CN104226284B - 一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种巯基键合银离子色谱柱及其制备方法，所述的巯基键合银离子色谱柱，即利用液相色谱仪，使用巯丙基三甲氧基硅烷在溶剂环己烷的作用下与空白硅胶色谱柱在柱内发生原位反应，得到巯基键合硅胶柱，然后利用液相色谱仪直接将银离子原位结合到巯基键合硅胶柱上，即得巯基键合银离子柱。该巯基键合银离子色谱柱的制备方法简便、且可通过制备过程中调整空白硅胶色谱柱的粒径最终得到不同的小粒径的巯基键合银离子色谱柱，该巯基键合银离子色谱柱可用于超高效液相色谱或液质联用的仪器中中对食用油，特别是玉米油和大豆油中不饱和有机物即不同类型的甘油三酯的分离分析。
Description
技术领域
本发明涉及一种有效的色谱柱的制备方法，特别涉及一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，该巯基键合银离子色谱柱在超高效液相色谱或其与质谱联用中用于分离食用油中不同类型的甘油三酯。
背景技术
银离子色谱法是基于独特的不饱和有机化合物属性的，也就是与过渡金属络合的能力，不饱和化合物充当电子供体，银离子作电子受体，而形成烯键分子络合物，进而有效的分离含不同烯键的甘油三酯[1]。
目前使用银离子柱来分离含不同烯键的甘油三酯，主要包括使用单根银离子柱[2]，或者串联2根银离子柱[3]，甚至是串联3根银离子柱[4]来达到分离分析的作用。使用一根银离子柱进行分离比较常规，但不能完全分离出所有的不饱和有机物，因而部分学者采用多根串联的技术来进行分离，从而达到更好的分离效果。
在使用银离子柱的时候，有直接采用商品化的银离子柱，也有采用自制的银离子柱，自制的银离子柱更加方便。自制银离子柱主要是使用高效液相色谱仪在阳离子交换柱灌注硝酸银溶液，硝酸银吸附在交换柱上，从而达到制备的效果。但是自制的银离子柱，一般不仅需要使用多根银离子柱串联才能很好的分离，并且使用寿命不长，重现性较差。
为了使得银离子柱更有效的达到分离的作用，有学者采用巯基键合银离子柱[5,6,7]的方法来自制银离子柱，这种方法可以使得键合的银离子更稳定，使用时间更长，更加有益于不饱和有机化合物的分离。
γ-巯丙基三甲氧基硅烷结构
目前这种巯基键合银离子色谱柱的制备方法由于需要先合成相应的键合硅胶后，通过柱填料填装的方法制备出所需的色谱柱。因此该制备方法存在制备过程过于复杂，条件苛刻，人工操作繁琐，得到的结果准确度和重现性受到实验技术的限制，且通常用于制备较大粒径的巯基键合银离子固定相等技术问题。
参考文献：
[1]、http://lipidlibrary.aocs.org/Silver/silver.html.
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发明内容
本发明的目的是为了解决上述的巯基键合银离子色谱柱制备过程复杂，条件苛刻，人工操作繁琐，得到的结果准确度和重现性受到实验技术的限制，及通常制备较大粒径固定相等技术问题而提供一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，该制备方法操作简便、且可以制备小粒径固定相的巯基键合银离子色谱柱，该色谱柱可以用于超高效液相色谱或高效液相色谱与质谱联用中对食用油中不饱和有机物即不同类型的甘油三酯进行了分离。
本发明的技术方案
一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，具体包括如下两个步骤：
（1）、硅胶柱键合巯丙基
利用超高效液相色谱仪，以流速0.5-1mL/min的环己烷冲洗硅胶柱1h,取4mL巯丙基三甲氧基硅烷溶于100mL环己烷中，在40-80℃柱温条件下以0.2-0.5mL/min的流速冲洗硅胶柱6-12h，结束后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速使用环己烷冲洗硅胶柱1-2h，然后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速使用乙醇冲洗硅胶柱1-2h，然后维持40-80℃柱温不变，保持12-24h;
所述的硅胶柱长度为100-250mm，优选为100-150mm，硅胶柱中所用的硅胶粒径为1.3-20μm，优选为1.8-5μm；
所述的超高效液相色谱仪为日本岛津公司LC-30AD型超高效液相色谱仪；
（2）、巯基键合银离子
配制0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液，蒸馏水做为流动相;
以10-50μL/min的进样量进样0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，结束后使用蒸馏水以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，结束后改用甲醇以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，再用正己烷-乙醇7:3以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，最后用正己烷以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，即得到巯基键合银离子色谱柱。
上述所得的巯基键合银离子色谱柱可以用于超高效液相色谱或液质联用的仪器中用于分离食用油，如玉米油或大豆油中不饱和有机物即不同类型的甘油三酯。
本发明的有益效果
本发明的一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，由于以商品化硅胶柱为原料，直接在柱内合成目标固定相，即制备过程中采用原位制备法，因此具有简便、不需要柱填充仪器、便于实验室制备、重现性好等特点，最终所得的巯基键合银离子色谱柱相比较于普通的阳离子交换固定相制备所得的银离子柱更加的灵敏以及耐久。使用普通的阳离子交换柱在实验室中制备所得的银离子柱在实验过程中对不饱和物的分离往往得不到完美的效果，而且经多次实验后结果也存在着很大的差异，甚至经过几次实验后就开始出现无法出峰的现象，必须通过再键合才能确保继续实验。
