CN104115012B - 用于晕厥的诊断、预后、评估和治疗分层的生物标志物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于患者的晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层的方法，所述方法包括：测定所述患者的体液样品中至少一个生物标志物的水平，所述生物标志物选自proET-1、proADM、proANP、proBNP、proAVP和PCT或它们至少12个氨基酸的片段，使至少一个生物标志物或其片段的所述水平与晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层相关联。

Description

用于晕厥的诊断、预后、评估和治疗分层的生物标志物
发明领域
本发明涉及临床诊断的领域。具体地本发明涉及晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层。
发明背景
在明显和明确的病因学不存在的情况下一过性意识丧失(TLOC)的评价是个复杂问题。TLOC被分成创伤性和非创伤性形式，非创伤性TLOC被分类成癫痫性发作、精神性假性晕厥、罕见的其它原因和晕厥。对于大部分具有不确定的诊断的情况，潜在原因是导致脑血流灌注过少的临时循环障碍，常规地分类为晕厥发作(Blanc等人2002.EurHeartJ.23:815-820；Bartoletti等人2006.EurHeartJ27:83-88)。
晕厥表征为通常无警告地发生的快速发作、短持续时间和自发完全恢复的TLOC。具体地，晕厥可被分成神经介导的反射性晕厥(NMS)、直立性低血压(OH)和心源性晕厥(心律不齐或结构性的)，尽管可能会发生频率较低的状况(Moya等人2009.HeartJ.30:2631-2671)。
NMS通常基于涉及最多的传出路径(即，交感神经或副交感神经路径)来进行分类：如果归因于直立缩血管紧张丧失的低血压占优势，则使用术语血管减压性晕厥；如果心动过缓或心搏停止占优势，则使用术语心动抑制性晕厥；如果两种机制存在，则诊断为混合形式。此外，NMS还可基于其触发因素(即传入路径)被分类成血管迷走神经性晕厥(VVS)、情境性晕厥(与一些特殊情境相关的NMS)、颈动脉窦过敏(CSH)和非典型形式(其中NMS因未明确触发因素或甚至明显地在触发因素不存在的情况下发生)的触发剂(即传入路径)。
与NMS相反，在直立性低血压中，交感神经传出活性长期受损，这样血管收缩不充分。当站立时，血压(BP)下降，从而晕厥或先兆晕厥发生。OH被定义为站立时BP的异常降低。严格地从病理生理学观点来看，NMS与OH之间不存在重叠，但这两种病况的临床表现经常重叠，有时使得鉴别诊断变得困难(Moya等人2009.HeartJ.30:2631-2671)。OH可被分成典型OH(定义为在3分钟内的站立大于等于20mmHg的收缩BP的下降以及大于等于10mmHg的舒张BP的下降(JNeurolSci1996；144:218-219))、初始性OH(表征为刚站起时大于40mmHg的BP下降和BP至正常的自发快速回复，导致短期的低血压和症状(Wieling等人2007.ClinSci(Lond)112:157-165))、延迟的(进行性)OH(表征为在假定直立姿势时收缩BP的缓慢进行性下降(GibbonsandFreeman2006.Neurology67:28-32))，和体位直立性心运过速综合征(POTS)(表征为每分钟大于30次搏动或每分钟大于120次搏动的非常显著的心率增加以及BP的不稳定性(Grubb等人1997.PacingClinElectrophysiol20:2205-2212))。
心源性晕厥可由心律不齐(心动过缓、心动过速)或结构性疾病(例如，心血脏瓣膜病、急性心肌梗塞/缺血、冠状动脉的先天异常、肺性高血压等)引起。
晕厥分类的概述示于图1中。
根据当前晕厥指导方针，推荐2个主要调查路线，基于长期ECG监控和自主测试的先进心脏评估，其中直立倾斜试验(HUTT)具有中心作用(Moya等人2009.HeartJ.30:2631-2671)。路线的选择通常取决于患者的历史和晕厥情况。
ECG监控是用于诊断间歇性缓慢性和快速性心律失常的方法。晕厥诊断的金标准是何时记录到症状与已记录的心律失常之间的关联。一般而言，仅当存在鉴定与晕厥相关的心律失常的高验前概率时才显示需要ECG监控。
在自主测试中，直立性挑战(orthostaticchallenge)(从仰卧位变化至直立位)产生血液从胸部至下肢的移位，这导致静脉回流和心输出量的减少。在代偿机制不存在的情况下，BP的下降可导致晕厥。目前，存在两个不同的用于评估对从仰卧位至直立位的姿势的改变的反应的方法：主动站立测试，其中患者主动从仰卧位至直立位站立，另一种是以60或70°的头离位分倾斜。主动站立测试用于使用血压计诊断不同类型的直立耐受不能(orthostaticintolerance)。倾斜测试使得能够在实验室情境中再现神经介导的反射。因直立应激和制动(immobilization)引起的血液滞积和静脉回流的减少触发反射。然而，诊断过程是非常耗时的并且并非总是成功的(Croci等人2002.Europace4:351-355)。
已在具有不同类型的具有异质结果的晕厥的患者中研究了血管活性激素的循环水平。在具有VVS的患者中，未发现精氨酸-加压素(AVP)在基线(在HUT测试之前)上的差异(Kaufmann等人1991.Lancet338:8782-8783；Kaufmann等人1992.Neurology42:590-593；Jardine等人1997.AmJCardiol79:1302-1306；Roul等人1999.PacingClinElectrophysiol22:1020-1030；Theopistou等人2001.AmJCardiol.88:376-381)。已显示成熟AVP的增加在具有阳性HUT测试结果的组(被分类为具有VVS的患者)中相较于阴性HUT测试组更明显(Jardine等人1997.AmJCardiol79:1302-1306；Roul等人1999.PacingClinElectrophysiol22:1020-1030；Kaufmann等人1991.Lancet338:8782-8783；Kaufmann等人1992.Neurology42:590-593；Theopistou等人2001.AmJCardiol.88:376-381)。此外，肽素(也称为C-末端proAVP(CT-proAVP)的proAVP前体的稳定片段)的水平在具有心动抑制型晕厥与血管减压反射性晕厥的患者之间没有差异(Holmegard等人2012.ScandJClinLabInvest,出版中)。类似地，在具有VVS的患者中未发现心房或脑钠尿肽(ANP或BNP)的差异(Jardine等人1997.AmJCardiol79:1302-1306；Roul等人1999.PacingClinElectrophysiol22:1020-1030；Magerkurth等人2005.ClinAutonomRes15:299-301)。相反地，Holmegard等人报导了当与具有血管减压反射性晕厥的患者相比较时在具有心动抑制型晕厥的患者中存在更高水平的中段心房钠尿肽原(MR-proANP)(前proANP的稳定片段)，然而BNP的水平在组之间无差异(Holmegard等人2012.ScandJClinLabInvest,出版中)。类似地，Jardine等人显示在倾斜过程中正常受试者和VVS的ANP的减少，这在正常群体中更明显(Jardine等人1997.AmJCardiol79:1302-1306)。与这些结果相反，Freitas等人报导BNP的仰卧位水平在具有神经介导性晕厥的患者中相较于具有神经源性OH的患者显著更低，然而ANP的水平不变(Freitas等人2007.IntJCardiol116:242-248)。此外，ANP和BNP的差(Δ倾斜/基线)在具有神经介导性晕厥的患者之间相较于具有神经源性OH的患者无差异。Gajek等人报导了在自发性晕厥的患者与药物诱发晕厥的患者之间，心动抑制反射的患者的基线肾上腺髓质素浓度无差异(Gajek等人2004.PolMerkurLekarski17:267-270)。
当与健康对照或具有不明原因晕厥的患者相比较时在具有CSH的患者中未发现AVP基线水平的差异，然而具有CSH的患者和具有不明原因晕厥的患者的AVP在倾斜过程中显示显著的增加，这在健康受试者中不明显(Kenny等人1987.CardiovascRes21:545-550)。
