CN104171691A - 一种鲟鱼亲鱼饲料 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鲟鱼亲鱼饲料。本发明经实验确认了在鲟鱼亲本期饲料中EPA和DHA两种必需脂肪酸在饲料中的用量、两者之间的重量份比例，以及分别占饲料总脂肪的含量，以及使用有机态微量元素和无机态微量元素进行比较。本发明还提供了所述亲本饲料的基础营养配方。经实验证实，本发明的饲料可明显促进鲟鱼母本繁殖期雌性激素的分泌，提高母本怀卵量、卵孵化率和受精率，以及仔鱼的生长速度、增加体重，并提高成活率。

Description

一种鲟鱼亲鱼饲料

技术领域

本发明涉及一种鲟鱼亲鱼饲料，是一种能促进鲟鱼繁殖性能及子代发育的专用饲料。

背景技术

亲鱼，也叫种鱼，是用来繁殖鱼苗的鱼，指发育到性成熟阶段，有繁殖能力的雄鱼或雌鱼。亲鱼应该选鱼中比较优秀的，因此保证其营养水平非常重要。

和其它动物一样，鱼类的繁殖性能直接受营养素的调控。亲鱼饲料中适宜的营养水平不仅可以显著促进卵子和精子的质量，还会对后代的生长性能产生长久影响(Izquierdo etal.,2001)。二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid，EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid,DHA)在维持细胞膜结构完整、维持渗透压、关键酶活性等方面具有重要的生理功能(Lee,2001)。而由于n-3HUFA在神经和视觉组织发育的重要性，鱼类在早期发育阶段对于n-3HUFA的需求会远远高于生长后期(Bruce et al.,1999；Sargent et al.,1999)，而鱼类在开口摄食外源营养前，主要依靠卵黄囊作为其营养来源。因此亲本的营养摄入与仔鱼发育直接相关。

虽然目前已经证实饲料中的n-3HUFA和VE直接影响鱼类亲本期的繁殖性能，但不同的鱼类，对于必需脂肪酸的需求可能有较大差别。例如，对于大部分海水鱼来说，n-3HUFA，特别是20C以上的多聚不饱和脂肪酸(PUFA)是生长期和繁殖期的必需脂肪酸。如真鲷(Sparus aurata)及其它鲷科鱼类，在生长期对20C以上PUFA的需求量为0.5-1％，但繁殖期的需要量可达1.6％以上(Watanabe et al.,1984；Fernández-Palacios et al.,1995)。七彩神仙鱼(Centropyge loriculus)繁殖期对n-3HUFA的需求量可达3.6％(Callan et al.2014)。然而对于淡水杂食性鱼类罗非鱼来说正好相反，当饲料中以大豆油为脂肪来源时，母本的繁殖性能显著高于鳕鱼油组，说明n-6系列脂肪酸是其必需脂肪酸，高n-3HUFA会抑制罗非鱼的繁殖性能(San9tiago&Reyes,193)。相对而言，传统的观点认为淡水鱼类对n-3HUFA的依赖性较低(NRC，2011)。但Lane(2005)发现淡水狼鲈(Morone chrysopes)繁殖期饲料需要补充较高量的n-3HUFA。

鲟鱼属鲟形目(Acipenseriforme)，是与恐龙同时代的生物，距今约有1亿3千多万年的历史，故有“活化石”之称。近年来由于捕捞过度，环境污染，拦河筑坝阻断生殖洄游路线等因素，世界鲟鱼资源急剧下降。鲟鱼苗种的培育成为水产养殖业发展的关键因素之一。而苗种发育质量的关键在于亲本的健康和营养来源。

鲟鱼个体庞大，亲本期营养研究非常困难，目前仅有鲁雪豹(2010)报道不同年龄中华鲟的肌肉中含有较高含量的EPA和DHA，其比例约为1:2。所以对于鲟鱼的亲鱼饲料中的必需脂肪酸研究很有必要。

