)–NR14R15、NR16–C(O)–OR14、NR16–C(O)–R14、NR14R15、NR16–SO2–NR14R15、NR16–SO2–R13、O–C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、O–C(O)–NR14R15、OC(O)–R13、OR13、S(O)t–C1–6-亚烷基–C(O)–NR14R15、S(O)t–C1–6-亚烷基–C(O)–OR13、S(O)t–C(O)–NR14R15、S(O)t–C(O)–OR13、S(O)tR13、SO2–NR14R15和SO2OR13。在优选的实施方案中，R8、R9、R10和R11独立地选自氢和C1–6-烷基。在甚至更优选的实施方案中，R8、R9、R10和R11是氢。
q是0、1或2。在优选的实施方案中，q是1，因为与其中q是2的化合物相比，这些化合物具有改善的溶解性。
t是1或2。
R1和R2独立地选自氢、C1–6-烷基、C5–10-环烷基、C5–10-环烷基-C1–6-烷基、5至10元杂环烷基、具有1至6个碳原子的卤代烷基、C5–10-杂环烷基-C1–6-烷基、C2–6-炔基、C5–10-芳基、5至10元杂芳基、C5–10-芳基-C1–6-烷基、5至10元杂芳基-C1–6-烷基或其中烷基具有1至6个碳原子的氨基烷基，其中烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、卤代烷基、杂环烷基烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基烷基可以任选被取代，或者R1和R2当与它们连接的氮一起时可以形成3至8元环，所述的3至8元环可以任选含有一个或多个另外的选自O、S或NR3的杂原子并且其中3至8元环可以任选被取代。在优选的实施方案中，R1和R2独立地选自氢、C1–6-烷基、C5–10-环烷基和C5–10-芳基。在更优选的实施方案中，R1和R2独立地选自氢、C1–6-烷基和苯基。最优选R1和R2独立地选自氢和C1–6-烷基。甚至更优选R1是氢和R2是甲基。
R16独立地选自C(＝NOR13)–R14、C(＝NR13)–NR14R15、C(O)–C(＝NR13)–NR14R15、C(O)–NR14R15、C(O)–OR13、R13、S(O)tNR14R15和S(O)tR13。在优选的实施方案中，R16是R13。在更优选的实施方案中，R16选自氢和C1–6-烷基。在甚至更优选的实施方案中，R16是氢。
R13独立地选自氢、C1–6-烷基、C5–10-环烷基、C5–10-环烷基-C1–6-烷基、5至10元杂环烷基、具有1至6个碳原子的卤代烷基、5至10元杂环烷基-C1–6-烷基、C2–6-炔基、C5–10-芳基、5至10元杂芳基、C5–10-芳基-C1–6-烷基、5至10元杂芳基-C1–6-烷基或其中烷基具有1至6个碳原子的氨基烷基，其中烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、卤代烷基、杂环烷基烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基烷基可以任选被取代。在优选的实施方案中，R13独立地选自氢、C1–6-烷基和C5–10-芳基。在更优选的实施方案中，R13独立地选自氢、C1–6-烷基和苯基，甚至更优选选自氢和C1–6-烷基。
R14和R15独立地选自氢、C1–6-烷基、C5–10-环烷基、C5–10-环烷基-C1–6-烷基、5至10元杂环烷基、具有1至6个碳原子的卤代烷基、5至10元杂环烷基-C1–6-烷基、C2–6-炔基、C5–10-芳基、5至10元杂芳基、C5–10-芳基-C1–6-烷基、5至10元杂芳基-C1–6-烷基或其中烷基具有1至6个碳原子的氨基烷基，其中烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、卤代烷基、杂环烷基烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基烷基可以任选被取代。在优选的实施方案中，R14和R15独立地选自氢、C1–6-烷基和C5–10-芳基。在更优选的实施方案中，R14和R15独立地选自氢、C1–6-烷基和苯基，甚至更优选选自氢和C1–6-烷基。
对于NR14R15，R14和R15当与它们连接的氮一起时可以形成3至8元环，所述的3至8元环可以任选含有一个或多个另外的选自O、S或NR3的杂原子并且其中3至8元环可以任选被取代。在该实施方案中，3至8元环可以例如是吡咯烷、吡咯、哌啶或吡啶。
优选的本发明的化合物是：
具有通式(I)的本发明的化合物同时具有良好的药物活性和良好的溶解性。这是因为存在3个吡啶环和2,6-二氨基吡啶亚结构。
可以按照常规方法、例如类似于在WO 2008/061795中公开的那些方法制备本发明的化合物。
可以通过流程1至8中所示的通用方法来合成本发明的化合物。这些方法作为说明性实例而被给出，并非是限制性的。
用于制备含有两个吡啶基部分的x＝1或2的胺结构单元的通用合成流程
流程1
在适宜的溶剂中于–78℃用二异丙基氨基锂处理可市售获得的2-溴-6-甲基-吡啶，产生相应的阴离子。使阴离子与二甲基甲酰胺于–78℃反应，将反应混合物用硼氢化钠处理，在纯化后获得具有延长了一个碳原子的侧链的相应羟基衍生物。在适宜的溶剂中并采用适宜的碱用三异丙基甲硅烷基氯对羟基部分进行保护，在纯化后得到被保护的醇。采用Buchwald胺化条件(Pd-催化剂、配体、碱和溶剂)使被保护的醇的溴取代基与适当的胺反应，在纯化后得到偶联产物。通过将原料与焦碳酸二叔丁酯一起加热并随后纯化，实现胺部分的Boc-保护。通过四正丁基氟化铵除去甲硅烷基-保护基团，在纯化后得到羟基衍生物。在适宜的溶剂中并采用适宜的碱将羟基部分用甲磺酰氯活化后，通过在适宜的溶剂中与叠氮化钠一起加热将中间体甲磺酰基衍生物转化为相应的叠氮化物衍生物。进行纯化，得到预期的叠氮化物衍生物。采用Staudinger反应条件将叠氮化物衍生物用三苯膦进行处理，产生相应的胺。进行纯化，得到预期的胺结构单元。
用于供选地制备含有两个吡啶基的具有C2-连接基的胺结构单元的通用合成流程
流程2
用三异丙基甲硅烷基氯在适宜的溶剂中并使用适宜的碱对可市售获得的(6-溴吡啶-2-基)甲醇的羟基部分进行保护，在纯化后得到被保护的醇。采用Buchwald胺化条件(Pd-催化剂、配体、碱和溶剂)使被保护的醇的溴取代基与适当的胺反应，在纯化后得到偶联产物。通过将原料与焦碳酸二叔丁酯一起加热并随后纯化，实现胺部分的Boc-保护。通过四正丁基氟化铵除去甲硅烷基-保护基团，在纯化后得到羟基衍生物。用甲磺酰氯在适宜的溶剂中并使用适宜的碱将羟基部分活化后，通过在适宜的溶剂中与氰化钠一起加热将中间体甲磺酰基衍生物转化为相应的腈衍生物。进行纯化，得到预期的腈衍生物。在适宜的溶剂中用氯化镍(II)和硼氢化钠处理腈衍生物处理，然后纯化，得到预期的胺结构单元。
用于制备含有两个吡啶基部分的具有C3-连接基的胺结构单元的通用合成流程
流程3
通过采用苯邻二甲酰亚胺进行光延(Mitsunobu)反应、然后用水合肼在适宜的溶剂中处理纯化的中间体，将可市售获得的3-(吡啶-2-基)丙-1-醇转化为相应的胺衍生物。进行纯化，得到具有C3-连接基的预期的胺。采用适宜的Pd-催化剂在适当的溶剂混合物中使可市售获得的2,6-二溴吡啶与烯丙醇和9-BBN在适宜溶剂中的加成产物反应，在纯化后得到预期的烷基化产物。用三异丙基甲硅烷基氯在适宜的溶剂中并使用适宜的碱对羟基部分进行保护，在纯化后得到被保护的醇。采用Buchwald胺化条件(Pd-催化剂、配体、碱和溶剂)使被保护的醇的溴取代基与适当的胺反应，在纯化后得到偶联产物。通过将原料与焦碳酸二叔丁酯一起加热以及随后纯化，实现胺部分的Boc-保护。通过四正丁基氟化铵除去甲硅烷基-保护基团，在纯化后得到羟基衍生物。通过采用苯邻二甲酰亚胺的光延反应、然后用水合肼在适宜的溶剂中处理纯化的中间体，将羟基衍生物转化为相应的胺衍生物。进行纯化，得到具有C3-连接基的预期的胺结构单元。
用于制备含有一个吡啶基部分的胺结构单元的通用合成流程
流程4
将可市售获得的2-氨基-6-甲基-吡啶与焦碳酸二叔丁酯一起加热，在纯化后得到单-Boc-保护的衍生物。在适宜的溶剂中于–78℃用二异丙基氨基锂处理Boc-衍生物，产生相应的阴离子。使阴离子与二甲基甲酰胺于–78℃反应，将反应混合物用硼氢化钠处理，在纯化后获得具有延长了一个碳原子的侧链的相应羟基衍生物。在适宜的溶剂中并使用适宜的碱用甲磺酰氯使羟基部分活化后，通过在适宜的溶剂中与叠氮化钠一起加热将中间体甲磺酰基衍生物转化为相应的叠氮化物衍生物。进行纯化，得到预期的叠氮化物衍生物。在适宜的溶剂中用氢化钠处理叠氮化物衍生物的单-Boc-氨基取代基，然后与甲基碘反应，在纯化后得到N-甲基化叠氮化物衍生物。采用Staudinger反应条件用三苯膦处理N-甲基化叠氮化物衍生物，产生相应的胺。进行纯化，得到预期的胺结构单元。
用于制备含有一个吡啶基部分的溴结构单元的通用合成流程
流程5
在适当的溶剂中用焦碳酸二叔丁酯、适宜的碱和4-二甲基氨基吡啶处理可市售获得的2-氨基-6-溴-吡啶，在纯化后得到单-Boc-衍生物。在适宜的溶剂中用氢化钠处理单-Boc-衍生物，然后与甲基碘反应，在纯化后得到预期的溴结构单元。
用于制备含有两个吡啶基部分的溴结构单元的通用合成流程
流程6
将可市售获得的2,6-二溴吡啶与适当的胺和适宜的碱一起在适宜的溶剂中加热，在纯化后得到单胺化产物。将胺化产物与焦碳酸二叔丁酯一起加热，在纯化后得到预期的溴结构单元。
用于制备其中x＝1、2或3且y＝1或2的化合物的通用合成流程
流程7
采用适当的胺和来自以上方法的溴结构单元，在采用Buchwald条件(Pd-催化剂、配体、碱、溶剂)的Pd催化的胺化反应中，在纯化后得到预期的胺化产物。用酸在适宜的溶剂中将Boc-保护基团裂解，在冷冻干燥后得到预期的终化合物。
用于制备本发明的化合物的通用合成流程
流程8
采用适当的胺和来自以上方法的溴结构单元，在采用Buchwald条件(Pd-催化剂、配体、碱、溶剂)的Pd催化的胺化反应中，在纯化后得到预期的胺化产物。用酸在适宜的溶剂中将Boc-保护基团裂解，在冷冻干燥后得到预期的终化合物。
尽管本发明的化合物能够单独施用，但是优选按照标准药物实践将其配制成药物组合物。因此，本发明还提供了药物组合物，它包含治疗有效量的式(I)化合物以及可药用赋形剂。
可药用赋形剂是制药领域中众所周知的，它们例如在《雷氏药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences),第15版,马克(Mack)出版公司,新泽西(1991)中有描述。药物赋形剂可以根据预期施用途径和标准药物实践来选择。赋形剂必须在对其接受者无害的意义上是可接受的。
可以在本发明的药物组合物的配制中使用的可药用赋形剂可以例如包括载体、溶媒(vehicles)、稀释剂、溶剂、例如一元醇如乙醇、异丙醇和多元醇如二元醇及食用油如大豆油、椰子油、橄榄油、红花油、棉子油、油性酯类如油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、粘合剂、佐剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、缓冲剂、乳化剂、润湿剂、助悬剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、包衣剂、防腐剂、抗氧化剂、加工剂(processing agents)、药物递送改良剂和促进剂如磷酸钙、magnesium state(硬脂酸镁)、滑石粉、单糖、二糖、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、右旋糖、羟丙基-β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。
本发明的化合物的施用(递送)途径包括但不限于以下一种或多种：口服(例如作为片剂、胶囊剂，或作为可摄取的溶液)、局部、粘膜(例如作为鼻喷雾剂或气雾剂以供吸入)、鼻、胃肠道外(例如通过可注射的形式)、胃肠道、椎管内、腹膜内、肌内、静脉内、子宫内、眼内、皮内、颅内、气管内、阴道内、脑室内、脑内、皮下、眼(包括玻璃体内或眼房内(intracameral))、透皮、直肠、颊、硬膜外和舌下。
在眼部施用中，化合物可以例如以滴眼剂的形式施用。
例如，化合物可以以片剂、胶囊剂、卵形剂(ovules)、酏剂、溶液剂或混悬剂的形式经口服施用，它们可以含有矫味剂或着色剂，用于速释、延迟释放、修饰释放、持续释放、脉冲释放或控制释放应用。
片剂可以含有：赋形剂、例如微晶纤维素、乳糖、枸橼酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸，崩解剂、例如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐，以及制粒粘合剂、例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。此外，还可以包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石粉。类似类型的固体组合物也可以用作明胶胶囊的填充物。在此方面，优选的赋形剂包括乳糖(lactose)、淀粉、纤维素、乳糖(milk sugar)或高分子量聚乙二醇。对于水性混悬剂和/或酏剂而言，药物可以与各种甜味或矫味剂、着色物质或染料、与乳化和/或助悬剂以及与稀释剂如水、乙醇、丙二醇和甘油及其组合合并。
如果本发明的化合物经胃肠道外施用，则这类施用的实例包括以下一或多种：经静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内或皮下施用化合物；和/或通过使用输注技术进行施用。对于胃肠道外施用而言，化合物以无菌水溶液的形式使用是最好的，该无菌水溶液可以含有其它物质，例如足量的盐或葡萄糖以使溶液与血液等张。如果需要，应当对水溶液进行适宜的缓冲(优选缓冲至pH为3至9)。在无菌条件下制备适宜的胃肠道外制剂可以通过本领域技术人员熟知的标准制药技术容易地完成。
如指出的那样，本发明的化合物可以经鼻内或通过吸入施用，方便地以干粉吸入器或者气溶胶喷雾的形式从加压容器、泵、喷雾器或雾化器中借助适宜的抛射剂来递送，所述的抛射剂例如有二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA134AT)或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(HFA 227EA)、二氧化碳或其它适宜的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供阀门以递送计量的量来确定。加压容器、泵、喷雾器或雾化器可以含有活性化合物的溶液或混悬液，例如使用乙醇和抛射剂的混合物作为溶剂，它们可以另外含有润滑剂如三油酸山梨坦。用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(cartridges)(例如由明胶制备)可以被配制为含有化合物和适宜粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
或者，本发明的化合物可以以栓剂或阴道栓的形式施用，或者它可以以凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏剂、软膏剂或扑粉的形式经局部应用。本发明的化合物还可以经皮或透皮施用，例如通过使用皮肤贴剂施用。
它们还可以通过肺或直肠途径施用。它们还可以通过眼部途径施用。对于眼部使用而言，化合物可以被配制成在等张的、pH调节的无菌盐水中的微粉化混悬液，或者优选被配制成在等张的、pH调节的无菌盐水中的溶液，任选还含有防腐剂如苯扎氯铵。或者，它们可以被配制成软膏剂，例如凡士林。
对于局部应用于皮肤而言，本发明的化合物可以被配制成适宜的软膏剂，它含有混悬于或溶解于例如含有以下一种或多种成分的混合物中的活性化合物：矿油、液状石蜡、白凡士林、丙二醇、乳化蜡和水。或者，它们可以被配制成混悬于或溶解于例如含有以下一种或多种成分的混合物中的适宜的洗剂或乳膏剂：矿油、山梨坦单硬脂酸酯、聚乙二醇、液状石蜡、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、十六十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
由于本发明的化合物具有高溶解性，所以它们特别适合于其中化合物在液体介质中递送的施用途径。实例有滴眼剂和其它溶液。
通常，医师将确定最适合个体对象的实际剂量。任何特定个体的特定剂量水平和给药频率可以改变并且将取决于多种因素，包括所用的特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用模式和时间、排泄速率、药物组合、特定病症的严重性以及正在进行治疗的个体。
用于人类(约70kg体重)施用的本发明化合物的建议剂量是0.1mg至1g、优选1mg至500mg活性成分/单位剂量。单位剂量可以例如每天施用1至4次。剂量将取决于施用途径。可以理解的是，可能有必要根据患者的年龄和体重以及待治疗病症的严重性对剂量进行常规改变。精确的剂量和施用途径将最终由主治医师或兽医来决定。
本发明的化合物还可以与其它治疗剂组合使用。当本发明的化合物与有效对抗相同疾病的第二种治疗剂组合使用时，每种化合物的剂量可以不同于该化合物单独使用时的剂量。
可以方便地提供上述组合用于以药物制剂形式使用。这类组合的各组分可以通过任意方便的途径、以单独或组合的药物制剂依次或同时施用。当依次施用时，可以首先施用本发明的化合物或第二种治疗剂。当同时施用时，组合可以在相同或不同的药物组合物中施用。当在相同制剂中组合时，可以理解，两种化合物必须是稳定的并且彼此以及与制剂中的其它组分相容。当分别配制时，它们可以以任意方便的制剂、方便地以本领域中这类化合物已知的方式被提供。
本发明的药物组合物可以以技术人员本身已知的方式、按照例如在《雷氏药物科学》,第15版,马克出版公司,新泽西(1991)中描述的方法来制备。
可以用本发明的化合物治疗的疾病可以与异常的蛋白质结构、特别是异常的β-折叠结构的形成有关。在本发明的上下文中，异常的蛋白质结构是当蛋白质或肽由通常在健康个体中采用的三维结构重新折叠成与病理状态有关的不同的三维结构时产生的蛋白质结构。同样，在本发明的上下文中，异常的β-折叠结构是当蛋白质或肽由通常在健康个体中采用的三维结构重新折叠成与病理状态有关的β-折叠结构时产生的β-折叠结构。
特别是在一项实施方案中，可以用本发明的化合物治疗的疾病是与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症。
该组疾病和紊乱包括靶向于眼部不同组织的与淀粉样物质有关的眼部疾病，例如靶向于：视皮质，包括皮质视觉缺乏；前房和视神经，包括青光眼；晶状体，包括由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障；玻璃体，包括眼部淀粉样变；视网膜，包括原发性视网膜变性和黄斑变性，特别是年龄相关性黄斑变性；视神经，包括视神经玻璃疣、视神经病和视神经炎；和角膜，包括格子状营养不良。
化合物抑制Aβ积聚的能力可以通过例如采用如在Rzepecki等人,J.Biol.Chem.,2004,279(46),47497-47505中描述的荧光相关光谱法或者通过采用硫黄素T荧光光谱分析来测定。