在无VVS史但具有一定直立耐受不能的健康志愿者中，在基线水平上，血清内皮缩血管肽水平在于HUTT过程中经历晕厥的受试者中相较于无晕厥的受试者显著更高(Magerkurth等人2005.ClinAutonomRes15:299-301)。此外，作者声明这些结果意味着具有血管迷走神经性晕厥倾向的受试者的永久性增强的内皮缩血管肽释放，以及将来的研究必须调查内皮缩血管肽血清水平是否可增强诊断血管迷走神经性晕厥的特异度和灵敏度。具有VVS的患者和正常受试者的ET-1在HUT测试过程中增加，然而该增加在具有VVS的患者中更明显(Kaufmann等人1991.Lancet338:8782-8783)。相反地，Mehta等人报导了当与具有阳性HUTT结果的患者相比较时，基线内皮缩血管肽水平在具有晕厥史和阴性HUTT的患者中显著更高(Mehta等人1995.AmJCardiol76:86-88)。然而，在晕厥亚型心动抑制型、血管减压性和混合型之间无差异，并且在时间样品(timedsample)之间无差异。
研究健康志愿者的肾上腺髓质素(ADM)，根据下体负压试验(LBNP)将受试者分成高(无晕厥)和低(晕厥症状)直立性挑战耐受性(Gasiorowska等人2005.JPhysiolPharmacol56:179-193)。ADM的基线值在低耐受性受试者中相较于对于直立性挑战具有高耐受性的受试者显著更高，然而ADM在测试过程中在两个组中类似地增加。
然而，对于所有这些研究，重要地要指出，在2009年公布ESC指导方针之前(Moya等人2009.HeartJ.30:2631-2671)，不存在对于晕厥患者的金标准诊断，因而关于不同形式的直立性不稳定性不存在一致意见，它们与晕厥发作的关系是不可获得的。此外，对少数选择患者系列(主要地与健康个体相比较)进行上述生物标志物研究，所述研究不包括全谱的基本机制。因此，特定类型的晕厥的诊断具有挑战性并且不太可靠。
此外，可靠的诊断是适当疗法的选择的重要前提。疗法的目的主要是预防复发和相关损伤，以及提高生活质量。用于神经介导性晕厥的疗法选择是例如身体抗压动作(physicalcounterpressuremanoeuvre)(例如腿或臂的等长PCM，如腿交叉或手紧握和手臂绷紧)和倾斜训练以及药物治疗(例如米多君，α-拮抗剂)以及心脏起搏法。Brignole已报导主动起搏器治疗显著减少具有严重神经介导性晕厥的患者，特别地具有心动抑制的CSH的晕厥复发(oralpresentation,AmericanCollegeofCardiology,ChicagoUSA,24-27ofMarch2012)。实际上，在严重心动抑制不存在的情况下忌用起搏。因此，晕厥的准确诊断和严重度的评估是强制性的。
关于与晕厥相关的预后(即风险分层)，应当考虑两个重要因素：(i)死亡和威胁生命的事件的风险；和(ii)晕厥和身体伤害复发的风险。
因此，本发明的目的是提供允许晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层的方法。
发明概述
本发明的主题是用于患者的晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层的方法，所述方法包括：
-测定所述患者的体液样品中至少一个生物标志物的水平，所述生物标志物选自proADM、proANP、proBNP、proAVP、proET-1和PCT或者它们至少12个氨基酸的片段，
-使至少一个生物标志物的所述水平与晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层相关联。
优选方法变型描述于从属权利要求中。
附图说明
图1：晕厥亚型的分类
图2：用于晕厥的诊断的MR-proANP值的盒须图
图3：用于晕厥的诊断的MR-proADM值的盒须图
图4：用于晕厥的诊断的CT-proET-1值的盒须图
图5：用于晕厥的诊断的CT-proAVP值的盒须图
图6：用于晕厥的诊断的PCT诊断的盒须图
图7：MR-proANP与VVS之间的线性关系
图8：CT-proET-1与VVS之间的线性关系
图9：CT-proET-1与OH之间的线性关系
图10：MR-proANP与CSH之间的线性关系和阈值样作用
图11：CT-proET-1与心动抵制反射之间的线性关系
图12：CT-proAVP与初始性OH之间的阈效应
发明详述
本发明的主题是提供用于患者的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层的方法，所述方法包括：
测定所述患者的体液样品中至少一个生物标志物的水平，所述生物标志物选自proADM、proANP、proBNP、proAVP、proET-1和PCT或者它们至少12个氨基酸的片段，
使至少一个生物标志物的所述水平与晕厥的诊断和/或预后和/或评估和/或治疗分层相关联。
晕厥被定义为因一过性全脑低灌注引起的一过性意识丧失，其表征为快速发作、短持续时间和自发完全恢复(Moya等人2009.HeartJ.30:2631-2671)。
VVS被定义为与明显的低血压和/或心动过缓/心搏停止的特征模式相关的晕厥的再现。
CSH被定义为大于等于50mmHg的SBP的下降和/或超过3秒的心搏停止。
OH被定义为大于等于20mmHg的收缩BP(SBP)的持续下降和/或大于等于10mmHg的舒张BP(DBP)的下降，或小于90mmHg的收缩BP(典型OH，在3min的倾斜期内；和延迟OH，在3至20min内)，然而POTS具有在站立姿势时大于30/min的心率增加或大于120/min的心动过速的直立耐受不能的特征症状。当短暂BP在站立后15秒内下降超过40mmHgSBP和/或超过20mmHgDBP时，初始性OH存在，脑低灌注的症状发生并且患者报告了典型的晕厥情况(Wieling等人2007.ClinSci(Lond)。112:157-165)。
心动抑制性晕厥被定义为至超过10秒的低于40bpm的心室率的心率下降，或超过3秒的心搏停止，然而，血管减压反射被定义为在晕厥时与其峰值相比小于等于10％的心率下降(Brignole等人2000.Europace2:66-76)。
如本文中所述，“测定”或“诊断测定”可以是用于诊断领域的任何类型的测定。这样的测定可基于待检测的分析物以一定亲和力与一种或多种捕获探针的结合。关于捕获分子与靶分子或目标分子之间的相互作用，亲和常数优选大于108M-1。
在本发明的上下文中，“捕获分子”是可用于结合靶分子或目标分子即来自样品的分析物(例如在本发明上下文中的肽)的分子。捕获分子因此必须在空间上和表面特征(例如表面电荷、疏水性、亲水性、路易斯供体和/或受体的存在或不存在)方面被充分地塑造来特异性结合靶分子或目标分子。因此，结合可以例如通过捕获分子与靶分子或目标分子之间的离子、范德瓦尔斯、π-π、σ-π、疏水或氢键相互作用或上述相互作用的两个或更多个的组合介导。在本发明的上下文中，捕获分子可以例如选自核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白质、抗体、肽或糖蛋白。优选，捕获分子是具有足够的对于靶或目标分子的亲和力的抗体，包括其片段，以及包括重组抗体或重组抗体片段，以及所述抗体的化学和/或生物化学修饰衍生物或其源自可变链的至少12个氨基酸的长度的片段。
优选检测法包括以各种形式存在的免疫测定，例如放射免疫测定(RIA)、化学发光和荧光免疫测定、酶联免疫测定(ELISA)、基于Luminex的珠粒阵列、蛋白质微阵列测定和快速测试形式例如免疫层析试条测试色谱试条测试。
测定可以是均相测试或异相测定，竞争性和非竞争性测定。在特别优选实施方案中，测定以夹心测定的形式存在，其为非竞争性免疫测定，其中待检测和/或定量的分子结合于第一抗体和第二抗体。第一抗体可结合于固相，例如珠粒、孔或其它容器、芯片或试条的表面，第二抗体是例如利用染料、放射性同位素或反应性部分或催化活性部分标记的抗体。随后通过适当的方法测量结合于分析物的标记抗体的量。与“夹心测定”有关的一般组合物和方法已被良好建立并且对于本领域技术人员来说是已知的(TheImmunoassayHandbook,Ed.DavidWild,ElsevierLTD,Oxford；第3版(May2005),ISBN-13：978-0080445267；HultschigC等人,CurrOpinChemBiol.2006Feb；10(1):4-10.PMID：16376134，通过此用并入本文)。
在特别优选实施方案中，测定包括两种捕获分子，优选作为分散体均存在于液体反应混合物中的抗体，其中第一标记组分连接于第一捕获分子，其中所述第一标记组分为基于荧光-或化学发光-淬灭或放大的标记系统的部分，并且所述标记系统的第二标记组分连接于第二捕获分子，以便在两种捕获分子结合分析物后，产生允许检测在包含样品的溶液中形成的夹心复合物的可测量信号。
