CN104208102B - 蛇粉蜂胶组合物、应用及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蛇粉蜂胶组合物，由蛇粉、蜂胶组成；其中，蛇粉、蜂胶的质量比为6‑9:4‑1。本发明还公开了上述蛇粉蜂胶组合物在制备用于增加免疫力的保健品或药物中的应用。同时本发明还公开了一种蛇粉蜂胶胶囊和蛇粉蜂胶片的制备方法。本发明的蛇粉蜂胶组合物，利用蛇粉与蜂胶的协同作用，能有效提高人体免疫功能，并且具有更好的保质效果。

Description

蛇粉蜂胶组合物、应用及制备方法

技术领域

本发明涉及营养和药物组合物领域，具体涉及一种蛇粉蜂胶组合物、应用及制备方法。

背景技术

当今社会是个日新月异的社会，随着社会的不断发展，竞争日趋激烈，工作和生活节奏不断加快，应酬也越来越多，人们所承受的压力也越来越大，由此而引起的亚健康呈现出不断上升的趋势，而免疫力低下是亚健康的重要特征之一。同时，免疫力低下也是老年人的常见症状，截止2013年底，我国60周岁及以上人口20243万人，占总人口的14.9％，65周岁及以上人口13161万人，占总人口的9.7％，所以我国已进入老龄化社会。人体免疫力低下易引发各种疾病，尤其是恶性肿瘤，所以老年人群中患癌症的比例比中青年高。为此，研发能真正有效提高人体免疫力的保健产品十分必要，这有利于提高中青年人的身体素质和老年人的延年益寿。

蛇肉是营养丰富的动物食品，新鲜蛇肉蛋白质含量约8.6％(冻干的蛇肉蛋白质含量可达到80％以上)，其中17种氨基酸占19.4％，而脂肪含量仅占约10％，每10克新鲜蛇肉还含有294I·U的维生素A，此外，蛇肉还含有多种有医药价值的成份。近代药理学研究表明，以蛇肉为原料制成的蛇粉具有很好的免疫增强作用。钱毅春等报道，将纯蛇粉灌胃小鼠30天，其脾脏和胸腺重量均高于对照组，环磷酰胺组重量最低，而纯蛇粉+环磷酰胺组有较明显的回升；同时，IgM-PFC数值、抗体积数，DTH及T细胞数在各组间的差异亦表现出相同的趋势，即环磷酰胺组与纯蛇粉+环磷酰胺组之间T细胞数有显著性差异(P＜0.05)，表明纯蛇粉能显著提高脾脏和胸腺重量，以及阻止免疫抑制剂引起的T细胞数下降而发挥提高细胞免疫功能的作用(钱毅春,乌尼尔,谢国梁,尹幸念,王莉.纯蛇粉对小鼠细胞及体液免疫功能影响的研究.中国预防医学杂志.2001,2(1):33-36.)。茆香存等报道，以27、270、810mg/kg体重比例给小鼠灌胃纯蛇粉28天，结果也发现各纯蛇粉组的脾脏指数明显高于水对照组(P＜0.05)，而810mg/kg组的DTH测定发现其耳肿胀度与对照组比较有显著性差异，表明高剂量的纯蛇粉对提高小鼠细胞免疫水平有明显的作用。同时，巨噬细胞吞噬试验测定结果显示，270、810mg/kg剂量组可明显提高小鼠的吞噬率(％)和吞噬指数(P＜0.05)(茆香存,王卓,仲伟鉴.雷氏纯蛇粉胶囊的免疫调节作用.中成药.1998,1:026.45.)。又如王坚报道，实验动物给予纯蛇粉0.05、0.25g/kg，连续28天后，分别测定红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、脑组织中过氧化脂质(LPO)、T淋巴细胞转化、溶血素(IgM)含量及外周血白细胞数(WBC)。结果显示，纯蛇粉可提高大鼠SOD活性，降低小鼠脑组织的LPO，增加T淋巴细胞转化、提高IgM含量以及升高WBC，说明纯蛇粉能提高实验动物的抗自由基能力及增强其免疫功能(王坚.纯蛇粉的抗自由基作用及其对免疫功能影响的研究.中国生化药物杂志.2000,21(3):135-137.)。