进一步，本发明的巯基键合银离子色谱柱的制备方法所得的一种巯基键合银离子色谱柱，使用时，只需使用超液相色谱仪或液质联用的仪器对样品进行仪器操作，无任何人为影响，重现性好，分析时间短。而现有技术中的巯基键合银离子薄层色谱法对不饱和物进行分析的过程手动操作较多，人为影响因素大，重现性不好，耗时长。
进一步，本发明的巯基键合银离子色谱柱的制备方法，弥补了现有技术中银离子柱制备过程复杂、难以制备小粒径柱的不足之处，制备过程中调整空白硅胶色谱柱的粒径最终得到不同的小粒径的巯基键合银离子色谱柱。
进一步，本发明的一种巯基键合银离子色谱柱的制备过程简单，易于操作，使用其对不饱和物进行分析也同样简单易操作，相比较巯基键合银离子薄层色谱的方法来说，更加的简便。
附图说明
图1、应用实施例1中，利用实施例1所得的巯基键合银离子色谱柱进行色谱分析玉米油样品的总离子流图；
图2、应用实施例2中，利用实施例1所得巯基键合银离子色谱柱与实施例2所得巯基键合银离子色谱柱串联进行色谱分析大豆油样品的总离子流图。
具体实施方式
下面通过具体实施例并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。
本发明各实施例或应用实施例中所用的试剂：
国药集团化学试剂有限公司购买试剂乙腈（HPLC级）；
赛默飞世尔（中国）有限公司购买试剂正己烷（HPLC级）；
本发明的各实施例中所用的超高效液相色谱仪为日本岛津公司LC-30AD型超高效液相色谱仪；
液质联用测定所用的仪器为LCMS-2020型液相色谱质谱仪（岛津），其中色谱分离部分为LC-30AD型超效液相色谱仪。
实施例1
一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，具体包括如下两个步骤：
（1）、硅胶柱键合巯丙基
利用日本岛津公司LC-30AD型超高效液相色谱仪，使用环己烷以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1h，取4mL巯丙基三甲氧基硅烷溶于100mL环己烷中，在40-80℃柱温条件下以0.2-0.5mL/min的流速冲洗硅胶柱6-12h，结束后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速使用环己烷冲洗硅胶柱1-2h，然后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后维持40-80℃柱温不变，保持12-24h;
所述的硅胶柱为月旭材料科技（上海）有限公司的UltimateUHPLCSIO2硅胶柱，规格为2.1*150mm,硅胶柱中所用的硅胶粒径为3μm；
（2）、巯基键合银离子
配制0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液，蒸馏水做为流动相；
以10-50μL/min的进样量进样0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，结束后使用蒸馏水以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后用甲醇以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后再用正己烷-乙醇7:3以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，最后用正己烷以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，即得巯基键合银离子色谱柱。
应用实施例1
利用实施例1所得的巯基键合银离子色谱柱对玉米油进行液质联用色谱分离，具体步骤如下：
玉米油：益海嘉里食品营销有限公司金龙鱼玉米胚芽油；
液质联用测定所用的仪器：LCMS-2020型液相色谱质谱仪（岛津），其色谱分离部分为LC-30AD型超效液相色谱仪；
待测样品的准备：10μl金龙鱼玉米胚芽油溶于1000μl正己烷中，浓度0.1%（v/v）；
液相分离条件：流速为1mL/min，柱温为室温，以A:B的体积比为40：60的比例组成流动相，进样量5μL；
所述的A为正己烷，B为由正己烷：乙腈按体积比为99:1组成的混合液；
液相分离后直接进入质谱进行分析；
质谱分离条件：APCI电离源，正离子电离模式，质荷比范围300-1050，雾化气流速1.5L/min，干燥气流速10L/min，APCI温度350℃，DL温度200℃，检测器电压1.05kV。
上述液质联用色谱分离所得的玉米油样品的总离子流图如图1所示，从图1中可以看出通过巯基键合银离子柱，玉米油样品中的甘油三酯根据双键数由2-6共分离出了5个峰，分别对应着不同的甘油三酯，由此表明了利用巯基键合银离子柱可以对甘油三酯这类不饱和化合物进行分离分析。
实施例2
一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，具体包括如下两个步骤：
（1）、硅胶柱键合巯丙基
利用超高效液相色谱仪（岛津），使用环己烷以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1h，取4mL巯丙基三甲氧基硅烷溶于100mL环己烷中，在40-80℃柱温条件下以0.2-0.5mL/min的流速冲洗硅胶柱6-12h，结束后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速使用环己烷冲洗硅胶柱1-2h，然后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速使用乙醇冲洗硅胶柱1-2h，然后维持40-80℃柱温不变，保持12-24h；
