CN104224686A

CN104224686A - 冬虫夏草提取物的制备方法及应用

Info

Publication number: CN104224686A
Application number: CN201410549351.8A
Authority: CN
Inventors: 张伟
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-10-17
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2014-12-24

Abstract

本申请涉及冬虫夏草提取液的制备方法及应用。具体而言，本申请涉及制备冬虫夏草提取物的方法，其中所述方法包括将冬虫夏草与磷酸盐缓冲液接触的步骤。本申请还涉及利用所述方法制备的冬虫夏草提取物，包含所述冬虫夏草提取物的组合物或试剂盒，以及所述的冬虫夏草提取物在制备化妆品中的应用。本申请提供的冬虫夏草提取物有较好的抗氧化活性，并且对皮肤有延缓衰老的作用，有护肤功效。

Description

冬虫夏草提取物的制备方法及应用

技术领域

本申请涉及冬虫夏草提取物的制备方法及应用。具体而言，本申请涉及通过磷酸盐缓冲液制备冬虫夏草提取物的方法，以及所获得的冬虫夏草提取液在美容方面的应用。

背景技术

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)是一种特殊的虫和真菌共生的生物体，含有多种生物活性物质和营养物质，主要包括核苷类物质(虫草素、腺苷等)、虫草多糖、D-甘露醇、甾醇、超氧化物歧化酶及氨基酸等，具有抗肿瘤、抗菌、调节心血管、增强免疫等功能。冬虫夏草为冬虫夏草真菌(球壳目、麦角菌科、虫草属)的虫生真菌，寄生于蝙蝠蛾(鳞翅目蝙蝠蛾科蝙蝠蛾属昆虫)的幼虫，以其体内的有机物质作为营养能量来源进行寄生生活，经过不断生长发育和分化后，最终菌丝体扭结并形成子座伸出寄主外壳，从而形成的一种特殊的虫菌共生的生物体，它的一端是蝙蝠蛾幼虫的遗骸，另一端是寄生虫体繁殖的外形似草的真菌子座。

发明内容

发明人研究发现磷酸盐缓冲液能够用于制备冬虫夏草(Cordyceps sinensis)提取物，所述提取物有利地具有抗氧化、延缓衰老和/或保水作用。

因此，本申请提供制备冬虫夏草提取物的方法，其中所述方法包括将冬虫夏草与磷酸盐缓冲液接触的步骤。

本申请还提供用于制备冬虫夏草提取物的试剂盒，所述试剂盒包含冬虫夏草和磷酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述试剂盒还包含使用说明书。

本申请还提供磷酸盐缓冲液用于制备冬虫夏草提取物的应用。

本申请还提供利用所述方法制备的冬虫夏草提取物。

本申请还提供包含所述冬虫夏草提取物的组合物或试剂盒。在一些实施方案中，所述组合物或试剂盒是美容组合物或试剂盒，例如美容液，美容膏，美容套装等。在一些实施方案中，所述美容组合物和/或试剂盒可以包括其它辅剂，如表面活性剂、醇类。在一些实施方案中，所述美容组合物和/或试剂盒可以包括例如其它抗敏、保水和/或抑菌等成分。在一些实施方案中，所述试剂盒可以包含其它美容工具。

本申请还提供所述的冬虫夏草提取物在制备化妆品/美容剂中的应用。

在本申请的各种实施方案中，使用的磷酸盐缓冲液的pH值可以在7.0至8.2的范围内，包括例如7.1，7.2，7.3，7.4，7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，8.0，8.1，8.2的范围。可以通过将冬虫夏草破碎，放入配制的磷酸盐缓冲液中浸提适当时间(例如10min至240min，例如10min，20min，30min，40min，50min，60min，70min，80min，90min，100min，110min，120min，150min，160min，180min，240min等)，然后离心，即可容易地获得冬虫夏草提取物。在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的pH值在7.6至8.0的范围内。在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.8。