蜂胶是由西方蜜蜂从植物幼芽与树干上采集来的树脂，并混入它的上颚腺分泌物和蜂蜡加工而成的具有芳香气味的胶状固体物。其在临床上具有较好的提高人体免疫功能的作用，现被广泛用于制备各种保健品和中药制剂，并被列入卫生部“可用于保健食品的物品名单”。中医认为蜂胶具有补虚弱，化浊脂，止消渴功能，临床用于体虚早衰，高脂血症，消渴。现代药理研究证实，蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质，使其具有增强免疫、抗菌、消炎、止痒、抗氧化、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，对人体有着广泛的医疗、保健作用。关于蜂胶增强免疫力的报道已有较多，如于晓红等报道，蜂胶能够增强免疫功能低下小鼠的抗体生成细胞功能，提高溶血素含量，增强单核吞噬细胞功能，提示蜂胶有促进和调节机体体液免疫功能的作用，并增加机体吞噬细胞的吞噬作用(于晓红,李淑华.蜂胶对小鼠免疫功能影响的实验研究.中医药信息.2001,18(4):53-54.)。也有作者用MTT法、耳肿胀法、Jerne改良玻片法、血凝法、半体内法、乳酸脱氢酶测定法等多种方法，观察蜂胶提取物对小鼠脾淋巴细胞转化、迟发型变态反应、血清溶血素、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性状况，结果蜂胶提取物具有增强小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能的作用。陈璇等观察了蜂胶鱼油软胶囊对小鼠免疫功能的影响，結果显示与对照组相比，蜂胶鱼油软胶囊中、高剂量组能显著增加小鼠溶血空斑数，并能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率(P＜0.05)(陈璇,任泽明,杨锋,戴关海,童晔玲,王波波.蜂胶鱼油软胶囊对小鼠免疫功能的影响研究.中国现代医生.2013,51(14):7-9.)。

蜂胶还具有很好的抗菌作用。蜂胶不仅对酵母菌和霉菌具有抑制作用，而且可以杀死某些致病菌和病毒，中和细菌产生的毒素。Rybak等人对不同溶剂蜂胶提取液的抗菌活性进行研究，发现70％的蜂胶乙醇提取液对霉菌、假丝酵母菌和原虫均有较强的杀灭和抑制作用(Rybak-Chmielewska H,SCZZESNA T. róznych rozpuszczalników na biologiczna propolisu.Pszczelnicze zeszyty naukowe.1991,35:55-62.)。Park HoYong等人研究了韩国蜂胶提取液的抗菌活性，在所用的33种微生物(22种细菌，9种真菌)中，蜂胶液表现出广泛的抗菌性，特别是对革兰氏阳性菌和真菌，35％的乙醇提取液比浓度为100％的提取液效果好(Park H,OH HW,Park D,et al.Antimicrobialactivities of honey bee propolis extracts in Korea.Korean Journal ofApiculture.1995,10(1):53-56.)。Tosi等人研究了4种商业蜂胶提取液的抗菌活性，发现醇提液、植物油提液、丙烯乙二醇提液和甘油提液均表现出抗菌活性，特别是对革兰氏阳性菌(如葡萄球菌和八叠球菌)、酵母菌(假丝酵母菌和红酵母菌)以及表皮真菌的效果明显，抑菌直径范围在3～33mm之间。植物油提液、醇提液、丙烯乙二醇提液的抑菌时间可长达两周以上(Tosi B,Donini A,Romagnoli C,Bruni A.Antimicrobial activity of somecommercial extracts of propolis prepared with different solvents.Phytotherapyresearch.1996,10(4):335-336.)。陈洪涛等做了蜂胶乙醇提取液抑制霉菌的实验，指出蜂胶乙醇提取液与龙胆紫抑制黄曲霉和烟曲霉的效果无异，蜂胶浓度为8.3mg/ml时其抑菌效果十分显著(陈洪涛,朱国强.蜂胶液抑制霉菌试验.中国兽医杂志.1997,23(11):16-17.)。Scheller等人指出蜂胶乙醇提取液对葡萄球菌和其它致病性菌有抑制作用，而对非致病菌无影响(Scheller S,Kawalski H,Oklek K,et al.Correlation between virulence ofvarious strains of Mycobacteria and their susceptibility to ethanolic extractof propolis(EEP).Zeitschrift fuer Naturforschung.Section C.1998,53(11～12):1040-1044.)。Rubio等指出古巴蜂胶对假丝酵母菌、假单孢菌、链霉菌具有良好的抑制效果(Rubio OC,Cuellar AC,Rojas N,Castro HV,Rastrelli L,Aquino R.Apolyisoprenylated benzophenone from Cuban propolis.Journal of naturalproducts.1999,62(7):1013-1015.)。Ozcan等研究了蜂胶的抗真菌活性，测定0.5％、1％、2％、3％和4％浓度的蜂胶水提液在培养基中对青霉属、链孢属、链格孢数、苹果虫属、葡萄孢属的抑制情况，发现链格孢数和青霉属对所有浓度的蜂胶液敏感，而4％浓度的蜂胶液对以上所有属的细菌抑菌数达50％以上( M.Antifungal properties ofpropolis.Grasas y aceites.1999,50(5):395-398.)。Koo等人利用琼脂扩散法测定蜂胶的抑菌效果，并将结果跟临床上常用的山金车花抑菌效果进行比较，发现蜂胶抑制假丝酵母菌、葡萄球菌、肠道球菌、链球菌、放线菌的效果均比山金车花好，对放线菌的抑菌半径最大，且不受培养基基质的影响(Koo H,Gomes B,Rosalen P,Ambrosano G,Park Y,CuryJ.In vitro antimicrobial activity of propolis and<i>Arnica montana</i>againstoral pathogens.Archives of oral biology.2000,45(2):141-148.)。