在另一项实施方案中，本发明的化合物可以用于治疗与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病、特别是与视觉系统的组织中β-淀粉状蛋白相关性病理学异常/改变如神经元退化有关的眼部疾病或者减轻其作用。所述的病理学异常可以例如发生在不同的眼部组织中，例如：视皮质，导致皮质视觉缺乏；前房和视神经，导致青光眼；晶状体，导致由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障；玻璃体，导致眼部淀粉样变；视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性如年龄相关性黄斑变性；视神经，导致视神经玻璃疣、视神经病和视神经炎；和角膜，导致格子状营养不良。本发明的化合物已经证明特别适合于治疗或预防青光眼。
本发明的化合物还可以以与至少一种其它生物学活性化合物和/或可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂的混合物的形式提供。化合物和/或其它生物学活性化合物优选以治疗有效量存在。
其它生物学活性化合物的性质将取决于混合物的预期用途。其它生物学活性物质或化合物可以通过与本发明的化合物相同或相似的机制或者通过不相关的作用机制或通过多种相关和/或不相关的作用机制而发挥其生物学作用。
通常，其它生物学活性化合物可以包括β-阻断剂、碳酸酐酶抑制剂、α-或β-肾上腺素能激动剂、前列腺素药物、拟副交感神经药、胆碱酯酶抑制剂、乙酰胆碱合成、贮存或释放促进剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂或N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂。特别地，其它生物学活性化合物可以选自用于治疗淀粉样变的化合物、对抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂如哌仑西平(pirenzepin)和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸盐(1,3PDS)、α-分泌酶激活剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、神经递质、β-折叠断裂剂、清除/消耗β-淀粉状蛋白的细胞组分的引诱剂、N-末端截短的β-淀粉状蛋白、包括焦谷氨酸化β-淀粉状蛋白3-42的抑制剂、抗炎分子或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)如他克林、利凡斯的明、多奈哌齐和/或加兰他敏、M1激动剂、其它药物、包括任意的修饰淀粉样物质的药物和营养补充剂、抗体、包括任意的在功能上等同的抗体或其功能部分、由来自Aβ肽的N-末端部分的多个相邻氨基酸残基的单一或重复延伸组成的Aβ抗原肽片段。
在另一项实施方案中，本发明的混合物可以包含美金刚和本发明的化合物以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在本发明的另一项实施方案中提供了包含作为其它生物学活性化合物的降低眼内压的物质和本发明的化合物以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂的混合物。
在一项优选的实施方案中，其它生物学活性化合物是抗体、包括任意的在功能上等同的抗体或其功能部分。抗体可以优选是单克隆、嵌合或人源化抗体。
在本发明的另一方面，提供了除本发明的化合物外还包含抗体、包括其功能部分或者更特别是单克隆抗体、包括其功能部分的混合物，所述抗体识别并结合β-淀粉状蛋白(Aβ)、特别是天然构象的β-淀粉状蛋白、即淀粉状低聚物和纤维，但是不识别和结合非线性化的淀粉样物质种类。
特别地，所述抗体能够在体外和体内抑制致淀粉样单体肽、尤其是β-淀粉状单体肽如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43、但是尤其是Aβ1-42单体肽积聚成高分子聚合淀粉状原纤维或纤丝。通过抑制致淀粉样单体肽的积聚，这些抗体能够阻止或减缓淀粉样蛋白斑、特别是淀粉状形式(1-42)的形成，已知后者通过二级构象的改变而变得不溶并且是患病动物或人的脑中淀粉样蛋白斑的主要部分。
在本发明的另一方面，混合物包含抗体，所述抗体当与通过淀粉状单体肽、特别是β-淀粉状单体肽、例如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43、尤其是Aβ1-42单体肽的积聚而预先形成的高分子聚合淀粉状原纤维或纤丝共同孵育时能够使所述的高分子聚合淀粉状原纤维或纤丝解聚。通过致淀粉样聚合原纤维或纤丝的解聚，这些抗体能够阻止或减缓淀粉样蛋白斑的形成，从而缓解与疾病有关的症状以及延缓或逆转其发展。
在本发明的另一方面，混合物包含抗体、但尤其是单克隆抗体或其功能部分，所述抗体是双功能性的或双特异性的，因为它显示出如上文所定义的积聚抑制性质以及解聚性质，特别是具有高度的构象敏感性。
在一项实施方案中，混合物包含抗体，所述抗体识别构象表位、特别是存在于β-淀粉状肽的N-末端部分中的构象表位、特别是嵌入β-淀粉状肽的N-末端部分的以下核心区中的构象表位并与之结合：
特别地，表位位于在氨基酸残基12至24之间、特别是在残基14至23之间、更特别是在氨基酸残基14至20之间的β-淀粉状蛋白区域，包含3个不同的识别和结合位点，这些残基优势地参与β-淀粉状蛋白的结合并且分别位于16、17位、位于19和20位以及位于14位。
在特定的实施方案中，本发明的混合物除了本发明的化合物外还包含抗体、特别是双功能抗体、但尤其是单克隆抗体、特别是双功能单克隆抗体、包括任意在功能上等同的抗体或其功能部分，所述抗体具有由选自如下的杂交瘤细胞系产生的抗体的特性：分别于2005年12月1日和2005年12月9日分别作为DSM ACC2752、DSM ACC 2750和DSM ACC2751保藏的FP 12H3、FP 12H3-C2和FP 12H3-G2，于2005年12月8日作为DSM ACC2755保藏的ET 7E3以及于2005年12月8日作为DSMACC2756保藏的EJ 7H3。
更特别地，本发明涉及抗体、包括由选自如下的杂交瘤细胞系产生的任意在功能上等同的抗体或其功能部分：分别于2005年12月1日和2005年12月9日分别作为DSMACC2752、DSM ACC 2750和DSM ACC2751保藏的FP 12H3、FP 12H3-C2和FP 12H3-G2，于2005年12月8日作为DSM ACC2755保藏的ET 7E3以及于2005年12月8日作为DSM ACC2756保藏的EJ 7H3。
以上抗体在公开的国际申请WO 2007/068412中有描述，该申请引入本文作为参考。
另一方面，本发明的混合物中所包含的抗体是嵌合抗体或其片段或者人源化抗体或其片段。可适用于本发明的混合物的这些和其它抗体例如在于2007年7月13日提交的国际申请PCT/US2007/073504中有描述。
如果抗体是人源化抗体，则它优选显示出如国际申请号PCT/US2007/073504的SEQID No.2和SEQ ID No.4中描述的轻链和重链，或者显示出如国际申请号PCT/US2007/073504的SEQ ID No.1和SEQ ID No.3中描述的轻链可变区和重链可变区。这些序列也显示在所附的序列表中。
在本发明的另一方面，提供了混合物，其除了本发明的和如上所述的化合物外还包含来自Aβ肽的N-末端部分的肽片段，特别是由来自Aβ肽的N-末端部分的13至15个相邻氨基酸残基的单一或重复延伸组成的Aβ肽片段、但特别是由选自来自Aβ肽的N-末端部分的残基1-15、1-14和1-13、更特别是残基1-15的氨基酸残基组成的Aβ肽片段、包括其在功能上等同的片段，但尤其是如上文提及的Aβ肽片段，其附着于或掺入于或重建于载体颗粒/佐剂如脂质体中。肽片段可以包含在疫苗组合物中。特别地，肽抗原通过亲脂或疏水部分进行修饰，所述亲脂或疏水部分有助于插入脂质体载体/免疫佐剂的脂双层中，特别是通过作为脂质体双层中肽的锚着点而发挥作用并且具有的尺寸使肽在接近脂质体表面的位置被定位和稳定的亲脂或疏水部分进行修饰。
在本发明的另一项实施方案中，亲脂或疏水部分是脂肪酸、甘油三酯或磷脂，但尤其是脂肪酸、甘油三酯或磷脂。特别地，疏水部分是棕榈酸，脂质体制剂可以另外含有佐剂如脂质A、明矾(alum)、磷酸钙、白细胞介素1和/或多糖和蛋白质的微囊，但特别是脱毒脂质A如单磷酰或二磷酰脂质A或者明矾(alum)。
可以适用于本发明的混合物的这些和其它组成例如在公开的国际申请WO 2007/068411中有描述。
诊断患者中淀粉样物质相关性疾病或病症或者淀粉样物质相关性疾病或病症的素因可以通过检测本发明的化合物与淀粉状蛋白在样品中或原位的特异性结合而实现，其包括：使被怀疑含有淀粉状抗原的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触，该化合物可与淀粉状蛋白结合；允许本发明的化合物与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物；检测化合物/蛋白质复合物的形成；和将是否存在化合物/蛋白质复合物与在样品或者特定身体部分或区域中是否存在淀粉状蛋白相关联；任选地，将所述化合物/蛋白质复合物的量与正常对照值相比较，其中所述积聚物的量与正常对照值相比增加可以表明所述患者正患有淀粉样物质相关性疾病或病症或者处于发展为淀粉样物质相关性疾病或病症的风险中。
监测在用本发明的化合物或混合物治疗后患者中微小残留疾病可以通过检测本发明的化合物与淀粉状蛋白在样品中或原位的特异性结合而实现，其包括：使被怀疑含有淀粉状抗原的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触，该化合物可与淀粉状蛋白结合；允许本发明的化合物与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物；检测化合物/蛋白质复合物的形成；和将是否存在化合物/蛋白质复合物与在样品或者特定身体部分或区域中是否存在淀粉状蛋白相关联；任选地，将所述化合物/蛋白质复合物的量与正常对照值相比较，其中所述积聚物的量与正常对照值相比增加可以表明所述患者仍然患有微小残留疾病。
预测患者对用本发明的化合物或组合物或混合物进行治疗的响应性可以通过检测本发明的化合物与淀粉状蛋白在样品中或原位的特异性结合而实现，其包括：使被怀疑含有淀粉状蛋白的样品或者特定身体部分或身体区域与本发明的化合物接触，该化合物可与淀粉状蛋白结合；允许化合物与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物；检测化合物/蛋白质复合物的形成；和将是否存在化合物/蛋白质复合物与在样品或者特定身体部分或区域中是否存在淀粉状蛋白相关联；任选地，将开始治疗之前和之后的所述化合物/蛋白质复合物的量相比较，其中所述积聚物的量降低可以表明所述患者对治疗有响应的可能性较高。
可用于诊断淀粉样物质相关性疾病或病症或者用于诊断淀粉样物质相关性疾病或病症的素因或者用于监测患者中微小残留疾病或者用于预测患者对用本发明的和如上文所述的化合物或组合物或混合物进行治疗的响应性的生物样品例如有：体液，例如血清、血浆、唾液、胃分泌液、粘液、脑脊髓液、淋巴液等，或者获自生物体的组织或细胞样品，例如神经组织、脑组织、心脏组织或脉管组织。对于测定样品中是否存在淀粉状蛋白，可以使用本领域普通技术人员已知的任意免疫测定法(参见Harlow和Lane,《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual)(冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory),纽约,1988,555至612))，例如采用间接检测方法使用用于检测的第二种试剂的测定法、ELISA测定法以及免疫沉淀和凝集测定法。这些测定法的详细描述例如在Maertens和Stuyver的WO96/13590、Zrein等人(1998)和WO96/29605中给出。
对于原位诊断，可以将本发明的和如上文所述的化合物或组合物或混合物通过本领域已知的方法如经静脉内、鼻内、腹膜内、脑内、动脉内注射施用于待诊断的生物体，以便可以发生本发明的化合物与淀粉状抗原之间的特异性结合。化合物/蛋白质复合物可以通过与化合物连接的标记物来检测。
在诊断应用中所用的或者在诊断淀粉样物质相关性疾病或病症的素因或监测患者中微小残留疾病或预测患者对用本发明的和如上文所述的化合物或组合物或混合物进行治疗的响应性的应用中所用的免疫测定法通常依赖于用于检测的标记抗原、抗体或第二种试剂。这些蛋白质或试剂可以用本领域技术人员通常已知的化合物进行标记，这些化合物包括酶、放射性同位素以及荧光、发光和产色物质、包括有色颗粒如胶体金和乳胶珠(latex beads)。其中，放射性标记可以用于几乎所有类型的测定法并且进行最大的变通。当必须避免放射性时或者当需要快速获得结果时，酶结合的标记物是特别有用的。尽管荧光染料在使用时需要昂贵的设备，但是它们可提供非常敏感的检测方法。可用于这些测定法的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体和亲和纯化的多克隆抗体。
或者，本发明的化合物可以通过与对免疫球蛋白如蛋白A或G或第二抗体具有亲和性的经标记物质反应而间接地进行标记。抗体可以与第二种物质结合，并且可以用对与抗体结合的第二种物质具有亲和性的经标记的第三种物质进行检测。例如，抗体可以与生物素结合，抗体-生物素结合物可以用经标记的抗生物素蛋白或链霉抗生物素进行检测。类似地，抗体可以与半抗原结合，抗体-半抗原结合物可以用经标记的抗半抗原抗体进行检测。
本领域普通技术人员将知道这些标记物和可以按照本发明使用的其它适宜的标记物。可以使用本领域普通技术人员公知的标准技术来完成这些标记物与抗体或其片段的结合。典型的技术在Kennedy,J.H.等人,1976(Clin.Chim.Acta 70:1-31)和Schurs,A.H.W.M.等人,1977(Clin.Chim Acta 81:1-40)中有描述。后文提及的偶联技术有戊二醛法、高碘酸法、二马来酰亚胺法等，所有这些方法引入本文作为参考。
目前的免疫测定法采用了双抗体法来检测分析物的存在，其中抗体通过与已经用可检测标记物标记的第二抗体的反应活性间接地进行标记。第二抗体优选是与动物的抗体结合的抗体，而单克隆抗体来源于该动物。换言之，如果单克隆抗体是鼠抗体，则经标记的第二抗体是抗-鼠抗体。对于下文所述的测定法中使用的单克隆抗体而言，该标记物优选是涂覆有抗体的小珠、特别是磁珠。对于本文所述的免疫测定法中采用的多克隆抗体而言，标记物优选是可检测的分子，例如放射性、荧光或电化学发光的物质。
在本发明的范围内还可以采用供选的双抗体系统，该系统通常称为快速格式系统(fast format systems)，因为它们适合于快速测定分析物的存在。该系统要求在抗体和分析物之间存在高亲和性。根据本发明的一项实施方案，可以使用各自对淀粉状抗原有特异性的抗体对来测定淀粉状抗原的存在。所述抗体对中的一个在本文中称为“检测抗体”，所述抗体对中的另一个在本文中称为“捕获抗体”。单克隆抗体可以用作捕获抗体或检测抗体。单克隆抗体还可以在单一测定法中既用作捕获抗体又用作检测抗体。因此，本发明的一项实施方案使用了双抗体夹心法来检测体液样品中的淀粉状抗原。在该方法中，分析物(淀粉状抗原)被夹入到检测抗体和捕获抗体之间，捕获抗体不可逆地被固定在固体载体上。为了确认抗体-分析物夹心的存在并由此确认分析物的存在，检测抗体将含有可检测的标记物。
示例性的固相物质包括但不限于微量滴定板、聚苯乙烯试管、磁性的、塑料的或玻璃的珠子及片状物，它们是放射免疫测定法和酶免疫测定法领域中所熟知的。将抗体与固相偶联的方法也是本领域技术人员所熟知的。最近，已经使用了多种多孔材料如尼龙、硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维和其它多孔聚合物作为固体载体。
在组织和/或体液(例如患有与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的、特别是与视觉系统的组织中β-淀粉状蛋白相关性病理学异常/改变有关的眼部疾病的动物、特别是哺乳动物、但尤其是人的视网膜神经节细胞层)中的斑负荷可以通过本领域已知的方法、例如在以下文献中公开的方法来计算：Ding,J.-D.等人,"Targeting age-relatedmacular degeneration with Alzheimer’s disease based immunotherapies:Anti-amyloid-b antibody attenuates pathologies in an age-related maculardegeneration mouse model",Vision Research(2007),doi:10.1016/j.visres.2007.07.025。
本发明的化合物还可以被加入到试剂盒中来检测淀粉状蛋白。该试剂盒通常包含容纳一种或多种本发明的化合物的容器以及将化合物用于如下目的的说明书：与淀粉状蛋白结合以形成化合物/蛋白质复合物和检测化合物/蛋白质复合物的形成，以便将是否存在化合物/蛋白质复合物与是否存在淀粉状蛋白相关联。
术语“测试试剂盒”通常指本领域已知的任意诊断试剂盒。更具体而言，后面的术语指如Zrein等人(1998)中描述的诊断试剂盒。
具体实施方式
实施例
抑制Ab1-42积聚的本发明的化合物的合成及其生物活性测定法在以下实施例中有描述，这些实施例不意欲以任何方式限制本发明。
可以使用本领域已知的任意适宜的测定法来测定本发明的化合物对Ab1-42积聚的抑制。描述了用于测定积聚抑制的标准体外测定法。
制备实施例
所有试剂和溶剂由市售来源获得并且未经进一步纯化进行使用。在400MHz NMR波谱仪上在氘化溶剂中记录质子(1H)谱。在Finnigan MAT TSQ 7000谱仪上记录质谱(MS)。使用硅胶(福鲁卡公司(Fluka):硅胶60,0.063-0.2mm)和如具体实施例中所指示的适宜溶剂进行色谱法。在硅胶板上用UV检测进行薄层色谱法(TLC)。用0.5mm或1mm硅胶板(Analtech:Uniplate,F254)和具体实施例中所指示的溶剂进行制备型薄层色谱法(Prep-TLC)。
制备实施例1(化合物5和化合物13):
步骤A
将可市售获得的2-氨基-6-甲基吡啶(10.8g,100mmol)用焦碳酸二叔丁酯(26.2g,120mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液处理。真空除去溶剂，于～70℃在沙浴中将残余物加热过夜。将混合物用乙酸乙酯(150mL)稀释，将有机相用10％枸橼酸溶液(70mL)、饱和碳酸氢钠(70mL)和盐水(70mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/石油醚(10/90)(以洗脱过量试剂)、然后使用乙酸乙酯/石油醚(20/80)进行纯化，得到预期的化合物，为无色油状物，于室温放置后它变为白色固体(19g,91％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.53(s,9H),2.44(s,3H),6.82(d,1H),7.27(br-s,1H),7.55(t,1H),7.72(d,1H)
步骤B
