KR20210044257A - 심방 세동의 평가에서의 순환 bmp10 (골형성 단백질 10) - Google Patents

심방 세동의 평가에서의 순환 bmp10 (골형성 단백질 10) Download PDF

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요한 칼
페터 카슈트너
우르줄라-헨리케 빈휘스-텔렌
마누엘 디트리히
앙드레 치글러
울리 쇼텐
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에프. 호프만-라 로슈 아게
아카데미스 지켄하위스 마스트리흐트
위니베르시테이트 마스트리흐트
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Abstract

본 발명은 대상체에서 심방 세동을 평가하기 위한 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 대상체 유래 샘플에서 BMP10의 양을 결정하는 단계, 및 BMP10의 양을 기준량과 비교하여, 심방 세동을 평가하게 되는 단계를 포함한다. 또한, 본 발명은 대상체 유래 샘플에서의 BMP10의 측정에 기반한 심부전을 진단하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 대상체 유래 샘플에서의 BMP10-유형 펩티드의 측정에 기반한 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 방법에 관한 것이다.

Description

심방 세동의 평가에서의 순환 BMP10 (골형성 단백질 10)
본 발명은 대상체에서 심방 세동을 평가하기 위한 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 대상체 유래 샘플에서 BMP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및 BMP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여, 심방 세동을 평가하게 되는 단계를 포함한다. 또한, 본 발명은 대상체 유래 샘플에서의 BMP10-유형 펩티드의 측정에 기반한 심부전을 진단하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 대상체 유래 샘플에서의 BMP10-유형 펩티드의 측정에 기반한 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 방법에 관한 것이다.
심방 세동 (AF)은 노령 인구에서 가장 흔한 유형의 부정맥이고 가장 광범위한 병태 중 하나이다. 심방 세동은 불규칙한 심장 박동을 특징으로 하고 종종 시간 경과에 따라 증가될 수 있는 짧은 기간의 비정상적인 박동에서 출발하여 지속성 병태가 될 수 있다. 미국에서 2백 7십만명 내지 6백 십만명으로 추산되는 사람들이 심방 세동을 가지고 있으며 전세계적으로는 대략 3천 3백만명으로 추산된다 (Chugh S.S. et al., Circulation 2014;129:837-47).
부정맥 예컨대 심방 세동의 진단은 전형적으로 부정맥의 원인 결정, 및 부정맥의 분류를 포함한다. 미국 심장 학회 (American College of Cardiology; ACC), 미국 심장 협회 (American Heart Association; AHA), 및 유럽 심장 학회 (European Society of Cardiology; ESC)에 따른 심방 세동의 분류에 관한 지침은 주로 단순성 및 임상 관련성을 기반으로 한다. 제1 카테고리는 "최초 검출 AF"라고 한다. 이 카테고리의 사람들은 초기에 AF로 진단되고 이전에 미검출 에피소드를 가졌었을 수도 있었거나 또는 그렇지 않았을 수도 있다. 최초 검출 에피소드가 그 자체로 1주 이내에 중지되지만, 이후에 다른 에피소드가 후속되면, 그 카테고리는 "발작성 AF"로 바뀐다. 이 카테고리의 환자가 최대 7일간 지속되는 에피소드를 갖더라도, 발작성 AF의 대부분의 경우에서 에피소드는 24시간 이내에 중단될 것이다. 에피소드가 1주를 초과하여 지속되면, "지속성 AF"로 분류된다. 이러한 에피소드가 즉, 전기적 또는 약학적 심장율동전환에 의해 중지될 수 없어서, 1년 넘게 지속되면, 그 분류는 "영구적 AF"로 바뀐다. 심방 세동의 조기 진단은 심방 세동이 뇌졸중 및 전신 색전증의 중요 위험 인자이기 때문에 매우 바람직하다 (Hart et al., Ann Intern Med 2007; 146(12):857-67; Go AS et al. 857-67; Go AS et al. JAMA 2001; 285(18): 2370-5). 뇌졸중은 허혈성 심장병 다음으로 고소득 국가에서 손실 장애 (보정) 의 원인으로 그리고 전 세계적으로 사망 원인으로 2 위를 차지한다. 뇌졸중의 위험을 줄이기 위해, 항응고 요법이 가장 적절한 요법으로 보인다.
심방 세동을 평가할 수 있는 바이오마커가 매우 요구된다.
Latini R. et al. (J Intern Med. 2011 Feb; 269(2): 160-71)은 심방 세동을 갖는 환자에서 다양한 순환성 바이오마커 (hsTnT, NT-proBNP, MR-proANP, MR-프로ADM, 코펩틴, 및 CT-프로엔도테린-1)를 측정하였다.
골형성 단백질 10 (약칭 BMP10) 은 단백질의 TGF-베타 (변환 성장 인자-베타) 수퍼패밀리의 리간드이다. 상기 패밀리의 리간드는 다양한 TGF-베타 수용체에 결합하여 유전자 발현을 조절하는 특정 전사 인자의 모집 및 활성화를 유도한다. BMP10 은 액티빈 수용체-유사 키나제 1 (ALK1) 에 결합하고 내피 세포에서 이 키나제의 기능적 활성제인 것으로 나타났다 (David et al., Blood. 2007, 109(5):1953-61).
BMP10 은 비활성 전구체 단백질 (프로-BMP10, ~60 kDa) 로서 합성되고 단백질 분해 절단에 의해 활성화되어 108 aa 의 비-글리코실화 C-말단 펩티드 (~14 kDa; BMP10) 및 ~50 kDa 의 N-말단 프로세그먼트 (prosegment) 를 산출한다 (Susan-Resiga et al., J Biol Chem. 2011 Jul 1;286(26):22785-94). 둘 다 BMP10 의 동종- 또는 이종-이량체를 형성하거나 다른 BMP 패밀리 단백질과 결합하여 구조적 근접성을 유지한다 (Yadin et al., CYTOGFR 2016, 27 (2016) 13-34). 이량체화는 Cys-Cys 브릿지의 형성 또는 두 결합 파트너의 C-말단 펩티드의 강한 접착에 의해 발생한다. 따라서, 두 개의 서브유닛으로 구성된 아키텍처가 형성된다.
BMP10 은 심근세포 증식 및 심장 크기 조절, 동맥관 폐쇄, 혈관신생 및 심실 섬유주 형성을 포함한 심혈관 발달에 역할을 하는 것으로 나타났다.
조직 복구의 조절에 관여하는, 가용성 BMP10 은 심혈관 질환에서도 조직 섬유증과 관련된 진단 및 치료 표적으로 발견되었다 (예, US2013209490 참조) BMP10 의 관련은 혈관 섬유증 및 심장 섬유증에서 설명되었다.
US 2012/0213782 는 BMP10 프로펩티드가 심장 질환 치료에 사용될 수 있음을 개시한다.
BMP10 의 일반적인 역할은 혈관 리모델링의 발달 조절에 있다 (Ricard et al., Blood. 2012 Jun 21; 119(25): 6162-6171). 또한, BMP10 은 심장 발달 인자 (Huang et al., J Clin Invest. 2012;122(10):3678-3691) 이며 심근 경색시 심근세포 증식을 유도한다 (Sun et al., J Cell Biochem. 2014;115(11)_1868-1876). 또한 내피 세포에서 유래한다고 설명되어 있다 (Jiang et al., JBC 2016, 291(6): 2954-2966).
유전자전사적 (transcriptomic) 분석은 건강한 상태에서 BMP10 mRNA 가 심장 우심방 및 우심방이에서 강하게 발현된다는 것을 보여준다. 이것은 좌심방이와 비교하여 오른쪽에서 우세하게 발현된다 (Kahr et al., Plos ONE, 2010, 6(10): e26389).
지금까지, 순환 BMP10-유형 펩티드는 심방 세동과 관련이 없었다.
심방 세동의 진단, 심방 세동을 갖는 환자의 위험도 계층화 (예컨대, 뇌졸중의 발병), 심방 세동의 중증도의 평가, 및 심방 세동을 갖는 환자에서 요법의 평가를 포함한 심방 세동의 평가를 위한 신뢰할 만한 방법이 요구된다.
본 발명의 기초가 되는 기술적 문제는 상기에 언급된 요구에 부응하는 방법의 제공으로서 확인할 수 있다. 기술적 문제는 하기 청구항 및 본 명세서에서 특징규명한 구현예에 의해 해결된다.
유리하게, 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양의 결정은 심방 세동의 개선된 평가를 가능하게 한다는 것을 본 발명의 연구와 관련하여 확인하였다. 본 발명 덕분에, 예를 들어 대상체가 심방 세동을 앓고 있는지 또는 심방 세동과 연관된 뇌졸중을 겪을 위험이 있는지 여부를 진단할 수 있다.
본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심방 세동이 평가되는 단계.
본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 심방 세동의 평가를 보조하는 방법에 관한 것이다:
a) 대상체로부터 적어도 하나의 샘플을 제공하는 단계,
b) 단계 a) 에서 제공된 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
c) BMP10-유형 펩티드의 결정된 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 결정된 양에 관한 정보를 의사에게 제공하여, 심방 세동의 평가를 보조하는 단계.
추가로, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 심방 세동의 평가를 보조하기 위한 방법을 고려한다:
a) BMP10-유형 펩티드에 대한 어세이 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 바이오마커에 대한 적어도 하나의 추가 어세이를 제공하는 단계, 및
b) 심방 세동의 평가에서 상기 어세이(들) 에 의해 수득되거나 또는 수득가능한 어세이 결과의 사용을 위한 지침을 제공하는 단계.
또한 본 발명에는 하기 단계를 포함하는, 심방 세동을 평가하기 위한 컴퓨터 구현 방법이 포함된다:
a) 프로세싱 유닛에서 BMP10-유형 펩티드의 양에 대한 값, 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양에 대한 적어도 하나의 추가 값을 수신하는 단계, 여기서 상기 BMP10 의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양은 대상체 유래의 샘플에서 결정되었음,
b) 상기 프로세싱 유닛에 의해, 단계 a) 에서 수신된 값 또는 값들을 기준 또는 기준들과 비교하는 단계, 및
c) 비교 단계 b) 에 기반하여 심방 세동을 평가하는 단계.
본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 심부전을 진단하는 방법에 관한 것이다:
(a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
(b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심부전이 진단되는 단계.
본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 방법에 관한 것이다:
(a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계,
(b) BMP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하는 단계, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교하는 단계, 및
(c) 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 단계.
본 발명은 또한 BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제 및 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제를 포함하는 키트에 관한 것이다.
게다가, 본 발명은 심방 세동 평가, 뇌졸중 위험 예측, 심부전 진단 또는 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성 예측을 위한, 하기:
i) BMP10-유형 펩티드 및, 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커, 및/또는
ii) BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 및, 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제
의 시험관 내 용도에 관한 것이다.
본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서 BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하여, 심방 세동을 평가하게 되는 단계.
BMP10-유형 펩티드는 바람직하게는 BMP10, BMP10 의 N-말단 프로세그먼트 (N-말단 proBMP10), proBMP10 및 preproBMP10 으로 구성된 군에서 선택된다. 더욱 바람직하게는, BMP10-유형 펩티드는 BMP10 및/또는 N-말단 proBMP10 이다.
본 발명의 방법의 한 구현예에서, 방법은 단계 a) 에서 대상체 유래의 샘플에서 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 측정하는 것 및 단계 b) 에서 기준량에 대한 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 비교하는 것을 포함한다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심방 세동이 평가되는 단계.
심방 세동 (AF)의 평가는 비교 단계 b) 의 결과를 기반으로 하게 될 것이다.
따라서, 본 발명은 바람직하게는 하기 단계를 포함한다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계,
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하는 단계, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교하는 단계, 및
c) 비교 단계 b) 의 결과를 기반으로 심방 세동을 평가하는 단계.
본 발명에 따라 언급되는 방법은 상기 언급된 단계로 본질적으로 이루어지는 방법 또는 추가 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 게다가, 본 발명의 방법은 바람직하게 생체외, 보다 바람직하게는 시험관내 방법이다. 게다가, 상기 명확하게 언급된 것들에 더하여, 단계들을 포함할 수 있다. 예를 들어, 추가 단계는 추가 마커의 결정 및/또는 샘플 전처리 또는 방법으로 수득된 결과의 평가에 관한 것일 수도 있다. 방법은 수동으로 수행할 수 있거나 또는 자동화로 보조될 수 있다. 바람직하게, 단계 (a), (b) 및/또는 (c)는 단계 (a)에서의 결정 또는 단계 (b)에서 컴퓨터-실행 계산의 경우에 자동화를 통해서, 예를 들어, 적합한 로봇식 및 감지식 장비를 통해서 전체적으로 또는 부분적으로 보조될 수 있다.
본 발명에 따라서, 심방 세동을 평가하게 된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "심방 세동을 평가하는"은 바람직하게 심방 세동의 진단, 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별, 심방 세동과 연관된 부작용 위험성의 예측 (예컨대, 뇌졸중), 심전도검사 (ECG)가 수행되어야 하는 대상체의 식별, 또는 심방 세동에 대한 요법의 평가에 관한 것이다.
당업자가 이해하게 되는 바와 같이, 본 발명의 평가는 일반적으로 검사되는 대상체의 100%에 대해 정확한 것을 의도하는 것이 아니다. 이 용어는 바람직하게 정확한 평가 (예컨대, 본 명세서에서 언급되는 바와 같은 진단, 구별, 예측, 식별 또는 요법의 평가)가 대상체의 통계적으로 유의한 부분에 대해서 이루어질 수 있는 것을 요구한다. 부분이 통계적으로 유의한지 여부는 다양한 충분히 공지된 통계적 평가 도구, 예를 들어 신뢰 구간의 결정, p-값 결정, 스튜던트 t-검정법, 만-위트니 검정법 등을 사용하여 당업자가 추가의 노력없이 결정할 수 있다. 자세한 내용은 Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983 에서 확인된다. 바람직한 신뢰 구간은 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 이다. p-값은 바람직하게, 0.4, 0.1, 0.05, 0.01, 0.005, 또는 0.0001이다.
본 발명에 따르면, 표현 "심방 세동의 평가"는 심방 세동의 평가에서 보조로서 이해되고, 따라서 심방 세동의 진단에서 보조, 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별에서 보조, 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성 예측에서 보조, 심전도검사 (ECG)를 수행해야 하는 대상체의 식별에서 보조, 또는 심방 세동에 대한 요법의 평가에서 보조로서 이해된다. 최종 진단은, 원칙적으로 의사가 실시할 것이다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 심방 세동의 진단이다. 따라서, 대상체가 심방 세동을 앓는지, 또는 그렇지 않은지 여부를 진단한다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동을 진단하기 위한 방법을 구상한다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교함으로써, 심방 세동을 진단하게 되는 단계.
일 구현예에서, 상기 언급된 방법은 하기 단계를 포함한다:
(a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
(b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심방 세동이 진단되는 단계.
바람직하게, 심방 세동의 진단을 위한 방법과 연관되어 검사되는 대상체는 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체이다. 그러나, 대상체가 이미 이전에 AF를 앓는 것으로 진단되었고 이전 진단을 본 발명의 방법을 수행하여 확증하는 것을 또한 고려한다.
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별이다. 따라서, 대상체가 발작성 또는 지속성 심방 세동을 앓는지 여부가 결정된다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별을 위한 방법을 고려한다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여, 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별을 하는 단계.
일 구현예에서, 상기 언급된 방법은 하기 단계를 포함한다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별을 하는 단계.
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성 (예컨대 뇌졸중)의 예측이다. 따라서, 대상체가 상기 부작용의 위험성이 있는지 여부 및/또는 위험성이 없는지 여부를 예측한다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성을 예측하기 위한 방법을 고려한다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여, 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성을 예측하게 되는 단계.
일 구현예에서, 상기 언급된 방법은 하기 단계를 포함한다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성을 예측하게 되는 단계.