蜂胶还具有保鲜防腐作用，杜更尧研究了14.9～31.8℃条件下不同浓度的醇提蜂胶液保鲜鸡蛋之效果，发现浓度为10.4％的蜂胶醇提液保鲜效果最好，保鲜时间为107天，1.6％和2.2％的保鲜时间为80天，3.9％的保鲜时间为90天，7.3％和15.9％的保鲜时间为100天。宋心仿研究了蜂胶液不同的使用方法对鸡蛋保鲜效果的影响，指出喷洒比浸渍保鲜效果好(宋心仿,邵有全.蜂胶制剂保鲜效果对比试验报告.中国养蜂.1999,50(2):6-6.)。汤凤霞等对蜂胶保鲜猪肉的效果进行了初步研究，发现蜂胶醇提液对新鲜猪肉有较好的保鲜效果。经8％蜂胶液保鲜的猪肉在36h后仍能保持新鲜，肌肉呈红色，脂肪洁白，硫化氢、挥发性盐基氮、过氧化酶等指标均符合国家一级鲜肉标准(汤凤霞,高飞云.蜂胶对猪肉保鲜效果的初步研究.宁夏农学院学报.1999,20(2):37-40.)。陈崇羔等研究蜂胶柠檬酸液对蜂王幼虫的保鲜效果，发现0.1％的蜂胶醇提液和0.5％的柠檬酸液综合保鲜效果最理想，蜂王幼虫于常温下浸没保存于其中7天，虫体挥发性盐基氮(VBN)仍小于150mg/kg，相当于肉类和鱼类的一级新鲜度，浸没保存于其中14天，虫体VBN值未超过250mg/kg，相当于肉类和鱼类的二级新鲜度(陈崇羔,刘后贵.蜂胶柠檬酸保鲜液对蜂王幼虫的保鲜效果.福建农业大学学报.2000,29(1):99-102.)。国外EI-Nawawy等对蜂胶液对酸奶中菌群体系的影响进行了研究，指出蜂胶液能有效抑制脱脂乳和酸奶的致病菌(El-Nawawy M,Mohamed M,Abdulsalam K.Propolis effect on some dairy lactic acid bacteria.Annals ofAgricultural Science,Moshtohor(Egypt).1993,31(4):2065-2072.)。Lim等指出蜂胶液能阻止猪油和棕榈油氧化，防止肉制品脂肪氧化变质(Lim D,Choi U,Shin D,JeongY.Antioxidative effect of propolis extract on palm oil and lard.KoreanJournal of Food Science and Technology(Korea Republic).1994,26(5):622-626.)。Han等人研究蜂胶醇提液和水提液对猪肉蛋白质和脂肪的影响，发现蜂胶水提液和醇提液均能有效阻止脂肪氧化和蛋白质酶解，水提液的防腐保鲜效果比醇提液好，并指出蜂胶水提液对肉制品具良好的防腐作用(Han S,Park H.A study on the preservation of meatproducts by natural propolis:effect of EEP on protein change of meatproducts.Korean Journal of Animal Science(Korea Republic).1995,37(5):551-557.Han S,Park H.Effect of ethanol extracted propolis(EEP)on fat oxidation ofmeat products.Korean Journal of Animal Science(Korea Republic).1996,38(1):94-100.Han S,Park H.A study on the preservation of meat products with waterextracted propolis(WEP).Korean Journal of Animal Science(Korea Republic).1996,38(6):605-612.)。埃及学者EI-Dieb等研究蜂胶对干酪中细菌和真菌的抑制效果，发现蜂胶液刷在干酪表面，无论包装与否，都能有效抑制大肠艾希氏杆菌、杂色曲霉菌、枯草芽孢杆菌、唾液链球菌、金黄色葡萄球菌和微球菌，其抑菌效果比乳酸链球菌和一般抗生素明显，且蜂胶液处理过的干酪口感比未处理过的好(El-Dieb S.The antibacterial andantifungal effect of honeybee propolis and its use on Ras cheese.Bulletin ofFaculty of Agriculture,Cairo Univ.(Egypt).1998,48(1):95-112.)。Yang等研究了蜂胶对干鱿鱼的作用，发现蜂胶液不仅能抑制干鱿鱼上的微生物繁殖，而且能使干鱿鱼保持原有水分、品质和风味不变(Yang S,Lee N,Hong SP,Bang H.Effects of propolistreatment on the quality of dried squid.Korean Journal of Food Science andTechnology.1999,31(2):356-360.)。