甚至更优选，所述标记系统包含与荧光染料或化学发光染料，特别地花青类型的染料组合的稀土穴状化合物或稀土螯合剂。
甚至更优选，所述标记系统包含与荧光染料或化学发光染料，特别地花青类型的染料组合的稀土穴状化合物或稀土螯合剂。在本发明的说明书中，基于荧光的测定包括染料的使用，所述染料可以例如选自FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、CY7、呫吨、6-羧基-2’,4’,7’,4,7-六氯荧光素(HEX)、TET、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素(JOE)、N,N,N’,N’-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)、6-羧基-X-罗丹明(ROX)、5-羧基罗丹明-6G(R6G5)、6-羧基罗丹明-6G(RG6)、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPYTMR、俄勒冈绿、香豆素类例如伞形酮、苯甲亚胺例如Hoechst33258；菲啶类例如德克萨斯红、Yakima黄、AlexaFluor、PET、溴化乙锭、吖啶酯染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、紫菜碱染料、聚甲炔染料等。
在本发明的说明书中，基于化学发光的测定包括基于在Kirk-Othmer,Encyclopediaofchemicaltechnology,第4版.,执行编辑,J.I.Kroschwitz；编辑,M.Howe-Grant,JohnWiley&Sons,1993,第15卷,p.518-562(通过引用并入本文，包括第551-562页上的引用)中针对化学发光材料描述的物理原理的染料的使用。优选化学发光染料为吖啶酯。
“诊断”在本发明的说明书中涉及受试者的疾病或临床病况的识别和(早期)检测，并且还可包括鉴别诊断。
术语“评估”涉及患者的疾病的严重度的评价。
在本发明中，术语“预后”是指受试者(例如患者)的医学状况将如何进展的预测。这可包括所述受试者的恢复可能性或不良后果(例如晕厥发作的复发或死亡)的可能性的评价。
如本文中所用，术语“患者”是指正在接受医疗护理或因疾病而应当接受医疗护理的活着的人或非人生物体。这包括正被调查病理学体征的无明确疾病的人。因此，本文中描述的方法和测定适用于人和兽医学疾病。
如本文中所用，术语“样品”是指为了目标受试者例如患者的诊断、预后或评价而获得的体液的样品。优选测试样品包括血液、血清、血浆、脑脊髓液、尿、唾液、痰和胸腔积液。此外，本领域技术人员可认识到一些测试样品在分级分离或纯化步骤例如全血至血清或血浆组分的分离后可更容易分析。
因此，在本发明的优选实施方案中，样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊髓液样品、唾液样品和尿样品或上述样品的任何样品的提取物。优选，样品为血液样品，最优选血清样品或血浆样品。
如本文中针对诊断和预后标志物的用途所用的，术语“使......相关联”是指将标志物在患者中的存在或水平与其在已知患有给定的病况或处于发生所述病况的风险中的人中的存在或量相比较。可将患者样品的标志物水平与已知与特定诊断相关的水平相比较。样品的标志物水平被认为与诊断相关；即，本领域技术人员可使用标志物水平来确定患者是否患有特定类型的疾病和相应地作出反应。或者，可将样品的标志物水平与已知与良好结果(例如疾病的不存在等)相关的标志物水平相比较。在优选实施方案中，使一小组标志物水平与总概率或特定结果相关联。
诊断和/或预后测试的灵敏度和特异度不仅取决于测试的分析“质量”，它们还取决于构成异常结果的事物的定义。实际上，接收器操作特征曲线(ROC曲线)通常通过将为量的值针对其在“正常”(即表面上健康)与“患病”群体(即患有糖尿病、胰岛素抗药性和/或代谢综合征的患者)中的相对频率作图来计算。对于任何特定标志物，具有疾病和不具有疾病的受试者的标志物水平的分布将可能重叠。在这样的条件下，测试不能以100％的准确性将正常与疾病绝对区分开，重叠的面积表示其中测试不能区分正常与疾病。选择阈值，高于其(或低于其，取决于标志物如何随疾病变化)，则测试被认为是异常的，低于其，则测试被认为是正常的。ROC曲线下面积是察觉测量将允许修正病况的鉴定的概率的量度。甚至当测试结果不一定给出准确数值时，亦可使用ROC曲线。只要可将结果分级，就可产生ROC曲线。例如，对“疾病”样品的测试的结果可能按照程度(例如，1＝低，2＝正常以及3＝高)来进行分级。可使该分级与“正常”群体中的结果相关联，并且ROC曲线产生。这些方法在本领域是公知的(参见，例如，Hanley等人1982.Radiology143：29-36)。优选，ROC曲线导致大于约0.5，更优选大于约0.7，更优选大于约0.8，更优选大于约085，最优选大于约0.9的AUC。在本说明书中，术语“约”是指给定测量的+/-5％。
ROC曲线的水平轴代表(1-特异性)，其随假阳性的比率增加而增加。曲线的垂直轴代表灵敏度，其随真阳性的比率增加而增加。因此，对于选择的具体截断值，可测定(1-特异度)的值，并且可获得对应的灵敏度。ROC曲线下面积是测量的标志物水平将允许修正疾病或病况的鉴定的概率的量度。因此，ROC曲线下面积可用于测定测试的有效性。
在某些实施方案中，标志物和/或标志物小组被选择来显示至少约70％的特异度，更优选至少约80％的特异度，更优选至少约85％的特异度，更优选至少约90％的特异度，最优选至少约95％的特异度组合的至少约70％的灵敏度，更优选至少约80％的灵敏度，更优选至少约85％的灵敏度，更优选至少约90％的灵敏度，最优选至少约95％的灵敏度。在特别优选实施方案中，灵敏度和特异度为至少约75％，更优选至少约80％，更优选至少约85％，更优选至少约90％，最优选至少约95％。在本说明书中，术语“约”是指给定的测量的+/-5％。
阈值水平可以例如从Kaplan-Meier分析获得，其中疾病的发生与群体中心血管标志物的四分位数相关。根据该分析，具有高于第75百分位数的心血管标志物水平的受试者具有显著增加的患根据本发明的疾病的风险。该结果进一步得到具有对典型风险因素的全面调整的Cox回归分析的支持：最高百分位相对所有其它受试者与增加的患根据本发明的疾病的风险高度显著相关。
其它优选截断值例如为正常群体的第90、95或99百分位。通过使用比第75百分位更高的百分位，可减少鉴定的假阳性受试者的数目，但可能错过鉴定处于中等(虽然仍然增加的)风险中的受试者。因此，可能采用取决于其是否被认为更适合于以也鉴定“假阳性”为代价鉴定大多数处于风险中的受试者，或其是否被认为更适合于以错过处于中等风险的若干受试者为代价主要鉴定处于高风险中的受试者的截断值。
通过使用个体的心血管标志物水平值以及其它预后实验室和临床参数来计算个体的风险的其它数学可能性是例如NRI(净新分类指数)或IDI(综合判别指数)。可根据Pencina(PencinaMJ,等人：Evaluatingtheaddedpredictiveabilityofanewmarker：fromareaundertheROCcurvetoreclassificationandbeyond.StatMed.2008；27:157-172)计算指标。
在本发明的说明书中，术语“水平”涉及获自患者样品的标志多肽的浓度(优选地表达为重量/体积；w/v)。
如本文中在蛋白质和其它肽的背景中提及的，术语“片段”是指来源于更大的蛋白质或肽的更小的蛋白质或肽，其因而包含更大的蛋白质或肽的部分序列。所述片段可通过一个或多个其肽键的皂化从更大的蛋白质或肽衍生而来。标志物PCT、proANP、proBNP、proET-1、proADM和proAVP的“片段”优选涉及在长度上具有至少6个氨基酸，最优选在长度上具有至少12个氨基酸残基的片段。这样的片段优选可利用本文中描述的免疫测定法来检测。
钠尿肽原选自心房钠尿肽原(proANP)和脑钠尿肽原(proBNP)或在长度上具有至少12个氨基酸的其片段。
153个氨基酸的前proANP的序列示于SEQIDNO:1中。在切割N末端信号肽(25个氨基酸)和2个C末端氨基酸后，释放proANP(SEQIDNO:2)。该激素原被切割成28个氨基酸的成熟肽ANP，也称为ANP(1-28)或α-ANP，和氨基末端proANP片段(1-98)(NT-proANP,SEQIDNO:3)。中段proANP(MR-proANP)被定义为NT-proANP或包含proANP的至少氨基酸残基53-90(SEQIDNO:4)的其任意片段。