다양한 부작용을 예측할 수 있다는 것을 고려한다. 예측하려는 바람직한 부작용은 뇌졸중이다.
따라서, 본 발명은 특히, 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 뇌졸중의 위험성을 예측하기 위한 방법을 고려한다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여, 뇌졸중의 위험성을 예측하게 되는 단계.
상기 언급된 방법은 단계 b)의 비교 결과를 기반으로 뇌졸중을 예측하는 단계 c)를 더 포함할 수 있다. 따라서, 단계 a), b), c)는 바람직하게 다음과 같다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하는 단계, 및
c) 단계 b)의 비교 결과를 기반으로 뇌졸중을 예측하는 단계.
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 심방 세동에 대한 요법의 평가이다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동에 대한 요법의 평가를 위한 방법을 고려한다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여, 심방 세동에 대한 요법을 평가하는 단계.
일 구현예에서, 상기 언급된 방법은 하기 단계를 포함한다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심방 세동에 대한 요법을 평가하는 단계.
바람직하게, 심방 세동에 대한 상기 언급된 구별, 상기 언급된 예측, 및 요법의 평가와 관련된 대상체는 심방 세동을 앓는 대상체, 특히 심방 세동을 앓는 것으로 알려진 (따라서 심방 세동의 기지 병력을 갖는) 대상체이다. 그러나, 상기 언급된 예측 방법과 관련하여, 또한 대상체는 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는다는 것을 고려한다.
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 심전도검사 (ECG)가 수행되어야 하는 대상체의 식별이다. 따라서, 대상체는 심전도검사가 수행되어야 하거나, 또는 그렇지 않다는 것이 식별된다.
본 방법은 하기 단계를 포함할 수 있다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심전도검사가 수행되어야 할 대상체를 식별하는 단계.
바람직하게, 심전도검사가 수행되어야 하는 대상체를 식별하는 상기 방법과 연관된 대상체는 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는 대상체이다. 표현 "심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는"은 본 명세서의 다른 곳에서 정의된다.
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 대상체의 항응고 요법의 효능의 평가이다. 따라서, 상기 요법의 효능을 평가한다.
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 대상체에서 뇌졸중 위험성의 예측이다. 따라서, 본 명세서에서 언급되는 대상체가 뇌졸중의 위험성이 있는지, 또는 그렇지 않은지 여부가 예측된다.
본 발명의 또 다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 적어도 하나의 항응고 약제의 투여에 적합하거나 또는 적어도 하나의 항응고 약제의 투여량을 증가시키기에 적합한 대상체의 식별이다. 따라서, 대상체가 상기 투여 및/또는 상기 투여량의 증가에 적합한지 여부가 평가된다.
본 발명의 또다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동의 평가는 항응고 요법의 모니터링이다. 따라서, 대상체가 상기 요법에 반응하는지, 또는 그렇지 않은지 여부를 평가한다.
용어 "심방 세동" ("약어" AF 또는 AFib)은 당분야에 충분히 공지되어 있다. 본 명세서에서 사용시 이 용어는 바람직하게 비조율성 심방 활성화와 그 결과로 심방의 기계적 기능의 악화를 특징으로 하는 심실위 빈맥성 부정맥을 의미한다. 특히, 이 용어는 빠르고 불규칙적인 박동을 특징으로 하는 비정상적인 심장 리듬을 의미한다. 여기에는 심장의 2개의 윗심실이 관여된다. 정상적인 심장 리듬에서, 동방 결절에 의해 발생된 임펄스가 심장을 통해 확산되고 심장 근육의 수축 및 혈액의 펌핑을 일으킨다. 심방 세동에서, 동방 결절의 규칙적인 전기 임펄스는 체계적이지 않은, 빠른 전기 임펄스로 교체되고 그 결과로 불규칙적인 심장 박동이 초래된다. 심방 세동의 증상은 심계 항진, 실신, 숨가뿜, 또는 흉부 통증이다. 그러나, 대부분의 에피소드는 무증상이다. 심전도 시에, 심방 세동은 방실 전도가 온전할 때, 불규칙적이고, 빈번하게 빠른 심실 반응과 연관된, 진폭, 형상, 및 시기가 다양한 빠른 진동 또는 세동 파동으로의 일관된 P 파의 대체를 특징으로 한다.
미국 심장 학회 (ACC), 미국 심장 협회 (AHA), 및 유럽 심장 학회 (ESC)는 다음의 분류 체계를 제안한다 (예를 들어, 문헌 [Fuster V. et al., Circulation 2006;114 (7):e257-354]을 참조하고, 이의 전문을 참조로 본 명세서에 편입시키며, 예를 들어 이 문헌의 도 3을 참조한다): 최초 검출 AF, 발작성 AF, 지속성 AF, 및 영구적 AF.
AF를 갖는 모든 사람은 초기에 최초 검출 AF라고 하는 카테고리에 있다. 그러나, 대상체는 이전에 미검출된 에피소드를 가졌을 수 있거나 또는 갖지 않았을 수 있다. 대상체는 AF가 1년 넘게 지속되고, 특히 부비동 리듬으로의 반전이 일어나지 않으면 (또는 오직 의료적 중재술로만), 영구적 AF를 앓는다. 대상체는 AF가 7일 넘게 지속되면, 지속성 AF를 앓는다. 대상체는 심방 세동을 종결하기 위해 약학적 또는 전기적 중재술을 요구할 수 있다. 바람직하게, 지속성 AF는 에피소드로 일어나지만, 부정맥은 동리듬으로 자발적으로 (즉, 의료적 중재술없이) 반전되지 않는다. 발작성 심방 세동은, 바람직하게, 최대 7일 동안 지속되는 심방 세동의 간헐적 에피소드를 의미한다. 발작성 AF의 대부분의 사례에서, 에피소드는 24시간 이내로 지속된다. 심방 세동의 에피소드는 자발적으로, 즉 의료적 중재술없이 종결된다. 따라서, 발작성 심방 세동의 에피소드(들)는 바람직하게 자발적으로 종결되지만, 지속성 심방 세동은 바람직하게 자발적으로 종료되지 않는다. 바람직하게, 지속성 심방 세동은 종결을 위한 전기적 또는 약학적 심장율동전환 또는 다른 시술, 예컨대 절제 시술을 요구한다 (Fuster V. et al., Circulation 2006;114 (7):e257-354). 지속성 및 발작성 AF 둘 모두는 재발성일 수 있어서, 발작성 및 지속성 AF의 구분은 ECG 기록에 의해 제공된다: 환자가 2회 이상의 에피소드를 가진 경우, AF는 재발성으로 간주된다. 부정맥이 자발적으로 종결되면, AF, 특히 재발성 AF는 발작성이라고 명명된다. AF는 7일 넘게 지속되면 지속성으로 명명된다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 용어 "발작성 심방 세동"은 자발적으로 종결되는 AF의 에피소드로서 정의되며, 상기 에피소드는 24시간 이내로 지속된다. 대안적인 구체예에서, 자발적으로 종결되는 에피소드는 7일 이하로 지속된다.
본 명세서에서 언급되는 "대상체"는 바람직하게, 포유동물이다. 포유동물은 제한없이 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 인간 이외의 영장류 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트) 를 포함한다. 바람직하게, 대상체는 인간 대상체이다.
바람직하게, 검사되는 대상체는 임의 연령이고, 보다 바람직하게는, 검사되는 대상체는 50세 이상이고, 보다 바람직하게는 60세 이상이며, 가장 바람직하게는 65세 이상이다. 더 나아가서, 검사하려는 대상체는 70세 이상을 고려한다.
게다가, 검사되는 대상체는 75세 이상을 고려한다. 또한, 대상체는 50세 내지 90세일 수 있다.
심방 세동을 평가하는 방법의 바람직한 구체예에서, 검사되는 대상체는 심방 세동을 앓고 있어야 한다. 따라서, 대상체는 심방 세동의 기지 병력을 가져야 한다. 따라서, 대상체는 검사 샘플을 수득하기 전에 심방 세동의 에피소드를 경험해야 하고, 심방 세동의 이전 에피소드의 적어도 하나는 예를 들어, ECG에 의해 진단되었을 것이다. 예를 들어, 심방 세동의 평가가 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별인 경우, 또는 심방 세동의 평가가 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성의 예측인 경우, 또는 심방 세동의 평가가 심방 세동에 대한 요법의 평가인 경우, 대상체는 심방 세동을 앓는 것으로 간주된다.
심방 세동을 평가하는 방법의 다른 바람직한 구체예에서, 검사되는 대상체는 예를 들어, 심방 세동의 평가가 심방 세동의 진단 또는 심전도검사 (ECG)를 수행해야 하는 대상체의 식별인 경우, 심방 세동을 앓고 있는 것으로 의심된다.
바람직하게, 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체는 심방 세동을 평가하기 위한 방법을 수행하기 전에 심방 세동의 적어도 하나의 증상을 보인 대상체이다. 상기 증상은 일반적으로 일시적이고 수 초 간 발생될 수 있고 아주 빠르게 사라질 수 있다. 심방 세동의 증상은 현기증, 실신, 숨가뿜 및, 특히, 심계 항진을 포함한다. 바람직하게, 대상체는 샘플을 수득하기 전 6개월 이내에 심방 세동의 적어도 하나의 증상을 가졌었다.
대안적으로 또는 추가적으로, 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체는 70세 이상인 대상체일 수 있다.
바람직하게, 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체는 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않을 수 있다.
본 발명에 따라서, 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는 대상체는 바람직하게 이전에, 즉 본 발명의 방법을 수행하기 전 (특히, 대상체 유래 샘플을 수득하기 전)에 심방 세동을 앓는다고 진단받지 않았던 대상체이다. 그러나, 대상체는 이전에 미진단된 심방 세동의 에피소드를 가졌을 수 있거나 또는 갖지 않았을 수 있다.
바람직하게, 용어 "심방 세동"은 모든 유형의 심방 세동을 의미한다. 따라서, 이 용어는 바람직하게 발작성, 지속성 또는 영구적 심방 세동을 포괄한다.
그러나, 본 발명의 일 구체예에서, 검사되는 대상체는 영구적 심방 세동을 앓고 있지 않다. 본 구체예에서, 용어 "심방 세동"은 오직 발작성 및 지속성 심방 세동을 의미하는 것이 바람직하다.
그러나, 본 발명의 일 구체예에서, 검사되는 대상체는 발작성 및 지속성 심방 세동을 앓고 있지 않다. 본 구체예에서, 용어 "심방 세동"은 오직 지속성 심방 세동을 의미하는 것이 바람직하다.
검사되는 대상체는 샘플이 수득될 때 심방 세동의 에피소드를 경험하지 않았을 수 있거나 또는 경험했을 수 있다. 따라서, 심방 세동의 평가의 바람직한 구체예 (예컨대, 심방 세동의 진단)에서, 대상체는 샘플이 수득될 때 심방 세동의 에피소드를 경험하지 않는다. 이러한 구체예에서, 대상체는 샘플이 수득될 때 정상 동리듬을 가져야 한다 (따라서 동리듬이어야 함). 따라서, 심방 세동의 진단은 심방 세동의 (일시적) 부재 하에서도 가능하다. 본 발명의 방법에 따라서, 본 명세서에서 언급되는 바이오마커의 상승은 심방 세동의 에피소드 이후에 보존되어야 하고, 따라서, 심방 세동을 앓았던 대상의 진단을 제공한다. 바람직하게, AF의 진단은 본 발명의 방법을 수행한 후 (또는 보다 정확하게 샘플을 수득한 후) 약 3일 이내, 약 1개월 이내, 약 3개월 이내, 또는 약 6개월 이내이다. 바람직한 구체예에서, 에피소드 이후 약 6개월 이내에 심방 세동의 진단이 실현가능하다. 바람직한 구체예에서, 에피소드 이후 약 6개월 이내에 심방 세동의 진단이 실현가능하다. 따라서, 본 명세서에서 언급되는 심방 세동의 평가, 특히 심방 세동의 평가와 연관된 본 명세서에서 언급되는 진단, 위험성의 예측 또는 구별은 바람직하게 심방 세동의 마지막 에피소드 이후 약 3일 이후, 보다 바람직하게는 약 1개월 이후, 보다 바람직하게는 약 3개월 이후, 및 가장 바람직하게는 약 6개월 이후에 수행된다. 결론적으로, 검사되는 샘플은 바람직하게 심방 세동의 마지막 에피소드 이후에 약 3일 후, 보다 바람직하게는 약 1개월 후, 보다 더 바람직하게는 약 3개월 후, 및 가장 바람직하게는 약 6개월 후에 수득하는 것을 고려한다. 따라서, 심방 세동의 진단은 바람직하게 또한 샘플을 수득하기 전에 바람직하게 약 3일 이내, 보다 바람직하게는 약 3개월 이내, 및 가장 바람직하게는 약 6개월 이내에 일어나는 심방 세동의 에피소드의 진단을 포괄한다.
그러나, 대상체는 샘플을 수득할 때 (예를 들어, 뇌졸중의 예측과 관련하여) 심방 세동의 에피소드를 경험한다고 간주된다.
용어 "샘플"은 체액의 샘플, 분리된 세포의 샘플 또는 조직 또는 장기 유래의 샘플을 의미한다. 체액의 샘플은 잘 알려진 기술에 의해 수득될 수 있고 혈액, 혈장, 혈청, 소변, 림프액, 타액, 복수, 또는 임의의 다른 분비물 또는 이의 유도체의 샘플을 포함한다. 조직 또는 장기 샘플은 예를 들어 생검에 의한 임의의 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 분리된 세포는 분리 기술 예컨대 원심분리 또는 세포 분류에 의해 체액 또는 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 세포-, 조직- 또는 장기 샘플은 바이오마커를 발현하거나 또는 생성하는 세포, 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 샘플은 냉동, 신선상태, 고정 (예를 들어, 포르말린 고정), 원심 분리, 및/또는 매립 (예를 들어, 파라핀 매립) 등일 수 있다. 세포 샘플은 물론, 샘플 중 바이오마커(들)의 양을 평가하기 전에 다양한 충분히 공지된 채취 후 분취 및 저장 기술 (예를 들어, 핵산 및/또는 단백질 추출, 고정, 저장, 냉동, 한외여과, 농도, 증발, 원심분리 등)이 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 샘플은 혈액 (즉, 전혈), 혈청 또는 혈장 샘플이다. 혈청은 혈액을 응고시킨 후에 수득되는 전혈의 액상 분획이다. 혈청을 수득한 후에, 응고물은 원심분리로 제거하고 상청액을 수집한다. 혈장은 혈액의 무세포 유체 부분이다. 혈장 샘플을 수득하기 위해서, 전혈은 항응고제-처리된 튜브 (예를 들어, 시트레이트-처리 또는 EDTA-처리 튜브)에 채혈된다. 세포는 원심분리에 의해 샘플로부터 제거하여 상청액 (즉, 혈장 샘플)이 수득된다.
상기에 기재된 바와 같이, 대상체는 샘플을 수득한 시점에 AF 리듬의 에피소드를 앓을 수 있거나 또는 동리듬일 수 있다.
BMP10-유형 펩티드는 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 바람직한 BMP10-유형 펩티드는 예를 들어, 본원에 그 전체가 참조로서 인용되는 Susan-Resiga et al. (J Biol Chem. 2011 Jul 1;286(26):22785-94) 에 개시되어 있다 (예를 들어, Susan-Resiga et al., 또는 US 2012/0213782 의 도 3A 참조).
한 구체예에서, BMP10-유형 펩티드는 처리되지 않은 preproBMP10 이다. 또다른 구체예에서, BMP10-유형 펩티드는 프로펩티드 proBMP10 이다. 이 마커는 N-말단 프로세그먼트 및 BMP10 을 포함한다. 또다른 구체예에서, BMP10-유형 펩티드는 BMP10 의 N-말단 프로세그먼트 (N-말단 proBMP10) 이다. 또다른 구체예에서, BMP10-유형 펩티드는 BMP10 이다.