EPA、DHA过量也会对亲鱼繁殖力造成负面影响。Fernández-Palacios et al.(1995)报道饲料中20C以上长链n-3HUFA的含量超过1.6％时显著提高真鲷亲鱼繁殖力，但超过2.18％时，过量n-3HUFA反而降低了亲本的怀卵量和卵的质量，而且增加饲料的成本。因此，必需脂肪酸的适当用量是需要研究的内容。

尽管有报道，对于海水鱼所需EPA、DHA两种脂肪酸的比例大致为DHA:EPA＝2:1，但由于EPA、DHA的适宜比例具有种属特性(Sargent等，1995)，而且该报道并非针对于亲鱼繁殖阶段，因此这个比例对于鲟鱼亲鱼繁殖中所需的EPA和DHA间的用量比，并不知道是否适当。

鱼类亲本期饲料中的脂肪酸结构直接影响其卵的脂肪酸组成(Harel et al.1992)。卵黄囊的营养作为亲本后代早期的唯一营养源，直接影响其后代的发育和存活。海水肉食性鱼类仔稚期对HUPA(DHA+EPA)的需求量通常在0.5-1％之间，1％的效果较0.5％的更好。Rodriquez et al(1997)报道真鲷开口饵料(轮虫)中DHA：EPA为1.5时，效果好于0.6组。而具体到鲟鱼，属于亚冷水性鱼类，对脂肪的需求量相对较高，通常鲟鱼饲料中的脂肪水平为12-16％，其必需脂肪酸的需求量尚没有文献报道。EPA、DHA两种脂肪酸的适宜比例具有种属特性(Sargent等，1995)，对于海水鱼大致为DHA:EPA＝2:1。

此外，脂肪酸的氧化会对鱼类机体的损伤，影响亲鱼繁殖力。因此，饲料中含有较高含量的n-3HUFA时需要特别考虑使用抗氧化保护措施，避免在空气中会自发地发生氧化反应而发生酸败。在现有技术中已知的油脂类抗氧化剂中选择合适的品种及用量，也是鲟鱼亲鱼繁殖饲料配方中应研究的内容。过量n-3HUFA的负面效应很大程度上来源于饲料的氧化，氧化应激对鱼类机体的损伤已有很多报道，主要体现为血浆中自由基升高，血脂代谢受阻，肝功能、肠道损伤等(Yun et al.2013)。无机态矿物质对维生素和油脂均起到促进氧化的作用(曹春燕等，2012)，使用氨基酸螯合态矿物质可有效保护维生素，对脂肪的氧化程度大大下降。天然油脂暴露在空气中会自发地发生氧化反应，氧化产物分解生成低级脂肪酸、醛、酮等，产生恶劣的酸臭和口味变坏等，这一现象就称为油脂的自动氧化酸败，此现象是油脂及含油食品败坏变质的主要原因。油脂的自动氧化遵循自由基(也称游离基)反应机制，油脂类抗氧化剂主要有丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、生育酚(维生素E)等，它们皆属于酚类抗氧化剂，在形成自由基后比较稳定。其中TBHQ对于油脂的保护效率最高。

但是，目前关于淡水肉食性鱼类饲料DHA/EPA比例以及同时结合抗氧化体系的研究尚属空白，特别是在亲本饲料中。鱼类亲本期的研究难度很大，样本稀缺昂贵，特别是对于鲟鱼这类性成熟晚，个体庞大的物种，亲本期营养基本处于空白状态。鱼油是最重要的n-3HUFA来源，不同品种鱼类制备的鱼油EPA，DHA的含量和比例差别较大，鉴于DHA在亲本繁殖和仔鱼发育阶段的特殊功能，研究淡水肉食性鱼类亲本期饲料中DHA和EPA的适宜添加量和适宜比例以及饲料的氧化保护非常必要。目前急需营养全面，适口性好且价格合理的淡水肉食性鱼类专用亲本饲料。