发明人研究发现冬虫夏草在不同pH磷酸盐缓冲液的提取物具有皮肤保水、延缓衰老等作用。发明人通过邻苯三酚自氧化法测定虫草磷酸盐提取液的自氧化抑制率；小鼠注射D-半乳糖建立衰老模型，鉴定衰老模型和使用虫草磷酸盐提取液皮肤涂布小鼠含水量的变化及SOD和MDA的变化。结果发现加入不同pH磷酸盐提取液后，邻苯三酚自氧化反应均有明显抑制作用，pH7.8时效果最好；衰老模型实验中，实验组与模型对照组含水量、SOD及MDA均有显著性差异(P＜0.01)，而pH7.2，7.4磷酸盐提取液的实验组与正常对照组之间没有显著性差异(P＞0.05)，pH7.6，7.8，8.0与正常对照组相比有显著性差异(p＜0.01)，显著提高SOD活性，降低MDA含量，其中pH7.8提取液效果最佳。因此，冬虫夏草磷酸盐提取液有较好的抗氧化活性，并且对皮肤有延缓衰老的作用，有护肤功效。

附图说明

图1：不同pH的磷酸盐提取物对邻苯三酚自氧化的抑制率。

具体实施方式

1材料和方法

1.1材料

0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.2，7.4，7.6，7.8，8.0

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)发酵液由中国农业科学院原子能利用所提供；

动物：3月龄雌性昆明小鼠，体重20-25，SPF级

1.2试验方法

1.2.1磷酸盐提取物制备：

1.2.1.1菌体细胞的制备：

将适量发酵液置于离心管中，2000rpm离心10min，出去上清液，得到菌体细胞沉淀。

1.2.1.2提取物制备：

沉淀按每克10mL磷酸盐缓冲液的比例，加入不同pH(7.2，7.4，7.6，7.8，8.0)的0.05mol/L磷酸盐缓冲液浸泡后冰浴中超声破碎(10kHz，15min)，浸提90min，于高速冷冻离心机中10000rpm离心20min，得上清液即为冬虫夏草提取液。

1.2.2提取物抗氧化活性检测：

利用邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出O₂ ^-，生成带色的中间产物，有色中间产物的累积时间有线性关系，一般维持在4min。加入酶液则抑制其自氧化速度，在325nm处测定溶液的吸光度。

在试管中按表1加入缓冲液和双蒸水，25℃恒温20min后加入25℃预热过的邻苯三酚(对照管用10mmol/L盐酸代替)，迅速摇匀，立即倒入比色杯中，在波长325nm处每30s测定一次吸光度值。

表1邻苯三酚自氧化速率测定加样表

对照管自氧化吸光度值为A，样品管所测吸光度为A₁，抑制率＝(ΔA/Δt-ΔA1/Δt1)/(ΔA/Δt)×100％。

ΔA/Δt为邻苯三酚自氧化时反应速率；ΔA1/Δt1为加入样品液后邻苯三酚自氧化反应速率。

1.2.3延缓衰老实验：

1.2.3.1分组处理：将小鼠分7组(n＝10)，分别为正常对照组(1)，模型对照组(2)，实验组(3～7)。

正常对照组：小鼠背部皮下注射等量于模型组D-半乳糖的生理盐水，1次/天，共6周。

模型对照组：小鼠用D-半乳糖按120mg/kg背部皮下注射6周，1次/天。造模同时背部皮肤4％硫化钠脱毛脱毛处理后给予生理盐水涂布，10mL/kg。

实验组：小鼠用D-半乳糖按120mg/kg背部皮下注射6周，1次/天。造模同时背部4％硫化钠脱毛剂脱毛(2cm×3cm)，皮肤给予冬虫夏草发酵液不同pH的磷酸盐提取物涂布，10mL/kg，1次/天，持续6周。

1.2.3.2皮肤含水量测定：连续给药6周后，颈椎脱臼处死小鼠。颈部皮肤清理后，切除1cm²皮肤，精确称量湿重，烘箱60℃过夜，称干重，皮肤含水百分率＝(湿重-干重)/湿重×100％。

