CN104215780B - 检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗体。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测甲羟孕酮的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测鸡肉、鱼、虾样本中甲羟孕酮的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。<!--1-->

Description

检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，可定性、定量检测动物组织(鸡肉、鱼、虾等)样本中甲羟孕酮药物的残留量。
背景技术
甲羟孕酮（Medroxyprogesterone），中文别名：甲孕酮，安宫黄体酮，为合成的黄体酮衍生物，甲羟孕酮是一种人工合成的孕激素类药物。该药物为作用较强的孕激素，无雌激素活性，口服和注射均有效。其孕激素活性于皮下注射时为黄体酮的20～30倍，口服时为炔孕酮的10～15倍。肌注后局部储存在组织中缓慢释放，产生长效作用，可维持2～4周以上，剂量较大时可达3个月之久。口服经肝代谢，1～2天内以硫酸盐和葡萄糖醛酸盐形式主要从尿中排泄。临床上用于人的先兆性流产、习惯性流产、痛经、功能性闭经、功能性子宫出血等；大剂量可用作长效避孕药针，也可用于一些对激素敏感肿瘤的姑息治疗。该药物可产生不规则出血、闭经、体重改变、精神抑郁、失眠、恶心、乳胀等不良反应。近年来，欧盟认为，食用含有雌烯二醇、黄体酮、甲羟孕酮等激素的牛肉可扰乱人体内分泌、生长发育、免疫系统、生殖系统等方面的正常功能,还可能致癌、致畸，因而世界各国都明文禁止这类激素在动物中使用。
目前，检测该类药物的方法主要是气相色谱-质谱联用，液相色谱-质谱联用等仪器方法，资金、人员等投入成本较高。本发明运用残留物的免疫学检测方法，测定动物组织中甲羟孕酮药物的含量，具有检测限低、特异性强、操作简便、检测速度快、检测成本低，非常容易推广等优点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够检测动物组织(鸡肉、鱼、虾等)样本中甲羟孕酮药物残留量的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。
本发明试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗体。
所述甲羟孕酮偶联抗原是由甲羟孕酮半抗原与载体蛋白偶联得到，所述甲羟孕酮半抗原是由还原氨化反应得到，所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。
所述甲羟孕酮特异性抗体是以甲羟孕酮偶联抗原作为免疫原制备获得，所述甲羟孕酮特异性抗体可为甲羟孕酮单克隆抗体或甲羟孕酮多克隆抗体，其中优选甲羟孕酮单克隆抗体。
所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标记抗体是采用改良后的过碘酸钠法进行偶联得到的。
为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。
所述甲羟孕酮标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L、0.03μg/L、0.06μg/L、0.12μg/L、0.24μg/L、0.48μg/L。
当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A液为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1~2mol/L氢氧化钠溶液。
所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5%~1.0%吐温-20、0.01‰~0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1~0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
所述复溶液优选为pH值为7.0、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
其中在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为pH值为9.6，0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，封闭液为pH值为7.1~7.5，含有1%~3%酪蛋白、0.1~0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
本发明中酶标板的制备过程为：用包被缓冲液将包被原稀释成20μg/ml，每孔加入100μl，37℃避光孵育2h或4℃过夜，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150~200μl封闭液，37℃避光孵育1~2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。
本发明的检测原理为：
本试剂盒采用ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的甲羟孕酮和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗甲羟孕酮的酶标记抗体，用显色液显色，样本吸光度值与其所含残留甲羟孕酮的含量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中甲羟孕酮的残留量。
本发明还提供了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测甲羟孕酮的方法，它包括步骤：
（1）样品前处理；
（2）用试剂盒进行检测；
（3）分析检测结果。
本发明检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒主要采用ELISA方法定性或定量检测样品中甲羟孕酮的含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批量样品；主要试剂以工作液的形式提供，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点。本发明的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、价格便宜、携带便利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量。
附图说明
图1：甲羟孕酮半抗原合成路线图
图2：甲羟孕酮半抗原核磁共振氢谱图
图3：试剂盒标准曲线图
具体实施方式
下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。
实施例1试剂盒组分的制备
1、甲羟孕酮半抗原的制备
0.70g甲羟孕酮在5ml二甲基亚砜（DMSO）中的混合物，40℃下缓慢滴加入0.5ml1,3-丙二胺和0.5ml吡啶在10mlDMSO的混合液中，滴加完毕后，继续反应12h，旋蒸除去溶剂和未反应的丙二胺，定量得到甲羟孕酮-3-氨丙基肟。
取上述产物经核磁共振氢谱测定，如图2所示，1.0-2.5之间增加的亚甲基峰说明目标半抗原合成成功。
2、抗原的制备