发明内容

本发明的目的是提供一种鲟鱼亲鱼饲料。特别是提供饲料中必需脂肪酸和抗氧化剂的合适品种及用量，以充分满足鲟鱼消化吸收和亲本期营养需求和子代发育。

本发明人研究了在淡水肉食性鱼类亲本饲料，经过大量实验确认了以下内容：

1、鲟鱼亲本饲料中需要两种必需脂肪酸：EPA(20碳5烯酸)和DHA(22碳6烯酸)；

2、所述两种必需脂肪酸在饲料中的含量(重量百分比)，分别为：

EPA 0.73～0.98％，DHA 1～1.4％。

3、两种必需脂肪酸之间的重量份比例为：EPA:DHA＝1:1.9～2.2。

4、脂肪酸来源的优选原料：选自鳕鱼油、裂壶藻粉、海洋磷脂、大豆磷脂中的2种或多种；

5、两种必需脂肪酸占饲料中总脂肪的含量，分别为：

EPA 8-10％，DHA 15-17％。

本发明提供的饲料用基础营养配方添加上述合适用量的必需脂肪酸来源，即可配制成本发明的的亲本期饲料。

所述基础营养配方可依据本领域技术人员的常识和不同鱼的需要而确定。

为避免饲料中的高度不饱和脂肪酸EPA和DHA的氧化，饲料中还可加入抗氧化剂。所述抗氧化剂选自特丁基对苯二酚(TBHQ)和维生素E醋酸酯中的一种或二种。

配制方法是将抗氧化剂与维生素、有机态多种矿物质等制成抗氧化剂预混剂，加在基础营养配料中。抗氧化剂预混剂的用量为饲料量的0.2-1份。优选用量是0.5-1份(重量份)。

在本发明一种实施方式中，抗氧化剂预混剂是分别先配制维生素预混料和矿物质预混料，然后再将二者和抗氧化剂预混而成。

所述有机态多种矿物质选自酵母硒和金属氨基酸螯合物，如氨基酸螯合铁、氨基酸螯合锌、氨基酸螯合铜、氨基酸螯合錳等。

本发明提供的优选抗氧化预混剂配方是(mg/kg饲料)：特丁基对苯二酚(TBHQ)：150-200mg/kg，维生素E醋酸酯：800-1000g/kg，氨基酸螯合铁：450-500mg/kg；氨基酸螯合锌：300-350mg/kg；氨基酸螯合铜：20-25mg/kg；氨基酸螯合錳：30-40mg/kg；酵母硒：25-50mg/kg。

本发明提供的优选基础营养配方是：

鱼粉35-45份，磷虾粉5-8份，大豆浓缩蛋白15-20份，面粉18-22份，维生素和矿物质预混剂1-2份，Grobiotic3-5份。

所述Grobiotic为市售饲料添加物，美国国际原料公司(international ingredientcorporation)生产。为乳源性益生元，是一种混合物，由部分自溶的啤酒酵母，奶组分，晒干的发酵产物(35.2％粗蛋白；1.7％粗脂肪和53％单糖和多糖包括低聚糖)组成。

其中，大豆浓缩蛋白的优选用量是16-18份，面粉21％的优选用量是21份，以上所述份是重量份。

基础营养配方的选定，主要是依据不同淡水肉食性鱼类亲鱼和仔鱼营养需求配制，满足基本蛋白质(氨基酸)、脂肪、能量及维生素和矿物质等营养素供给。通常主要蛋白来源应选用高蛋白和易于消化吸收、新鲜度高的原料。

在本发明一个实施例中采用了如下配方

北欧低温干燥鱼粉40％，南极磷虾粉6％，维生素及矿物质预混料2.5％，抗氧化预混剂1％，Grobiotic3％；大豆浓缩蛋白：16.5％，面粉21％，海洋磷脂2％，大豆磷脂2％，鱼油4％，裂壶藻粉2％。