将氢化钠(0.84g,35mmol)混悬在N,N’-二甲基甲酰胺(50mL)中，将该混合物冷却至0℃。于0℃历经5分钟加入来自以上步骤A的标题化合物(6g,28.8mmol)在N,N’-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液。加入完成后，于0℃将反应混合物搅拌15分钟，然后于室温搅拌60分钟。然后一次性加入甲基碘(2.39mL,38.5mmol)，于室温将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(150mL)和10％枸橼酸溶液(150mL)稀释。分离有机相，将水相用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机相用10％枸橼酸溶液(80mL)、饱和碳酸氢钠(80mL)和盐水(80mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/石油醚(10/90)进行纯化，得到预期的化合物，为淡黄色油状物(4.75g,74％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.53(s,9H),2.48(s,3H),3.38(s,3H),6.87(d,1H),7.40(d,1H),7.52(t,1H)
步骤C
通过于0℃将2M正丁基锂溶液(12mL,24mmol)加入搅拌的N,N'-二异丙胺(4mL,28.8mmol)在四氢呋喃(60mL)中的溶液中制得LDA溶液。于0℃将该混合物搅拌1小时，然后冷却至–78℃。于–78℃历经5分钟加入来自以上步骤B的标题化合物(2.13g,9.6mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液。于–78℃将混合物搅拌45分钟，使其温热至–50℃。然后将混合物冷却至–78℃，加入N,N'-二甲基甲酰胺(0.76mL,10.3mmol)。于–78℃15分钟后，加入甲醇(8.4mL)和乙酸(0.59mL,12,8mmol)。然后于–78℃加入硼氢化钠(0.34g,9.4mmol)，将混合物搅拌过夜，使其达到室温。将反应混合物用乙酸乙酯(80mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/石油醚(20/80)(以洗脱原料)(0.7g,35％回收率)、然后使用乙酸乙酯/石油醚(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为淡橙色油状物(1.08g,44％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.56(s,9H),2.98(t,2H),3.37(s,3H),4.05(t,2H),6.88(d,1H),7.53-7.60(m,2H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(1.07g,4.27mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(1.32mL,9.4mmol)。加入甲磺酰氯(0.66mL,8.5mmol)后，于室温将反应混合物搅拌1小时。将该混合物用二氯甲烷(50mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠(20mL)和盐水(20mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/石油醚(50/50)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.93g,65％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),2.90(t,3H),3.15(t,3H),3.40(s,3H),4.68(t,2H),6.90(t,1H),7.53-7.60(m,2H)
步骤E
将来自以上步骤D的标题化合物(0.93g,2.8mmol)溶于N,N'-二甲基乙酰胺(10mL)中，加入叠氮化钠(0.91g,14mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热16小时。将混合物用乙酸乙酯(80mL)和10％枸橼酸溶液(30mL)稀释。分离有机相，将其用饱和碳酸氢钠(25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机相通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/石油醚(20/80)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.69g,89％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.55(s,9H),3.00(t,3H),3.40(s,3H),3.71(t,2H),6.88-6.92(m,1H),7.53-7.60(m,2H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.69g,2.5mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入三苯膦(0.79g,3mmol)。于室温将该混合物搅拌18小时，加入水(10mL)。继续搅拌5小时，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)(以洗脱非极性副产物)、然后使用含有氨在甲醇中的7M溶液的二氯甲烷/甲醇(1/1)(每500mL含10mL)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.52g,82％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),1.68(br-s,2H),2.88(t,2H),3.11(t,2H),3.40(s,3H),6.88(d,1H),7.50(d,1H),7.53(t,1H)
步骤G
通过于0℃将正丁基锂在己烷中的1.6M溶液(51mL,81.2mmol)加入搅拌的N,N'-二异丙胺(13.5mL,97.4mmol)在四氢呋喃(60mL)中的溶液中制得LDA溶液。于0℃将该混合物搅拌15分钟，然后于–78℃将其加入可市售获得的2-溴-6-甲基-吡啶(5g,29.1mmol)在四氢呋喃(90mL)中的溶液中。于–78℃将混合物搅拌25分钟，然后加入N,N'-二甲基甲酰胺(7.9mL,107mmol)。于–78℃30分钟后，加入甲醇(80mL)和乙酸(6.1mL,132mmol)。然后于–78℃加入硼氢化钠(1.1g,28mmol)，将混合物搅拌过夜，使其达到室温。将反应混合物用乙酸乙酯(150mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(80mL)和盐水(80mL)洗涤。分离有机相，将水相用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。将合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(5g,85％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝3.01(t,2H),3.09(t,1H),4.02(q,2H),7.16(d,1H),7.34(d,1H),7.43(t,1H)
步骤H
将来自以上步骤G的标题化合物(5g,24.75mmol)溶于N,N’-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入咪唑(4.84g,74.25mmol)。加入三异丙基氯硅烷(7.92mL,37.1mmol)后，于室温将该混合物搅拌16小时。将反应混合物用乙醚(300mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(3×40mL)和盐水(100mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(5/95)进行纯化，得到标题化合物，为无色液体(7.36g,83％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.92-1.13(m,21H),3.00(t,2H),4.08(q,2H),7.22(d,1H),7.33(d,1H),7.45(t,1H)
步骤I
将来自以上步骤H的标题化合物(0.21g,0.6mmol)和来自以上步骤F的标题化合物(0.16g,0.63mmol)溶于甲苯(11mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.082g,0.12mmol)和叔丁醇钠(0.16g,1.63mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.054g,0.06mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～80至85℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)和水(20mL)稀释。将有机相用饱和碳酸氢钠(20mL)和盐水(20mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(20/80)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.26g,78％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.92-1.13(m,21H),1.52(s,9H),2.83(t,2H),3.03(t,2H),3.42(s,3H),3.66(q,2H),4.02(t,2H),4.95(br-s,1H),6.26(d,1H),6.49(d,1H),6.88(dd,1H),7.31(t,1H),7.54-7.57(m,2H)
步骤J
将来自以上步骤I的标题化合物(0.26g,0.53mmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入焦碳酸二叔丁酯(0.17g,0.84mmol)。加入4-二甲基氨基吡啶(0.006g,0.05mmol)后，在沙浴中于～65℃将该混合物加热过夜。加入另一批焦碳酸二叔丁酯(0.17g,0.84mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.006g,0.05mmol)，于～75℃继续加热12小时。然后除去剩余溶剂，加入焦碳酸二叔丁酯(0.17g,0.84mmol)后，于～75℃继续加热过夜。将残余物通过硅胶色谱法、使用正庚烷(以洗脱过量焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.27g,80％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.92-1.13(m,21H),1.47(s,9H),1.52(s,9H),2.97(t,2H),3.098t,2H),3.38(s,3H),4.06(t,2H),4.31(t,2H),6.83-6.87(m,1H),6.93(d,1H),7.35(d,1H),7.47-7.52(m,3H)
步骤K
将来自以上步骤J的标题化合物(0.27g,0.428mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入四丁基氟化铵在四氢呋喃中的1M溶液(2.14mL,2.14mmol)。于室温将该混合物搅拌过周末，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.19g,92％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.53(s,9H),2.98(t,2H),3.07(t,2H),3.3.5(s,3H),3.78(br-s,1H),3.98-4.04(m,2H),4.28(t,2H),6.86-6.88(m,2H),7.39(d,1H),7.45-7.57(m,3H)
步骤L
将来自以上步骤K的标题化合物(0.19g,0.396mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三乙胺(0.12mL,0.9mmol)。加入甲磺酰氯(0.06mL,0.8mmol)后，于室温将该混合物搅拌1小时。将混合物浓缩，将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(50/50)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.2g,90％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.53(s,9H),2.90(s,3H),3.09(t,2H),3.15(t,2H),3.37(s,3H),4.31(t,2H),4.68(t,2H),6.86(d,1H),6.91(d,1H),7.47-7.59(m,4H)
步骤M
将来自以上步骤L的标题化合物(0.2g,0.36mmol)溶于N,N’-二甲基乙酰胺(1.3mL)中，加入叠氮化钠(0.12g,1.8mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热过夜。将混合物用乙酸乙酯(25mL)和10％枸橼酸(10mL)稀释。分离有机相，将其用盐水(10mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(20/80)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.16g,92％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.53(s,9H),3.01(t,2H),3.10(t,2H),3.37(s,3H),3.73(t,2H),4.32(t,2H),6.84(dd,1H),6.90(d,1H),7.46-7.55(m,4H)
步骤N
将来自以上步骤M的标题化合物(0.16g,0.33mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，加入三苯膦(0.1g,0.39mmol)。于室温将该反应混合物搅拌30小时，然后加入水(2mL)。继续搅拌14小时，真空除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1/1，每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.13g,85％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.53(s,9H),2.90(t,1H),3.08(t,2H),3.14(t,2H),3.378s,3H),4.32(t,2H),6.85-6.89(m,2H),7.39(d,1H),7.44-7.55(m,3H)
步骤O
将来自以上步骤N的标题化合物(0.13g,0.28mmol)和2-溴吡啶(0.043g,0.27mmol)溶于甲苯(4.8mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.034g,0.059mmol)和叔丁醇钠(0.082g,0.853mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.025g,0.027mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～80至85℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)和水(10mL)稀释。将有机相用饱和碳酸氢钠(10mL)和盐水(10mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)(以洗脱反应产物的混合物)进行纯化。通过制备型TLC板(Analtech,0.5mm)、使用乙酸乙酯/正庚烷(70/30)作为流动相将极性较低的产物与极性较高的产物分离，得到标题化合物。
极性较低的产物:(0.029g,淡黄色油状物,16％)
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.49(s,9H),1.51(s,9H),3.19(t,2H),3.32(s,3H),4.30(t,2H),4.59(t,2H),6.81-6.88(m,4H),7.07-7.09(m,2H),7.34(d,1H),7.43-7.51(m,5H),8.30-8.32(m,2H)
极性较高的产物:(0.035g,淡黄色油状物,22％)
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.50(s,18H),3.03(t,2H),3.10(t,2H),3.32(s,3H),3.68-3.74(m,2H),4.32(t,2H),5.00(br-s,1H),6.34(d,1H),6.51-656(m,1H),6.82-6.89(m,2H),7.31-7.53(m,5H),8.08(br-s,1H)
步骤P
将来自以上步骤O的极性较高的产物(0.035g,0.06mmol)溶于氯仿(1.1mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(1.1mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(2mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为橙色玻璃状物(0.026g,90％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.92(s,3H),3.03-3.09(m,4H),3.68-3.76(m,4H),6.63(d,1H),6.738d,1H),6.79-6.87(m,3H),6.92(d,1H),7.68-7.85(m,4H)
(MS(ESI)；m/z＝349.52(MH+)
步骤Q
将来自以上步骤O的极性较低的产物(0.029g,0.046mmol)溶于氯仿(0.8mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(0.8mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(2mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为橙色玻璃状物(0.024g,97％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.91(s,3H),3.00(t,2H),3.21(t,2H),3.63(t,2H),4.49(t,2H),6.60-6.64(m,2H),6.70(d,1H),6.81(d,1H),7.26(t,2H),7.38(d,2H),7.62(t,1H),7.70(t,1H),7.99-8.04(m,2H),8.13(d,2H)
MS(ESI)；m/z＝426.42(MH+)
制备实施例2(化合物1):
步骤A