在根据本发明的方法的优选实施方案中，测定proANP前体片段MR-proANP的水平。
肾上腺髓质素的前体肽(pre-pro-肾上腺髓质素)的氨基酸序列示于SEQIDNO:5中。肾上腺髓质素原涉及肾上腺髓质素原前体的氨基酸残基22至185。肾上腺髓质素原(proADM)的氨基酸序列示于SEQIDNO:6中。MR-肾上腺髓质素原(MR-proADM)涉及proADM前体的氨基酸残基45-92。MR-proADM的氨基酸序列示于SEQIDNO:7中。
在根据本发明的方法的另一个优选实施方案中，测定proADM前体片段MR-proADM的水平。
加压素的164个氨基酸的前体肽(前加压素原)的序列示于SEQIDNO:8中。加压素涉及加压素原前体的序列的氨基酸残基19至164。加压素原的氨基酸序列示于SEQIDNO:9中。加压素原被切割成成熟加压素、后叶激素运载蛋白II和C-末端加压素原(CT-proAVP或肽素)。肽素涉及加压素原前体的氨基酸残基126至164。肽素的氨基酸序列提供于SEQIDNO:10中。后叶激素运载蛋白II包含加压素原体前体的氨基酸残基32至124并且其序列示于SEQIDNO:11中。
在根据本发明的方法的另一个优选实施方案中，测定proAVP前体片段肽素的水平。
原降钙素是降钙素和抗钙素的前体。PCT1-116的氨基酸序列示于SEQIDNO:12中。
134个氨基酸的脑钠尿肽的前体肽(前proBNP)的序列示于SEQIDNO:13中。proBNP涉及前proBNP的氨基酸残基27至134。proBNP的序列示于SEQIDNO:14中。proBNP被切割成N末端proBNP(NT-pro-BNP)和成熟BNP。NT-proBNP包含氨基酸残基27至102并且其序列示于SEQIDNO:15中。SEQIDNO:16显示包含前BNP肽原的氨基酸残基103至134的BNP的序列。
212个氨基酸的内皮缩血管肽-1的前体肽(前内皮缩血管肽-1原)的序列示于SEQIDNO:17中。ET-1原涉及前proET-1的序列的氨基酸残基18至212。ET-1原的氨基酸序列示于SEQIDNO:18中。ET-1原被切割成成熟ET-1、大-ET-1和C-末端proET-1(CT-proET-1)。ET-1涉及前proET-1的氨基酸残基53至73。ET-1的氨基酸序列示于SEQIDNO:19中。CT-proET-1涉及前proET-1的氨基酸残基168至212。CT-proET-1的氨基酸序列提供于SEQIDNO:20中。大-ET-1包含前proET-1的氨基酸残基53至90并且其序列示于SEQIDNO:21中。
在根据本发明的方法的优选实施方案中，测定前proBNP片段NT-proBNP或BNP的水平。
在根据本发明的方法的另一个优选实施方案中，测定由氨基酸1至116或2至116或3至116组成的PCT的水平。
在本发明的优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proET-1水平高于预定阈值水平时，患者被诊断为患有直立性低血压(全部)。优选地，预定阈值水平为30至70pmol/L，更优选45至70pmol/L，更优选55至70pmol/L，最优选60至(高于)70pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proET-1水平高于30pmol/L，优选高于40pmol/L，更优选高于45pmol/L，更优选高于55pmol/L，更优选高于60pmol/L，最优选高于70pmol/L时，患者被诊断为患有OH。
更优选，当所述测定的基线CT-proET-1水平低于预定阈值水平时，患者被诊断为不具有直立性低血压(全部)。优选，预定阈值水平为30至70pmol/L，更优选30至60pmol/L，更优选30至55pmol/L，最优选30至45pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proET-1水平低于70pmol/L，优选低于60pmol/L，更优选低于55pmol/L，更优选低于45pmol/L，最优选低于30pmol/L时，患者被诊断为不患有OH。
在本发明的另一个优选实施方案中，当所述测定的基线MR-proANP水平低于预定阈值水平时，患者被诊断为患有CSH。优选，预定阈值水平为50至200pmol/L，更优选50至150pmol/L，更优选50至100pmol/L，最优选50至85pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线MR-proANP水平低于200pmol/L，优选低于150pmol/L，更优选低于100pmol/L，更优选低于85pmol/L，最优选低于50pmol/L时，患者被诊断为不患有CSH。
更优选，当所述测定的基线MR-proANP水平高于预定阈值水平时，患者被诊断为患有CSH。优选，预定阈值水平为50至200pmol/L，更优选85至200pmol/L，更优选100至200pmol/L，最优选150至200pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线MR-proANP水平高于50pmol/L，优选高于85pmol/L，更优选高于100pmol/L，更优选高于150pmol/L，最优选高于200pmol/L时，患者被诊断为不患有CSH。
在本发明的另一个优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proET-1水平低于预定阈值水平时，患者被诊断为患有心动抑制反射。优选，预定阈值水平为30至70pmol/L，更优选30至60pmol/L，更优选30至55pmol/L，最优选30至45pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proET-1水平低于70pmol/L，优选低于60pmol/L，更优选低于55pmol/L，更优选低于45pmol/L，最优选低于30pmol/L时，患者被诊断为患有心动抑制反射。
更优选，当所述测定的基线CT-proET-1水平高于预定阈值水平时，患者被诊断为未患有心动抑制反射。优选，预定阈值水平为30至70pmol/L，更优选45至70pmol/L，更优选55至70pmol/L，最优选60至70pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proET-1水平高于30pmol/L，优选高于45pmol/L，更优选高于55pmol/L，更优选高于60pmol/L，最优选高于70pmol/L时，患者被诊断为未患有心动抑制反射。
在本发明的另一个优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proAVP水平低于预定阈值水平时，患者被诊断为患有初始性OH。优选，预定阈值水平为2.5至20pmol/L，更优选2.5至10pmol/L，更优选2.5至8pmol/L，更优选2.5至6pmol/L，最优选2.5至4pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的基线CT-proAVP水平低于20pmol/L，优选低于10pmol/L，更优选低于8pmol/L，更优选低于6pmol/L，更优选低于4pmol/L，最优选低于2.5pmol/L时，患者被诊断为患有初始性OH。
更优选，当所述测定的基线CT-proAVP水平高于预定阈值水平时，患者被诊断为未患有初始性OH。优选，预定阈值水平为2.5至20pmol/L，更优选4至20pmol/L，更优选6至20pmol/L，更优选8至20pmol/L，最优选10至20pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的CT-proAVP水平高于2.5pmol/L，优选高于4pmol/L，更优选高于6pmol/L，更优选高于8pmol/L，更优选高于10pmol/L，最优选高于20pmol/L时，患者被诊断为未患有初始性OH。
在本发明的另一个优选实施方案中，当所述测定的基线MR-proANP水平低于预定阈值水平时，患者被诊断为患有血管迷走神经性晕厥。优选，预定阈值水平为50至200pmol/L，更优选50至150pmol/L，更优选50至100pmol/L，更优选50至85pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的MR-proANP水平低于200pmol/L，优选低于150pmol/L，更优选低于100pmol/L，更优选低于85pmol/L，最优选低于50pmol/L时，患者被诊断为患有血管迷走神经性晕厥。