本发明用不同脂肪源的亲本饲料，对繁殖期的西伯利亚鲟母本及其与史氏鲟的杂交子代进行了研究验证，考察的指标和结果如下：

1.对母本繁殖性能影响显著

采用含不同比例DHA/EPA，以及是否采用专用抗氧化预混剂的饲料(配方1、2和3)饲喂鲟鱼亲鱼，考察对鲟鱼雌性亲本繁殖性能的影响。结果发现，对鲟鱼亲本繁殖性能和子代生长发育的影响均显著高于对照组，使用专用抗氧化预混剂的西伯利亚鲟亲本的繁殖力和配方2组没有显著差异。

2.子代生长和体重

实验组西伯利亚鲟和史氏鲟杂交子代生长性能与商品饲料对照组相比变化明显，总体均优于商品饲料组(P<0.05)。

具体实施方式

亲鱼饲料中DHA和EPA用量和二者间的比例对西伯利亚鲟亲鱼繁殖力和仔鱼生长、存活的影响

一、试验亲鱼饲料配方及配制

1.试验亲鱼饲料基础配方，包括两部分：

1)基础营养配方(重量百分比)：北欧低温干燥鱼粉40％(Triple nine,丹麦)，南极磷虾粉6％，维生素及矿物质预混料2.5％，抗氧化预混剂1％，Grobiotic3％；大豆浓缩蛋白：16.5％，高筋小麦面粉21％。

其中，所述抗氧化预混剂配比为：特丁基对苯二酚(TBHQ)：150-200mg/kg，维生素E醋酸酯：800-1000g/kg，有机态多矿：氨基酸螯合铁：450-500mg/kg；氨基酸螯合锌：300-350mg/kg；氨基酸螯合铜：20-25mg/kg；氨基酸螯合錳：30-40mg/kg；酵母硒：25-50mg/kg。

脂肪源：磷虾油2％，大豆磷脂2％，鱼油4％，裂壶藻粉2％，配制DHA/EPA为2:1的饲料；

对照组(对比例)饲料：

选用市售常用，市场反映较优的台湾统一企业生产的商品鲟鱼亲鱼饲料——“统一”饲料进行对比，其DHA/EPA比例为1:2。具体用量见表1。

表1 对比例和实施例中脂肪源和抗氧化预混剂用量(重量份比)

表2 两种必需脂肪酸在饲料中的含量(％)

表3 两种必需脂肪酸占饲料总脂肪的含量(％)

2.试验饲料加工方法

1)将上述配方中1)部分中除维生素外的其它大宗原料，经过一次粗粉均混合均匀后，再经过微粉粹至80目；

2)加入维生素、裂湖藻粉、海洋磷脂和大豆磷脂，以及抗氧化预混剂混匀；

3)加入适量水(20-25％)进入预调质器，调质60s后进行膨化挤压成8.0mm大型沉性颗粒饲料，之后在烘干机中烘干30min，之后将1.2中的鱼油进行真空后喷涂，冷却后则得到适合鲟鱼亲本阶段摄食的饲料。

表4 试验饲料和对照饲料的营养成分含量(％)

注：以上为实测值

二、试验动物及饲养方法

2.1亲鱼养殖试验

135尾进入性成熟阶段的西伯利亚鲟母本平均分成3组，每组45尾，每一尾作为一个重复，养殖在室外圆形流水池中。平均养殖密度为10kg/m².每组亲鱼分别饲喂3组试验饲料，每日表观饱食投喂两次，共进行6个月。试验期间水温13～15℃，pH＝7.5～8.0,氨氮(0.07-0.15mg L^-1)和亚硝酸盐态氮(0.06-0.09mg L^-1)均符合渔业用水标准。