将来自实施例1的步骤H的标题化合物(0.9g,2.51mmol)和可市售获得的2-(2-氨基乙基)-吡啶(0.34g,2.78mmol)溶于甲苯(45mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.33g,0.48mmol)和叔丁醇钠(0.63g,6.6mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯(0.22g,0.024mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～80至85℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(150mL)、水(30mL)和盐水(30mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为深黄色油状物。另外进行三次，共产生3.4g(84％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.98-1.10(m,21H),2.85(t,2H),3.10(t,2H),3.68(q,2H),4.03(t,2H),4.81(br-s,1H),6.24(d,1H),6.50(d,1H),7.13-7.18(m,2H),7.32(t,1H),7.60(t,1H),8.58(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(1.7g,4.26mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入焦碳酸二叔丁酯(4.75g,21.3mmol)。除去溶剂，在沙浴中于～75℃将油状残余物加热18至36小时，直到TLC表明原料耗尽。然后将混合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)(以除去过量的焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物。两批共产生3.6g(86％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.98-1.10(m,21H),1.42(s,9H),2.92(t,2H),3.11(t,2H),4.01(t,2H),4.30(t,2H),6.90(d,1H),7.07-7.10(m,1H),7.12(d,1H),7.36(d,1H),7.46-7.56(m,2H),8.49(d,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(3.9g,7.81mmol)溶于乙腈(100mL)中，用四丁基氟化铵在四氢呋喃中的1M溶液(30mL,30mmol)处理。于室温将该混合物搅拌过夜，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(2.57g,95％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.49(s,9H),2.98(t,2H),3.11(t,2H),4.04(t,2H),4.30(t,2H),6.85(d,1H),7.06-7.10(m,1H),7.16(d,1H),7.38(d,1H),7.48-7.57(m,2H),8.46(d,1H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(2.57g,7.49mmol)溶于二氯甲烷(45mL)中，加入三乙胺(2.33mL,16.9mmol)。将该混合物冷却至0℃，加入甲磺酰氯(1.17mL,15mmol)。加入完成后，于0℃将混合物搅拌5分钟，然后于室温搅拌1小时。将溶剂蒸发，将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(3.1g,98％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.49(s,9H),2.91(s,3H),3.11-3.17(m,4H),4.30(t,2H),4.66(t,2H),6.89(d,1H),7.08-7.11(m,1H),7.15(d,1H),7.46(d,1H),7.53(t,1H),7.56(dt,1H),8.49(d,1H)
步骤E
将来自以上步骤D的标题化合物(1.57g,3.73mmol)溶于N,N’-二甲基乙酰胺(17.5mL)中，加入叠氮化钠(1.22g,18.6mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热过夜。将混合物用乙酸乙酯(150mL)和水(40mL)稀释。分离有机相，将其用盐水(40mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物。两批共产生2.4g,87％。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.43(s,9H),2.97(t,2H),3.12(t,2H),3.69(t,2H),4.31(t,2H),6.87(d,1H),7.07-7.10(m,1H),7.12(d,1H),7.468d,1H),7.51-7.58(m,2H),8.50(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(2.4g,6.52mmol)溶于四氢呋喃(60mL)中，加入三苯膦(2.15g,8.17mmol)。于室温将该反应混合物搅拌48小时，然后加入水(30mL)。继续搅拌16小时，真空除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)(以除去非极性副产物)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1/1,每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(2.1g,95％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.43(s,9H),2.83(t,2H),3.06-3.14(m,4H),4.31(t,2H),6.84(d,1H),7.05-7.09(m,1H),7.12(d,1H),7.37(d,1H),7.48(t,1H),7.52(dt,1H),8.47(d,1H)
步骤G
将可市售获得的2-氨基-6-溴-吡啶(4.25g,24.6mmol)溶于二氯甲烷(50mL)和N,N'-二异丙基乙胺(5.25mL,30.7mmol)中，加入4-二甲基氨基吡啶(0.15g,1.23mmol)。加入焦碳酸二叔丁酯(5.9g,27mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液后，于室温将该混合物搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(100mL)稀释，用10％枸橼酸(50mL)和盐水(50mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(5/95)进行纯化，得到标题化合物，为白色固体(2.15g,32％)。将柱用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)洗涤，得到相应的双-Boc-衍生物，为白色固体(1.95g,21％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),7.13(d,1H),7.27(br-s,1H),7.51(t,1H),7.90(d,1H)
双-Boc衍生物:
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.48(s,18H),7.27(d,1H),7.40(d,1H),7.60(t,1H)
步骤H
将氢化钠(0.18g,7.38mmol)混悬在N,N’-二甲基乙酰胺(10mL)中，将该混合物冷却至0℃。于0℃历经5分钟加入来自以上步骤G的标题化合物(1.66g,6.1mmol)在N,N’-二甲基乙酰胺(5mL)中的溶液。加入完成后，于0℃将反应混合物搅拌5分钟，然后于室温搅拌60分钟。然后一次性加入甲基碘(0.5mL,8.12mmol)，于室温将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(30mL)、饱和碳酸氢钠(30mL)和盐水(30mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(5/95)进行纯化，得到预期的化合物，为无色液体(1.54g,90％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),3.40(s,3H),7.17(d,1H),7.47(t,1H),7.74(d,1H)
步骤I
将来自以上步骤F(0.525g,1.54mmol)和步骤H(0.423g,1.53mmol)的标题化合物溶于甲苯(24mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.186g,0.3mmol)和叔丁醇钠(0.383g,3.98mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯(0.133g,0.15mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)、水(20mL)和盐水(20mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)(以洗脱预期的化合物)进行纯化。将来自4批的粗标题化合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进一步进行纯化，得到标题化合物，为淡橙色油状物(3g,89％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.50(s,9H),1.52(s,9H),3.02(t,2H),3.18(t,2H),3.32(s,3H),3.70-3.74(m,2H),4.38(t,2H),5.20(br-s,1H),6.13(d,1H),6.83-6.88(m,2H),7-06-7.09(m,1H),7.13(d,1H),7.31(t,1H),7.40(d,1H),7.50(t,1H),7.53(dt,1H),8.48(d,1H)
步骤J
将来自以上步骤I的标题化合物(3g,5.47mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(50mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将残余物溶于水(30mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤(每筒10mL)。将三个筒用水(5mL)洗涤。采集合并的滤液，使用冷冻干燥器将溶剂蒸发，得到标题化合物，为淡橙色泡沫状物(2.2g,88％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.79(s,3H),3.02(t,2H),3.33(t,2H),3.57(t,2H),3.81(t,2H),5.81(d,1H),5.92(d,1H),6.71(d,1H),6.81(d,1H),7.50(t,1H),7.78(t,1H),7.83-7.91(m,2H),8.42(t,1H),8.59(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝349.42(MH+)
制备实施例3(化合物1的供选合成流程):
步骤A
将可市售获得的(6-溴吡啶-2-基)-甲醇(1g,5.3mmol)溶于N,N'-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入咪唑(0.97g,14.85mmol)。加入三异丙基甲硅烷基氯(1.58mL,7.42mmol)后，于室温将该混合物搅拌过周末。将混合物用乙醚(80mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(25mL)和盐水(25mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(5/95)进行纯化。采集含有被保护的醇的级分，将溶剂蒸发，得到无色液体(1.7g,92％)。将被保护的醇(0.85g,2.47mmol)和可市售获得的2-(2-氨基乙基)-吡啶(0.35g,2.78mmol)溶于甲苯(45mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.33g,0.48mmol)和叔丁醇钠(0.63g,6.625mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯(0.22g,0.24mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～80至85℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(1000mL)、水(20mL)和盐水(20mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为褐色油状物。两批共产生1.6g(84％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.06-1.08(m,18H),1.13-1.24(m,3H),3.07(t,2H),3.64-3.69(m,2H),4.72(s,2H),4.81(br-s,1H),6.28(d,1H),6.86(d,1H),7.12-7.18(m,2H),7.43(t,1H),7.59(dt,1H),8.56(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(1.6g,4.15mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入焦碳酸二叔丁酯(4.75g,21.3mmol)。除去溶剂，在沙浴中于～75℃将油状残余物加热24小时，直到TLC表明原料耗尽。然后将混合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)(以除去过量的焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(1.75g,86％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.06-1.08(m,18H),1.13-1.24(m,3H),1.44(s,9H),3.10(t,2H),4.31(t,2H),4.80(s,2H),7.05-7.08(m,1H),7.12(d,1H),7.25-7.33(m,2H),7.53(dt,1H),7.60(t,1H),8.48(d,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(1.75g,3.6mmol)溶于乙腈(45mL)中，用四丁基氟化铵在四氢呋喃中的1M溶液(13mL,13mmol)处理。于室温将该混合物搅拌过夜，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为淡橙色油状物(1.16g,97％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),3.18(t,2H),4.31(t,2H),4.40-4.52(br-s,1H),4.70(s,2H),6.87-6.90(m,1H),7.08-7.16(m,2H),7.54-7.62(m,3H),8.55(d,1H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(0.33g,1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(0.28mL,2mmol)。将该混合物冷却至0℃，加入甲磺酰氯(0.13mL,1.7mmol)。加入完成后，于0℃将混合物搅拌5分钟，然后于室温搅拌1小时。将溶剂蒸发，将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.31g,75％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.46(s,9H),3.07(s,3H),3.11(t,2H),4.33(t,2H),5.22(s,2H),7.07-7.16(m,3H),7.53-7.66(m,3H),8.48(d,1H)
步骤E
将来自以上步骤D的标题化合物(0.3g,0.75mmol)溶于乙醇(17.5mL)中，加入氰化钾(0.24g,3.75mmol)。在沙浴中于～85℃将该混合物加热1小时。除去溶剂，将残余物用乙酸乙酯(30mL)和水(5mL)溶解。分离有机相，将其用盐水(5mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.118g,46％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.47(s,9H),3.17(t,2H),3.83(s,2H),4.34(t,2H),7.04-7.11(m,2H),7.18(d,1H),7.56(dt,1H),7.60-7.63(m,2H),8.49(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.118g,0.35mmol)溶于无水乙醇(1.2mL)中，加入氯化镍(II)(0.045g,0.35mmol)。向该反应混合物中分批加入硼氢化钠(0.04g,1.05mmol)(放热反应)。加入完成后，于室温将黑色反应混合物搅拌2小时，直到所有原料耗尽。将黑色反应混合物通过Celite垫过滤，将垫用乙醇(25mL)洗涤。将淡黄色滤液蒸发，将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(9/1)(以除去非极性副产物)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1/1,每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为黄色油状物(0.084g,70％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),3.03(t,2H),3.16(t,2H),3.30(t,2H),3.12-3.48(br-s,2H),4.32(t,2H),6.88(d,1H),7.07-7.12(m,1H),7.17(d,1H),7.42(d,1H),7.53(t,1H),7.58(dt,1H).8.57(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝342.98(MH+)
步骤G