更优选，当所述测定的基线MR-proANP水平高于预定阈值水平时，患者被诊断为未患有血管迷走神经性晕厥。优选，预定阈值水平为50至200pmol/L，更优选85至200pmol/L，更优选100至200pmol/L，最优选150至200pmol/L。在优选实施方案中，当所述测定的MR-proANP水平高于50pmol/L，优选高于85pmol/L，更优选高于100pmol/L，更优选高于150pmol/L，最优选高于250pmol/L时，患者被诊断为未患有血管迷走神经性晕厥。
上述截断值在其它测定中可能不同，如果已根据本发明中使用的测定系统对这些截断值不同地进行了校准的话。因此，考虑到校准的差异，上述截断值可相应地用于这样不同地校准的测定。校准中定量差异的一个可能是所述测定(例如，PCT测定)与本发明中使用的各自生物标志物测定(例如，BRAHMSKRYPTORPCT测定)的比较分析(使相关联)法(通过使用两种方法测量样品中各自生物标志物(例如，PCT))。另一个可能性是利用所述测定法测定(条件是该测试具有足够的分析灵敏度)代表性正常群体的中位生物标志物水平，将结果与(例如在PCT的EP09011073.5-“Procalcitoninfortheprognosisofadverseeventsintheasymptomaticpopulation”中)所述的中位生物标志物水平相比较，并基于通过该比较获得的差异重新计算校准。通过本发明中使用的校准，已测量来自正常(健康)受试者的样品：中位(四分位距)血浆原降钙素为0.018(0.015–0.022)ng/ml(在男人中)和0.014(0.012–0.017)ng/ml(在妇女中)(Abbasi等人2010.JCEM95:E26-E31),中位(范围)血浆MR-proADM为0.41(0.23-0.64)nmol/L(Smith等人2009.ClinChem55:1593-1595)、中位(四分位距)肽素浓度为4.7(2.9–7.5)pmol/L，浓度在男人(6.2(4.1–9.5)pmol/L)中显著高于在妇女(3.6(2.4–5.5)pmol/l)中(Meijer等人2010.KidneyInt77:29-36)，中位(四分位距)MR-proANP浓度为66(51–86)pmol/L(Melander等人2009.JAMA302:49-57)，平均(范围)血浆CT-proET-1浓度为44.3(10.5–77.4)pmol/L(Papassotiriou等人2006.ClinChem52:1144-1151)。
用于检测MR-proADM的自动夹心荧光测定使用针对包含人ADM原前体序列的氨基酸68至86(SEQIDNO：5)的肽的绵羊多克隆抗体和针对包含人ADM原前体序列的氨基酸83至94(SEQIDNO：5)的肽的绵羊多克隆抗体(Caruhel等人2009.ClinBiochem42:725-8)。
用于检测CT-proET-1的自动夹心荧光测定使用针对包含人proET-1序列的氨基酸167至183(SEQIDNO：18)的肽的小鼠单克隆抗体和针对包含人proET-1序列的氨基酸183至195(SEQIDNO：18)的肽的绵羊多克隆抗体(Caruhel等人2008.ClinChem54:A119)。
在本发明的优选实施方案中，可组合至少两个生物标志物的水平。
在本发明的一个实施方案中，例如在基线上(在立位耐力测试[例如HUT测试或主动站立测试]开始之前)和在这样的测试的过程中或之后进行生物标志物的系列测量。换句话，测定在立位耐力测试开始前的基线上和所述测试的过程中或之后获取的所述患者的体液的至少两个样品的至少一种生物标志物的水平。
在本发明的另一个优选实施方案中，可在数学算法中组合所述至少一个生物标志物的至少两个水平。
在其它优选实施方案中，肽素从基线至站立的增加与心动抑制反射相关。
在另一个优选实施方案中，CT-proET-1从基线至站立的增加不包括直立性低血压。
在另一个优选实施方案中，PCT从基线至站立的增加与POTS相关。
在其它优选实施方案中，将至少一个生物标志物的至少一个水平与一个或多个临床参数组合，所述临床参数选自年龄、性别、体质指数(BMI)、收缩血压、舒张血压、心率、肾小球滤过率(GFR)、总胆固醇、HDL-胆固醇、晕厥发作的次数和距离首次晕厥发作的时间。
术语“组合”被定义为一定数目的参数的可能选择以及使用数学算法(例如，偏差或比率)进行的这些参数至指定组的安排。例如，可计算在立位耐力测试过程中或之后采自患者的样品的生物标志物的水平与在基线时(在立位耐力测试开始之前)采自患者的样品的相同生物标志物的水平之间的比率。此外，可计算在立位耐力测试过程中或之后采自患者的样品的生物标志物的水平与在基线时(在立位耐力测试开始之前)采自患者的样品的相同生物标志物的水平之间的偏差。本文中还包括，可计算不同生物标志物之间的比率。例如，可计算在相同时间点(例如，在基线时[在立位耐力测试开始之前]采自患者的样品的MR-proADM与CT-proET-1之间的比率)或在不同时间点(例如，在基线时采自患者的样品的MR-proADM与在立位耐力测试过程中或之后采自患者的样品的CT-proET-1之间的比率)从患者采集的样品的测量的生物标志物水平之间的比率。
在另一个优选实施方案中，可将所述至少一个生物标志物的水平组合为连续或分类变量。
在优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM和CT-proET-1的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM和MR-proANP的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM和肽素的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物CT-proET-1和MR-proANP的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物CT-proET-1和肽素的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM、CT-proET-1和MR-proANP的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM、CT-proET-1和肽素的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM、MR-proANP和肽素的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物CT-proET-1、MR-proANP和肽素的水平。
在另一个优选实施方案中，组合生物标志物MR-proADM、CT-proET-1、MR-proANP和肽素的水平。
在本发明的说明书中，术语“分数”是指基于某些质量或状况(例如，生物标志物的水平)在所述患者中存在所达到的特定成就或程度，数字表达的评级。
在本发明的说明书中，术语“治疗分层”是指所述患者的治疗性治疗的选择和/或调整。在本发明的优选实施方案中，就治疗性治疗对患者进行分层，例如就身体抗压动作(例如，腿或手臂的等长PCM，如腿交叉或手紧握和手臂绷紧)、倾斜训练以及药物治疗(例如米多君，α-拮抗剂)和心脏起搏法对患者进行分层，包括：测定所述患者的体液样品的至少一个选自proADM、proANP、proBNP、proAVP、proET-1和PCT或它们具至少12个氨基酸的片段的生物标志物的水平，和使所述水平与治疗性治疗相关联。
在特别优选实施方案中，根据他们对心脏起搏器的需要对患者进行分层。最优选地，根据他们对心脏起搏器的需要，通过测定至少CT-proET-1的水平来对患者进行分层，其中高于预定阈值水平的水平表示不需要心脏起搏器的患有直立性低血压的患者，以及其中低于预定阈值水平的水平表示需要心脏起搏器的患有心动抑制反射的患者。
利用心脏起搏器进行心脏起搏法，所述心脏起搏器是使用通过接触心肌的电极传递来调节心脏的搏动的电脉冲的医疗器械。由于心脏的天然起搏器不足够快，或由于心脏的电兴奋传导系统存在堵塞，因而起搏器的主要目的是维持足够的心率。现代起搏器是可在外部通过程序控制的，并且允许心脏病学家选择个体患者的最佳起搏模式。可暂时或永久性地进行心脏起搏法。利用可编程起搏器的永久性起搏包括将一个或多个起搏电极经静脉放置于心脏的室内。存在3个根据牵涉的室的数目和它们的基本操作机制分类的基本类型的永久性起搏器：单室、双室和频率反应性起搏器。
实施例
研究装置、检查方案和诊断指标