1.2.3.3皮肤生化指标测定：取一定量脱毛背部皮肤组织(0.2g～0.5g)，用预冷的生理盐水漂洗去除皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，称重，量取9倍重量预冷生理盐水，用内切式组织匀浆机制成10％组织匀浆(冰水中进行)，反复冻融多次破碎细胞游离内容物。

参照超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒说明书、丙二醛(MDA)试剂盒使用说明书测定各匀浆SOD活力和MDA含量。

2结果与讨论

2.1冬虫夏草发酵液不同pH的磷酸盐提取物对邻苯三酚自氧化的抑制率如图1。

不同pH的磷酸盐提取物对邻苯三酚自氧化的抑制率不用，pH7.8时抑制效果最佳，具有最强的抗氧化效果。

2.2皮肤含水量实验结果(见表2)。

表明衰老模型对照组小鼠皮肤含水量与正常小鼠皮肤含水量有显著的统计学差异(P＜0.01)，提示造模成功。给予虫草提取物皮肤涂布的实验组小鼠皮肤含水量与衰老模型对照组小鼠皮肤含水量有显著性差异(P ＜0.01)，而与正常对照组小鼠皮肤含水量无显著性差异(P＞0.05)，提示虫草提取物能帮助小鼠衰老的皮肤恢复正常水分。而实验组6与其他实验组相比较，p＜0.05，表示在pH7.8时提取液最能保持小鼠皮肤含水量。

表2虫草提取物对小鼠皮肤含水量的影响

实验组3～7分别使用pH7.2，7.4，7.6，7.8，8.0的磷酸盐提取液

2.3皮肤生化指标测定结果(见表3)

模型对照组与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.01)，说明模型对照组小鼠皮肤组织中SOD有显著下降，MDA有显著提升，提示衰老模型造模成功。使用冬虫夏草pH7.2，7.4磷酸盐提取液涂布的实验组3，4与正常对照组在SOD与MDA均无显著差异(p＞0.05)，而使用冬虫夏草pH7.6，7.8，8.0磷酸盐提取液涂布的小鼠皮肤SOD活力显著强于正常对照组(p＜0.01)，MDA含量显著低于正常对照组。提示冬虫夏草pH7.6，7.8，8.0磷酸盐提取液能有效降低皮肤氧化损伤，延缓皮肤衰老。

表3小鼠皮肤SOD活力和MDA含量

2.4综上实验结果表明，虫草磷酸盐提取液抗氧化功效，能够明显提高衰老小鼠皮肤SOD活性，降低MDA含量，具有良好的抗皮肤衰老功效。提示虫草磷酸盐提取液在化妆品领域存在的价值，拓宽了虫草磷酸盐提取物在化妆品领域的应用。

Claims

1.制备冬虫夏草(Cordyceps sinensis)提取物的方法，其中所述方法包括将冬虫夏草与磷酸盐缓冲液接触的步骤。

2.权利要求1所述的方法，其中所述磷酸盐缓冲液的pH值在7.0至8.2的范围内。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述磷酸盐缓冲液的pH值在7.6至8.0的范围内。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.8。

5.用于制备冬虫夏草提取物的试剂盒，所述试剂盒包含冬虫夏草和磷酸盐缓冲液，优选所述磷酸盐缓冲液的pH范围为权利要求2-4中任一项定义的范围。

6.磷酸盐缓冲液用于制备冬虫夏草提取物的应用，优选所述磷酸盐缓冲液的pH范围为权利要求2-4中任一项定义的范围。

7.权利要求1-4中任一项的方法制备的冬虫夏草提取物。

8.包含权利要求7所述冬虫夏草提取物的组合物或试剂盒。

9.权利要求8所述的组合物或试剂盒，其中所述组合物或试剂盒是美容组合物或试剂盒，例如美容液，美容膏，美容套装等。

10.权利要求7所述的冬虫夏草提取物在制备化妆品中的应用。