发明内容

本发明提供了一种蛇粉蜂胶组合物，利用蛇粉和蜂胶的协同增效作用，提高人体免疫功能，且组合物本身具有抗菌防腐作用。

本发明还提供了一种利用上述蛇粉蜂胶组合物制备用于增加免疫力的保健品或药物。该产品能够显著增强人体免疫功能，同时由于产品自身具有抗菌防腐作用，故不易变质。

本发明同时还提供了蛇粉蜂胶组合物胶囊和蛇粉蜂胶片的制备方法，制备工艺简单。

一种蛇粉蜂胶组合物，由蛇粉、蜂胶组成；其中，蛇粉、蜂胶的质量比为6-9:4-1。

作为优选，所述的蛇粉、蜂胶的质量比为7-8:2-3；更进一步优选为7:3；选用上述比例的蛇粉蜂胶组合物时，人体免疫功能作用显著。

作为优选，所述的蛇粉包括乌梢蛇、腹蛇、五步蛇、眼镜蛇、蔪蛇等中的至少一种制成的蛇粉。进一步优选为乌梢蛇蛇粉。所述的蛇粉可采用市售产品，也可自行制备，其制备方法具体步骤：活蛇→去皮和肠→洗净→100℃蒸汽灭菌2小时→红外线烘箱烘干→磨粉机磨成粉→80目过筛→备用。

作为优选，所述的蛇粉中蛋白质质量百分含量为40％～90％；进一步提高蛇粉蜂胶组合物的增强人体免疫功能。

作为优选，所述的蜂胶包括粗蜂胶、纯蜂胶等中的至少一种。所述的蜂胶可采用市售产品，也可自行制备，其制备方法具体步骤：粗蜂胶→冷冻→粉碎→乙醇提取→过滤→滤液→真空浓缩→蜂胶膏→冷冻保藏。

所述的蜂胶中总黄酮质量百分含量为6％～15％，进一步提高蛇粉蜂胶组合物的增强人体免疫功能和抗菌防腐作用。

所述的蜂胶(PROPOLIS)符合《中华人民共和国药典》中蜂胶的质量标准。蜂胶为蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物，补虚弱，化浊脂，止消渴的作用，用于体虚早衰，高脂血症，消渴。

本发明还提供了一种上述蛇粉蜂胶组合物在制备用于增加免疫力的保健品或药物中的应用。

作为优选，本发明提供了一种蛇粉蜂胶组合物胶囊，包括蛇粉蜂胶组合物，其中，蛇粉、蜂胶的质量比为6-9:4-1。

作为优选，所述的蛇粉蜂胶组合物胶囊中，蛇粉、蜂胶的质量比为7-8:2-3，进一步优选为7:3。

所述的蛇粉蜂胶组合物胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)活蛇烘干，磨成粉，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉；

(2)将蜂胶块与蛇粉按照比例混合，粉碎机粉碎，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶混合粉；