在2008年9月与2011年4月之间，在的UniversityHospital的晕厥单元(地区三级医疗中心)调查总共255位具有病因学不明的怀疑晕厥发作的患者(119个男人，平均年龄60±21赚钱，范围15至93岁)。前101个患者直接在引入期中从急诊科招募而来，如先前描述(Fedorowski等人2010.Europace12:1322-1328)。当晕厥单元正式建立时，患者的招募通过从地区的初级保健医生、急症科和门诊病人或医院门诊部引荐来确定。通常地，在调查之前已进行了一组额外检查，例如Holter-ECG、脑成像、起声心动描记术和运动试验–ECG或在一些情况下EEG。作为这些检查是阴性或无确定结果的结果，患者被进一步移交至晕厥单元。具有确认心脏(即心律失常或结构性心脏和血管疾病)、神经学、代谢、中毒和TLOC的其它明确病因学的临床体征和测试结果的患者被先验地排除，正如那些具有晚期痴呆和身体残疾的患者一样。研究参与者被要求定期服药，并且在测试前禁食2小时，虽然允许他们随意饮水。他们还被要求填写问卷，所述问卷调查患者的医疗史，包括晕厥-相关症状的持续时间和频率，以及目前的药物治疗。由于物流原因，在早晨(8至10a.m.)和下午(13至15p.m.)进行测试。
检查基于扩展的直立倾斜试验(HUTT)方案，包括外周静脉插管、15分钟的仰卧静息、血液取样、根据新城疫苗方案的颈动脉窦按摩(CSM)(Parry等人2009.Heart95:416-420)、头朝上倾斜和3分钟后重复的血液取样以及根据Italian方案的可选的硝酸甘油激发(Bartoletti等人2000.Europace2:339-342)、由Goldstein提议的堵鼻鼓气法(GoldsteinandSharabi2009.Circulation119:139-146)和最后根据Wieling的主动站立测试(Wieling等人2007.ClinSci(Lond)112:157-165)。使用验证的Nexfin监护仪(BMEYE,TheNetherlands)连续跟踪血压(BP)和其它血液动力学参数以及ECG(Eeftinck等人2009.Hypertens22:378-383)。如果在测试的特定部分过程中血液动力反应是诊断性的，尽管如此，我们仍然继续进行至下一部分以调查诊断之间的可能重叠。如果结果是非诊断性的或非结论性的，则主要研究人员与可能对延长的ECG监控和额外的心脏测试作决定的心律失常专家讨论其它方法。
当a)患者显示典型的前驱症状(眩晕、轻度头痛、晕厥前期)和/或再现的晕厥，和b)血液动力反应满足血管迷走反射(神经介导的)晕厥(VVS、NMS)、颈动脉窦过敏(CSH)、体位直立性心动过速综合征(POTS)和直立性低血压(OH)的诊断标准(Moya等人2009.EurHeartJ30:2631-2671；Parry等人2009.Heart95:416-420)，则测试是诊断性的。简而言之，VVS被定义为与明显的低血液和/或心动过缓/心搏停止的特征模式相关的晕厥的再现，CSH被定义为大于等于50mmHg的SBP的下降和/或大于3秒的心搏停止，OH被定义为大于等于20mmHg的收缩BP(SBP)的持续下降和/或大于等于10mmHg的舒张BP(DBP)的下降，或小于90mmHg的收缩BP(典型OH，在3min的倾斜期内；和延迟OH，在3至20min之间)，而POTS具有大于30/min的心率增加或在站立位时大于120/min的心运过速的直立耐受不能的特征症状。心动抑制性晕厥被定义为达到少于40bpm(超过10秒)的心室率的心率下降或大于3秒的心搏停止，然而血管减压反射被定义为在晕厥时与其峰值相差小于等于10％的心率下降(Brignole等人2000.Europace2:66-76)。当在站立后15秒内瞬间BP下降大于40mmHg(对于SBP)和/或大于20mmHg(对于DBP)，伴随脑低灌注的症状发生并且患者报告典型的晕厥情况(Wieling等人2007.ClinSci(Lond)。112:157-165)时，呈现初始性OH。
如果在倾斜期中直立性挑战在常规OH标准(大于等于20mmHg的持续SBP下降)方面是阳性的，但患者未再现症状或结果是不确定的，如果站立SBP>90mmHg的话，我们通常继续进行硝酸甘油激发。如果患者发生低血压和心动过速而无特征性血液动力血管迷走神经模式和伴随症状，则硝酸甘油激发不是诊断性的(Moya等人2009.EurHeartJ30:2631-2671)。为了确定诊断的准确性，随后使用由Nexfin系统提供的NexfinPC(BMEYE,TheNetherlands)(被开发来显现、重演和再分析测试测量(incl.ECG)的软件工具)离线检查数字测试记录。
生物标志物测量
在开始测试之前以仰卧位体积15分钟后收集血液样品。从收集后于-80℃冷冻的血液样品(塑料热管中的16x250μl的EDTA血浆等分)测量生物标志物。按照制造商的说明书使用下列测定法测量肽素(C末端精氨酸加压素原；CT-proAVP)，精氨酸加压素前体的稳定肽(Fenske等人2009.JClinEndocrinolMetab94：123–129)、C末端内皮缩血管肽-1前体片段(CT-proET-1)(Papassotiriou等人2006.ClinChem52:1144-1151)、心房钠尿肽原中段(MR-proANP)(Morgenthaler等人2004.ClinChem50:234-236)、肾上腺髓质素原中段(MR-proADM)(Caruhel等人2008.ClinChem54：A119)和原降钙素(Morgenthaler等人2002.ClinChem48：788-790)：ThermoScientificB·R·A·H·M·SCT-proAVPLIA；ThermoScientificB·R·A·H·M·SCT-proET-1KRYPTOR；ThermoScientificB·R·A·H·M·SMR-proANPKRYPTOR；ThermoScientificB·R·A·H·M·SMR-proADMKRYPTOR；ThermoScientificB·R·A·H·M·SPCTsensitiveLIA(BRAHMSGmbH,Hennigsdorf,Germany)。
统计分析
我们使用逻辑回归模型来评估特定诊断与分析的生物标志物之间的关系。我们进行多重变量调整后逻辑回归分析(multivariateadjustedlogisticregressionanalysis)，将VVS、CSH、OH、POTS、初始性OH、心动抑制和血管减压反射作为应变量输入，同时分别添加每一个生物标志物作为协变量。针对年龄、性别和BMI调整模型1，然而针对SBP、DBP、心率和估计的GFR额外地调整更加综合的模型2。在下一阶段，同时在模型2中输出与特定诊断显著相关的生物标志物，我们进行协变量的后退消去法以鉴定特定晕厥诊断的独立预测因素。随后我们评估晕厥诊断在对应的显著相关的生物标志物的血浆浓度的四分位数间的分布。我们应用逻辑回归模型1和2，输入四分位数(第一或第四)，以特定诊断的最低频率作为参照。CSH的分布限定于超过60岁的那些人，因为该状态在更年轻的个体中极其罕见。未评估POTS的分布，因为仅有11个个体具有POTS诊断。使用IBMSPSS统计软件19.0版(SPSSInc.,Chicago,IL)进行所有计算。所有检验是双侧的，p<0.05被认为是统计上显著的。
结果
如可在表1中看到的，包括的患者报告在8年的时间中发生平均7次晕厥发作。此外，10个患者中有4个报告他们因高血压而被治疗，最常见地利用β-阻断剂、RAAS抑制剂和钙离子通道阻断剂进行治疗。估量的生物标志物的静息血浆浓度(Restingplasmaconcentrations)示于表2中。基于扩展HUTT的结果，总共142个(56％)患者被诊断为患有VVS，85个(33％)被诊断为患有OH，47个(18％)被诊断为患有CSH，11个(4％)被诊断为患有POTS。直立性低血压在典型(n＝42)与延迟形式(n＝43)之间等同地分布。在30个患者(12％)中，未发现明确的晕厥病因学，但在它们的两个中长期ECG监控显示晕厥过程中的缓慢心律失常，随后用起搏器治疗他们。诊断之间不存在重叠，因为OH和POTS频繁地促成VVS(分别地在31和6个患者中)，18个具有VVS的患者也满足CSH标准。总共35个患者(13.7％)在测试过程中具有心动抑制性晕厥；在这些患者中，29个归因于血管迷走反射，6个归因于颈动脉窦反射。平行地，32个患者(12.5％)在晕厥过程中显示血管减压模式。在179个具有表明初始性OH的历史的患者中进行主动站立测试；在这些患者中，40个(22.3％)满足初始性直立性低血压的诊断标准。
不同晕厥诊断的单标志物值的盒须图示于图2至6中。