所述的硅胶柱为月旭材料科技（上海）有限公司的UltimateUHPLCSIO2硅胶柱，规格为2.1*100mm,硅胶柱中所用的硅胶粒径为1.8μm；
（2）、巯基键合银离子
配制0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液，蒸馏水做为流动相；
以10-50μL/min的进样量进样0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，结束后使用蒸馏水以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后用甲醇以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后再用正己烷-乙醇7:3以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，最后用正己烷以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，即得到巯基键合银离子色谱柱。
应用实施例2
利用实施例2所得的巯基键合银离子色谱柱串联实施例1所得的巯基键合银离子色谱柱对大豆油进行液质联用色谱分离，具体步骤如下：
大豆油：益海嘉里食品营销有限公司金龙鱼大豆油；
液质联用测定所用的仪器：LCMS-2020型液相色谱质谱仪（岛津），其中色谱分离部分为LC-30AD型超效液相色谱仪。
待测样品的准备：10μl金龙鱼大豆油溶于1000μl正己烷中，浓度0.1%（v/v）
液相分离条件：流速为0.2mL/min，柱温为室温，以A:B的体积比为45：55的比例组成流动相，进样量5μL；
所述的A为正己烷，B为由正己烷：乙腈按体积比为99:1组成的混合液；
液相分离后直接进入质谱进行分析；
质谱分离条件：APCI电离源，正离子电离模式，质荷比范围300-1000，雾化气流速2.5L/min，干燥气流速10L/min，APCI温度240℃，DL温度200℃，检测器电压1.10kV。
上述液质联用色谱分离所得的大豆油样品的总离子流图如图2所示，从图2中可以看出大豆油的样品根据双键数由1-8以及相当碳原子数（所述的相当碳原子数等于碳原子个数减去两倍双键数，以下同）由38-48的不同共分离出了11种不同的甘油三酯，表明本发明制备方法所得的巯基键合银离子柱可有效对甘油三酯这类不饱和物进行分析。
综上所述，本发明的巯基键合银离子色谱柱的制备方法具有简便、不需要柱填充仪器、便于实验室制备、重现性好等特点，所得的巯基键合银离子色谱柱可以有效地对不饱和物，如甘油三酯进行分离，其分离主要依据不同的双键数，根据双键数的不同，按由少到多的顺序进行了分离，同时对于拥有相同的双键数，不同的相当碳原子数的化合物同样可以进行分离，分离效果明显，重现性好。
以上实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (6)
1.一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，其特征在于包括如下两个步骤：
（1）硅胶柱原位键合制备巯丙基硅胶
利用超高效液相色谱仪，以流速0.5-1mL/min的环己烷冲洗硅胶柱1h，取4mL巯丙基三甲氧基硅烷溶于100mL环己烷中，在40-80℃柱温条件下以0.2-0.5mL/min的流速冲洗硅胶柱6-12h，结束后在40-80℃柱温条件下以1mL/min的流速使用环己烷冲洗硅胶柱1-2h，继续使用乙醇在同一条件下冲洗硅胶柱1-2h，维持40-80℃柱温不变，保持12-24h;
所述的超高效液相色谱仪为日本岛津公司LC-30AD型超高效液相色谱仪；
（2）巯基原位键合银离子
配制0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液，蒸馏水做为流动相;
以10-50μL/min的进样量进样0.2-0.5g/mL的AgNO3水溶液40-100次，结束后使用蒸馏水以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后用甲醇以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，然后再用正己烷-乙醇7:3以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，最后用正己烷以0.5-1mL/min的流速冲洗硅胶柱1-2h，即得到巯基键合银离子色谱柱。
2.如权利要求1所述一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的硅胶柱长度为50-250mm，硅胶柱中所用的硅胶粒径为1.3-20μm。
3.如权利要求2所述一种巯基键合银离子色谱柱的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的硅胶柱长度为50-150mm，硅胶柱中所用的硅胶粒径为1.8-3μm。
4.如权利要求1、2或3所述的制备方法所得的巯基键合银离子色谱柱在超高效液相色谱或液质联用的仪器中分离食用油中不同类型的甘油三酯的应用。
5.如权利要求4所述的巯基键合银离子色谱柱在超高效液相色谱或液质联用的仪器中分离食用油中不同类型的甘油三酯的应用，其特征在于所述的超高效液相色谱仪为日本岛津公司LC-30AD型超高效液相色谱仪；
所述的液质联用的仪器为日本岛津公司LCMS-2020型液相色谱质谱仪，其中色谱分离部分为LC-30AD型超效液相色谱仪。
6.如权利要求1、2或3所述的制备方法所得的巯基键合银离子色谱柱在超高效液相色谱或液质联用的仪器中分离玉米油或大豆油中不同类型的甘油三酯的应用。
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