한 구체예에서, BMP10-유형 펩티드는 동종- 또는 이종이량체 복합체의 일부이다.
인간 preproBMP10 (즉, 처리되지 않은 preproBMP10) 은 424개 아미노산의 길이를 갖는다. 인간 preproBMP10 의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 1 또는 US 2012/0213782의 도 3에 나타나 있으며, 이는 그 전문이 참고로 포함된다. 또한, preproBMP10의 아미노산 서열은 Uniprot (접근 번호 O95393-1의 서열 참조)를 통해 평가될 수 있다. 인간 preproBMP10은 proBMP10을 방출하기 위해 효소적으로 절단되는 짧은 신호 펩티드(아미노산 1 내지 21)를 포함한다. 따라서, 인간 proBMP10은 인간 preproBMP10 (즉, SEQ ID NO 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드)의 아미노산 22 내지 424를 포함한다. 인간 proBMP10은 활성 형태인 (비-글리코실화) BMP10 및 BMP10의 N-말단 프로세그먼트로 추가로 절단된다. BMP10의 N-말단 프로세그먼트는 SEQ ID NO 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드 (즉, 인간 preproBMP10) 의 아미노산 22 내지 316을 포함한다. BMP10은 SEQ ID NO 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드의 아미노산 317 내지 424를 포함한다.
바람직한 BMP10-유형 펩티드는 BMP10 및 N-말단 proBMP10 이다. proBMP10의 분할 후, BMP10 및 N-말단 proBMP10은 BMP10의 동종- 또는 이종-이량체를 형성하거나 다른 BMP 패밀리 단백질과 결합하여 구조적 근접성을 유지한다 (Yadin et al., CYTOGFR 2016, 27 (2016) 13-34). 이량체화는 Cys-Cys 브릿지의 형성 또는 두 결합 파트너의 C-말단 펩티드의 강한 접착에 의해 발생한다. 따라서, 두 개의 서브유닛으로 구성된 아키텍처가 형성된다.
proBMP10이 등몰 비율로 BMP10 및 N-말단 프로세그먼트로 절단되기 때문에, BMP10의 양은 N-말단 프로세그먼트의 양을 반영한다. 따라서, BMP10의 양은 N-말단 프로세그먼트의 양을 결정함으로써 결정될 수 있고, 그 반대도 가능하다.
바람직하게는, BMP10-유형 펩티드의 양은 BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 (또는 이의 항원-결합 단편) 를 사용하여 결정된다.
예를 들어, BMP10 의 N-말단 프로세그먼트에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 사용할 수 있다. 이러한 항체 (또는 단편) 는 또한 proBMP10 및 preproBMP10에 결합할 것이기 때문에, BMP10, proBMP10 및 preproBMP10의 N-말단 프로세그먼트의 양의 합은 본 발명의 방법의 단계 a) 에서 결정된다. 따라서, "BMP10 의 N-말단 프로세그먼트의 양을 결정" 하는 표현은 또한 "BMP10, proBMP10 및 preproBMP10 의 N-말단 프로세그먼트의 양의 합을 결정" 하는 것을 의미한다.
예를 들어, BMP9 와 같은 다른 BMP-유형 단백질로부터의 발견에 기초한 구조적 예측은 BMP10 이 proBMP10 과 복합체로 남아있다는 것을 보여주며, 따라서 N-말단 프로세그먼트의 검출은 또한 BMP10 의 양을 반영한다.
예를 들어, BMP10 에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 사용할 수 있다. 이러한 항체 (또는 단편) 는 또한 proBMP10 및 preproBMP10에 결합할 것이기 때문에, BMP10, proBMP10 및 preproBMP10의 양의 합은 본 발명의 방법의 단계 a) 에서 결정된다. 따라서, "BMP10 의 양을 결정" 하는 표현은 또한 "BMP10, proBMP10 및 preproBMP10 의 양의 합을 결정" 하는 것을 의미한다.
예를 들어, BMP9 와 같은 다른 BMP-유형 단백질로부터의 발견에 기초한 구조적 예측은 BMP10 이 proBMP10 과 복합체로 남아있다는 것을 보여주며, 따라서 BMP10 의 검출은 또한 N-말단 프로세그먼트의 양을 반영한다.
또한, 상기 언급된 모든 4개의 BMP10-유형 펩티드, 즉 BMP10, BMP10, proBMP10 및 preproBMP10의 N-말단 프로세그먼트의 양의 합을 측정하는 것이 고려된다.
따라서, BMP10-유형 펩티드의 하기 양이 본 발명에 따라 결정될 수 있다:
· BMP10 의 양
· BMP10 의 N-말단 프로세그먼트의 양
· proBMP10 의 양
· preproBMP10 의 양
· BMP10, proBMP10, 및 preproBMP10 의 양의 합
· BMP10, proBMP10, 및 preproBMP10 의 N-말단 프로세그먼트의 양의 합, 또는
· BMP10과, BMP10, proBMP10, 및 preproBMP10 의 N-말단 프로세그먼트의 양의 합
용어 "나트륨이뇨 펩티드"는 심방 나트륨이뇨 펩티드 (ANP)-유형 및 뇌 나트륨이뇨 펩티드 (BNP)-유형 펩티드를 포함한다. 따라서, 본 발명에 따른 나트륨이뇨 펩티드는 ANP-유형 및 BNP-유형 펩티드 및 이의 변이체를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Bonow RO. et al., Circulation 1996;93:1946-1950] 참조).
ANP-유형 펩티드는 pre-proANP, proANP, NT-proANP, 및 ANP를 포함한다.
BNP-유형 펩티드는 pre-proBNP, proBNP, NT-proBNP, 및 BNP를 포함한다.
프리-프로 펩티드 (pre-proBNP의 경우에 134개 아미노산)는 짧은 신호 펩티드를 포함하고, 효소적으로 절단되어 프로 펩티드를 방출한다 (proBNP의 경우에 108개 아미노산). 프로 펩티드는 N-말단 프로 펩티드 (NT-프로 펩티드, NT-proBNP의 경우에 76개 아미노산) 및 활성 호르몬 (BNP의 경우에 32개 아미노산, ANP의 경우에 28개 아미노산)으로 더욱 절단된다.
본 발명에 따른 바람직한 나트륨이뇨 펩티드는 NT-proANP, ANP, NT-proBNP, BNP이다. ANP 및 BNP는 활성 호르몬이고 그들의 개별 불활성 대응물, NT-proANP 및 NT-proBNP 보다 짧은 반감기를 갖는다. BNP는 혈액에서 물질대사되는 반면, NT-proBNP는 온전한 분자로서 혈액에서 순환되고 그와 같이 신장에서 제거된다.
본 발명에 따라 가장 바람직한 나트륨이뇨 펩티드는 NT-proBNP 및 BNP, 특히 NT-proBNP이다. 상기에 간략하게 설명한 바와 같이, 본 발명에 따라 언급되는 인간 NT-proBNP는 인간 NT-proBNP 분자의 N-말단 부분에 상응하는 바람직하게 76개 아미노산 길이를 포함하는 폴리펩티드이다. 인간 BNP 및 NT-proBNP의 구조는 종래 기술, 예를 들어 WO 02/089657, WO 02/083913, 및 문헌 [Bonow RO. et al., New Insights into the cardiac natriuretic peptides. Circulation 1996;93:1946-1950]에 이미 상세하게 기술되어 있다. 바람직하게, 본 명세서에서 사용되는 인간 NT-proBNP는 EP 0 648 228 B1에 개시된 바와 같은 인간 NT-proBNP이다.
본 명세서에서 용어 "FABP-3"은 지방산 결합 단백질 3 을 의미한다. FABP-3 은 심장 지방산 결합 단백질 또는 심장 유형 지방산 결합 단백질 (H-FABP로 약칭) 로도 알려져 있다. 바람직하게는, 상기 용어는 또한 FABP-3 의 변이체를 포함한다. 본원에 사용된 FABP-3 은 바람직하게는 인간 FABP-3 에 관한 것이다. 인간 FABP-3 폴리펩티드를 코딩하는 폴리펩티드의 DNA 서열 및 인간 FABP-3 의 단백질 서열은 당업계에 잘 공지되어 있고, 먼저 Peeters et al. 에 의해 처음 기재되어 있다 (Biochem. J. 276 (Pt 1), 203-207 (1991)). 또한, 인간 H-FABP 의 서열은 바람직하게는 Genbank entry U57623.1 (cDNA 서열) 및 AAB02555.1 (단백질 서열) 에서 발견될 수 있다. FABP 의 주요 생리학적 기능은 유리 지방산의 수송인 것으로 생각되며, 예를 들어 Storch et al., Biochem. Biophys. Acta. 1486 (2000), 28-44 를 참조한다. FABP-3 및 H-FABP 의 다른 명칭은 다음과 같다: FABP-11 (지방산 결합 단백질 11), M-FABP (근육 지방산 결합 단백질), MDGI (유방 유래 성장 억제제), 및 O-FABP.
바이오마커 내피 세포 특이적 분자 1 (약칭 ESM-1)은 당분야에 널리 공지되어 있다. 이 바이오마커는 종종 엔도칸이라고도 불린다. ESM-1은 인간 폐 및 신장 조직의 내피 세포에서 주로 발현되는 분비형 단백질이다. 공개 도메인 데이터는 갑상선, 폐 및 신장뿐만 아니라 심장 조직에서도 발현을 암시한다, 예를 들어, 참조: Protein Atlas 데이터베이스에서의 ESM-1 에 대한 엔트리 (Uhlen M. et al., Science 2015;347(6220): 1260419). 이 유전자의 발현은 사이토카인에 의해 조절된다. ESM-1은 20 kDa의 성숙한 폴리펩티드 및 30 kDa의 O-연결된 글리칸 사슬로 구성된 프로테오글리칸이다 (Bechard D et al., J Biol Chem 2001;276(51):48341-48349). 본 발명의 바람직한 구체예에서, 인간 ESM-1 폴리펩티드의 양은 대상체 유래 샘플에서 결정된다. 인간 ESM-1 폴리펩티드의 서열은 당분야에서 충분히 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Lassale P. et al., J. Biol. Chem. 1996;271:20458-20464] 참조), 예를 들어 Uniprot 데이타베이스, 등재 번호 Q9NQ30 (ESM1_HUMAN)을 통해서 평가할 수 있다. ESM-1의 2개 이소폼은 선택적 스플라이싱에 의해, 이소폼 1 (Uniprot 식별자 Q9NQ30-1을 가짐) 및 이소폼 2 (Uniprot 식별자 Q9NQ30-2)를 생성한다. 이소폼 1은 184개 아미노산의 길이를 갖는다. 이소폼 2에서, 이소폼 1의 아미노산 101 내지 150이 누락된다. 아미노산 1 내지 19는 신호 펩티드를 형성한다 (절단될 수 있음).
바람직한 구체예에서, ESM-1 폴리펩티드의 이소폼 1, 즉 UniProt 수탁 번호 Q9NQ30-1 하에 표시된 서열을 갖는 이소폼 1의 양이 결정된다.
다른 바람직한 구체예에서, ESM-1 폴리펩티드의 이소폼 2, 즉 UniProt 수탁 번호 Q9NQ30-2 하에 표시된 서열을 갖는 이소폼 2의 양이 결정된다.
다른 바람직한 구체예에서, ESM-1 폴리펩티드의 이소폼-1 및 이소폼-2, 즉 전체 ESM-1의 양이 결정된다.
예를 들어, ESM-1의 양은 ESM-1 폴리펩티드의 아미노산 85 내지 184에 대한 단일클론 항체 (예컨대, 마우스 항체) 및/또는 염소 다클론 항체를 사용해 결정될 수 있다.
바이오마커 안지오포이에틴-2 (축약형 "Ang-2", 또한 흔히 ANGPT2라고도 함)는 당분야에 잘 알려져 있다. 이것은 Ang-1 및 TIE2 둘 모두에 대한 천연 발생 길항제이다 (예를 들어, 문헌 [Maisonpierre et al., Science 277 (1997) 55-60] 참조). 이 단백질은 ANG-1의 부재 하에서 TEK/TIE2의 티로신 인산화를 유도할 수 있다. 혈관신생 유도인자, 예컨대 VEGF의 부재 하에서, 세포-매트릭스 접촉부의 ANG2-매개 이완은 내피 세포 아폽토시스와 그 결과 혈관 퇴행을 유도할 수 있다. VEGF와 협력하여, 내피 세포 이동 및 증식을 촉진시킬 수 있고, 따라서 허용되는 혈관신생 신호로서 제공된다. 인간 안지오포이에틴의 서열은 당분야에서 잘 알려져 있다. Uniprot에는 안지오포이에틴-2의 3가지 이소폼:이소폼 1 (Uniprot 식별자:O15123-1), 이소폼 2 (식별자:O15123-2) 및 이소폼 3 (O15123-3)이 목록에 올라가 있다. 바람직한 구체예에서, 안지오포이에틴-2의 전체량이 결정된다. 전체량은 바람직하게는 복합체화 및 자유 안지오포이에틴-2의 양의 합이다.
본 명세서에 언급된 바와 같은 바이오마커 (예컨대 BMP10-유형 펩티드 또는 나트륨이뇨 펩티드)의 양을 "결정하는"이라는 용어는 바이오마커의 정량, 예를 들어, 본 명세서의 다른 곳에 기술된 적절한 검출 방법을 적용하여, 샘플 중 바이오마커의 수준을 측정하는 것을 의미한다. 용어 "측정하는" 및 "결정하는" 은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
일 구체예에서, 바이오마커의 양은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 작용제와 샘플을 접촉시키고, 그리하여, 작용제와 상기 바이오마커 간에 복합체를 형성시키고, 형성된 복합체의 양을 결정하고, 그리하여 상기 바이오마커의 양을 측정하여 결정된다.
본 명세서에서 언급되는 바이오마커 (예컨대 BMP10-유형 펩티드)는 당분야에서 일반적으로 공지된 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 검출 방법은 일반적으로 샘플 중에서 바이오마커의 양을 정량하기 위한 방법 (정량 방법)을 포괄한다. 일반적으로 어떠한 하기의 방법이 바이오마커의 정성적 및/또는 정량적 검출에 적합한지는 당업자에게 공지되어 있다. 샘플은 통상적으로 예를 들어, 상업적으로 입수할 수 있는, 웨스턴 및 면역어세이, 예컨대 ELISA, RIA, 형광발광- 및 발광-기반 면역어세이 및 근접 연장 어세이를 사용하여 단백질에 대해 어세이될 수 있다. 바이오마커를 검출하기 위한 추가의 적합한 방법은 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적인 물리적 또는 화학적 특성 예컨대 이의 정확한 분자 질량 또는 NMR 스펙트럼을 측정하는 것을 포함한다. 상기 방법은 예를 들어, 바이오센서, 면역어세이와 커플링된 광학 장치, 바이오칩, 분석 장치 예컨대 질량-분광계, NMR-분석기, 또는 크로마토그래피 장치를 포함한다. 더 나아가서, 방법은 마이크로플레이트 ELISA-기반 방법, 전자동 또는 로봇식 면역어세이 (예를 들어, Elecsys™ 분석기에서 이용가능), CBA (효소 코발트 결합 어세이, 예를 들어 Roche-Hitachi™ 분석기에서 이용가능), 및 라텍스 응집 어세이 (예를 들어, Roche-Hitachi™ 분석기에서 이용가능)를 포함한다.