将来自以上步骤F(0.084g,0.245mmol)和来自以上制备实施例2的步骤I(0.068g,0.245mmol)的标题化合物溶于甲苯(4mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.03g,0.048mmol)和叔丁醇钠(0.062g,0.64mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯(0.021g,0.024mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯(以洗脱预期的化合物)进行纯化。将粗标题化合物通过PREP-TLC、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进一步进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.04g,29％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.48(s,9H),1.50(s,9H),3.02(t,2H),3.16(t,2H),3.31(s,3H),3.70(t,2H),4.38(t,2H),5.17-5.27(br-s,1H),6.11(d,1H),6.81-6.86(m,2H),7-06-7.09(m,1H),7.13(d,1H),7.29(t,1H),7.38(d,1H),7.48(t,1H),7.52(dt,1H),8.48(d,1H)
步骤H
将来自以上步骤G的标题化合物(0.075g,0.137mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(2mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将残余物溶于水(5mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，使用冷冻干燥器将溶剂蒸发，得到标题化合物，为淡橙色泡沫状物(0.045g,72％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.79(s,3H),3.02(t,2H),3.33(t,2H),3.57(t,2H),3.81(t,2H),5.81(d,1H),5.92(d,1H),6.71(d,1H),6.818d,1H),7.50(t,1H),7.78(t,1H),7.83-7.91(m,2H),8.42(t,1H),8.59(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝349.42(MH+)
制备实施例4(化合物2)
步骤A
将来自实施例1的步骤H的标题化合物(0.35g,0.95mmol)和可市售获得的2-氨基甲基-吡啶(0.108g,1mmol)溶于甲苯(17mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.13g,0.19mmol)和叔丁醇钠(0.245g,2.58mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.086g,0.095mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～80至85℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(40mL)、水(10mL)和盐水(10mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯(以洗脱产物)进行纯化。将粗物质再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)进行纯化，得到标题化合物，为淡橙色油状物(0.28g,75％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.98-1.10(m,21H),2.88(t,2H),4.02(t,2H),4.65(d,2H),5.51(br-s,1H),6.28(d,1H),6.53(d,1H),7.16-7.20(m,1H),7.30-7.38(m,2H),7.63(dt,1H),8.58(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(0.28g,0.73mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入焦碳酸二叔丁酯(0.8g,3.65mmol)。除去溶剂，在沙浴中于～75℃将油状残余物加热3天。然后将混合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)(以除去过量的焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.32g,91％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝0.85-1.10(m,21H),1.38(s,9H),2.88(t,2H),3.90(t,2H),5.31(s,2H),6.91(d,1H),7.12-7.17(m,1H),7.28(d,1H),7.54-7.62(m,2H),7.67(d,1H),8.54(d,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(0.32g,0.66mmol)溶于乙腈(8mL)中，用四丁基氟化铵在四氢呋喃中的1M溶液(3.3mL,3.3mmol)处理。于室温将该混合物搅拌过夜，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为淡橙色油状物(0.18g,84％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,9H),2.91(t,2H),3.69(br-s,1H),3.88(t,2H),5.27(s,2H),6.88(d,1H),7.15-7.20(m,1H),7.30(d,1H),7.59(t,1H),7.63-7.67(m,2H),8.548d,1H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(0.18g,0.56mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三乙胺(0.17mL,1,26mmol)。将该混合物冷却至0℃，加入甲磺酰氯(0.09mL,1.12mmol)。然后于室温将反应混合物搅拌1小时。然后将混合物置于用乙酸乙酯平衡的硅胶柱上。将柱用乙酸乙酯展开，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.22g,96％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,9H),2.82(s,3H),3.07(t,2H),4.43(t,2H),5.30(s,2H),6.91(d,1H),7.18-7.23(m,1H),7.29(d,1H),7.61(t,1H),7.69(dt,1H),7.78(d,1H),8.57(d,1H)
步骤E
将来自以上步骤D的标题化合物(0.22g,0.54mmol)溶于N,N’-二甲基乙酰胺(2.1mL)中，加入叠氮化钠(0.18g,2.7mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热过夜。将混合物用乙酸乙酯(25mL)和水(10mL)稀释。分离有机相，将其用盐水(10mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.15g,78％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,9H),2.88(t,2H),3.49(t,2H),5.30(s,2H),6.90(d,1H),7.13-7.18(m,1H),7.22(d,1H),7.59-7.66(m,2H),7.77(d,1H),8.55(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.15g,0.41mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，加入三苯膦(0.13g,0.5mmol)。于室温将该反应混合物搅拌24小时，然后加入水(2mL)。继续搅拌过周末，真空除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1/1,每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.135g,98％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,9H),2.79(t,2H),2.94(t,2H),5.30(s,2H),6.88(d,1H),7.12-7.16(m,1H),7.26(d,1H),7.58(t,1H),7.61(dt,1H),7.70(d,1H),8.54(d,1H)
步骤G
将来自以上制备步骤F的标题化合物(0.135g,0.41mmol)和来自制备实施例2的步骤H的标题化合物(0.085g,0.4mmol)溶于甲苯(7.2mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.05g,0.08mmol)和叔丁醇钠(0.125g,1.25mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.037g,0.04mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(40mL)、饱和碳酸氢钠(10mL)和盐水(10mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)(以洗脱极性较低的副产物)、然后使用二氯甲烷/甲醇(9/1)(以洗脱2种化合物的混合物，可通过TLC(二氯甲烷/甲醇(9/1))判断)进行纯化。除去溶剂，粗混合物(87mg,46％联合产率)直接用于下一步。
步骤E
将来自以上步骤B的标题化合物(0.06g,0.183mmol)和来自以上步骤D的标题化合物(0.048g,0.167mmol)溶于甲苯(3mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.021g,0.034mmol)和叔丁醇钠(0.049g,0.51mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.015g,0.0167mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(70/30)(以洗脱预期的化合物)进行纯化。为了除去剩余的杂质，将粗产物通过Prep-TLC(Analtech,0.5mm)、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)作为流动相进一步进行纯化，得到标题化合物，为深黄色油状物(0.023g,25％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.40(s,9H),1.50(s,9H),2.92(t,2H),3.30(s,3H),3.50-3.54(m,2H),4.69(br-s,1H),5.31(s,2H),5.92(d,1H),6.82-6.88(m,2H),7.11-7.14(m,1H),7.27-7.30(m,2H),7.55-7.62(m,2H),7.70(d,1H),8.53(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.023g,0.04mmol)溶于氯仿(0.8mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(0.8mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(2mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.016g,84％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.79(s,3H),3.07(t,2H),3.58(t,2H),5.00(s,2H),5.81(d,1H),5.92(d,1H),6.82(d,1H),6.89(d,1H),7.51(t,1H),7.83-7.91(m,3H),8.43(t,1H),8.63(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝335.44(MH+)
制备实施例5(化合物6):
步骤A
将可市售获得的2-(2-氨基乙基)-吡啶-2-基(0.037g,0.3mmol)和来自制备实施例2的步骤H的标题化合物(0.072g,0.25mmol)溶于甲苯(4.5mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.031g,0.05mmol)和叔丁醇钠(0.075g,0.78mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.023g,0.025mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)(以洗脱预期的化合物)进行纯化。为了除去剩余的杂质，将粗产物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)进一步进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.07g,85％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),3.14(t,2H),3.36(s,3H),3.66-3.76(m,2H),4.81(br-s,1H),6.11(d,1H),6.88(d,1H),7.13-7.19(m,2H),7.36(t,1H),7.61(dt,1H),8.56(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(0.062g,0.189mmol)溶于氯仿(2.75mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(2.75mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(5mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.047g,84％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.78(s,3H),3.28(t,2H),3.67(t,2H),5.80(d,1H),5.91(d,1H),7.50(t,1H),7.82(t,1H),7.86(d,1H),8.40(t,1H),8.56(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝229.30(MH+)
制备实施例6(化合物7):
步骤A
将来自实施例1的步骤F的标题化合物(0.075g,0.3mmol)和来自实施例2的步骤H的标题化合物(0.072g,0.25mmol)溶于甲苯(4.5mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.031g,0.05mmol)和叔丁醇钠(0.075g,0.78mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.023g,0.025mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质以及预期的化合物(0.098g))进行纯化。将产物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进一步进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.09g,78％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.54(s,9H),3.04(t,2H),3.33(s,3H),3.44(s,3H),3.64-3.70(m,2H),5.02(br-s,1H),6.12(d,1H),6.86-6.90(m,2H),7.37(t,1H),7.53-7.57(m,2H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(0.09g,0.196mmol)溶于氯仿(2.9mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(2.9mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(5mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.057g,80％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.78(s,3H),2.89(s,3H),2.98(t,2H),3.57(t,2H),5.80(d,1H),5.90(d,1H),6.63(d,1H),6.77(d,1H),7.50(t,1H),7.68(t,1H)
MS(ESI)；m/z＝258.28(MH+)
制备实施例7(化合物4):
步骤A
将三苯膦(3.8g,14.4mmol)和苯邻二甲酰亚胺(1.08g,7.4mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，将该混合物冷却至0℃。于0℃历经5分钟加入可市售获得的2-吡啶-1-丙醇(1g,7.4mmol)在四氢呋喃(10mL)中的混合物和偶氮二甲酸二乙酯在甲苯中的40％溶液(6mL,14.4mmol)。将该混合物搅拌过夜，使其达到室温。除去溶剂，将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为红色油状物(1.9g,98％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝2.13-2.21(m,2H),2.87(t,2H),3.80(t,2H),7.07-7.11(m,1H),7.20(d,1H),7.58(dt,1H),7.69-7.72(m,2H),7.83-7.86(m,2H),8.50(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(1.9g,7mmol)溶于甲醇(50mL)中，用肼在水中的50％溶液(1.4mL,14mmol)处理。于室温将该混合物搅拌过夜，除去溶剂。将固体用二氯甲烷(100mL)处理，超声处理5分钟，得到浆液，于室温将其搅拌30分钟。将混合物过滤，将沉淀物用30mL二氯甲烷洗涤。将滤液浓缩，将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(9/1)(以洗脱有色杂质)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1:1)(每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为褐色液体(0.69g,70％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.43(br-s,2H),1.85-1.92(m,2H),2.74(t,2H),2.83(t,2H),7.08-7.12(m,1H),7.16(d,1H),7.59(dt,1H),8.52(d,1H)