(3)将蛇粉蜂胶混合粉混合均匀，灌装胶囊，胶囊经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶胶囊。

作为另一种优选，本发明还提供了一种蛇粉蜂胶组合物片；包括蛇粉蜂胶组合物，其中，蛇粉、蜂胶的质量比为6-9:4-1。

作为进一步优选，所述的蛇粉蜂胶组合物胶囊中还包括赋形剂，按照质量百分比计算，包括：

蛇粉蜂胶组合物 30～60％

赋形剂 40～70％。

所述的赋形剂包括各种食用赋形剂，例如常见的赋形剂包括纤维素或淀粉。

所述的蛇粉蜂胶组合物片剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)活蛇烘干，磨成粉，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉；

(2)将蜂胶块与蛇粉按照比例混合，粉碎机粉碎，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶混合粉；

(3)将蛇粉蜂胶混合粉混合均匀，得到蛇粉蜂胶粉，再将蛇粉蜂胶粉与纤维素按物料比混合充分，压片，包衣，制成片剂，片剂经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶片。

本发明的蛇粉蜂胶组合物以及含有该组合物的保健品或药物其保健功能为“增强免疫力”，适合中青年人、老年人服用，以提高机体的免疫功能，起到防病健体的作用。由于该组合物无任何毒副作用可长期服用，适用人群广泛，所以，将有极好的市场需求。

本发明基于蛇肉的丰富营养价值及所含高蛋白的特性，存在着易污染变质的缺点，而蜂胶具有杀菌防腐作用并本身具有增强免疫力等功能，所以将蜂胶加入到蛇肉粉中既起到杀菌防腐作用，又增加了蛇肉粉促进免疫力的作用。本发明将乌梢蛇肉粉与蜂胶组合，其功能定位为增强免疫力。这一组合以蛇粉为主，另加适量蜂胶粉为组方，其中蜂胶粉起到防腐作用和增强免疫力作用。

本发明具有如下有益效果：

现有的纯蛇粉相比，本发明的组合物大大提高了增强免疫的作用和产品自身的保质效果，对中老年人具有很好的保健作用，目前国内外尚无该组方的产品，本发明填补了这一空白。与相同剂量的单味纯蛇粉及单味蜂胶相比，本发明的组合物利用蛇粉、蜂胶的协同增效作用，具有更好的增强免疫力功能和保质作用。

本发明的组合物可应用各种保健品或药物，适用性强，具有较好的药学和保健功能。

本发明的组合物胶囊或者片剂制备工艺简单，适于工业化生产。

具体实施方式

所用原料：纯蛇粉购于广州辉诚贸易有限公司。纯蜂胶购于杭州天厨蜜源保健品有限公司。

实施例1

将蛇粉(乌梢蛇纯蛇粉，蛋白质质量百分含量大于50％)与蜂胶块(总黄酮的质量百分含量大于10％)7：3(重量比，其他实施例同)混合，粉碎机粉碎，充分混合均匀，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶粉，制备得到蛇粉蜂胶组合物，灌装胶囊。胶囊经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶胶囊。

实施例2

将蛇粉(乌梢蛇纯蛇粉，蛋白质质量百分含量大于50％)与蜂胶块(总黄酮的质量百分含量大于10％)8：2混合，粉碎机粉碎，充分混合均匀，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶粉，制备得到蛇粉蜂胶组合物，灌装胶囊。胶囊经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶胶囊。

实施例3

将蛇粉(乌梢蛇纯蛇粉，蛋白质质量百分含量大于50％)与蜂胶块(总黄酮的质量百分含量大于10％)7：3混合，粉碎机粉碎，充分混合均匀，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶粉，制备得到蛇粉蜂胶组合物，再将蛇粉蜂胶粉与纤维素按1：1混合充分，压片，包衣，制成片剂，片剂经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶片。

实施例4

将蛇粉(乌梢蛇纯蛇粉，蛋白质质量百分含量大于50％)与蜂胶块(总黄酮的质量百分含量大于10％)8：2混合，粉碎机粉碎，充分混合均匀，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶粉，制备得到蛇粉蜂胶组合物，再将蛇粉蜂胶粉与纤维素按1：1混合充分，压片，包衣，制成片剂，片剂经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶片。