본 명세서에서 언급되는 바이오마커 단백질의 검출의 경우, 이러한 어세이 형식을 사용하는 광범위한 면역어세이 기술이 이용가능하고, 예를 들어, 미국 특허 제4,016,043호, 제4,424,279호, 및 제4,018,653호를 참조한다. 이들은 비경쟁적 유형의 단일-부위 및 2-부위 또는 "샌드위치" 어세이를 비롯하여, 전통적인 경쟁적 결합 어세이를 포함한다. 이들 어세이는 또한 표적 바이오마커에 표지된 항체의 직접 결합을 포함한다.
전기화학발광 표지를 적용하는 방법이 충분히 공지되어 있다. 이러한 방법은 그들이 전기화학발광을 방출하는 바닥 상태로 붕괴되는 흥분 상태를 산화를 통해 획득하는 특별한 금속 착체의 능력을 이용한다. 자세한 내용은 Richter, M.M., Chem. Rev. 2004;104: 3003-3036 를 참조한다.
일 구체예에서, 바이오마커의 양을 측정하는데 사용되는 검출 항체 (또는 이의 항원-결합 단편)는 루테늄화되거나 또는 이리듐화될 수 있다. 따라서, 항체 (또는 이의 항원-결합 단편)는 루테늄 표지를 포함할 것이다. 일 구체예에서, 상기 루테늄 표지는 비피리딘-루테늄(II) 착체이다. 또는 항체 (또는 이의 항원-결합 단편)은 이리듐 표지를 포함할 것이다. 일 구체예에서, 상기 이리듐 표지는 WO 2012/107419에 개시된 바와 같은 착체이다.
BMP10-유형 펩티드의 결정을 위한 샌드위치 어세이의 구체예에서, 어세이는 BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 바이오틴화된 제1 단일클론 항체 (포획 항체로서) 및 BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 제2 단일클론 항체의 루테늄화된 F(ab')2-단편 (검출 항체로서)을 포함한다. 2개 항체는 샘플 중에서 BMP10-유형 펩티드와 샌드위치 면역어세이 복합체를 형성한다.
나트륨이뇨 펩티드의 결정을 위한 샌드위치 어세이의 구체예에서, 어세이는 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 바이오틴화된 제1 단일클론 항체 (포획 항체로서) 및 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 제2 단일클론 항체의 루테늄화된 F(ab')2-단편 (검출 항체로서)을 포함한다. 2개 항체는 샘플 중에서 나트륨이뇨 펩티드와 샌드위치 면역어세이 복합체를 형성한다.
폴리펩티드 (예컨대 BMP10-유형 펩티드 또는 나트륨이뇨 펩티드)의 양을 측정하는 단계는 바람직하게, (a) 폴리펩티드를 상기 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는 작용제와 접촉시키는 단계, (b) (임의로) 미결합된 작용제를 제거하는 단계, (c) 결합된 결합제, 즉 단계 (a)에서 형성된 작용제의 복합체의 양을 측정하는 단계를 포함할 수도 있다. 바람직한 구체예에 따라서, 상기 접촉, 제거 및 측정 단계는 분석기 유닛에 의해 수행될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 상기 단계는 상기 시스템의 단일 분석기 유닛에 의해서 또는 서로 작동적으로 연통되는 하나를 초과하는 분석기 유닛에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 특별한 구체예에 따라서, 본 명세서에 개시된 상기 시스템은 상기 접촉 및 제거 단계를 수행하기 위한 제1 분석기 유닛, 및 상기 측정 단계를 수행하는 수송 유닛 (예를 들어, 로봇식 팔대)에 의한 상기 제1 분석기 유닛에 작동적으로 연결된 제2 분석기 유닛을 포함할 수 있다.
바이오마커에 특이적으로 결합하는 작용제 (본 명세서에서는 "결합제"라고도 함)는 결합체의 검출 및 측정을 가능하게 하는 표지에 공유적으로 또는 비공유적으로 커플링될 수 있다. 표지화는 간접 또는 직접 방법으로 수행될 수 있다. 직접 표지화는 직접적으로 (공유적으로 또는 비공유적으로) 결합제와 표지의 커플링을 포함한다. 간접 표지화는 제1 결합제에 제2 결합제의 (공유적 또는 비공유적) 결합을 포함한다. 제2 결합제는 제1 결합제에 특이적으로 결합해야 한다. 상기 제2 결합제는 적합한 표지와 커플링될 수 있고/있거나 제2 결합제에 결합하는 제3 결합제의 표적 (수용체)일 수 있다. 적합한 제2 및 더 고차의 결합제는 항체, 제2 항체, 및 충분히 공지된 스트렙타비딘-바이오틴 시스템 (Vector Laboratories, Inc.)을 포함할 수 있다. 결합제 또는 기질은 또한 당분야에 공지된 바와 같은 하나 이상의 태그로 "태그화"될 수도 있다. 이러한 태그는 고차의 결합제에 대한 표적일 수 있다. 적합한 태그는 바이오틴, 딕옥시게닌, His-태그, 글루타티온-S-트랜스퍼라제, FLAG, GFP, myc-태그, 인플루엔자 A 바이러스 해마글루티닌 (HA), 말토스 결합 단백질 등을 포함한다. 펩티드 또는 폴리펩티드의 경우에, 태그는 바람직하게 N-말단 및/또는 C-말단에 존재한다. 적합한 표지는 적절한 검출 방법에 의해 검출가능한 임의의 표지이다. 전형적인 표지는 금 입자, 라텍스 비드, 아크리단 에스테르, 루미놀, 루테늄 착체, 이리듐 착체, 효소 활성 표지, 방사능 표지, 자성 표지 (예를 들어, 상자성 및 초상자성 표지를 포함하는 "자성 비드"), 및 형광 표지를 포함한다. 효소적 활성 표지는 예를 들어, 홀스래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 루시퍼라제, 및 이의 유도체를 포함한다. 검출에 적합한 기질은 디-아미노-벤지딘 (DAB), 3,3'-5,5'-테트라메틸벤지딘, NBT-BCIP (4-니트로 블루 테트라졸륨 클로라이드 및 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이트, Roche Diagnostics에서 즉석 제조 스톡 용액으로 입수가능), CDP-Star™ (Amersham Bio-sciences), ECF™ (Amersham Biosciences)을 포함한다. 적합한 효소-기질 조합은 당분야에 공지된 방법에 따라서 결정할 수 있는 (예를 들어, 감광 필름 또는 적합한 카메라 시스템 사용), 발생된 반응 산물, 형광발광 또는 화학발광을 생성시킬 수 있다. 효소 반응의 측정과 관련하여, 상기 제공된 기준이 유사하게 적용된다. 전형적인 형광발광성 표지는 형광발광성 단백질 (예컨대 GFP 및 이의 유도체), Cy3, Cy5, 텍사스 레드, 플루오레세인, 및 Alexa 염료 (예를 들어, Alexa 568)를 포함한다. 추가의 형광발광성 표지는 예를 들어, Molecular Probes (Oregon)에서 입수가능하다. 형광발광 표지로서 퀀텀 도트의 사용이 또한 고려된다. 방사성 표지는 공지되고 적합한 임의의 방법, 예를 들어, 감광성 필름 또는 인광체 이미지화기에 의해 검출될 수 있다.
폴리펩티드의 양은 또한 바람직하게는, 하기와 같이 결정될 수 있다: (a) 본 명세서의 다른 곳에 기술한 바와 같은 폴리펩티드에 대한 결합제를 포함하는 고형 지지체를 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함하는 샘플과 접촉시키는 단계, 및 (b) 지지체에 결합된 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정하는 단계. 지지체를 제조하기 위한 재료는 당분야에 충분히 공지되어 있고, 특히, 상업적으로 입수할 수 있는 컬럼 재료, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자성 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면, 니트로셀룰로스 스트립, 멤브레인, 시트, 듀라사이트, 반응 트레이의 웰 및 벽, 플라스틱 튜브 등을 포함한다.
다른 양상에서 샘플은 형성된 복합체의 양의 측정 전에 적어도 하나의 마커 및 결합제 간에 형성된 복합체로부터 제거된다. 따라서, 일 양상에서, 결합제는 고체 지지체 상에 고정될 수 있다. 역시 일 구체예에서, 샘플은 세척 용액을 도포하여 고체 지지체 상에 형성된 복합체로부터 제거될 수 있다.
"샌드위치 어세이" 는 샌드위치 어세이 기술의 수많은 변형을 포괄하는 가장 유용하고 통상적으로 사용되는 어세이 중 하나이다. 간략하게, 전형적인 어세이에서, 미표지된 (포획) 결합제가 고형 기재 상에 고정되거나 또는 고정될 수 있고, 검사하려는 샘플은 포획 결합제와 접촉된다. 인큐베이션의 적합한 기간 이후에, 결합제-바이오마커 복합체의 형성을 가능하게 하는 충분한 시간 기간 동안, 검출가능한 신호를 생성시킬 수 있는 리포터 분자로 표지된 제 2 (검출) 결합제가 이후에 첨가되고 인큐베이션되어서, 결합제-바이오마커-표지된 결합제의 또다른 복합체의 형성을 위한 충분한 시간을 가능하게 한다. 임의의 미반응된 재료는 세척해 버릴 수 있고, 바이오마커의 존재는 검출 결합제에 결합된 리포터 분자에 의해 생성되는 신호의 관찰에 의해 결정된다. 결과는 가시적인 신호의 단순 관찰에 의해, 정성적일 수 있거나, 또는 바이오마커의 기지량을 함유하는 대조군 샘플과 비교하여 정량적일 수 있다.
전형적인 샌드위치 어세이의 인큐베이션 단계는 필요에 따라서 적절하게 가변화시킬 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 동시 인큐베이션을 포함하고, 여기서 둘 이상의 결합제 및 바이오마커가 동시 인큐베이션된다. 예를 들어, 분석하려는 샘플 및 표지된 결합제 둘 모두는 고정된 포획 결합제에 동시에 첨가된다. 또한 분석하려는 샘플 및 표지된 결합제를 먼저 인큐베이션하고 그 이후에 고체상에 결합되거나 또는 고체상에 결합할 수 있는 항체를 첨가하는 것이 가능하다.
특이적 결합제 및 바이오마커 간에 형성된 복합체는 샘플에 존재하는 바이오마커의 양에 비례하게 될 것이다. 적용하려는 결합제의 특이성 및/또는 민감성은 특이적으로 결합할 수 있는 샘플에 포함된 적어도 하나의 마커의 비율 정도를 정의하는 것으로 이해하게 될 것이다. 측정을 어떻게 수행할 수 있는 지에 대한 보다 상세한 내용은 또한 본 명세서의 다른 곳에서 확인할 수 있다. 형성된 복합체의 양은 실제로 샘플에 존재하는 양을 반영하는 바이오마커의 양으로 변환될 것이다.
용어 "결합제", "특이적 결합제", "피분석물-특이적 결합제", "검출제" 및 "바이오마커에 특이적으로 결합하는 작용제"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 바람직하게 상응하는 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 모이어티를 포함하는 작용제에 관한 것이다. "결합제", "검출제", "작용제"의 예는 핵산 프로브, 핵산 프라이머, DNA 분자, RNA 분자, 앱타머, 항체, 항체 단편, 펩티드, 펩티드 핵산 (PNA) 또는 화학적 화합물이다. 바람직한 작용제는 결정하려는 바이오마커에 특이적으로 결합하는 항체이다. 본 명세서에서 용어 "항체"는 광범위한 의미로 사용되고, 그들이 바람직한 항원-결합 활성을 나타내는 한 제한없이 단일클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함하는 다양한 항체 구조 (즉, 이의 항원-결합 단편)를 포괄한다. 바람직하게, 항체는 다클론 항체 (또는 이의 항원-결합 단편)이다. 더욱 바람직하게는, 항체는 단일클론 항체 (또는 이의 항원 결합 단편)이다. 게다가, 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이, BMP10-유형 펩티드의 상이한 위치에서 결합되는 (샌드위치 면역어세이에서) 2종의 단일클론 항체를 사용하는 것이 고려된다. 따라서, 적어도 하나의 항체는 BMP10-유형 펩티드의 양의 결정에 사용된다.
일 구체예에서, 적어도 하나의 항체는 마우스 단일클론 항체이다. 다른 구체예에서, 적어도 하나의 항체는 토끼 단일클론 항체이다. 추가의 구체예에서, 항체는 염소 다클론 항체이다. 더욱 추가의 구체예에서, 항체는 양 다클론 항체이다.
용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다"는 그들이 다른 분자에 유의하게 결합하지 않는 조건 하에서 결합쌍 분자가 서로와의 결합을 나타내는 결합 반응을 의미한다. 바이오마커로서 단백질 또는 펩티드를 언급시, 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다"는 바람직하게 결합제가 적어도 107 M-1 의 친화성 ("결합 상수" Ka)으로 상응하는 바이오마커에 결합하는 결합 반응을 의미한다. 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다"는 바람직하게 이의 표적 분자에 대한 적어도 108 M-1 또는 보다 더 바람직하게 적어도 109 M-1 의 친화성을 의미한다. 용어 "특이적" 또는 "특이적으로"는 샘플에 존재하는 다른 분자가 표적 분자에 특이적인 결합제에 유의하게 결합하지 않는다는 것을 의미하는데 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "양"은 본 명세서에서 언급된 바이오마커 (예컨대 BMP10-유형 펩티드 또는 나트륨이뇨 펩티드)의 절대량, 상기 바이오마커의 상대적인 양 또는 농도를 비롯하여, 그와 상관있거나 또는 그로부터 유래될 수 있는 임의의 값 또는 매개변수를 포괄한다. 이러한 값 또는 매개변수는 직접 측정에 의한 상기 펩티드로부터 수득된 모든 특별한 물리적 또는 화학적 특성 유래의 강도 신호 값, 예를 들어, 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼의 강도 값을 포함한다. 게다가, 본 설명의 다른 곳에서 명시된 간접 측정에 의해 수득된 모든 값 또는 매개변수, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 리간드로부터 수득된 강도 신호 또는 펩티드에 대응하여 생물학적 판독 시스템으로부터 결정된 반응 양을 포괄한다. 상기에 언급된 양 또는 매개변수와 상관된 값은 또한 모든 표준 수학 연산에 의해 수득될 수 있다는 것을 이해한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "비교하는"은 이 설명의 다른 곳에서 명시된 생물학적 마커의 기준량과 대상체 유래 샘플 중 바이오마커 (예컨대 BMP10-유형 펩티드 및 나트륨이뇨 펩티드 예컨대 NT-proBNP 또는 BNP)의 양을 비교하는 것을 의미한다. 일반적으로 본 명세서에서 사용되는 비교하는은 상응하는 매개변수 또는 값의 비교를 의미하고, 예를 들어, 절대량은 절대 기준량과 비교하는 한편 농도는 기준 농도와 비교하거나 또는 샘플 중 바이오마커로부터 수득된 강도 신호는 제 1 샘플로부터 수득된 동일 유형의 강도 신호와 비교한다는 것을 이해한다. 비교는 수동으로 또는 컴퓨터-보조로 수행될 수 있다. 따라서, 비교는 컴퓨터 장비를 통해 수행될 수 있다. 대상체 유래 샘플 중 바이오마커의 결정되거나 또는 검출된 양의 값 및 기준량은 예를 들어, 서로 비교할 수 있고 상기 비교는 비교를 위한 알고리즘을 실행하는 컴퓨터 프로그램에 의해 자동으로 수행될 수 있다. 상기 평가를 수행하는 컴퓨터 프로그램은 적합한 출력 형식으로 바람직한 평가를 제공하게 될 것이다. 컴퓨터-보조 비교를 위해서, 결정된 양의 값은 컴퓨터 프로그램에 의해 데이타베이스에 저장되는 적합한 기준에 상응하는 값과 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 비교의 결과를 더욱 평가할 수 있고, 즉 적합한 출력 형식으로 바람직한 평가를 자동적으로 제공할 수 있다. 컴퓨터-보조 비교를 위해서, 결정된 양의 값은 컴퓨터 프로그램에 의해 데이타베이스에 저장되는 적합한 기준에 상응하는 값과 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 비교의 결과를 더욱 평가할 수 있고, 즉 적합한 출력 형식으로 바람직한 평가를 자동적으로 제공할 수 있다.