在单标志物多重变量调整后模型中，VVS与更低的MR-proANP、MR-proADM、CT-proET-1、CT-proAVP和原降钙素显著相关，然而OH与更高的肾素和CT-proET-1显著相关(表3)。此外，CSH与更低的MR-proANP、MR-proADM和CT-proET-1相关，对于心动抑制反应亦如此。血管减压反射与更低的原降钙素和MR-proADM弱相关(p<0.10)。最后，POTS与更低的原降钙素显著相关，初始性OH与更低的CT-proAVP相关(表3)。在多重标志物调整后模型2中，在协变量的后退消去后，VVS与更低的MR-proANP(比值比[OR]/一个标准差[SD]：0.51,0.34-0.77；p＝0.001)和CT-proET-1(OR：0.38,0.23-0.62；p<0.001)、更高的静息SBP(OR/10mmHg：1.17,95％的置信区间：1.03-1.32,p＝0.015)以及更低的静息心率(OR/10bpm：0.76,0.61-0.95,p＝0.020)相关。平行地，更高的CT-proET-1和肾素(分别地，OR/一个SD：1.94,1.27-2.96；p＝0.002，和1.34,1.01-1.78；p＝0.041)和增龄(OR/10岁：1.23,1.04-1.42,p＝0.015)预示着OH。此外，CSH与更低的MR-proANP(OR/一个SD：0.40,0.24-0.66；p<0.001)和增龄(OR/10岁：2.38,1.86-2.92；p<0.001)相关，然而POTS与更低的原降钙素(OR/一个SD：0.21,0.06-080；p＝0.023)和年龄(OR/10岁：0.46,0.44-0.63；p＝0.001)、女性(OR：10.0,1.1-90.9；p＝0.043)和更高的静息心率(OR/10bpm：1.94,1.0-2.19；p＝0.037)相关。初始性OH与更低的CT-proAVP(OR/一个SD：0.57,0.36-0.89,p＝0.013)、更高的静息DBP(OR/10mmHg：1.11,1.03-1.18,p＝0.003)相关，并且相反地，与更低的静息SBP(OR/10mmHg：0.68,0.56-0.85；p＝0.002)和估计的肾小球滤过率(eGFR)(OR/10ml/min：0.86,0.78-0.96；p＝0.012)相关。此外，更低的CT-proET-1预示着测试期间的心动抑制性晕厥(OR/一个SD：0.34,0.22-0.53；p<0.001)，对于更低的静息心率(OR/10bpm减少：1.45,1.04-1.89；p＝0.037)和男性(OR：2.70,1.17-6.32；p＝0.021)亦如此。血管减压反射与原降钙素(OR/一个SD：0.59,0.35-1.00；p＝0.050)反相关。
如图7-12中所示，晕厥诊断与鉴定的预测生物标志物的四分位数之间的关系遵循两个不同的模式：线性和阈值样(threshold-like)模式。线性模式表征MR-proANP与VVS(图7)之间以及CT-proET-1与VVS(图8)、OH(图9)和心动抑制反射(图11)之间的关系，然而观察到CT-proAVP与初始性OH之间的阈效应(图12)。将MR-proANP与CSH之间的关系(图10)与线性和阈值样效应组合。对于与血管迷走反射相关的MR-proANP(<51pmol/L)和CT-proET-1(<46pmol/L)的最低四分位数，以及对于与初始性OH相关的CT-proAVP(<3.1pmol/L)的最低四分位数观察到最强的阳性预测值。平行地，CT-proET-1的最低四分位数预示OH为阴性，然而CT-proET-1的最高四分位数(>69pmol/L)通常排除心动抑制反射。在完全调整后模型2中每一对晕厥诊断和对应生物标志物的四分位数的逻辑回归分析的概述示于表4中。
单个标志物和不同晕厥诊断的接收者操作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)概述于表5中。不同的截断值用于测定每一个标志物的对应灵敏度和特异度，以诊断晕厥的各自形式(表6至12)。
对于标志物组合，进行对数转换的生物标志物值的逻辑回归。用于的初始性OH的诊断的MR-proANP、MR-proADM、CT-proET-1和肽素的组合表现好于(OR0.62[95％CI0.41–0.91])单个标志物MR-proANP(OR0.70[95％CI0.48–1.00])、MR-proADM(OR0.72[95％CI0.50–1.02])、CT-proET-1(OR0.70[95％CI0.51-0.98])或肽素(OR0.65[95％CI0.44–0.96]。此外，用于血管迷走神经性晕厥的诊断的MR-proANP、MR-proADM、CT-proET-1和肽素的组合表现好于(OR0.29[95％CI0.20–0.42])单个标志物MR-proANP(OR0.38[95％CI0.28–0.52])、MR-proADM(OR0.35[95％CI0.25–0.49])、CT-proET-1(OR0.36[95％CI0.24-0.52])或肽素(OR0.51[95％CI0.38–0.68])。
对于系列测量，使用δ对数转换的生物标志物值应用逻辑回归。肽素从基线至站立的增加显示了与心动抑制反射的强相关性(OR1.48[95％CI1.11–1.98])。CT-proET-1从基线至站立的增加排除了直立性低血压(OR0.84[95％CI0.65–1.08])，然而PCT从基线至站立的增加与POTS显著相关(OR2.42[95％CI1.04–5.62])。
此外，我们的结果显示肽素从基线至站立的增加与自发VVS(非由硝酸甘油应用刺激的)密切相关(OR2.54[95％CI1.47-4.39])，然而MR-proANP从基线至站立的增加与自发VVS反相关(OR0.79[95％CI0.57–1.10])。
表1：研究参与者的临床特征(N＝255)
表3：多重变量调整后逻辑回归模型*中晕厥诊断与调查的血浆标志物之间的关系(模型1，第一行；模型2，第二行；比值比，95％的置信区间，p值)。比值比由对数转换的血浆生物标志物浓度的一个标准差表现。
*模型1，针对年龄、性别和BMI调整的；模型2，针对年龄、性别和BMI、收缩和舒张血压、心率以及估计的肾小球滤过率调整的

Claims (19)

1.用于测定患者的体液样品中CT-proET-1的水平的试剂在制备晕厥的治疗分层的诊断试剂盒中的用途，其中通过测定CT-proET-1的水平根据所述患者对心脏起搏器的需要对患者进行分层，其中高于预定阈值水平的水平表示不需要心脏起搏器的患有直立性低血压的患者，以及其中低于预定阈值水平的水平表示需要心脏起搏器的患有心动抑制反射的患者。
2.权利要求1的用途，其中所述样品在立位耐力测试开始之前的基线时被采集。
3.权利要求2的用途，其中所述患者的体液的至少一个样品在立位耐力测试过程中或之后被采集。
4.权利要求2的用途，其中所述立位耐力测试是HUT测试或主动站立测试。
5.权利要求1的用途，其中所述试剂盒用于测试所述患者的至少两个体液样品中CT-proET-1的水平，所述样品是在立位耐力测试开始之前的基线时和所述测试过程中或之后采集的。
6.权利要求1至5任一项的用途，其中所述CT-proET-1的水平被组合入数学算法中。
7.权利要求1至5任一项的用途，其中将CT-proET-1水平与至少一个临床参数组合，所述参数选自年龄、性别、体质指数BMI、收缩血压、舒张血压、心率、肾小球滤过率GFR、总胆固醇、HDL-胆固醇、晕厥发作的次数和距离首次晕厥发作的时间。
8.权利要求1至5任一项的用途，其中所述直立性低血压选自初始性OH、典型OH、延迟或进行性OH和POTS。
9.权利要求1至5任一项的用途，其中所述样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊髓液样品、唾液样品和尿样品或前述样品任一种的提取物。
10.权利要求1至5任一项的用途，其中所述试剂盒用于测定CT-proET-1的水平。
11.权利要求1至5任一项的用途，其中当所述测定的基线CT-proET-1水平低于预定阈值水平时，所述患者被诊断为未患有直立性低血压。
12.权利要求1至5任一项的用途，其中当所述测定的基线CT-proET-1水平高于预定阈值水平时，所述患者被诊断为未患有心动抑制反射。
13.权利要求1至5任一项的用途，其中所述试剂盒使用针对包含如SEQIDNO：18所示的人proET-1序列的氨基酸167至183的肽的第一抗体和针对包含如SEQIDNO：18所示的人proET-1序列的氨基酸183至195的肽的第二抗体，通过夹心免疫测定法来检测CT-proET-1。
14.权利要求1至5任一项的用途，其中所述试剂盒用于就治疗性治疗以及药物治疗和心脏起搏法对患者进行分层。