步骤C
将烯丙醇(0.087mL,1.5mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，将该混合物冷却至0℃。于0℃加入9-硼杂二环[3.3.1]壬烷在己烷中的0.4M溶液(11.25mL,4.5mmol)，于0℃继续搅拌15分钟。然后于室温将混合物搅拌4小时，将溶剂蒸发。将残余物溶于四氢呋喃(8mL)中，加入3M氢氧化钠水溶液(2mL,6mmol)。加入可市售获得的2,6-二溴-吡啶(0.46g,1.95mmol)在N,N’-二甲基乙酰胺(10mL)中的溶液后，将该混合物超声处理5分钟，同时将氩气气流通入混合物中。然后加入四(三苯膦)钯(0)(0.17g,0.156mmol)，在沙浴中于～95℃将混合物加热90分钟。将混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用10％枸橼酸(20mL)和盐水(15mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)(以洗脱有色杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到粗产物。将由这批和另外两批合并的粗产物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(50/50)进一步进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.48g,49％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.97-2.03(m,2H),2.92(t,2H),3.68-3.73(m,2H),7.12(d,1H),7.34(d,1H),7.42(t,1H)
注意：1H-NMR表明存在少量的9-BBN的分解产物，但是该物质的纯度足以用于下一步。
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(0.48g,2.23mmol)溶于N,N’-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入咪唑(0.3g,4.46mmol)。加入三异丙基氯硅烷(0.43g,2.23mmol)后，于室温将该混合物搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(3×15mL)和盐水(15mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(5/95)进行纯化，得到标题化合物，为无色液体(0.66g,79％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):(＝1.05-1.14(m,21H),1.94-2.01(m,2H),2.88(t,2H),3.72(t,2H),7.14(d,1H),7.31(d,1H),7.45(t,1H)
步骤E
将来自以上步骤B的标题化合物(0.136g,1mmol)和来自以上步骤D的标题化合物(0.35g,0.95mmol)溶于甲苯(17mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.13g,0.19mmol)和叔丁醇钠(0.25g,2.58mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.086g,0.095mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～85℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(80mL)、水(20mL)和盐水(20mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)(以洗脱预期的化合物)进行纯化。将粗产物再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)进行纯化，得到标题化合物，为深黄色油状物(0.34g,83％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.05-1.14(m,21H),1.92-1.97(m,2H),2.05-2.12(m,2H),2.68(t,2H),2.91(t,2H),3.27-3.33(m,2H),3.74(t,2H),4.60-4.63(br-s,1H),6.18(d,1H),6.46(d,1H),7.10-7.13(m,1H),7.17(d,1H),7.32(t,1H),7.60(dt,1H),8.52(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.34g,0.79mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入焦碳酸二叔丁酯(0.86g,3.95mmol)。除去溶剂，在沙浴中于～75℃将油状残余物加热3天，直到通过TLC判断所有原料已经消失。然后将混合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)(以洗脱过量的焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为橙色油状物(0.38g,92％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.05-1.14(m,21H),1.49(s,9H),1.99-1.96(m,2H),2.05-2.12(m,2H),2.74-2.84(m,4H),3.72(t,2H),4.01(t,2H),6.88(d,1H),7.07-7.10(m,1H),7.12(d,1H),7.39(d,1H),7.52(t,1H),7.58(dt,1H),8.51(d,1H)
步骤G
将来自以上步骤F的标题化合物(0.38g,0.72mmol)溶于乙腈(8mL)中，加入四丁基氟化铵在四氢呋喃中的1M溶液(3.6mL,3.6mmol)。于室温将该混合物搅拌过夜，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.25g,94％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.49(s,9H),2.00-2.11(m,4H),2.81-2.89(m,4H),3.68(t,2H),4.02(t,2H),6.88(d,1H),7-08-7.12(m,1H),7.16(d,1H),7.41(d,1H),7.52(t,1H),7.59(t,1H),8.47(d,1H)
步骤H
将三苯膦(0.35g,1.36mmol)和苯邻二甲酰亚胺(0.1g,0.68mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，将该混合物冷却至0℃。于0℃历经5分钟加入来自以上步骤G的标题化合物(0.25g,0.68mmol)在四氢呋喃(2mL)中的混合物和偶氮二甲酸二乙酯在甲苯中的40％溶液(0.55mL,1.36mmol)。将该混合物搅拌过夜，使其达到室温。除去溶剂，将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为橙色油状物(382mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.49(s,9H),2.00-2.17(m,4H),2.77(t,2H),2.81(t,2H),3.76(t,2H),4.03(t,2H),6.88(d,1H),7.04-7.08(m,1H),7.14(d,1H),7.38(d,1H),7.48(t,1H),7.55(t,1H),7.69-7.72(m,2H),7.82-7.86(m,2H),8.48(d,1H)
注意：1H-NMR表明存在少量的肼-1,2-二甲酸二乙酯，但是该物质的纯度足以用于下一步。
步骤I
将来自以上步骤H的标题化合物(0.34g,0.68mmol)溶于甲醇(7mL)中，用肼在水中的50％溶液(0.14mL,1.36mmol)处理。于室温将该混合物搅拌过夜，除去溶剂。将固体用二氯甲烷(20mL)处理，超声处理5分钟，得到浆液，于室温将其搅拌30分钟。将混合物过滤，将沉淀物用10mL二氯甲烷洗涤。将滤液浓缩，将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(9/1)(以洗脱有色杂质)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1:1)(每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.16g,62％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),1.86(q,2H),2.08(q,2H),2.70-2.76(m,4H),2.83(t,2H),4.04(t,2H),6.85(d,1H),7.08-7.11(m,1H),7.14(d,1H),7.40(d,1H),7.52(t,1H),7.57(t,1H),8.51(d,1H)
步骤J
将来自以上步骤I的标题化合物(0.075g,0.2mmol)和来自实施例2的步骤H的标题化合物(0.055g,0.193mmol)溶于甲苯(3.1mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.024g,0.039mmol)和叔丁醇钠(0.05g,0.52mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.017g,0.019mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)(以洗脱预期的化合物)进行纯化。将粗产物再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.094g,89％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.50(s,9H),1.528s,9H),2.00-2.12(m,4H),2.78-2.84(m,4H),3.27-3.33(m,5H),4.02(t,2H),4.70(br-s,1H),6.08(d,1H),6.86(d,2H),7.08-7.13(m,2H),7.34(t,1H),7.40(d,1H),7.48-7.57(m,2H),8.50(d,1H)
步骤K
将来自以上步骤J的标题化合物(0.094g,0.16mmol)溶于氯仿(2.3mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(2.3mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(5mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为橙色玻璃状物(0.06g,76％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝1.97(q,2H),2.06(q,2H),2.73-2.79(m,5H),3.07(t,2H),3.25(t,2H),3.36(t,2H),5.82-5.87(m,2H),6.66(d,1H),6.73(d,1H),7.50(t,1H),7.72(t,1H),7.78(t,1H),7.83(d,1H),8.39(t,1H),8.51(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝377.17(MH+)
制备实施例8(化合物3)
步骤A
将可市售获得的2,6-二溴吡啶(0.5g,2.1mmol)溶于N,N`-二甲基乙酰胺(5mL)中，加入可市售获得的2-吡啶基-乙胺(0.26g,2.1mmol)。加入碳酸氢钾(0.23g,2.3mmol)后，在沙浴中于～110℃将混合物加热5小时。将混合物用乙酸乙酯(80mL)稀释，用水83×20mL洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为橙色油状物(0.13g,21％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝3.07(t,2H),3.68(m,2H),5.17(br-s,1H),6.30(d,1H),6.70(d,1H),7.10-7.21(m,3H),7.58(t,1H),8.52(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(0.13g,0.46mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入焦碳酸二叔丁酯(0.5g,2.32mmol)。除去溶剂，在沙浴中于～75℃将油状残余物加热3天。然后将混合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(20/80)(以洗脱过量的焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(40/60)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.095g,53％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.49(s,9H),3.18(t,2H),4.38(t,2H),7.11-7.14(m,1H),7.18(d,1H),7.23(d,1H),7.48(t,1H),7.59-7.67(m,2H),8.52(d,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(0.09g,0.238mmol)和来自实施例1的步骤F的标题化合物(0.07g,0.27mmol)溶于甲苯(4.25mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.032g,0.048mmol)和叔丁醇钠(0.061g,0.65mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.021g,0.024mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)(以洗脱预期的化合物)进行纯化。将粗产物再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.12g,94％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,9H),1.53(s,9H),3.04(t,2H),3.18(t,2H),3.43(s,3H),3.68-3.73(m,2H),4.30(t,2H),5.00(br-s,1H),6.14(d,1H),6.83(d,1H),6.86-6.89(m,1H),7.09-7.11(m,1H),7.16(d,1H),7.38(t,1H),7.53-7.58(m,3H),8.518d,1H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(0.12g,0.22mmol)溶于氯仿(3.1mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(3.1mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(5mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为橙色玻璃状物(0.074g,74％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝2.90(s,3H),3.00(t,2H),3.31(t,2H),3.58(t,2H),3.69(t,2H),5.88-5.93(m,2H),6.61-6.65(m,1H),6.79(d,1H),7.50-7.73(m,1H),7.70(t,1H),7.84-7.91(m,2H),8.42(t,1H),8.58(d,1H)
MS(ESI)；m/z＝349.49(MH+)
制备实施例9(化合物9):
步骤A
向可市售获得的2-氨基-6-甲基吡啶(25.46g,235mmol)中加入丙烯酸乙酯(26mL,239mmol)和乙酸(6mL,105mmol)。在沙浴中于～150℃将该混合物加热50小时。将混合物冷却至室温，加入6N氢氧化钠(120mL,720mmol)。然后在沙浴中于～120℃将混合物加热1小时。将混合物冷却至室温，在冰冷却下加入浓盐酸，直到pH达到约4-5。形成聚合的沉淀物，将该混合物过滤。将滤液蒸发，将残余物用甲醇(100mL)处理。于室温将所得浆液搅拌30分钟，过滤。将沉淀物用甲醇(30mL)洗涤，将合并的滤液蒸发，剩下褐色的粘性物质。将该粗物质溶于二氯甲烷(400mL)中，将该溶液置于冰浴中。然后逐滴加入氯磺酸(162mL,2430mmol)。加入完成后，于室温将混合物搅拌2小时。然后将混合物放回冰浴中，小心加入水(800mL)。加入完成后，加入氢氧化钠将酸性溶液碱化至pH～6。然后加入碳酸钠将pH调至～10至11。形成沉淀物，将混合物用乙酸乙酯(3×400mL)萃取。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(75/25)(以洗脱非极性杂质)、然后使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为黄色固体(12.2g,32％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝2.40(s,3H),2.69(t,2H),3.58-3.62(m,2H),5.318br-s-,1H),6.58(d,1H),7.97(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(7g,43.2mmol)混悬在甲醇(170mL)中，分批加入硼氢化钠(2.94g,77.7mmol)。加入完成后，于室温将该混合物搅拌1小时至变为澄清溶液。然后加入乙酸(21mL)，除去溶剂。将残余物溶于水(250mL)中，将水相用二氯甲烷(2×100mL)洗涤。加入碳酸钠将水相制成碱性(pH～10)，用乙酸乙酯(6×150mL)萃取。将合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂，得到标题化合物，为灰白色固体(6.39g,90％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.82-1.90(m,1H),1.95-2.01(m,1H),2.30(s,3H),3.10(br-s,1H),3.31-3.36(m,1H),3.48(dt,1H),4.72(t,1H),5.32(br-s,1H),6.38(d,1H),7.32(d,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(6.39g,38.9mmol)溶于甲醇(130mL)和乙酸(65mL)中。加入10％钯/碳催化剂(1.6g)后，将该混合物氢化3天。将混合物过滤，将催化剂用甲醇(50mL)洗涤，将合并的滤液蒸发。将乙酸盐溶于水(200mL)中，加入碳酸钠将pH调至pH～10。将水相用二氯甲烷(3×150mL)萃取。将合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂，得到游离胺，为白色固体(4.42g,76％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.86-1.92(m,2H),2.30(s,3H),2.68(t,2H),3.37-3.41(m,2H),4.80(br-s,1H),6.34(d,1H),7.03(d,1H)