본 발명에 따라서, BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커 (예컨대 나트륨이뇨 펩티드) 의 양은 기준과 비교하게 될 것이다. 기준은 바람직하게 기준량이다. 용어 "기준량"은 당업자가 충분히 이해하고 있다. 기준량은 본 명세서에서 기술된 심방 세동의 평가를 가능하게 한다는 것을 이해한다. 예를 들어, 심방 세동을 진단하기 위한 방법과 관련하여, 기준량은 바람직하게 (i) 심방 세동을 앓고 있는 대상체의 그룹 또는 (ii) 심방 세동을 앓지 않는 대상체의 그룹으로 대상체를 할당할 수 있게 하는 양을 의미한다. 적합한 기준량은 검사 샘플과 함께, 즉 동시에 또는 후속하여 분석하려는 제 1 샘플로부터 결정될 수 있다.
BMP10-유형 펩티드의 양은 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교되는 반면, 적어도 하나의 추가 바이오마커 (예컨대 나트륨이뇨 펩티드) 의 양은 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커 (예컨대 나트륨이뇨 펩티드) 에 대한 기준량과 비교되는 것으로 이해되어야 한다. 2개 이상의 마커의 양이 결정되면, 2개 이상의 마커의 양 (예컨대, BMP10-유형 펩티드의 양 및 나트륨이뇨 펩티드의 양) 에 기초하여 조합 점수가 계산되는 것이 또한 고려된다. 후속 단계에서, 점수는 기준 점수와 비교된다.
기준량은 원칙적으로, 표준 통계학 방법을 적용하여 소정 바이오마커에 대한 평균치 또는 평균값을 기반으로 상기에 명시된 바와 같은 대상체의 코호트에 대해 계산될 수 있다. 특히, 검사 예컨대 이벤트를 진단하기 위한 목적의 방법, 또는 그렇지 않은 방법의 정확도는 이의 수용자 작용 특성 (receiver-operating characteristics) (ROC)에 의해 최고로 설명된다 (특히 문헌 [Zweig MH. et al., Clin. Chem. 1993;39:561-577] 참조). ROC 그래프는 관찰된 전체 데이타 범위에 대해서 판단 한계치를 연속적으로 가변화시켜 얻은 모든 감도 대 특이도 쌍의 그래프이다. 진단 방법의 임상적 효율은 이의 정확도, 즉 일정한 예후 또는 진단으로 대상체를 정확하게 할당하는 이의 능력에 의존적이다. ROC 그래프는 구분하는데 적합한 한계치의 완전한 범위에 대해 감도 대 1 - 특이도를 그래프화하여 2개 분포 간의 중복부를 의미한다. y-축이 감도이거나, 또는 참-양성 분율이면, 이것은 참-양성 검사 결과의 수 대 참-양성의 수 및 거짓-음성 검사 결과의 수의 곱의 비율로서 정의된다. 이것은 영향받은 서브그룹으로부터 단독으로 계산된다. x-축이 거짓-양성 분율, 또는 1 - 특이도일 때, 이것은 거짓-양성 결과의 수 대 참-거짓의 수 및 거짓-양성 결과의 수의 곱의 비율로서 정의된다. 이것은 특이도의 지수이고 영향받지 않은 하위그룹으로부터 전체적으로 계산된다. 참-양성 및 거짓-양성 분율은 2개의 상이한 하위 그룹에 의한 검사 결과를 사용하여, 별도로 전체로 계산되기 때문에, ROC 그래프는 코호트에서 이벤트의 출현율과 독립적이다. ROC 그래프 상에서 각 점은 특정한 판단 한계치에 상응하는 감도/1 - 특이도 쌍을 대표한다. 완벽한 판별력 검사 (결과의 2개 분포에 중복부가 없음)는 상부 좌측 코너를 통해 통과하는 ROC 그래프를 갖고, 여기서 참-양성 분율은 1.0, 또는 100% (완벽한 감도)이고, 거짓-양성 분율은 0이다 (완벽한 특이도). 판별력이 없는 검사에 대한 이론적 그래프 (2개 그룹에 대한 결과의 동일한 분포)는 하부 좌측 코너에서 상부 우측 코너로 45°사선이다. 대부분의 그래프는 이들 2개 극단 사이에 속한다. ROC 그래프가 45°사선 아래에 완전하게 속하면, 이것은 "양성도"에 대한 기준을 "초과"에서 "미만"으로 또는 그 반대로 반전시켜 쉽게 교정된다. 정성적으로, 그래프가 상부 좌측 코너에 가까울수록, 검사의 전체 정확도는 더 높아진다. 바람직한 신뢰 구간에 의존하여, 한계치는 각각 감도 및 특이도의 적절한 균형으로 소정 이벤트에 대한 진단을 가능하게 하는 ROC 그래프로부터 유래될 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에 사용되는 기준, 즉 심방 세동을 평가할 수 있게 하는 한계치는 바람직하게, 상기 기술된 바와 같이 상기 코호트에 대한 ROC를 확립하고 그로부터 한계치 양을 유도하여 생성시킬 수 있다. 진단 방법에 바람직한 감도 및 특이도에 의존하여, ROC 그래프는 적합한 한계치를 유도시킬 수 있다. 최적 감도는 예를 들어, 심방 세동을 앓고 있는 대상체를 배제 (즉, 제외)시키는데 바람직한데 반해, 최적 특이도는 심방 세동을 앓고 있는 것으로 대상체를 평가 (즉, 포함)하는 것을 고려한다는 것을 이해하게 될 것이다. 일 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체가 심방 세동과 연관된 부작용 예컨대 뇌졸중 및/또는 심방 세동의 발병 또는 재발의 위험성이 있다는 예측을 가능하게 한다.
바람직한 구체예에서, 본 명세서에서 "기준량"은 사전결정된 값을 의미한다. 사전 결정된 값은 심방 세동을 평가할 수 있게 하고, 따라서 심방 세동의 진단, 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별, 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성의 예측, 심전도검사 (ECG)를 수행해야 하는 대상체의 식별, 또는 심방 세동에 대한 요법의 평가를 가능하게 한다. 기준량은 평가의 유형을 기반으로 상이할 수 있다는 것을 이해해야 한다. 예를 들어, AF의 구별을 위한 BMP10-유형 펩티드의 기준량은 일반적으로 AF의 진단을 위한 기준량보다 높을 것이다. 그러나, 이것은 당업자가 고려하게 될 것이다.
상기에 기재된 바와 같이, 용어 "심방 세동을 평가하는"은 바람직하게 심방 세동의 진단, 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별, 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성의 예측, 심전도검사 (ECG)를 수행해야 하는 대상체의 식별, 또는 심방 세동에 대한 요법의 평가를 의미한다. 이하에서, 본 발명의 방법의 이들 구체예를 보다 구체적으로 설명하게 될 것이다. 상기 정의들은 그에 맞춰 적용된다.
심방 세동의 진단을 위한 방법
본 명세서에서 사용되는 용어 "진단하는"은 본 발명의 방법에 따라서 언급되는 대상체가 심방 세동 (AF)을 앓는지 또는 그렇지 않은지 여부를 평가하는 것을 의미한다. 바람직한 구체예에서, 대상체가 발작성 AF를 앓고 있다고 진단된다. 대안적인 구체예에서, 대상체는 AF를 앓고 있지 않다고 진단된다.
본 발명에 따라서, 모든 유형의 AF를 진단할 수 있다. 따라서, 심방 세동은 발작성, 지속성 또는 영구적 AF일 수 있다. 바람직하게, 발작성 또는 지속성 심방 세동은 특히, 영구적 AF를 앓지 않는 대상체에서 진단된다.
대상체가 AF를 앓고 있는지, 또는 그렇지 않은지 여부의 실제 진단은 추가 단계 예컨대 진단의 확진 (ECG 예컨대 Holter-ECG에 의함)을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명은 환자가 심방 세동을 앓고 있을 가능성을 평가할 수 있게 한다. 기준량 이상의 BMP10의 양을 갖는 대상체는 아마도 심방 세동을 앓을 것인데 반해, 기준량 이하의 BMP10의 양을 갖는 대상체는 아마도 심방 세동을 앓지 않을 것이다. 따라서, 본 발명의 문맥에서 용어 "진단하는"은 또한 대상체가 심방 세동을 앓고 있거나, 또는 그렇지 않은지 여부를 평가하기 위해 의사를 보조하는 단계를 포괄한다.
바람직하게, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 증가된 검사 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 심방 세동을 앓고 있는 대상체를 의미하고/하거나, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 감소된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 심방 세동을 앓고 있지 않은 대상체를 의미한다.
바람직한 구체예에서, 기준량, 즉 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량 및, 결정되는 경우 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량은 심방 세동을 앓고 있는 대상체와 심방 세동을 앓고 있지 않은 대상체 간 구별을 가능하게 할 것이다. 바람직하게, 상기 기준량은 사전결정된 값이다.
일 구체예에서, 본 발명의 방법은 심방 세동을 앓고 있는 대상체의 진단을 가능하게 한다. 바람직하게는, BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)이 기준량 이상인 경우, 대상체는 AF를 앓고 있다. 일 구체예에서, BMP10-유형 펩티드의 양이 기준량의 일정 백분위수 (예를 들어, 99th 백분위수) 기준 상한치 (upper reference limit) (URL) 이상이면, 대상체는 AF를 앓고 있다.
심방 세동을 진단하는 방법의 구체예에서, 상기 방법은 진단의 결과를 기반으로 심방 세동에 대한 요법을 권고하고/하거나 개시하는 단계를 더 포함한다. 바람직하게, 대상체가 AF를 앓고 있다고 진단되면 요법이 권고되거나 또는 개시된다. 심방 세동에 바람직한 요법은 본 명세서의 다른 곳 (예컨대 항응고 요법) 에 개시되어 있다.
발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별을 위한 방법
본 명세서에서 사용되는 용어 "구별하는"은 대상체에서 발작성 및 지속성 심방 세동을 구분하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용시 이 용어는 바람직하게 대상체에서 발작성 및 지속성 심방 세동을 구별하여 진단하는 것을 포함한다. 따라서, 본 발명의 방법은 심방 세동을 갖는 대상체가 발작성 심방 세동 또는 지속성 심방 세동을 앓고 있는지 여부를 평가할 수 있게 한다. 실제 구별은 추가 단계, 예컨대 구별의 확인 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명에서 용어 "구별하는"은 또한 발작성 및 지속성 AF 간 구별을 위해서 의사를 보조하는 것을 포괄한다.
바람직하게, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 증가된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 지속성 심방 세동을 앓고 있는 대상체를 의미하고/하거나, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 감소된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)의 양은 발작성 심방 세동을 앓고 있는 대상체를 의미한다. 양쪽 AF 유형 (발작성 및 지속성)에서, BMP10-유형 펩티드의 양은 비-AF 대상체의 기준량과 비교하여 증가된다.
바람직한 구체예에서, 기준량(들)은 발작성 심방 세동을 앓고 있는 대상체 및 지속성 심방 세동을 앓고 있는 대상체 간 구별을 가능하게 할 것이다. 바람직하게, 상기 기준량은 사전결정된 값이다.
발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별을 위한 상기 방법의 일 구체예에서, 대상체는 영구적 심방 세동을 앓고 있지 않다.
심방 세동과 연관된 부작용의 위험성을 예측하기 위한 방법
본 발명의 방법은 또한 부작용의 위험성을 예측하기 위한 방법을 고려한다.
일 구체예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 부작용의 위험성은 심방 세동과 연관된 임의 부작용의 예측일 수 있다. 바람직하게, 상기 부작용은 심방 세동의 재발 (예컨대 심장율동전환 후 심방 세동의 재발) 및 뇌졸중에서 선택된다. 따라서, 향후에 부작용 (예컨대 뇌졸중 또는 심방 세동의 재발)을 앓게 될 (심방 세동을 앓고 있는) 대상체의 위험성을 예측하게 될 것이다.
더 나아가서, 심방 세동과 연관된 상기 부작용은 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는 대상체에서 심방 세동의 발병이라고 간주된다.
특히 바람직한 구체예에서, 뇌졸중의 위험성이 예측된다.
따라서, 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 뇌졸중의 위험성을 예측하기 위한 본 발명의 방법:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여, 뇌졸중의 위험성을 예측하게 되는 단계.
특히, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 뇌졸중의 위험성을 예측하기 위한 방법에 관한 것이다:
(a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
(b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 뇌졸중의 위험성을 예측하는 단계.
바람직하게, 본 명세서에서 사용되는 용어 "위험성을 예측하는"은 본 명세서에 언급된 바와 같은 부작용 (예를 들어, 뇌졸중)을 대상체가 앓게 될 확률을 평가하는 것을 의미한다. 전형적으로, 대상체가 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있는지 (따라서 상승된 위험성) 또는 위험성이 없는지 (따라서 감소된 위험성) 여부를 예측한다. 따라서, 본 발명의 방법은 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있는 대상체와 위험성이 없는 대상체를 구별할 수 있게 한다. 더 나아가서, 본 발명의 방법은 감소되거나, 평균이거나, 또는 상승된 위험성의 대상체 간에 구별을 할 수 있게 하는 것을 고려한다.
상기 기재된 바와 같이, 일정 시간 윈도우 내에서 상기 부작용을 앓게 될 위험성 (및 확률)이 예측될 것이다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 예측 윈도우는 약 3개월, 약 6개월, 또는 특히 약 1년의 기간이다. 따라서, 단기적인 위험성이 예측된다.
다른 바람직한 구체예에서, 예측 윈도우는 약 5년의 기간이다 (예를 들어, 뇌졸중의 예측 경우). 더 나아가서, 예측 윈도우는 약 6년의 기간일 수 있다 (예를 들어, 뇌졸중의 예측 경우). 대안적으로, 예측 윈도우는 약 10년일 수 있다. 또한 예측 윈도우가 1년 내지 3년의 기간인 것을 고려한다. 따라서, 1년 내지 3년 이내의 뇌졸중 위험성이 예측된다. 또한 예측 윈도우가 1년 내지 10년의 기간인 것을 고려한다. 따라서, 1년 내지 10년 이내의 뇌졸중 위험성이 예측된다.
바람직하게, 상기 예측 윈도우는 본 발명의 방법의 완료로부터 계산된다. 보다 바람직하게는, 상기 예측 윈도우는 검사하려는 샘플을 수득한 시점부터 계산된다. 당업자가 이해하게 되는 바와 같이, 위험성의 예측은 일반적으로 대상체의 100%에 정확한 것을 의도하지 않는다. 그러나, 이 용어는 적절하고 올바른 방식으로 대상체의 통계적으로 유의한 부분에 대해 예측이 이루어지는 것을 요구한다. 부분이 통계적으로 유의한지 여부는 다양한 충분히 공지된 통계적 평가 도구, 예를 들어 신뢰 구간의 결정, p-값 결정, 스튜던트 t-검정법, 만-위트니 검정법 등을 사용하여 당업자가 추가의 노력없이 결정할 수 있다. 자세한 내용은 Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983 에서 확인된다. 바람직한 신뢰 구간은 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 이다. p-값은 바람직하게는, 0.1, 0.05, 0.01, 0.005 또는 0.0001 이다.