进入繁殖期后，每组选择5尾进入待产期的西伯利亚鲟亲鱼，称重后，注射8μg kg-1体重的LHRH-A2。通过微创手术取出卵巢中所有卵，其中50g在液氮中冷冻后置于-80℃用于脂肪酸的检测。取卵后，尾静脉取血5ml,4℃保存过夜后离心取血清，-80℃保存用于测定激素水平。采卵后的亲鱼重新称重，用于测定繁殖力。繁殖力以每kg体重亲本所产卵的重量(g)为计。所有卵与史氏鲟(A.schrencki)的精子进行受精。受精3h后，每尾鱼随机取100g卵在10％福尔马林液中固定，对单精受精卵的比例进行计数(占单精受精卵、多精受精卵和未受精卵的总数的比例)。

2.2仔鱼养殖实验

分别取3组鱼卵孵化后3日龄仔鱼进行亲本营养对子代生长性能影响实验。每组杂交鲟仔鱼设4个重复，每个重复1000尾苗。试验在北京市昌平区中国农业科学院南口中试基地水产安全评价中心进行，采用流水循环系统。

苗种培育系统为室内循环水养殖系统，每个育苗桶是底部为圆锥形的玻璃钢桶(256L)，底部放置平整聚氯乙烯(PVC)板。整个试验用水均直接来自地下井水，控制水温(20±1)℃，pH 7.8～8.5，DO≥9mg/L，随鱼苗增大适当加大充气量，氨态氮浓度≤0.5mg/L，亚硝态氮浓度≤0.1mg/L。

3日龄的西伯利亚鲟仔鱼进入系统后，每隔1h观察1次，用小抄网捞取死亡鱼苗，并对其计数。每天8:00和14:00用虹吸管清理残饵、粪便。7日龄开始开口，根据情况每小时投适量商用鲟鱼微颗粒饲料，至少每4h清理1次(具体清理时间视残饵量情况而定)。日投喂量按体重的100％，开口后期，投喂量可降低到体重的40％～60％。10日龄前，1h饲喂1次，10日龄后，根据具体情况2～3h饲喂1次。每次摄食时间控制在0.5h以内。饲喂实验进行至30日龄后，每桶选取100尾鱼测量体长和体重，之后对整桶鱼进行称重后清点存活数量。仔鱼全长、体长和体重测量：每天每桶取刚刚死亡并且有代表性的鱼苗5尾，用游标卡尺测定全长。用万分之一分析天平测量鱼苗体重。7日龄前不同处理组统一测量全长。

特定生长率(SGR，％/d)＝[(ln鱼体末重－ln鱼体初重)/饲喂天数]×100％

成活率(Survival，％)＝[(试验开始鱼尾数－试验结束时鱼尾数)/试验开始鱼尾数]×100％

2.3检测与分析

饲料中干物质、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量采用AOAC，1996的方法测定。鱼卵经冻干后，采用Santha&Ackman(1990)的方法，使用气相色谱法测定脂肪酸组成。血清中的雌二醇(E2)、皮质醇(COR)、睾酮和人绒毛膜促性腺激素采用R-911放射免疫法(RIA)测定。血清促黄体素和11-酮基-睾酮采用ELASA方法测定。

三、实验结果的分析方法

试验结果用平均数±标准差表示，对数据进行单因素方差分析(ANOVA)，并结合Duncan’s法进行多重比较，检验处理间的差异显著性(P<0.05)。

四、实验结果

1、亲本繁殖性能

从表5中可见，实验组西伯利亚鲟母本的繁殖力评价指标中平均卵重和受精率均显著高于商品饲料组(实际生产水平)。平均体重怀卵量(Fecundity)虽然没有统计学差异，但实验组为123.1g/kg体重，而对照组为111.5g/kg体重，仍具有明显的生产优势。

1、子代生长性能

亲本阶段的营养对仔鱼的生长性能影响显著，其中对照组仔鱼的各项指标均最低，其次为配方2组，结合使用高DHA和抗氧化预混剂的配方3组的仔鱼得到最佳生长性能，其存活率和增重率均显著高于对照组和配方2组。