免疫原制备——甲羟孕酮半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联得到免疫原。
取甲羟孕酮-3-氨丙基肟30mg，用1.5ml水溶解，得到溶液1；取50%的GA10μl加入溶液1中，室温下搅拌反应18h；取BSA100mg用1.5ml水稀释后加入溶液1中，反应24h；加入24mgNaBH4反应3h；用三蒸水透析48h,即得免疫原。
包被原制备——甲羟孕酮半抗原与卵清蛋白（OVA）偶联得到免疫原。
取甲羟孕酮-3-氨丙基肟30mg用1.5ml水溶解，得到溶液1；取50%的GA10μl加入溶液1中，室温下搅拌反应18h；取OVA30mg用1.5ml水稀释后加入溶液1中，反应24h；加入24mgNaBH4反应3h；用三蒸水透析48h,即得免疫原。
3、甲羟孕酮单克隆抗体的制备
动物免疫：将上述步骤得到的免疫原注入到Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。
细胞融合和克隆化：小鼠血清测定结果较高后，取其脾细胞，按8:1（数量配比）比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到分泌甲羟孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
细胞冻存和复苏：将单克隆杂交瘤细胞株用冻存液制成1×106个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。
单克隆抗体的生产与纯化：将Balb/c小鼠腹腔注入灭菌石蜡油0.5ml/只，7天后腹腔注射稳定的单克隆杂交瘤细胞株5×105个/只，7天后采集腹水。用辛酸-饱和硫酸铵法进行腹水纯化，-20℃保存。
4、酶标记抗体的制备
将甲羟孕酮单克隆抗体与辣根过氧化物酶（HRP）采用改良后的过碘酸钠法进行偶联。
5、酶标板的制备
用包被缓冲液将包被原稀释成20μg/ml，每孔加入100μl，37℃避光孵育2h，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入200μl封闭液，37℃避光孵育2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。
实施例2检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒的组建
组建检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，使其包含下述组分：
（1）包被甲羟孕酮偶联抗原的酶标板；
（2）甲羟孕酮标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L、0.03μg/L、0.06μg/L、0.12μg/L、0.24μg/L、0.48μg/L；
（3）用辣根过氧化物酶标记的甲羟孕酮单克隆抗体；
（4）底物显色液由A液和B液组成，A液为过氧化脲，B液为四甲基联苯胺；
（5）终止液为2mol/L硫酸；
（6）洗涤液为pH值为7.4，含有0.5%~1.0%吐温-20、0.01‰~0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1~0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；
（7）复溶液为pH值为7.0、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
实施例3动物组织样本中甲羟孕酮的检测
1、样品前处理
用均质器均质组织样本；称取3.0±0.05g均质物至50ml聚苯乙烯离心管中，量取90ml乙腈加入10ml0.1mol/L氢氧化钠溶液中，混匀，加入6ml该乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液，涡动2min，3000g以上，室温离心5min；取出1ml上清液至15ml干净的玻璃试管中，于50～60℃氮气流下吹干；加入1ml复溶工作液，用涡旋仪涡动1min；取100ul加900ul复溶工作液，混匀；取50ul用于检测。
2、用试剂盒检测
加甲羟孕酮标准品溶液或经前处理的样品溶液50μl到对应的包被有甲羟孕酮偶联抗原的酶标板微孔中，然后加入酶标记物50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加入洗涤工作液250μl/孔，充分洗涤4-5次，每次间隔10s，倒出板孔内洗涤液，用吸水纸拍干。加入底物液A液过氧化氢50μl/孔，再加入底物液B液四甲基联苯胺（TMB）50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min。加入终止液2mol/L硫酸50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值（OD值）。
3、检测结果分析
标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准品（0标准）的吸光度值的平均值,再乘以100%，得到标准品或样本的百分吸光度值。以标准品百分吸光率为纵坐标，以甲羟孕酮标准品浓度（ppb）的对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中甲羟孕酮的实际浓度。
实施例4甲羟孕酮技术参数的确定试验
1、试剂盒灵敏度和检测限
按照常规方法测定试剂盒灵敏度，试剂盒标准曲线最低点为4μg/L，标准曲线的范围为0.03~0.48μg/L，IC50（50%抑制浓度）浮动范围为0.08~0.12μg/L；对20份样品进行检测，从标准曲线上查出对应于各百分吸光度值的浓度，以20份样本浓度的平均值加上3倍标准差表示检测限，结果得该方法对样本的检测限为1μg/kg。
2、样本精密度和准确度试验
以回收率作为准确度评价指标，重复测定某一浓度样品的检测结果相对标准偏差（RSD%）作为精密度评价指标。计算公式为：回收率（%）＝实际测定值/理论值×100%，其中理论值为样品的添加浓度；相对标准偏差RSD%＝SD/X×100%，其中SD为标准偏差，X为测定数据的平均值。
按1μg/kg、2μg/kg、4μg/kg三个浓度甲羟孕酮分别对鸡肉、鱼、虾样品进行添加回收测定，每个样品做4个平行，用三批不同试剂进行测定，计算样品的平均回收率及精密度结果见下表。
表1鸡肉样本精密度及准确度试验
表2鱼样本精密度及准确度试验
表3虾组织样本精密度及准确度试验
以1、2、4μg/kg三个浓度的甲羟孕酮分别对动物组织样品进行添加，平均回收率在66.9%~93.4%之间；批内、批间相对标准偏差均小于10%。
3、交叉反应率试验
选择与甲羟孕酮具有类似结构和类似功能的药物进行ELISA测定，通过各种药物的标准曲线分别得到其50%抑制浓度，用下式计算试剂盒对其它药物的交叉反应率。
表4交叉反应率试验
药物名称 交叉反应率（%）
甲羟孕酮 100
醋酸甲羟孕酮 ＜1
甲地孕酮 ＜1
孕酮 ＜1
己烯雌酚 ＜1
炔诺酮 ＜1
4、试剂盒稳定性试验
试剂盒保存条件为2~8℃，经过12个月的测定，试剂盒的最大吸光度值（零标准）、50%抑制浓度、甲羟孕酮添加实际测定值均在正常范围之内。考虑在运输和使用过程中，会有非正常保存条件出现，将试剂盒在37℃保存条件下放置7天，进行加速老化实验，结果表明该试剂盒各项指标完全符合要求。考虑到试剂盒冷冻情况发生，将试剂盒放入-20℃冰箱冷冻7天，测定结果也表明试剂盒各项指标完全正常。从以上结果可得出试剂盒可以在2~8℃至少保存12个月以上。