动物实验显示实施例1-4制备的蛇粉蜂胶胶囊或者蛇粉蜂胶片有明显的免疫增加功能和保质作用。下面以实施例1制备的蛇粉蜂胶组合物为例，进行详细的说明。

蛇粉蜂胶组合物与单味蛇粉或单味蜂胶对小鼠免疫功能影响比较

蛇粉蜂胶组合物主要由蛇粉、蜂胶组成，通过蛇粉蜂胶组合物与单味蛇粉、单味蜂胶对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验比较，血清溶血素测定值比较，观察蛇粉蜂胶组合物效果，现将试验结果报告如下：

1、材料

1.1实施例1制备的蛇粉蜂胶组合物，为灰黑色粉末，本实验以蒸馏水为溶媒将实施例1制备的蛇粉蜂胶组合物配制成供试液，并设单味蛇粉供试液、单味蜂胶供试液和等量蒸馏水对照液。

1.2实验动物和检测条件:实验动物使用许可证号为：SYXK(浙2014-0003)。实验用ICR小鼠上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证为：SCXK(沪)2013-0016，清洁级，雌性，体重20±2g。饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-2001。检测环境条件，温度范围20℃-24℃，相对湿度范围40％-70％。动物于试验前在动物房环境中适应3天。

1.3剂量设计:实施例1制备的蛇粉蜂胶组合物人推荐量为2.0g/日/60kg体重，本次实验设蛇粉蜂胶低剂量组1.0g/kg(相当于人推荐量30倍)，蛇粉蜂胶高剂量组2.0g/kg(相当于人推荐量60倍)，蛇粉组1.4g/kg，蜂胶组0.6g/kg、阴性对照组0.4ml/kg。阴性对照组使用蒸馏水。

1.4主要仪器:二氧化碳培养箱、离心机、可调移液器、电热不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器、医用净化台、显微镜、干燥箱及酶标分析仪等。

2、实验方法：

2.1ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验：

各组灌胃给受试物，每天一次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75ulConA液(相当于7.5ul/ml)，另一孔作为对照，置换37℃、5％(体积百分比)CO₂培养箱中培养72小时。培养结束前4小时，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入噻唑蓝(MTT)，培养4小时后加入DMSO，使紫色结晶完全溶解。在570nm波长处测定光密度值(OD)。最后用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力。

2.2血清溶血素测定

各组灌胃给受试物，每天一次，连续30天，在停受试物前4天，每只小鼠腹腔注射0.2ml2％(v/v)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。4天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，收集血清。取血清用生理盐水稀释200～500倍。将稀释后血清1ml置试管内，依次加入10％(v/v)SRBC0.5ml，补体(生理盐水1：10稀释)1ml。另设不加血清的对照管(以生理盐水代替)。置37℃水浴中保温15～30min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清液1ml，加都氏液3ml，同时另取10％(v/v)SRBC0.25ml，加都氏液4ml，充分混匀，放置10min后，于540nm波长处以对照管作空白，分别测定各管光密度(OD)值，用半数溶血值(HC50)表示。按下列公式计算，受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项实验结果阳性。

2.3数据处理：采用SPSS11.5统计软件分析。

3、实验结果

3.1蛇粉蜂胶组合物对小鼠脾淋巴细胞增值能力的影响：

结果见表1。蛇粉蜂胶组合物各剂量组均能明显提高ConA诱导小鼠脾淋巴细胞的增值能力，差异均有显著性(P＜0.05-0.01)。蛇粉组提高小鼠脾淋巴细胞的增值能力不显著(P＞0.05)，蜂胶组亦能明显提高小鼠脾淋巴细胞的增值能力(P＜0.05)，但作用没有蛇粉蜂胶组强。

表1.蛇粉蜂胶组合物与单味原料对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的比效

注：与阴性对照组(蒸馏水)比较，#P＜0.05。

3.2蛇粉蜂胶组合物对小鼠血清溶血素测定值的影响：

表2 蛇粉蜂胶组合物与单味原料对小鼠血清溶血素测定值的比效

注：与阴性对照组(蒸馏水)比较，#P＜0.05。

由表2可见。蛇粉蜂胶组合物各剂量组均能明显提高小鼠血清溶血素测定值(P＜0.05)。蜂胶组提高小鼠血清溶血素测定值能力不显著(P＞0.05)，蛇粉组亦能明显提高小鼠血清溶血素测定值(P＜0.05)，但从有效剂量比较作用没有蛇粉蜂胶组强。