바람직한 구체예에서, 표현 "상기 부작용을 앓게 될 위험성을 예측하는"은 본 발명의 방법으로 분석되는 대상체가 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있는 대상체의 그룹, 또는 상기 부작용 (예컨대 뇌졸중)을 앓게 될 위험성이 없는 대상체의 그룹으로 할당되는 것을 의미한다. 따라서, 대상체가 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있거나 또는 위험성이 없는지 여부가 예측된다. 본 명세서에서 사용시 "상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있는 대상체"는 바람직하게 상기 부작용을 앓게 될 상승된 위험성을 갖는다 (바람직하게 예측 윈도우 내에서). 바람직하게, 상기 위험성은 대상체의 코호트에서 평균 위험성과 비교하여 상승된다. 본 명세서에서 사용시 "상기 부작용을 앓게 될 위험성이 없는 대상체"는 바람직하게 상기 부작용을 앓게 될 감소된 위험성을 갖는다 (바람직하게, 예측 윈도우 내에서). 바람직하게, 상기 위험성은 대상체의 코호트에서 평균 위험성보다 감소된다. 바람직하게 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있는 대상체는 바람직하게 약 1년의 예측 윈도우 내에서, 적어도 20% 또는 보다 바람직하게는 적어도 30%의 상기 부작용 예컨대 심방 세동의 재발 또는 발병을 앓게 될 위험성을 갖는다. 바람직하게 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 없는 대상체는 바람직하게 1년의 예측 윈도우 내에서, 12% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만의 상기 부작용을 앓게 될 위험성을 갖는다.
졸중의 예측과 관련하여, 바람직하게 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 있는 대상체는 바람직하게, 약 5년, 또는 특히 약 6년의 예측 윈도우 내에서 적어도 10% 또는 보다 바람직하게는 적어도 13%의 상기 부작용을 앓게 될 위험성을 갖는다. 바람직하게 상기 부작용을 앓게 될 위험성이 없는 대상체는 바람직하게 약 5년, 또는 특히 약 6년의 예측 윈도우 내에서, 10% 미만, 보다 바람직하게는 8% 미만, 또는 가장 바람직하게는 5% 미만의 상기 부작용을 앓게 될 위험성을 갖는다. 위험성은 대상체가 항응고 요법을 받지 않으면, 더 높을 수 있다. 이것은 당업자가 고려할 것이다.
바람직하게, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 증가된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성이 있는 대상체를 의미하고/하거나, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 감소된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)의 양은 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성이 없는 대상체를 의미한다.
바람직한 구체예에서, 기준량 (또는 기준량들)은 본 명세서에서 언급시 부작용의 위험성이 있는 대상체와 상기 부작용의 위험성이 없는 대상체 간 구별을 가능하게 할 것이다. 바람직하게, 상기 기준량은 사전결정된 값이다.
예측하려는 부작용은 바람직하게는 뇌졸중이다. 용어 "졸중" 은 당업계에 잘 알려져 있다. 본 명세서에서 사용되는 상기 용어는, 바람직하게는 허혈성 뇌졸중, 특히 대뇌 허혈성 뇌졸중을 의미한다. 본 발명의 방법에 의해 예측되는 뇌졸중은 뇌 또는 그 부분으로의 감소된 혈류에 의해 야기되며, 이로 인해 뇌 세포에 산소가 부족하게 된다. 특히, 뇌졸중은 뇌 세포 사멸로 인한 비가역적인 조직 손상을 초래한다. 뇌졸중의 증상은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 뇌졸중 증상은 특히 신체의 한쪽 면에서 안면, 팔 또는 다리의 갑작스러운 무지 또는 약화, 갑작스런 혼동, 말하기 또는 이해 곤란함, 갑작스런 한쪽 또는 양쪽 눈으로 보기 곤란함, 및 갑작스런 걷기 곤란함, 어지러움, 균형 또는 조율 상실을 포함한다. 허혈성 뇌졸중은 주요 대뇌 동맥의 아테롬성혈전증 또는 색전증, 응고 장애 또는 비아테롬성 혈관 질환, 또는 감소된 전체 혈류를 야기하는 심장 허혈에 의해 야기될 수 있다. 허혈성 뇌졸중은 아테롬성혈전성 뇌졸중, 심장색전성 뇌졸중 및 라쿠나르 뇌졸중으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 예측되는 뇌졸중은 급성 허혈성 뇌졸중, 특히 심장색전성 뇌졸중이다. 심장색전성 뇌졸중 (빈번하게는 또한 색전성 또는 혈전색전성 뇌졸중)은 심방 세동에 의해 야기될 수 있다.
바람직하게, 상기 뇌졸중은 심방 세동과 연관될 것이다. 보다 바람직하게는, 뇌졸중은 심방 세동에 의해 야기될 것이다. 그러나, 또한 대상체가 심방 세동의 병력이 없는 것이 구상된다.
바람직하게, 뇌졸중은 뇌졸중과 심방 세동의 에피소드 간 시간적 관련성이 존재하면, 심방 세동과 연관된다. 보다 바람직하게는, 뇌졸중이 심방 세동에 의해 야기되면, 뇌졸중은 심방 세동과 연관된다. 가장 바람직하게는, 뇌졸중이 심방 세동에 의해 야기될 수 있으면, 뇌졸중은 심방 세동과 연관된다. 예를 들어, 심장색전성 뇌졸중 (빈번하게는 또한 색전성 또는 혈전색전성 뇌졸중)은 심방 세동에 의해 야기될 수 있다. 바람직하게, AF와 연관된 뇌졸중은 경구 항응고제에 의해 예방될 수 있다. 또한 바람직하게, 검사하려는 대상체가 심방 세동을 앓고 있고/있거나 이의 기지 병력을 가지면, 뇌졸중은 심방 세동과 연관된 것으로 간주된다. 또한, 일 구체예에서, 대상체가 심방 세동을 앓고 있다고 의심되면, 뇌졸중은 심방 세동과 연관된 것으로 간주될 수 있다.
"뇌졸중"이라는 용어는 출혈성 뇌졸중을 포함하지 않는 것이 바람직하다.
상기 언급된 부작용 (예컨대 뇌졸중) 의 예측 방법의 바람직한 구체예에서, 검사되는 대상체는 심방 세동을 앓는다. 보다 바람직하게는, 대상체는 심방 세동의 기지 병력을 갖는다. 부작용을 예측하기 위한 방법에 따라서, 대상체는 바람직하게 영구적 심방 세동, 보다 바람직하게는 지속성 심방 세동 및 가장 바람직하게는 발작성 심방 세동을 앓는다.
부작용을 예측하는 방법의 일 구체예에서, 심방 세동을 앓고 있는 대상체는 샘플을 수득할 때 심방 세동의 에피소드를 경험한다. 부작용을 예측하는 방법의 다른 구체예에서, 심방 세동을 앓고 있는 대상체는 샘플을 수득할 때 심방 세동의 에피소드를 경험하지 않는다 (따라서 정상 동리듬을 가질 것이다). 더 나아가서, 그의 위험성이 예측되는 대상체는 항응고 요법 중일 수 있다.
부작용을 예측하는 방법의 다른 구체예에서, 검사하려는 대상체는 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는다. 특히, 대상체는 심방 세동을 앓지 않는다는 것을 고려한다.
본 발명의 방법은 개인화된 약물을 보조할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 대상체에서 뇌졸중의 위험성을 예측하는 방법은, 대상체가 뇌졸중에 걸릴 위험성이 있는 것으로 확인된 경우, i) 항응고 요법을 권고하는 단계, 또는 ii) 항응고 요법의 강화를 권고하는 단계를 더 포함한다. 바람직한 구체예에서, 대상체에서 뇌졸중의 위험성을 예측하는 방법은, 대상체가 (본 발명의 방법에 의해) 뇌졸중에 걸릴 위험성이 있는 것으로 확인된 경우, i) 항응고 요법을 개시하는 단계, 또는 ii) 항응고 요법의 강화하는 단계를 더 포함한다.
시험 대상체가 항응고 요법 중이고, 대상체가 (본 발명의 방법에 의해) 뇌졸중에 걸릴 위험성이 없는 것으로 확인된 경우, 항응고 요법의 투여량은 감소될 수 있다. 따라서, 투여량의 감소를 권고할 수 있다. 투여량을 줄이면, 부작용 (예컨대 출혈)을 겪을 위험성이 감소될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "권고되는" 은 대상에게 적용될 수 있을 요법에 대한 제안을 성립하는 것을 의미한다. 그러나, 실제 요법을 적용하는 것은 상기 용어에 의해 포함되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 권고되는 요법은 본 발명의 방법에 의해 제공되는 결과에 의존한다.
특히, 다음이 적용된다:
검사 대상체가 항응고 요법을 받지 않은 경우, 대상체가 뇌졸중에 걸릴 위험성이 있는 것으로 확인된 경우, 항응고 개시가 권고된다. 따라서, 항응고 요법을 시작할 수 있다.
검사 대상체가 항응고 요법을 이미 받은 경우, 대상체가 뇌졸중에 걸릴 위험성이 있는 것으로 확인된 경우, 항응고 강화가 권고된다. 따라서, 항응고 요법을 강화할 수 있다.
바람직한 구체예에서, 항응고 요법은 항응고제의 투여량, 즉 현재 투여되는 응고제의 투여량을 증가시킴으로써 강화된다.
특히 바람직한 구체예에서, 항응고 요법은 현재 투여되는 항응고제를 보다 효과적인 항응고제로 대체함으로써 강화된다. 따라서, 항응고제의 대체가 권고된다.
고위험 환자에서 보다 나은 예방이 문헌[Hijazi at al., The Lancet　2016 387, 2302-2311] (도 4) 에 제시된 바와 같이 경구 항응고제 아픽사반 대 비타민 K 길항제 와파린으로 달성되는 것으로 기술되어 있다.
따라서, 검사 대상체는 와파린 또는 디쿠마롤과 같은 비타민 K 길항제로 치료되는 대상체인 것으로 예상된다. 대상체가 뇌졸중 위험성이 있는 것으로 확인된 경우 (본 발명의 방법에 의해), 비타민 K 길항제를 경구 항응고제, 특히 다비가트란, 리바록사반 또는 아픽사반으로 대체하는 것이 권고된다. 따라서, 비타민 K 길항제를 이용한 요법이 중단되고, 경구 항응고제를 이용한 요법이 개시된다.
심전도검사 (ECG)를 수행해야 하는 대상체를 식별하기 위한 방법
본 발명의 방법의 이러한 구체예에 따라서, 바이오마커로 검사되는 대상체가 심전도검사 (ECG), 즉, 심전도검사 평가가 수행되어야 하는지 여부를 평가하게 될 것이다. 상기 평가는 진단을 위해서, 즉 상기 대상체에서, AF의 존재 또는 부재를 검출하기 위해서 수행될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상체를 식별하는"은 바람직하게 ECG가 수행되어야 하는 대상체를 식별하기 위해서 샘플 중 BMP10 의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양) 에 관해 생성된 정보 또는 데이타를 이용하는 것을 의미한다. 식별된 대상체는 AF을 앓게 될 증가된 가능성을 갖는다. ECG 평가는 확인으로서 수행된다.
심전도검사 (ECG로 축약)는 적합한 ECG에 의해 심장의 전기적 활동을 기록하는 프로세스이다. ECG 장치는 신체를 통해 피부로 확산되는 심장에 의해 생성되는 전기 신호를 기록한다. 전기 신호의 기록은 ECG 장치에 포함된 전극과 검사 대상체의 피부를 접촉시켜 획득된다. 기록을 수득하는 프로세스는 비침습성 및 무위험성이다. ECG는 심방 세동의 진단, 즉 검사 대상체에서 심방 세동의 존재 또는 부재의 평가를 위해 수행된다. 본 발명의 방법의 구체예에서, ECG 장치는 원-리드 장치 (예컨대 원-리드 소형 ECG-장치)이다. 다른 바람직한 구체예에서, ECG 장치는 12-리드 ECG 장치 예컨대 홀터 (Holter) 모니터이다.
바람직하게, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 증가된 검사 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 ECG가 수행되어야 하는 대상체를 의미하고/하거나, 기준량 (또는 기준량들)과 비교하여 감소된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)의 양은 ECG가 수행되지 않을 대상체를 의미한다.
바람직한 구체예에서, 기준량은 ECG가 수행되어야 하는 대상체와 ECG가 수행되지 않을 대상체 간 구별을 가능하게 할 것이다. 바람직하게, 상기 기준량은 사전결정된 값이다.
상기 방법의 구체예에서, 상기 방법은, 특히 시험 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양) 이 기준량 (또는 기준량들) 에 비해 증가된 경우, 심전도검사가 수행되어야 하는 대상체를 확인하는 단계, 및 확인된 대상체를 심전도검사에 적용하는 단계를 포함한다.
심방 세동에 대한 요법의 평가를 위한 방법
본 명세서에서 사용되는 용어 "심방 세동에 대한 요법을 평가하는"은 바람직하게 심방 세동을 치료하려는 것을 목표로 하는 요법의 평가를 의미한다. 특히, 요법의 효능을 평가하여야 한다.
평가하려는 요법은 심방 세동을 치료하려는 것을 목표로 하는 임의의 요법일 수 있다. 바람직하게, 상기 요법은 적어도 하나의 항응고제의 투여, 리듬 제어, 속도 제어, 심장율동전환 및 절제술로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 요법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Fuster V et al. Circulation 2011;123:e269-e367] 에서 검토되고, 상기 문헌은 본원에 그 전문이 참고로 포함된다.
일 구체예에서, 요법은 적어도 하나의 항응고제의 투여, 즉 항응고 요법이다. 항응고 요법은 바람직하게는 상기 대상체에서 항응고의 위험성을 감소시키는 것을 목적으로 하는 요법이다. 적어도 하나의 항응고제의 투여는 혈액의 응고 및 관련 뇌졸중을 감소시키거나 또는 예방하는 것을 목표로 할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 적어도 하나의 항응고제는 헤파린, 쿠마린 유도체 (즉, 비타민 K 길항제), 특히 와파린 또는 디쿠마롤, 경구 항응고제, 예컨대 다비가트란, 리바록사반 또는 아픽사반, 조직 인자 경로 억제제 (TFPI), 항트롬빈 III, 인자 IXa 억제제, 인자 Xa 억제제, 인자 Va 및 VIIIa의 억제제 및 트롬빈 억제제 (항-IIa 유형)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 따라서, 대상체가 상기 언급된 약제 중 적어도 하나를 복용하는 것이 예상된다.
바람직한 구체예에서, 항응고제는 비타민 K 길항제, 예컨대 와파린 또는 디쿠마롤이다. 비타민 K 길항제, 예컨대 와파린 또는 디쿠마롤은 덜 비싸지만, 더 나은 환자 순응성을 필요로 하는데, 이는 치료 범위에서 변동하는 시간에 대한 불편하고 번거롭고 종종 신뢰할 수 없는 치료 때문이다. NOAC (신규 경구 항응고제)는 직접 인자 Xa 억제제 (아픽사반, 리바록사반, 다렉사반, 에독사반), 직접 트롬빈 억제제 (다비가트란) 및 PAR-1 길항제 (보라파사르, 아토팍사르)를 포함한다.
또 다른 바람직한 구체예에서, 항응고제 및 경구 항응고제, 특히 아픽사반, 리바록사반, 다렉사반, 에독사반, 다비가트란, 보라파사르, 또는 아토팍사르가 있다.
따라서, 시험되는 대상체는 시험의 시간(즉, 샘플이 수용되는 시간)에 경구 항응고제 또는 비타민 K 길항제로 치료할 수 있다.
바람직한 구체예에서, 심방 세동에 대한 요법의 평가는 상기 요법의 모니터링이다. 이러한 구체예에서, 기준량은 바람직하게 조기에 수득된 샘플 (즉, 단계 a)의 검사 샘플 전에 수득된 샘플)에서 BMP10 의 양이다.
임의로, BMP10-유형 펩티드의 양에 더하여, 본원에 언급된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정한다.