15.权利要求14的用途，其中所述治疗性治疗为身体抗压动作，和倾斜训练。
16.权利要求15的用途，其中所述身体抗压动作为腿或手臂的等长PCM。
17.权利要求16的用途，其中所述身体抗压动作为腿交叉或手紧握和手臂绷紧。
18.权利要求14的用途，其中所述药物治疗是α-拮抗剂的施用。
19.权利要求18的用途，其中所述药物治疗是米多君的施用。
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3168618B1 (en) 2006-04-04 2018-11-21 Singulex, Inc. Highly sensitive methods for analysis of troponin
US7838250B1 (en) 2006-04-04 2010-11-23 Singulex, Inc. Highly sensitive system and methods for analysis of troponin
CA2762612A1 (en) 2009-06-08 2010-12-16 Singulex, Inc. Highly sensitive biomarker panels
WO2014116708A1 (en) * 2013-01-22 2014-07-31 Singulex, Inc. Endothelin in the diagnosis of cardiac disease
CN109154607A (zh) * 2016-03-09 2019-01-04 拜尔梅里科有限公司 功能性消化不良敏感测试的组合物、设备以及方法
MX2018011166A (es) * 2016-03-15 2019-03-28 Biomerica Inc Composiciones, dispositivos y metodos de prueba de sensibilidad de fibromialgia.
US12001939B2 (en) 2018-12-11 2024-06-04 Eko.Ai Pte. Ltd. Artificial intelligence (AI)-based guidance for an ultrasound device to improve capture of echo image views
US11446009B2 (en) 2018-12-11 2022-09-20 Eko.Ai Pte. Ltd. Clinical workflow to diagnose heart disease based on cardiac biomarker measurements and AI recognition of 2D and doppler modality echocardiogram images
US11931207B2 (en) 2018-12-11 2024-03-19 Eko.Ai Pte. Ltd. Artificial intelligence (AI) recognition of echocardiogram images to enhance a mobile ultrasound device
CN117275737B (zh) * 2023-11-22 2024-02-23 首都医科大学宣武医院 一种直立性低血压智能诊疗方法、设备及可存储介质

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1339466A (zh) * 2000-08-21 2002-03-13 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人内皮素受体b相似蛋白23.65和编码这种多肽的多核苷酸
CN102203608A (zh) * 2008-10-31 2011-09-28 B.R.A.H.M.S有限公司 用于与代谢综合征、心血管疾病和/或胰岛素抗性相关的病症的诊断、预后、监测和治疗追踪的体外方法
CN102428368A (zh) * 2009-05-05 2012-04-25 B.R.A.H.M.S有限公司 患有内皮功能/功能障碍相关疾病的患者的基于血管活性激素的分层

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5993811A (en) * 1997-02-03 1999-11-30 Biology Associates, Llc Method and compositions for preventing and treating the systemic inflammatory response syndrome including sepsis
DE10316583A1 (de) * 2003-04-10 2004-10-28 B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft Bestimmung eines midregionalen Proadrenomedullin-Teilpeptids in biologischen Flüssigkeiten zu diagnostischen Zwecken, sowie Immunoassays für die Durchführung einer solchen Bestimmung
US20060099608A1 (en) * 2004-03-29 2006-05-11 Medstar Research Institute Methods of diagnosing cardiovascular disease
RU2409310C1 (ru) * 2009-10-26 2011-01-20 Федеральное государственное учреждение "Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" Способ диагностики ортостатической гипотензии

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1339466A (zh) * 2000-08-21 2002-03-13 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人内皮素受体b相似蛋白23.65和编码这种多肽的多核苷酸
CN102203608A (zh) * 2008-10-31 2011-09-28 B.R.A.H.M.S有限公司 用于与代谢综合征、心血管疾病和/或胰岛素抗性相关的病症的诊断、预后、监测和治疗追踪的体外方法
CN102428368A (zh) * 2009-05-05 2012-04-25 B.R.A.H.M.S有限公司 患有内皮功能/功能障碍相关疾病的患者的基于血管活性激素的分层

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Impaired Endothelin-1 Release in Tilt-Induced Syncope;Michel White,et al;《THE AMERICAN JOURNAL OF CARDIOLOGY》;19980215;第81卷(第4期);460-464 *
Neurohormonal Response to Head-Up Tilt and Its Role in Vasovagal Syncope;David L. Jardine,et al;《BRIEF REPORTS》;19970505;第79卷(第9期);1302-1306 *
Permanent increase in endothelin serum levels in vasovagal syncope;C.Magerkurth et al;《Clin. Auton. Res.》;20050831;第15卷(第4期);299-301 *
Usefulness of Enelolhelln-I as a Preellclor of Response to Heael-Up nll-taltle "esllng in Chllelren Wllh Syncope-;Mary Mehta,et al.;《THE AMERICAN JOURNAl OF CARDIOlOCY》;19950701;第76卷;86-88 *

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