4、小结：

实验结果表明:蛇粉蜂胶组合物高低剂量与阴性对照组(蒸馏水)比较，均能显者提高ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能(P＜0.05-0.01)和小鼠血清溶血素测定值(P＜0.05)；相同高剂量的蜂胶对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能也有明显的提高作用(P＜0.05)，但作用不如蛇粉蜂胶组合物强。相同高剂量的蛇粉对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能也有一定的提高作用，但作用不显著(P＞0.05)。相同高剂量的蛇粉能明显提高小鼠血清溶血素测定值(P＜0.05)，而相同高剂量的蜂胶对小鼠血清溶血素测定值无明显提高作用(P＞0.05)。

说明本发明蛇粉蜂胶组合物与相同剂量的单味蛇粉、单味蜂胶相比，本发明具有更好增强免疫力功能的作用。

蛇粉蜂胶组合物与单味原料抗细菌、霉菌酵母菌实险比较

取实施例1蛇粉蜂胶组合物25g，蛇粉25，蜂胶粉25g分别加225mL磷酸盐缓冲液，均质1min～2min，制成1:10的样品匀液。用1mL无菌吸管吸取1:10的样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中，振摇试管使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。将上述不同稀释度样品各取1ml，按GB47892—2010(食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定)进行菌落总数测定，按GB4789.15—2010(食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数)进行霉菌和酵母计数。结果见表3-4。

表3 菌落总数测定 (36℃±1℃培养48h±2h)

表4 霉菌和酵母菌计数 (28℃±1℃培养5d)

由表3-4可见，蛇粉中加入蜂胶后每克样品的菌落形成总数(cfu/g)由850(cfu/g)降至170(cfu/g)，而蜂胶的cfu/g为0。蛇粉中加入蜂胶后霉菌和酵母菌落形成总数由75(cfu/g)降至20(cfu/g)。说明本发明蛇粉蜂胶组合物与单味蛇粉相比，具有抑制蛇粉中微生物的生长，起到对产品本身的抗菌防腐作用。

Claims (10)

1.一种蛇粉蜂胶组合物，由蛇粉、蜂胶组成；其中，蛇粉、蜂胶的质量比为6-9:4-1。

2.根据权利要求1所述的蛇粉蜂胶组合物，其特征在于，所述的蛇粉包括乌梢蛇、腹蛇、五步蛇、眼镜蛇、蔪蛇中的至少一种制成的蛇粉。

3.根据权利要求1所述的蛇粉蜂胶组合物，其特征在于，所述的蛇粉中蛋白质质量百分含量为40％～90％；所述的蜂胶中总黄酮质量百分含量为6％～15％。

4.一种权利要求1-3任一权利要求所述的蛇粉蜂胶组合物在制备用于增加免疫力的保健品或药物中的应用。

5.一种含有权利要求1-3任一权利要求所述的蛇粉蜂胶组合物的用于增加免疫力的保健品或药物。

6.根据权利要求5所述的用于增加免疫力的保健品或药物，其特征在于，所述保健品或药物为蛇粉蜂胶胶囊。

7.根据权利要求5所述的用于增加免疫力的保健品或药物，其特征在于，所述保健品或药物为蛇粉蜂胶片。

8.根据权利要求7所述的用于增加免疫力的保健品或药物，其特征在于，所述的蛇粉蜂胶片中还包括赋形剂，按照质量百分比计算，包括：

蛇粉蜂胶组合物 30～60％

赋形剂 40～70％。

9.一种权利要求6所述的蛇粉蜂胶胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)活蛇烘干，磨成粉，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉；

(2)将蜂胶块与蛇粉按照比例混合，粉碎机粉碎，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶混合粉；

(3)将蛇粉蜂胶混合粉混合均匀，灌装胶囊，胶囊经辐照灭菌即制成蛇粉蜂胶胶囊。

10.一种权利要求7所述的蛇粉蜂胶片的制备方法，包括以下步骤：

(1)活蛇烘干，磨成粉，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉；

(2)将蜂胶块与蛇粉按照比例混合，粉碎机粉碎，80目过筛，得到粒径小于80目的蛇粉蜂胶混合粉；

(3)将蛇粉蜂胶混合粉混合均匀，得到蛇粉蜂胶，再将蛇粉蜂胶粉与纤维素按物料比混合充分，压片，包衣，制成片剂，片剂经辐照灭菌制成蛇粉蜂胶片。