步骤D
向来自以上步骤C的标题化合物(7.42g,50.13mmol)中加入焦碳酸二叔丁酯(33.7g,150.4mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液。除去溶剂，在沙浴中于～75℃将油状残余物加热18小时。将反应混合物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(10/90)(以除去过量的焦碳酸二叔丁酯)、然后使用乙酸乙酯/正庚烷(40/60)进行纯化，得到标题化合物，为白色固体(11.2g,90％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),1.87-1.93(m,2H),2.46(s,3H),2.70(t,2H),3.72(t,2H),6.80(d,1H),7.24(d,1H)
步骤E
通过于0℃将正丁基锂的1.6M溶液(39.24mL,62.82mmol)加入搅拌的N,N'-二异丙胺(9.9mL,75.4mmol)在四氢呋喃(45mL)中的溶液而制得LDA溶液。于0℃将该混合物搅拌15分钟。然后于–78℃将LDA溶液逐滴加入来自以上步骤D的标题化合物(5.6g,22.56mmol)和甲酸二乙酯(10.08mL,83.1mmol)在四氢呋喃(72mL)中的溶液。于–78℃将混合物搅拌40分钟。通过于–8℃加入饱和氯化铵溶液(100mL)将反应物淬灭。使混合物达到室温，用乙酸乙酯(200mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(50/50)进行纯化，得到标题化合物，为黄色油状物，于室温放置后它变为固体(7g,96％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.25(t,3H),1.51(s,9H),1.88-1.93(m,2H),2.72(t,2H),3.71-3.75(m,4H),4.13(q,2H),6.96(d,1H),7.34(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(2g,6.25mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，分批加入硼氢化锂(0.18g,8.14mmol)。于室温将反应混合物搅拌过夜。然后加入水(25mL)，于室温将混合物搅拌10分钟。加入乙酸乙酯(150mL)后，分离有机相，将水相用乙酸乙酯(50mL)萃取。将合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(1.48g,85％)，然后使用二氯甲烷/甲醇(4/1)进行纯化，得到N-Boc脱保护的产物，为黄色油状物(0.13g,11％)。
标题化合物:
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.88-1.93(m,2H),2.70(t,2H),2.92(t,2H),3.77(t,2H),3.98(t,2H),5.53(br-s,1H),6.75(d,1H),7.30(d,1H)
N-Boc脱保护的产物:
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.87-1.93(m,2H),2.03(s,1H),2.68(t,2H),2.80(t,2H),3.40(t,2H),3.89(t,2H),6.32(d,1H),6.48(br-s,1H),7.10(d,1H)
步骤G
将来自以上步骤F的标题化合物(822mg,2.95mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入三乙胺(0.9mL,6.5mmol)。加入甲磺酰氯(0.46mL,5.87mmol)后，于室温将反应混合物搅拌1小时。将混合物用二氯甲烷(50mL)稀释，用10％枸橼酸溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠(20mL)和盐水(20mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)进行纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.83g,78％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.88-1.93(m,2H),2.72(t,2H),2.92(s,3H),3.12(t,2H),3.74(t,2H),4.65(t,2H),6.86(d,1H),7.32(d,1H)
步骤H
将来自以上步骤G的标题化合物(0.83g,2.22mmol)溶于N,N'-二甲基乙酰胺(5.5mL)中，加入叠氮化钠(0.76g,11.65mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热16小时。将混合物用乙酸乙酯(55mL)和10％枸橼酸溶液(15mL)稀释。分离有机相，将其用饱和碳酸氢钠(15mL)和盐水(15mL)洗涤。将有机相通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(40/60)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.6g,84％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.51(s,9H),1.88-1.93(m,2H),2.72(t,2H),2.98(t,2H),3.69(t,2H),3.74(t,2H),6.84(d,1H),7.32(d,1H)
步骤I
将来自以上步骤H的标题化合物(0.6g,1.98mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入三苯膦(0.63g,2.38mmol)。于室温将反应混合物搅拌20小时，然后加入水(4mL)。继续搅拌过夜，真空除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)、然后使用二氯甲烷/甲醇(1/1,每500mL含有10mL氨在甲醇中的7M溶液)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物(0.5g,91％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.52(s,9H),1.66(br-s,2H),1.89-1.96(m,2H),2.72(t,2H),2.87(t,2H),3.11(t,2H),3.78(t,2H),6.80(d,1H),7.25(d,1H)
步骤J
将来自实施例8的步骤B的标题化合物(0.090g,0.238mmol)和来自以上步骤I的标题化合物(0.075g,0.27mmol)溶于甲苯(4.25mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.032g,0.048mmol)和叔丁醇钠(0.061g,0.65mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.021g,0.024mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～110℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)进行纯化，得到粗标题化合物。将粗物质再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(80/20)进行纯化，得到标题化合物，为黄色油状物(0.58g,42％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.40(s,9H),1.52(s,9H),1.86-1.92(m,2H),2.67-2.71(m,2H),2.93-2.99(m,2H),3.10-3.17(m,2H),3.68-3.73(m,2H),3.73-3.80(m,2H),4.23-4.27(m,2H),6.40(d,1H),6.68(d,1H),6.80(d,1H),7.06-7.09(m,1H),7.12(d,1H),7.23-7.29(m,2H),7.50-7.56(m,1H),8.50-8.53(m,1H)
步骤K
将来自以上步骤J的标题化合物(0.058g,0.1mmol)溶于氯仿(1.6mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(1.6mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(4mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.042g,86％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝1.71-1.78(m,2H),2.57-2.61(m,2H),2.79-2.84(m,2H),3.22-3.30(m,4H),3.47-3.50(m2H),3.59-3.63(m,2H),5.80(d,1H),6.44(d,1H),7.33(d,1H),7.42-7.83(m,4H),8.35(t,1H),8.518d,1H)
MS(ESI)；m/z＝375.29(MH+)
制备实施例10(化合物10):
步骤A
将双(三甲基甲硅烷基)氨化钾(5.99g,30mmol)溶于四氢呋喃(90mL)中，将该溶液冷却至–78℃。于–78℃一次性加入来自实施例9的步骤E的标题化合物(3.2g,10mmol)，于–78℃将该混合物搅拌45分钟。一次性加入溴化锰(II)(4.3g,20mmol)，继续于–78℃搅拌30分钟。然后于–78℃一次性加入N-氟苯磺酰亚胺(8.9g,28.2mmol)。于–78℃将该混合物搅拌30分钟，使其温热至室温过夜。将混合物用饱和碳酸氢钠(250mL)和乙酸乙酯(300mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(40/60)进行纯化，得到标题化合物，为淡橙色油状物(2.15g,60％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.30(m,3H),1.50(s,9H),1.88-1.96(m,2H),2.77-2.82(m,2H),3.73-3.78(m,2H),4.30-4.36(m,2H),7.31-7.34(m,1H),7.48-7.51(m,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(2.15g,6mmol)溶于乙醇(8mL)中，将该混合物冷却至0℃。然后历经10分钟分批加入硼氢化钠(0.23g,6mmol)。加入完成后，将混合物搅拌过夜，使其达到室温。将混合物用乙酸乙酯(80mL)、水(10mL)和10％枸橼酸溶液(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(40/60)进行纯化，得到标题化合物，为灰白色固体(1.08g,57％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.50(s,9H),1.92-1.98(m,2H),2.76-2.80(m,2H),3.77-3.82(m,2H),4.14(t,2H),5.28(br-s,1H),7.30-7.38(m,1H),7.52.7.56(m,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(1.08g,3.44mmol)溶于乙腈(6mL)中，加入吡啶(0.36mL,5.4mmol)。将该混合物冷却至0℃，逐滴加入三氟甲磺酸酐(0.63mL,3.77mmol)。加入完成后，于0℃将混合物搅拌30分钟。将混合物用乙醚(100mL)稀释，用10％枸橼酸(10mL)和盐水(10mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂，得到粗三氟甲磺酸酯，为橙色油状物。将粗三氟甲磺酸酯溶于N,N’-二甲基乙酰胺(7.5mL)中，加入叠氮化钠(1.1g,17.2mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热3小时。将混合物用乙醚(100mL)稀释，用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色油状物，于室温放置后它变为固体(0.87g,742％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.50(s,9H),1.92-1.98(m,2H),2.79(t,2H),3.78(t,2H),3.97(t,2H),7.36(d,1H),7.51(d,1H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(0.87g,2.58mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入三苯膦(0.81g,3.1mmol)。于室温将反应混合物搅拌20小时，然后加入水(10mL)。继续搅拌过夜，真空除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(98/2)、然后使用二氯甲烷/甲醇(95/5)进行纯化，得到粗标题化合物。将粗物质再次通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(99/1)、然后使用二氯甲烷/甲醇(9/1)进行纯化，得到标题化合物，为黄色液体，于室温放置后它变为固体/蜡状物(0.79g,98％)。标题化合物含有痕量的三苯基氧化膦。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.50(s,9H),1.70(br-s,2H),1.90-1.97(m,2H),2.74-2.79(m,2H),3.40(t,2H),3.74-3.79(m,2H),7.31(d,1H),7.48(d,1H)
步骤E
将来自实施例8的步骤B的标题化合物(0.09g,0.238mmol)和来自以上步骤D的标题化合物(0.085g,0.27mmol)溶于甲苯(4.25mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.032g,0.048mmol)和叔丁醇钠(0.061g,0.65mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.021g,0.024mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～115℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(40/60)进行纯化，得到标题化合物，为深黄色蜡状物(0.62g,43％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,9H),1.57(s,9H),1,92-1.98(m,2H),2.76-2.80(m,2H),3.13-3.18(m,2H),3.77-3.82(m,2H),4.22-4.32(m,4H),6.38(d,1H),6.52(br-s,1H),6.82(d,1H),7.06-7.09(m,1H),7.17-7.20(m,1H),7.26-7.31(m,2H),7.47-7.56(m,2H),8.51(m,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.06g,0.1mmol)溶于氯仿(1.6mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(1.6mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(4mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.039g,74％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝1.73-1.81(m,2H),2.67-2.71(m,2H),3.23-3.28(m,2H),3.32-3.38(m,2H),3.62-3.67(m,2H),3.97(t,2H),5.90-5.93(m,1H),6.80-6.83(m,1H),7.44-7.83(m,5H),8.38(t,1H),8.50-8.53(m,1H)
MS(ESI)；m/z＝411.45(MH+)
制备实施例11(化合物12):
步骤A
将铜粉(4.5g,70.8mmol)混悬在N,N’-二甲基甲酰胺(22.5mL)中，加入2-溴吡啶(4.5g,28.5mmol)和2-溴-2,2-二氟乙酸酯(6g,29.6mmol)。在沙浴中于～72℃将该混合物加热过夜。将混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，加入磷酸二氢钾(8.58g,63mmol)在水(50mL)中的溶液。于室温将混合物搅拌30分钟，过滤。将沉淀物用乙酸乙酯(30mL)洗涤，从滤液中分离有机相。将有机相用水(2×20mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(20/80)进行纯化，得到标题化合物，为黄色油状物(3.17g,55％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.33(t,3H),4.38(q,2H),7.40-7.45(m,1H),7.72(d,1H),7.86(t,1H),8.66(d,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(3.17g,15.8mmol)溶于乙醇(18mL)中，烧瓶被水浴围绕。然后历经10分钟分批加入硼氢化钠(0.6g,16mmol)。加入完成后，于室温将混合物搅拌90分钟。将混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，加入10％枸橼酸溶液直到混合物停止产生泡沫。另外加入水(25mL)，分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(95/5)进行纯化，得到标题化合物，为灰白色固体(2g,79％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝3.52(br-s,1H),4.23(t,2H),7.40-7.45(m,1H),7.72(d,1H),7.87(t,1H),8.61(d,1H)