Claims (8)

1.一种检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗体，所述甲羟孕酮偶联抗原是由甲羟孕酮半抗原与载体蛋白偶联得到，所述甲羟孕酮半抗原的分子结构式为：
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述甲羟孕酮半抗原的制备方法如下：
将0.70g甲羟孕酮在5ml二甲基亚砜中的混合物，40℃下缓慢滴加入0.5ml1,3-丙二胺和0.5ml吡啶在10ml二甲基亚砜的混合液中，滴加完毕后，继续反应12h，旋蒸除去溶剂和未反应的1,3-丙二胺，定量得到所述甲羟孕酮半抗原。
3.如权利要求1所述的试剂盒，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述酶标记抗体是酶标记的甲羟孕酮特异性抗体，所述甲羟孕酮特异性抗体是以甲羟孕酮偶联抗原作为免疫原制备获得，所述甲羟孕酮特异性抗体为甲羟孕酮单克隆抗体或甲羟孕酮多克隆抗体。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，当标记酶为辣根过氧化物酶时，底物显色液A液为过氧化氢或过氧化脲，底物显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1～2mol/L的硫酸；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，终止液为1～2mol/L氢氧化钠。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述洗涤液为pH值为7.4，含有重量百分比为0.5％～1.0％的吐温-20、0.01‰～0.03‰的叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液；所述复溶液为pH值为7.0、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液。
7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述甲羟孕酮标准品溶液的浓度分别为0μg/L、0.03μg/L、0.06μg/L、0.12μg/L、0.24μg/L、0.48μg/L。
8.一种检测样品中甲羟孕酮含量的方法，包括步骤：
(1)样品前处理；
(2)用权利要求1～7任一项所述的试剂盒进行检测；
(3)分析检测结果。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104897864B (zh) * 2015-06-18 2016-08-31 北京勤邦生物技术有限公司 检测金刚烷胺的酶联免疫试剂盒及其应用
CN111812317A (zh) * 2020-06-17 2020-10-23 北京勤邦生物技术有限公司 一种多氯联苯人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1472533A (zh) * 2002-07-29 2004-02-04 中国农业科学院饲料研究所 一种检测醋酸甲羟孕酮含量的试剂盒及其检测方法
CN101066998A (zh) * 2007-04-27 2007-11-07 江南大学 甲羟孕酮醋酸酯特异性抗体的制备及该抗体用于同源或异源酶联免疫分析的方法
CN101240025A (zh) * 2008-03-14 2008-08-13 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所 鼠抗醋酸甲羟孕酮(mpa)的单克隆抗体
CN101793894A (zh) * 2009-02-03 2010-08-04 王武康 一种检测甲羟孕酮的直接竞争酶联免疫测定试剂盒
CN102128931A (zh) * 2010-12-21 2011-07-20 江南大学 一种基于银增强的甲羟孕酮的检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1472533A (zh) * 2002-07-29 2004-02-04 中国农业科学院饲料研究所 一种检测醋酸甲羟孕酮含量的试剂盒及其检测方法
CN101066998A (zh) * 2007-04-27 2007-11-07 江南大学 甲羟孕酮醋酸酯特异性抗体的制备及该抗体用于同源或异源酶联免疫分析的方法
CN101240025A (zh) * 2008-03-14 2008-08-13 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所 鼠抗醋酸甲羟孕酮(mpa)的单克隆抗体
CN101793894A (zh) * 2009-02-03 2010-08-04 王武康 一种检测甲羟孕酮的直接竞争酶联免疫测定试剂盒
CN102128931A (zh) * 2010-12-21 2011-07-20 江南大学 一种基于银增强的甲羟孕酮的检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
醋酸甲羟孕酮的单克隆抗体及ELISA检测技术研究;杨泽晓;《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20081215(第12期);第二章-第四章 *

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