表5 西伯利亚鲟亲本繁殖性能和子代35日龄生长性能结果

注：同一行中不同肩标字母表示差异显著(P<0.05),下表同。

2.鱼卵脂肪酸组成

从表6中可见，鱼卵中的脂肪酸结构和饲料中的脂肪酸组成具有密切关系。各组卵中的EPA和DHA的比例基本和饲料中的组成变化趋势一致。而补充抗氧化预混剂组的鱼卵脂肪酸和配方2中没有差异。

表6 各组鱼卵中脂肪酸组成(g/kg饲料)

3.血清中激素含量

从表7中可见，3组鲟鱼亲本血清中的激素水平普遍受饲料中脂肪酸组成及抗氧化状态的影响。高DHA饲料组的雌性亲本血清中含有更高含量的E2和11-KT，补充抗氧化预混剂可进一步促进其水平的提高。对照组和配方2组间血清中COR没有显著差异，而配方3组中显著降低，说明抗氧化预混剂的使用有助于降低鲟鱼亲本在采卵操作时造成的应激。

表7 西伯利亚鲟亲鱼血清中激素水平含量

注：COR：肾上腺素；LH：黄体酮；E2：雌二醇；HCG：人绒毛膜促性腺激素；11-KT：11睾酮。

Claims (10)

1.一种鲟鱼亲鱼饲料，含蛋白质、脂肪、能量及维生素和矿物质的基础营养物质，其特征是：在饲料中需要添加EPA(20碳5烯酸)和DHA(22碳6烯酸)两种必需脂肪酸，且此二者在饲料中所占的重量百分比分别为：

EPA 0.73～0.98％，DHA 1～1.4％。

2.根据权利要求1所述的饲料，所述两种必需脂肪酸之间的重量份比例为：

EPA:DHA＝1:1.9～2.2。

3.根据权利要求1所述的饲料，所述两种必需脂肪酸占饲料总脂肪中所占的重量百分比分别为：

EPA 8-10％，DHA 15-17％。

4.根据权利要求1所述的饲料，用于调配饲料中的EPA、DHA的脂肪酸原料选自鳕鱼油、裂壶藻粉、海洋磷脂和大豆磷脂中的2种或多种。

5.根据权利要求1-4中任一所述的饲料，饲料中还含有抗氧化剂。所述抗氧化剂选自特丁基对苯二酚和维生素E醋酸酯中的一种或二种。

6.根据权利要求5所述的饲料，所述抗氧化剂使用时与维生素和有机态矿物质成分配制成抗氧化剂预混剂；所述有机态多种矿物质选自酵母硒和金属氨基酸螯合物；所述抗氧化剂预混剂的用量是饲料量的0.2-1重量份。

7.根据权利要求6所述的饲料，所述抗氧化剂预混剂的配方和用量为，每kg饲料中：

特丁基对苯二酚150-200mg，维生素E醋酸酯800-1000g，氨基酸螯合铁450-500mg；氨基酸螯合锌300-350mg；氨基酸螯合铜20-25mg；氨基酸螯合錳30-40mg；酵母硒25-50mg。

8.根据权利要求1或5所述的饲料，所述基础营养的配方是：

鱼粉35-45份，磷虾粉5-8份，大豆浓缩蛋白15-20份，面粉18-22份，Grobiotic3-5份，所述份是重量份。

9.根据权利要求8所述的饲料，所述大豆浓缩蛋白的用量是16-18重量份。

10.一种鲟鱼亲鱼饲料，配方是：北欧低温干燥鱼粉40份，南极磷虾粉6份，维生素及矿物质预混料2.5份，抗氧化预混剂1份，Grobiotic3份；大豆浓缩蛋白：16.5份，面粉21份，海洋磷脂2份，大豆磷脂2份，鱼油4份，裂湖藻粉2份，所述份是重量份。