步骤C
将来自以上步骤B的标题化合物(1.8g,11.3mmol)溶于乙腈(18mL)中，加入吡啶(1.18mL,17.8mmol)。将该混合物冷却至0℃，逐滴加入三氟甲磺酸酐(2.09mL,12.4mmol)。加入完成后，于0℃将混合物搅拌30分钟。将混合物用乙醚(200mL)稀释，用10％枸橼酸(60mL)和盐水(60mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂，得到粗三氟甲磺酸酯，为褐色油状物。将粗三氟甲磺酸酯溶于N,N’-二甲基乙酰胺(25mL)中，加入叠氮化钠(3.69g,56.7mmol)。在沙浴中于～75℃将该混合物加热3小时。将混合物用乙醚(200mL)稀释，用10％枸橼酸(60mL)和盐水(60mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为无色液体(1.29g,62％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝4.02(t,2H),7.39-7.45(m,1H),7.72(d,1H),7.86(t,1H),8.68(d,1H)
步骤D
将来自以上步骤C的标题化合物(1.4g,7.6mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，加入三苯膦(2.4g,9.1mmol)。于室温将该反应混合物搅拌48小时，然后加入水(15mL)。继续搅拌过夜，真空除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/甲醇(98/2)、然后使用二氯甲烷/甲醇(95/5)进行纯化，得到标题化合物，为淡黄色液体(1.05g,87％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.42(s,2H),3.42(t,2H),7.35-7.40(m,1H),7.68(d,1H),7.82(t,1H),8.65(d,1H)
步骤E
将可市售获得的2,6-二溴吡啶(0.5g,2.1mmol)溶于N,N`-二甲基乙酰胺(5mL)中，加入来自以上步骤D的标题化合物(0.31g,2.1mmol)。加入碳酸氢钾(0.23g,2.3mmol)后，在沙浴中于～145℃将该混合物加热8小时。将混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(30/70)进行纯化，得到标题化合物，为橙色油状物(0.13g,20％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝4.20(dt,2H),5.08(br-s,1H),6.42(d,1H),6.71(d,1H),7.20(d,1H),7.35-7.39(m,1H),7.66(d,1H),7.79(t,1H),8.63(d,1H)
步骤F
将来自以上步骤E的标题化合物(0.12g,0.39mmol)和来自实施例10的步骤D的标题化合物(0.14g,0.44mmol)溶于甲苯(7mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.053g,0.078mmol)和叔丁醇钠(0.1g,1.06mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.035g,0.039mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～115℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用二氯甲烷/丙酮(95/5)进行纯化，得到粗标题化合物。将粗物质再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(50/50)进行纯化，得到标题化合物，为深黄色油状物(0.62g,29％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.56(s,9H),1.90-1.97(m,2H),2.74-2.80(m,2H),3.78-3.82(m,2H),4.13-4.27(m,4H),4.50(br-s,1H),5.68-5.70(m,1H),5.92-5.98(m,2H),7.10(t,1H),7.26-7.32(m,2H),7.45-7.50(m,1H),7.63-7.68(m,1H),7.73-7.79(m,1H),8.63-8.67(m,1H)
步骤G
将来自以上步骤F的标题化合物(0.06g,0.11mmol)溶于氯仿(1.6mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(1.6mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(4mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.048g,77％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝1.71-1.78(m,2H),2.63-2.69(m,2H),3.30-3.36(m,2H),3.90-4.02(m,4H),5.81-8.48(m,9H)
MS(ESI)；m/z＝447.38(MH+)
制备实施例12(化合物11)
步骤A
将来自实施例11的步骤E的标题化合物(0.13g,0.42mmol)和来自实施例9的步骤I的标题化合物(0.13g,0.48mmol)溶于甲苯(7.6mL)中，用2,2-双-(二苯膦基)-1,1-萘(0.058g,0.084mmol)和叔丁醇钠(0.11g,1.15mmol)处理。然后通过向反应混合物中通入氩气而将反应混合物脱气，然后加入三(双苯亚甲基丙酮)双钯氯仿复合物(0.038g,0.042mmol)。将反应容器密封，在沙浴中于～115℃将混合物加热45分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)、水(5mL)和盐水(5mL)稀释。分离有机相，将其通过Na2SO4干燥，过滤，除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(70/30)进行纯化，得到粗标题化合物。将粗物质再次通过硅胶色谱法、使用乙酸乙酯/正庚烷(70/30)进行纯化，得到标题化合物，为灰色泡沫状物(0.07g,32％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):d＝1.54(s,9H),1.86-2.04(m,2H),2.66-2.74(m,2H),2.93-3.08(m,2H),3.48-3.66(m,2H),3.72-3.80(m,2H),4.18(t,2H),4.5(br-s,1H),5.65-5.98(m,2H),6.21-6.40(m,1H),6.76-6.83(m,1H),7.10(t,1H),7.25-7.36(m,2H),7.61-7.68(m,1H),7.72-7.77(m,1H),8.60-8.64(m,1H)
步骤B
将来自以上步骤A的标题化合物(0.07g,0.14mmol)溶于氯仿(2mL)中，用氯化氢在乙醚中的2M溶液(2mL)处理。于室温将反应混合物搅拌过夜，使用注射器除去溶剂。将固体物质溶于水(4mL)中，通过0.2μm过滤筒过滤。采集滤液，将溶剂蒸发，得到标题化合物，为深黄色玻璃状物(0.063g,88％)。
1H-NMR(400MHz,D2O):d＝1.63-1.75(m,2H),2.44-2.59(m,2H),2.73-2.85(m,2H),3.18-3.28(m,2H),3.41-3.49(m,2H),3.93(t,2H),5.73-5.80(m,1H),6.38-6.43(m,1H),7.25-7.50(m,4H),7.61-7.65(m,1H),7.85-7.90(m,1H),8.42-8.48(m,1H)
MS(ESI)；m/z＝411.45(MH+)
制备实施例13(化合物8):
按照WO2008/061795中描述的方法制得化合物8。
实验结果
测定溶解度的方法：
1.材料、试剂和设备
板振荡器,离心机(Eppendorf,8cm半径),HPLC(Dionex P580),柱：AgilentZorbax Eclipse XDB-C18快速解析(4.6×50mm,3.5mM,安捷伦公司(Agilent)),未着色的微型管1.5mL(Eppendorf,1.5mL),微量吸管100-1000mL,微量吸管10-100mL,Dulbecco氏磷酸盐缓冲液,DMSO,甲酸铵,甲酸98-100％,UP-H2O,乙腈：HPLC级,甲醇：GR分析,PVDF膜滤器。
2.方法
2.1用于分析的PBS5×(于4℃保存)和PBS1×的制备
PBS5×
将PBS盐(D-5652-10L)的全部内容物溶于2L UP-H2O中。
PBS1×
在分析前，将PBS5×稀释5倍以制备30mL PBS 1×，使用注射器和任意亲水膜如PVDF膜将溶液过滤。
2.2 HPLC溶剂(于室温保存)的制备
溶剂A:13.3mM甲酸铵/6.5mM甲酸/UP-水
将820±1mg甲酸铵和245μL甲酸溶于1000mL UP-H2O中。
溶剂B:6.0mM甲酸铵/2.9mM甲酸/90％乙腈/10％UP-水
将378±1mg甲酸铵和110μL甲酸溶于900mL乙腈和100mL UP-H2O中。
2.3化合物的储备液的制备
将化合物以25mM的浓度溶于DMSO中(最少50mL)。
2.4标准曲线的制备
制备15mL甲醇/H2O(6/4)。
在甲醇/H2O(6/4)中制备5种标准校准液：250μM、200μM、50μM、12.5μM和3.13μM。
在1.5微型管中配制每种标准浓度的制备物。
从每支微型管中取250-300μL直接转移到HPLC瓶中。
使用以下条件运行HPLC(来自微型管#6至#1)：
C18柱，0.7mL/min，20℃，于254nm的UV检测，进样体积:20μL，和以下梯度之一：
用于高极性/亲水性化合物的梯度
用于较低极性/亲脂性的化合物的梯度
2.5.用于水溶解度的样品的制备
一式三份制备化合物的样品
浓度[mM] 200μM 空白
PBS 1× 392μL 294μL
DMSO 4.8μL 6μL
25mM DMSO储备化合物 3.2μL —
于室温将其轻轻振摇(350rpm)24小时。
孵育时间后，于2500g(5500rpm)离心30分钟。
使用2.4中描述的条件，取200μL上层液样品进行HPLC分析。
2.6.数据处理
对在254nm处的每个标准点峰的面积进行积分。
通过以面积对理论浓度作图来确定化合物的标准曲线。根据线性回归建立标准曲线方程式(在0时具有截距，R2≥0.90)。
y(面积)＝斜率×x(浓度)
计算在水相中制备的一式三份中的每一份的平均面积。
通过下式确定上层液中化合物的浓度：
通过下式确定化合物的溶解度：
实施例：β-淀粉状蛋白(Ab)1-42肽积聚的抑制(ThT测定法)
使用硫黄素T荧光光谱分析测试了多种小分子抑制β-淀粉状蛋白(Ab)1-42肽积聚的能力。
Ab肽膜的制备
将Ab1-42冷冻干燥粉末(BaChem)在六氟异丙醇(HFIP)中重新配制成1mM。于室温将该肽溶液超声处理15分钟，搅拌过夜，将等分试样置于非硅化微量离心管中。然后在氩气气流下将HFIP蒸发。将所得的肽膜在真空下干燥10分钟，密封，于–80℃储存备用。
Ab1-42积聚的抑制
为了测定小分子介导的Ab1-42积聚抑制，在每次实验前将小分子溶于无水二甲基亚砜(DMSO,西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich)公司)中，达到浓度为7.4mM。将Ab1-42肽膜溶于DMSO中达到浓度为400μM。在非硅化孵育管中制备在PBS缓冲液中的测定溶液，达到以下浓度：330mM小分子、33mM Ab1-42、10μM硫黄素T(ThT)和12.8％DMSO。因此，小分子与Ab1-42的最终摩尔比为10:1。制备不含小分子的阳性对照以测定最大RFU。对于每个小分子，制备不含Ab1-42的阴性对照。在所有试验中测试3-氨基吡唑三聚体(Trimer)以确定独立实验之间的重现性。于37℃将溶液孵育24小时，在Perkin-Elmer FluoroCount荧光分光计上在黑色384孔测定板(Perkin-Elmer)中重复六次读取荧光光谱(相对荧光单位；RFU)。根据以下方程，积聚的抑制以平均％抑制或±1标准偏差(SD)来表示：
功能分子选择的截止标准(Cut-off criteria)定义为50％的抑制能力。显示出抑制能力超过70％的分子被认为是非常强的候选物。
为了测定IC50，在上述ThT测试中使用了化合物的以下稀释物：330μM、82.50μM、20.63μM、5.16μM、1.29μM、0.32μM和0.08μM。
实施例：本发明的化合物在长期眼高压/青光眼大鼠模型中的作用
通过将高渗盐水注射到Dark Agouti大鼠的一只眼的巩膜外静脉中而产生长期眼高压(OHT)/青光眼大鼠模型。18只大鼠在OHT眼中接受含有浓度为74mg/L的5μL体积化合物1(ACI-260)的玻璃体内注射液。18只大鼠用作阴性对照并接受5μl盐水，18只大鼠用作阳性对照并接受6μL刚果红(1.46mg/mL)。在治疗后3、8和16周在每个时间点将6只动物处以安乐死。
在给药后和处死前(在3天内)，使用Tonopen测定眼内压(IOP)，每4周一次。在处死前5至7天，给动物经脑内注射5μL 4％荧光金以标记视网膜神经节细胞(RGC)。为了定量活的RGC，使用特定的图像分析软件系统处理图像，活的RGC以每平方毫米表示。
在3周时，在任何动物中均未观察到眼内压降低。但是，与对照组相比，在用化合物1治疗的组(p<0.001)中以及在刚果红组(p<0.001)中活RGC的数目显著增加。在8和16周时，这些结果被证实，表明化合物1具有神经保护作用。结果显示在图1中。
*2次实验的平均值
通过比较用本发明的化合物(化合物1、2、3和4)得到的结果可以看出，较长的连接基降低了溶解度。
化合物5(不是本发明的化合物)不具有2,6-二氨基吡啶部分。可以看出，其生物活性显著降低。
化合物6(不是本发明的化合物)仅具有两个吡啶环。化合物7(不是本发明的化合物)仅具有两个吡啶环。与化合物1(本发明的化合物)相比，这两种化合物的活性均显著降低。
具有2,5-二氨基吡啶部分的化合物8(不是本发明的化合物)的溶解性显著差于具有2,6-二氨基吡啶部分的化合物1(本发明的化合物)的溶解度。
化合物9、10和11与化合物1的活性相当，但是它们的溶解度较差。当与化合物1相比时，只有化合物12的溶解度和活性均较差。

Claims (14)

1.具有通式(I)的化合物或其可药用盐：
其中：
吡啶环A、B和C独立地是未取代的；
L1和L2独立地选自具有式(a)或(b)的部分：
其中L1或L2中至少一个具有式(b)；
R1为氢；
R2为C1–6-烷基；
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12独立地是氢；
p是1或2；
q是0、1或2。
2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中化合物选自：
3.药物组合物，包含权利要求1或2的化合物或其可药用盐。
4.根据权利要求3的药物组合物，还包含可药用载体或赋形剂。
5.权利要求1或2的化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防与淀粉样物质和/或淀粉样蛋白有关的疾病或病症的药剂中的用途。
6.根据权利要求5的用途，其中疾病或病症是眼部疾病或病症。
7.根据权利要求6的用途，其中所述眼部疾病或病症是青光眼。
8.根据权利要求7的用途，其中所述青光眼是慢性开角型青光眼、瞳孔阻滞性青光眼、发育性青光眼、与其它眼部疾病有关的青光眼、与浅层巩膜静脉压升高有关的青光眼、与炎症和创伤有关的青光眼、眼内手术后的青光眼、高压型青光眼、常压型青光眼、急性闭角型青光眼、亚急性闭角型青光眼、慢性闭角型青光眼、联合机制型青光眼、先天性青光眼、无虹膜青少年青光眼、与角膜内皮疾病有关的青光眼、与虹膜和睫状体疾病有关的青光眼、与晶状体疾病有关的青光眼、与视网膜、脉络膜和玻璃体疾病有关的青光眼、与视网膜脱离和玻璃体视网膜异常有关的青光眼、新生血管性青光眼、色素性青光眼、剥脱综合征、晶状体引起的开角型青光眼、与晶状体膨大和脱位有关的青光眼、与角膜炎、巩膜外层炎和巩膜炎有关的青光眼、睫状体阻滞性青光眼、无晶状体和假晶状体、上皮、纤维和内皮增殖性的青光眼、与角膜手术有关的青光眼以及与玻璃体视网膜手术有关的青光眼。
9.混合物，包含权利要求1或2的化合物或其可药用盐以及任选的至少一种其它生物学活性化合物和/或可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
10.根据权利要求9的混合物，其中其它生物学活性化合物是用于治疗淀粉样变和/或眼内压的化合物。
11.根据权利要求9的混合物，其中其它生物学活性化合物选自β-阻断剂、碳酸酐酶抑制剂、α-或β-肾上腺素能激动剂、前列腺素药物、拟副交感神经药、胆碱酯酶抑制剂、乙酰胆碱合成、贮存或释放促进剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、用于治疗淀粉样变的化合物、对抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂、3-氨基-1-丙磺酸、1,3-丙烷二磺酸盐、α-分泌酶激活剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、神经递质、β-折叠断裂剂、清除/消耗β-淀粉状蛋白的细胞组分的引诱剂、N-末端截短的β-淀粉状蛋白、包括焦谷氨酸化β-淀粉状蛋白3-42的抑制剂、抗炎分子或胆碱酯酶抑制剂、M1激动剂、修饰淀粉样物质的药物和营养补充剂、抗体、疫苗。
12.权利要求1或2的化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病或病症的药剂中的用途，其中所述眼部疾病或病症选自青光眼、神经元退化、皮质视觉缺乏、由β-淀粉状蛋白沉积引起的白内障、眼部淀粉样变、原发性视网膜变性、黄斑变性、视神经玻璃疣、视神经病、视神经炎和格子状营养不良。
13.权利要求12的用途，其中所述与视觉系统的组织中病理学异常/改变有关的眼部疾病或病症为与视觉系统的组织中β-淀粉状蛋白相关性病理学异常/改变有关的眼部疾病或病症。
14.权利要求12的用途，其中所述黄斑变性为年龄相关性黄斑变性。
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