따라서, 본 발명은 대상체에서 심방 세동에 대한 요법을 모니터링하기 위한 방법에 관한 것이고, 상기 대상체는 바람직하게 심방 세동을 앓고 있고, 여기서 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
(a) 대상체 유래의 제 1 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계,
(b) 대상체 유래의 제 2 샘플에서, BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 상기 제 2 샘플은 상기 제 1 샘플 후에 수득됨,
(c) 상기 제 1 샘플 중의 BMP10-유형 펩티드의 양을 상기 제 2 샘플 중의 BMP10-유형 펩티드의 양과 비교하고, 선택적으로 상기 제 1 샘플 중의 상기 적어도 하나의 추가의 바이오마커의 양을 상기 제 2 샘플 중의 상기 적어도 하나의 추가의 바이오마커의 양과 비교함으로써, 항응고 요법을 모니터링하는 단계.
본 명세서에서 사용되는 용어 "모니터링"은 바람직하게, 본 명세서의 다른 곳에 언급된 바와 같은 요법의 효과를 평가하는 것에 관한 것이다. 따라서, 요법 (예컨대, 항응고 요법)의 효능이 모니터링된다.
상기 언급된 방법은 단계 c)에서 수행된 비교 단계의 결과를 기반으로 요법을 모니터링하는 단계를 더 포함할 수 있다. 당업자가 이해하게 되는 바와 같이, 위험성의 예측은 일반적으로 대상체의 100%에 정확한 것을 의도하지 않는다. 그러나, 이 용어는 적절하고 올바른 방식으로 대상체의 통계적으로 유의한 부분에 대해 예측이 이루어지는 것을 요구한다. 따라서, 실제 모니터링은 추가 단계, 예컨대 확인 단계를 포함할 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 방법을 수행하여, 대상체가 상기 요법에 반응하는지 또는 그렇지 않은지 여부를 평가할 수 있다. 제1 및 제2 샘플의 수득 사이에 대상체의 병태가 개선되면 대상체는 요법에 반응한다. 바람직하게, 제1 및 제2 샘플 수득 간에 병태가 악화되면 대상체는 요법에 반응하지 않는다.
바람직하게, 제 1 샘플은 상기 요법의 개시 이전에 수득된다. 보다 바람직하게는, 샘플은 상기 요법의 개시 전 1주 이내 특히 2주 이내에 수득된다. 그러나, 또한 제 1 샘플은 상기 요법의 개시 이후 (그러나 제 2 샘플의 수득 전)에 수득될 수 있다는 것을 고려한다. 이러한 경우에 진행중인 요법이 모니터링된다.
따라서, 제 2 샘플은 제 1 샘플 이후에 수득될 것이다. 제 2 샘플은 상기 요법의 개시 이후에 수득될 것이라는 것을 이해해야 한다.
게다가, 제 2 샘플은 제 1 샘플을 수득한 이후 타당한 기간 이후에 수득된다는 것을 특히 고려한다. 본 명세서에 언급된 바이오마커의 양은 즉시 (예를 들어, 1분 또는 1시간 이내) 변화하지 않는다는 것을 이해해야 한다. 그러므로, 본 문맥에서 "타당한"은 바이오마커(들)을 조정할 수 있게 하는 간격으로 제1 및 제 2 샘플을 수득하는 사이의 간격을 의미한다. 그러므로, 제 2 샘플은 바람직하게, 상기 제 1 샘플 이후 적어도 1개월에, 적어도 3개월, 또는 특히 상기 제 1 샘플 이후 적어도 6개월에 수득된다.
바람직하게, 제 1 샘플 중 바이오마커(들)의 양(들)과 비교하여 제 2 샘플 중 바이오마커(들), 즉, BMP10-유형 펩티드 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드의 양의 감소, 및 보다 바람직하게는 유의한 감소, 및 가장 바람직하게는 통계적으로 유의한 감소는 요법에 반응하는 대상체를 의미한다. 따라서, 요법이 유효하다. 또한 바람직하게는, 제 1 샘플 중 바이오마커(들)의 양(들)과 비교하여 제 2 샘플의 BMP10-유형 펩티드의 농도의 변화 없음 또는 바이오마커(들)의 양(들)의 바람직하게, 증가, 보다 바람직하게는, 유의한 증가, 가장 바람직하게는, 통계적으로 유의한 증가는 요법에 반응하지 않는 대상체를 의미한다. 따라서, 요법은 유효하지 않다.
용어 "유의한" 및 "통게적으로 유의한"은 당업자에게 공지되어 있다. 따라서, 증가 또는 감소가 유의하거나 또는 통계적으로 유의한지 여부는 다양한 충분히 공지된 통계적 평가 도구를 사용해 당업자가 추가 노력없이 결정할 수 있다. 예를 들어, 유의한 증가 또는 감소는 적어도 10%, 특히 적어도 20%의 증가 또는 감소이다.
요법이 대상체의 심방 세동의 재발 위험성을 감소시키면, 대상체는 요법에 반응하는 것으로 간주된다. 요법이 대상체의 심방 세동의 재발 위험성을 감소시키지 않으면, 대상체는 요법에 반응하지 않는 것으로 간주된다.
일 구체예에서, 대상체가 요법에 반응하지 않으면, 요법의 강도가 증가된다. 게다가, 대상체가 요법에 반응하면, 요법의 강도가 감소되는 것을 고려한다. 예를 들어, 요법의 강도는 투여되는 약물의 용량을 증가시켜 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 요법의 강도는 투여되는 약물의 용량을 감소시켜 감소시킬 수 있다. 이에 의해, 출혈과 같은 원하지 않는 부작용을 방지할 수 있다.
다른 바람직한 구체예에서, 심방 세동에 대한 요법의 평가는 심방 세동에 대한 요법의 지침이다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "지침"은 바람직하게 요법의 강도의 조정, 예컨대, 요법 동안 바이오마커, 즉 BMP10-유형 펩티드의 결정을 기반으로, 경구 항응고제의 용량의 증가 또는 감소에 관한 것이다.
추가의 바람직한 구체예에서, 심방 세동에 대한 요법의 평가는 심방 세동에 대한 요법의 계층화이다. 따라서, 대상체는 심방 세동에 대한 일정 요법에 적격하다고 확인되어야 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "계층화"는 바람직하게, 특정한 약물 또는 시술의 기대 효능 및/또는 확인된 특정한 위험, 분자 경로를 기반으로 적절한 요법을 선택하는 것에 관한 것이다. 검출된 위험성에 의존하여, 특히 부정맥과 관련된 최소 증상 또는 무증상의 환자는 심박수의 제어, 심장율동전환 또는 절제술에 적격하게 될 것이고, 아니면, 오직 항혈전제 요법만을 받게 된다.
상기 본 명세서에 제공된 정의 및 설명은 다음에 따라서 (달리 명시한 경우 제외) 준용하여 적용된다.
본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 심방 세동의 평가를 보조하는 방법에 관한 것이다:
a) 대상체로부터 적어도 하나의 샘플을 제공하는 단계,
b) 단계 a) 에서 제공된 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
c) BMP10-유형 펩티드의 결정된 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 결정된 양에 관한 정보를 의사에게 제공하여, 심방 세동의 평가를 보조하는 단계.
의사는 참관의, 즉 바이오마커(들)의 결정을 요청한 의사이다. 상기에 언급된 방법은 심방 세동의 평가에서 참관의를 보조하게 된다. 따라서, 방법은 심방 세동을 평가하는 방법과 연관되어 상기에 언급된 바와 같은 진단, 예측, 모니터링, 구별, 식별을 포괄하지 않는다.
샘플을 수득하는 상기 언급된 방법의 단계 a)는 대상체로부터 샘플의 채취를 포괄하지 않는다. 바람직하게, 샘플은 상기 대상체로부터 샘플을 수용하여 수득된다. 따라서, 샘플은 전달될 수 있다.
일 구체예에서, 상기 방법은 하기 단계를 포함하는, 뇌졸중의 예측을 보조하는 방법이다:
a) 심방 세동을 평가하는 방법과 연관되어, 특히 심방 세동을 예측하는 방법과 연관되어 본 명세서에서 언급되는 대상체로부터 적어도 하나의 샘플을 제공하는 단계,
b) BMP10-유형 펩티드의 양 및 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
c) BMP10-유형 펩티드의 결정된 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 결정된 양에 관한 정보를 의사에게 제공하여, 뇌졸중의 예측을 보조하는 단계.
본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다:
BMP10-유형 펩티드에 대한 어세이 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 바이오마커에 대한 적어도 하나의 추가 어세이를 제공하는 단계, 및
심방 세동의 평가에서 상기 어세이(들) 에 의해 수득되거나 또는 수득가능한 어세이 결과의 사용을 위한 지침을 제공하는 단계.
상기 언급된 방법의 목적은 바람직하게, 심방 세동의 평가를 보조하는 것이다.
지시서는 상기 본 명세서에 기술된 바와 같은 심방 세동을 평가하는 방법을 수행하기 위한 프로토콜을 함유할 것이다. 더 나아가서, 지시서는 BMP10-유형 펩티드의 기준량에 대한 적어도 하나의 값 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드의 기준량에 대한 적어도 하나의 값을 함유하게 될 것이다.
상기 "어세이"는 바람직하게는 바이오마커의 양을 측정하기 위한 키트이다. 용어 "키트"는 본 명세서에서 하기에 설명한다. 예를 들어, 상기 키트는 BMP10-유형 펩티드에 대한 적어도 하나의 검출제 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP-3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제를 포함할 것이다. 따라서, 1개 내지 4개의 검출제가 존재할 수 있다. 1개 내지 4개의 바이오마커에 대한 검출제는 단일 키트 내에 또는 별도 키트 내에 제공될 수 있다.
상기 검사에 의해 수득되거나 또는 수득가능한 검사 결과는 바이오마커(들)의 양에 대한 값이다.
일 구체예에서, 단계 b)는 뇌졸중 (본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같음)의 예측에서 상기 검사(들)에 의해 수득되거나 또는 수득가능한 검사 결과를 사용하기 위한 지시서를 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 심방 세동을 평가하기 위한 컴퓨터-구현 방법에 관한 것이다:
a) 프로세싱 유닛에서 BMP10-유형 펩티드의 양에 대한 값, 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양에 대한 적어도 하나의 추가 값을 수신하는 단계, 여기서 상기 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양은 대상체 유래의 샘플에서 결정되었음,
b) 상기 프로세싱 유닛에 의해, 단계 (a) 에서 수신된 값 또는 값들을 기준 또는 기준들과 비교하는 단계, 및
c) 비교 단계 b) 에 기반하여 심방 세동을 평가하는 단계.
상술한 방법은 컴퓨터-구현 방법이다. 바람직하게는, 컴퓨터-구현 방법의 모든 단계는 컴퓨터 (또는 컴퓨터 네트워크) 의 하나 이상의 프로세싱 유닛에 의해 수행된다. 따라서, 단계 (c) 에서의 평가는 프로세싱 유닛에 의해 수행된다. 바람직하게는, 상기 평가는 단계 (b) 의 결과에 기반한다.
단계 (a) 에서 수신된 값 또는 값들은 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 대상체로부터 바이오마커의 양의 결정으로부터 유도될 것이다. 바람직하게는, 값은 바이오마커의 농도에 대한 값이다. 이 값은 일반적으로 프로세싱 유닛에 값을 업로드 또는 전송함으로써 프로세싱 유닛에 의해 수신될 것이다. 대안적으로는, 사용자 인터페이스를 통해 값을 입력함으로써 프로세싱 유닛에 의해 값이 수신될 수 있다.
상술한 방법의 구체예에서, 단계 (b) 에서 설명된 참조 (또는 참조들) 는 메모리로부터 설정된다. 바람직하게는, 참조에 대한 값은 메모리로부터 설정된다.
전술한 본 발명의 컴퓨터-구현 방법의 일 구체예에서, 단계 c) 에서 수행된 평가의 결과는 결과를 제시하도록 구성된, 디스플레이를 통해 제공된다.
전술한 본 발명의 컴퓨터-구현 방법의 일 구체예에서, 방법은 단계 c) 에서 수행된 평가 정보를 대상체의 전자 의료 기록에 전송하는 단계를 더 포함할 수 있다.
심부전의 진단 방법
추가로, 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양의 결정은 심부전의 진단을 가능하게 한다는 것을 본 발명의 실험에서 확인하였다. 따라서, 본 발명은 또한 BMP10-유형 펩티드 (및 선택적으로 추가로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1, Ang2 및/또는 FABP3) 에 기초하여 심부전을 진단하는 방법을 고려한다.
심방 세동의 평가와 관련하여 상기 본 명세서에 제공된 정의는 다음에 따라서 (달리 명시한 경우 제외) 준용하여 적용된다.
따라서, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심부전을 진단하는 방법에 관한 것이다:
a) 대상체 유래의 샘플 중의 BNP10-유형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) BNP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하여 심부전을 진단하게 되는 단계.
심부전 진단 방법은 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 측정하고, 이를 적합한 기준량과 비교하는 단계를 더 포함할 수 있다.
따라서, 심부전 진단 방법은 다음과 같은 단계를 포함할 수 있다:
a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심부전이 진단되는 단계.
본 명세서에서 사용되는 용어 "진단하는"은 본 발명의 방법에 따라서 언급되는 대상체가 심부전을 앓는지 또는 그렇지 않은지 여부를 평가하는 것을 의미한다. 대상체가 심부전을 앓는지, 또는 그렇지 않은지 여부의 실제 진단은 추가 단계, 예컨대 진단의 확진을 포함할 수 있다. 따라서, 심부전 진단은 심부전 진단의 도움으로 이해된다. 따라서, 본 발명의 문맥에서 용어 "진단하는"은 또한 대상체가 심부전을 앓고 있거나, 또는 그렇지 않은지 여부를 평가하기 위해 의사를 보조하는 단계를 포괄한다.
용어 "심부전" ("HF"로 축약)은 당업자에게 충분히 공지되어 있다. 본 명세서에서 사용시, 이 용어는 바람직하게 당업자에게 공지된 바와 같이 심부전의 현성 징후가 동반되는 심장의 손상된 수축기 및/또는 확장기 기능과 관련된다. 바람직하게, 본 명세서에서 언급되는 심부전은 또한 만성 심부전이다. 본 발명에 따른 심부전은 현성 및/또는 후기 심부전을 포함한다. 현성 심부전에서, 대상체는 당업자에게 공지된 심부전의 증상을 보인다.
본 발명의 일 구체예에서, 용어 "심부전"은 감소된 좌심실 박출 분율 (HFrEF)이 수반된 심부전을 의미한다. 본 발명의 다른 구체예에서, 용어 "심부전"은 좌심실 박출 분율 (HFpEF)이 보존된 심부전을 의미한다.
HF는 다양한 중증도로 분류될 수 있다. NYHA (New York Heart Association) 분류에 따라서, 심부전 환자는 NYHA 클래스 I, II, III 및 IV에 속하도록 분류된다. 심부전을 갖는 환자는 이미 그의 심막, 심근, 관상 순환 또는 심장판의 구조적 및 기능적 변화를 경험하였다. 환자는 그의 건강을 완전하게 복원할 수 없을 것이고, 치료를 필요로 한다. NYHA 클래스 I의 환자는 심혈관 질환의 분명한 증상은 갖지 않지만 이미 기능적 손상의 객관적 증거를 갖는다. NYHA 클래스 II의 환자는 물리적 활동에 약간의 제한을 갖는다. NYHA 클래스 III의 환자는 물리적 활동에 뚜렷한 제한을 보인다. NYHA 클래스 IV의 환자는 불편함없이 임의의 물리적 활동을 수행할 수 없다. 그들은 휴식시에 심장 기능부전의 증상을 보인다.
이러한 기능적 분류는 미국 심장학 학회 및 미국 심장 협회에 의한 보다 최신의 분류가 보충된다 (J. Am. Coll. Cardiol. 2001; 38; 2101-2113, 2005 년에 업데이트됨, 참조 J. Am. Coll. Cardiol. 2005; 46; e1-e82). 4개 병기 A, B, C 및 D가 정의된다. 병기 A 및 B는 HF는 아니지만 "진짜" HF가 발병되기 전에 조기에 환자를 식별하는데 도움을 주는 것으로 간주된다. 병기 A 및 B 환자는 HF가 발병될 위험 인자를 갖는 이들로서 최고로 정의된다. 예를 들어, 손상된 좌심실 (LV) 기능, 비대증, 또는 기하학적 심실 왜곡이 아직 입증되지 않은 관상 동맥 질환, 고혈압, 또는 진성 당뇨병을 갖는 환자가 병기 A로 간주되는데 반해, 무증상성이지만 LV 비대증 및/또는 손상된 LV 기능이 입증된 환자는 병기 B로 지정된다. 다음으로 병기 C는 기본적인 구조적 심장 질환과 연관된 HF의 현재 또는 과거 증상을 갖는 환자 (대부분의 HF를 갖는 환자)를 의미하고, 병기 D는 진짜의 난치성 HF를 갖는 환자를 지정한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "심부전"은, 바람직하게, 상기에 언급된 ACC/AHA 분류의 병기 A, B, C, 및 D를 포함한다. 또한 이 용어는 NYHA 클래스 I, II, III 및 IV를 포함한다. 따라서, 대상체는 심부전의 전형적인 증상을 보일 수도 있거나 또는 그렇지 않을 수도 있다.
바람직한 구체예에서, 용어 "심부전"은 상기 언급된 ACC/AHA 분류에 따른 병기 A 심부전, 또는 특히 병기 B 심부전을 의미한다. 이들 초기 병기, 특히 병기 A의 식별은 치료가 비가역적 손상이 일어나기 전에 개시될 수 있기 때문에 유리하다.
심부전의 진단 방법에 따라서 검사하려는 대상체는 바람직하게는 심방 세동을 앓지 않는다. 그러나, 또한 대상체는 심방 세동을 앓는다고 간주된다. 용어 "심방 세동"은 심부전을 평가하는 방법과 연관되어 정의된다.
바람직하게는, 심부전의 진단 방법에 따라서 검사하려는 대상체는 심부전을 앓는 것으로 의심된다.
용어 "기준량"은 심방 세동을 평가하는 방법과 연관되어 정의되었다. 심부전 진단 방법에서 적용되는 기준량은 원칙적으로 전술한 바와 같이 결정될 수 있다.
바람직하게, 기준량과 비교하여 증가된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 심부전을 앓고 있는 대상체를 의미하고/하거나, 기준량과 비교하여 감소된 대상체 유래 샘플 중 BMP10-유형 펩티드의 양 (및 선택적으로 적어도 하나의 추가 바이오마커, 예컨대 ESM-1, Ang-2, FABP-3 및/또는 나트륨이뇨 펩티드의 양)은 심부전을 앓고 있지 않은 대상체를 의미한다.
심부전을 진단하는 방법의 구체예에서, 상기 방법은 진단의 결과를 기반으로 심부전에 대한 요법을 권고하고/하거나 개시하는 단계를 더 포함한다. 바람직하게, 대상체가 심부전을 앓고 있다고 진단되면 요법이 권고되거나 또는 개시된다. 바람직하게는, 상기 심부전 요법은 안지오텐신 전환효소 (ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제, 베타 차단제 및 알도스테론 길항제로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 약물의 투여를 포함한다. 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제, 베타 차단제 및 알도스테론 길항제의 예는 다음 섹션에 기재되어 있다.
대상체의 입원 위험성 예측 방법
일부 대상체는 심부전으로 더 빠르게 진행되어, 심부전으로 인한 입원 위험성이 높은 것으로 알려졌다. 심부전으로의 진행을 예방하거나 지연시키는 치료적 측정을 가능하게 할 수 있으므로, 이러한 대상체를 가능한 한 빨리 확인하는 것이 중요하다.
유리하게는, 본 발명의 기초가 되는 연구에서, 대상체의 샘플에서 BMP10-유형의 양이 심부전 입원의 위험성이 있는 대상체를 확인하는 것을 허용하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 분석된 코호트 (실시예 4) 의 BMP10 의 네번째 4분위 수의 대상체는 첫번째 4분위 수의 대상체와 비교하여 3년의 기간 내에 심부전 입원의 약 4배의 위험성을 가졌다.
따라서, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 방법에 관한 것이다:
(a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
(b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하는 단계, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교하는 단계.
심방 세동 평가 방법 및 심부전 진단 방법과 관련하여 설명된 정의 및 설명은, 바람직하게는 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성의 예측 방법에 적용된다.
상기 방법은 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 단계 (c) 를 더 포함할 수 있다. 따라서, 단계 (a), (b), (c) 는 바람직하게 다음과 같다:
(a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
(b) BMP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하는 단계, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교하는 단계, 및
(c) 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 단계.
바람직하게, 예측은 단계 (b) 에서의 비교 결과를 기반으로 한다.
표현 "입원" 은 당업자에게 잘 이해되고 바람직하게는, 대상체가 특히 입원 환자 기초로 병원에 입장되는 것을 의미한다. 입원은 심부전으로 인한 것이어야 한다. 따라서, 심부전은 입원의 원인일 것이다. 바람직하게는, 입원은 급성 또는 만성 심부전으로 인한 입원이다. 따라서, 심부전은 급성 및 만성 심부전을 모두 포함한다. 더욱 바람직하게는, 입원은 급성 심부전으로 인한 입원이다. 따라서, 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성이 예측된다.
용어 "심부전" 은 상기에서 정의되었다. 정의는 그에 맞춰 적용된다. 일부 구체예에서, 입원은 ACC/AHA 분류에 따라 병기 C 또는 D로 분류된 심부전으로 인한 것이다. ACC/AHA 분류는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, Hunt et. al. 에 기재되어 있고 (Journal of the American College of Cardiology, Volume 46, Issue 6, 20 September 2005, Pages e1-e82, ACC/AHA Practice Guidelines) 이는 본원에 그 전체가 참고로서 인용된다.
상기 언급된 방법에 따르면, 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성은 예측될 것이다. 따라서, 대상체는 심부전으로 인한 입원 위험성이 있는 자 또는 심부전으로 인한 입원 위험성이 없는 자로 확인될 수 있다. 따라서, 상기 방법에 따라 본 명세서에서 용어 "위험성을 예측하는 것" 은, 바람직하게는 심부전으로 인한 입원 확률을 평가하는 것을 의미한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 상기 방법은 심부전으로 인한 입원 위험성이 있는 대상체와 위험성이 없는 대상체를 구별할 수 있게 한다.
본 발명에 따르면, "위험성의 예측"이라는 용어는 심부전으로 인한 입원 위험성의 예측의 도움으로 이해된다. 최종 예측은, 원칙적으로, 의사에 의해 수행될 것이며, 추가적인 진단 결과를 포함할 수 있다.
당업자가 이해하게 되는 바와 같이, 위험성의 예측은 일반적으로 대상체의 100%에 정확한 것을 의도하지 않는다. 바람직하게는, 이 용어는 적절하고 올바른 방식으로 대상체의 통계적으로 유의한 부분에 대해 예측이 이루어지는 것을 의미한다. 부분이 통계적으로 유의한지 여부는 다양한 충분히 공지된 통계적 평가 도구, 예를 들어 신뢰 구간의 결정, p-값 결정, 스튜던트 t-검정법, 만-위트니 검정법 등을 사용하여 당업자가 추가의 노력없이 결정할 수 있다. 자세한 내용은 Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983 에서 확인된다. 바람직한 신뢰 구간은 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 이다. p-값은 바람직하게는, 0.1, 0.05, 0.01, 0.005 또는 0.0001 이다.
바람직하게는, 특정 시간 윈도우 내의 위험/확률이 예측된다. 일부 구체예에서, 상기 예측 윈도우는 본 발명의 방법의 완료로부터 계산된다. 특히, 상기 예측 윈도우는 검사하려는 샘플을 수득한 시점부터 계산된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 예측 윈도우는 바람직하게는, 1 년 이상, 2 년 이상, 3 년 이상, 4 년 이상, 5 년 이상 또는 10 년 이상, 또는 임의의 일시 중단 시간 범위의 간격이다. 본 발명의 또다른 바람직한 구체예에서, 예측 윈도우는 바람직하게는 5 년 이하, 보다 바람직하게는 4 년 이하, 또는 가장 바람직하게는 3 년 이하의 기간이다. 따라서, 3 년 이하, 4 년 이하 또는 5 년 이하의 기간 내 위험성이 예측된다. 또한 예측 윈도우가 1년 내지 5년의 기간인 것을 고려한다. 대안적으로, 예측 윈도우는 1 내지 3 년의 기간일 수 있다.
바람직한 구체예에서, 3 년 이내에 심부전으로 인한 입원 위험성이 예측된다.
바람직하게는, 본 발명의 상기 방법에 의해 분석되는 대상체는 심부전으로 인한 입원 위험성이 있는 대상체의 그룹, 또는 심부전으로 인한 입원 위험성이 없는 대상체의 그룹으로 할당된다. 위험성이 있는 대상체는, 바람직하게는 심부전으로 인한 입원 위험성이 상승된 대상체이다 (특히 예측 윈도우 내에). 바람직하게는, 상기 위험성은 대상 코호트 (즉, 대상 그룹) 에서의 위험성과 비교하여 상승된다. 위험성이 없는 대상체는, 바람직하게는 심부전으로 인한 입원 위험성이 감소된 대상체이다 (특히 예측 윈도우 내에). 바람직하게는, 상기 위험성은 대상 코호트 (즉, 대상 그룹) 에서의 평균 위험성과 비교하여 감소된다. 따라서, 본 발명의 방법은 상승된 위험성 및 감소된 위험성 사이의 구별을 가능하게 한다. 위험성을 갖는 대상체는 3 년의 예측 윈도우 내에 바람직하게는 12% 이상, 또는 보다 바람직하게는 15% 이상, 또는 가장 바람직하게는 20% 이상의 심부전으로 인한 입원의 위험성을 갖는다. 위험성이 없는 대상체는 바람직하게는, 3 년의 예측 윈도우 내에, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 8% 이하, 또는 가장 바람직하게는 7% 이하의 심부전으로 인한 입원의 위험성을 갖는다.
용어 "기준량"은 본원의 다른 곳에 정의되어 있다. 정의는 그에 맞춰 적용된다. 상기 방법에서 적용되는 기준량은 심부전으로 인한 입원의 위험성을 예측할 수 있도록 하여야 한다. 일부 구체예에서, 기준량은 심부전으로 인한 입원의 위험성이 있는 대상체와 심부전으로 인한 입원의 위험성이 위험성이 없는 대상체 간 구별을 가능하게 할 것이다. 일부 구체예에서, 상기 기준량은 사전결정된 값이다.
바람직하게는, 기준량에 비해 증가된 대상체 유래 샘플 중의 BMP10-유형 펩티드의 양은 심부전으로 인한 입원의 위험성이 있는 대상체에 대한 지표이다. 또한 바람직하게는, 기준량에 비해 감소된 대상체 유래 샘플 중의 BMP10-유형 펩티드의 양은 심부전으로 인한 입원의 위험성이 없는 대상체에 대한 지표이다.
1 개 초과의 바이오마커가 결정되면, 다음과 같이 적용된다:
바람직하게는, 각각의 기준량에 비해 증가된 대상체 유래 샘플 중의 BMP10-유형 펩티드의 양 및 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양 (또는 양들) 은 심부전으로 인한 입원의 위험성이 있는 대상체에 대한 지표이다. 또한 바람직하게는, 각각의 기준량에 비해 감소된 대상체 유래 샘플 중의 BMP10-유형 펩티드의 양 및 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양 (또는 양들) 은 심부전으로 인한 입원의 위험성이 없는 대상체에 대한 지표이다.
용어 "샘플"은 본원의 다른 곳에 정의되어 있다. 정의는 그에 맞춰 적용된다. 일부 구체예에서, 샘플은 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플이다.
용어 "대상체"는 본원의 다른 곳에 정의되어 있다. 정의는 그에 맞춰 적용된다. 일부 구체예에서, 대상체는 인간 대상체이다. 바람직하게, 검사되는 대상체는 50세 이상이고, 보다 바람직하게는 60세 이상이며, 가장 바람직하게는 65세 이상이다. 더 나아가서, 검사하려는 대상체는 70세 이상을 고려한다. 게다가, 검사되는 대상체는 75세 이상을 고려한다. 또한, 대상체는 50세 내지 90세일 수 있다.
구체예에서, 검사하려는 대상체는 심부전의 병력을 갖는다. 또다른 구체예에서, 검사하려는 대상체는 심부전의 병력을 갖지 않는다.
본 발명의 방법은 개인화된 약물을 보조할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 상기 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하기 위한 방법은, 대상체가 심부전으로 인한 입원의 위험에 있다고 예측되는 경우, 적어도 하나의 적절한 요법을 권고 및/또는 개시하는 단계를 더 포함한다. 따라서, 본 발명은 또한 치료 방법에 관련된다.
바람직하게는, 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하기 위한 방법의 맥락에서 사용하는 바와 같은 용어 "요법" 은 생활 방식 변화, 식이 요법, 신체에 대한 개입 뿐 아니라 의학적 치료, 즉 약제(들) 로의 치료를 포함한다. 바람직하게는, 상기 치료는 심부전으로 인한 입원의 위험성을 감소시키는 것을 목적으로 한다. 일 구체예에서, 요법은 약제 (또는 약제들) 의 투여이다. 바람직하게는, 약제는 안지오텐신-변환 효소 (ACE) 저해제, 안지오텐신 수용체 안타고니스트 (ARB), 알도스테론 안타고니스트 및 베타 차단제로 이루어지는 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, 약제는 프로프레놀롤, 메토프롤롤, 비소프롤롤, 카베딜롤, 부신돌롤, 및 네비볼롤과 같은 베타 차단제이다. 일부 구체예에서, 약제는 ACE 억제제, 예컨대 에날라프릴, 캅토프릴, 라미프릴 및 트란돌라프릴이다. 일부 구체예에서, 약제는 안지오텐신 II 수용체 차단제, 예컨대 로사르탄, 발사르탄, 이르베사르탄, 칸데사르탄, 텔미사르탄 및 에프로사르탄이다. 일부 구체예에서, 약제는 알도스테론 길항제, 예컨대 에플레론, 스피로노락톤, 칸레논, 멕스레논 및 프로레논이다.
생활 방식 변화는 금연, 알코올 소비 절제, 신체적 활동 증가, 체중 감소, 나트륨 (염) 제한, 체중 관리 및 건강한 식사, 매일의 어유, 염 제한을 포함한다.
또한, 본 발명은 하기:
i) BMP10-유형 펩티드 및, 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커, 및/또는
ii) BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 및, 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP-3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제의,
a) 심방 세동을 평가하기 위한, b) 대상체의 뇌졸중의 위험성을 예측하기 위한, 및/또는 c) 심부전을 진단하기 위한 용도 (특히, 예를 들어, 대상 유래 샘플에서의 시험관 내 용도)에 관한 것이다.
상기 언급된 용도와 연관되어 언급된 용어들 예컨대 "샘플", "대상체", "검출제", "특이적으로 결합하는", "심방 세동", 및 "심방 세동을 평가하는"은 심방 세동을 평가하기 위한 방법와 연관되어 정의되었다. 정의 및 설명은 그에 맞춰 적용된다.
본 발명은 또한 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하기 위한 BMP10-유형 펩티드 및/또는 BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제의 용도 (특히, 예를 들어, 대상 유래 샘플에서의 시험관 내 용도)에 관한 것이다.
바람직하게, 상기 언급된 용도는 시험관 내 용도이다. 게다가, 검출제는 바람직하게 항체 예컨대 단일클론 항체 (또는 이의 항원 결합 단편)이다.
본 발명은 또한 키트에 관한 것이다. 일 구체예에서, 본 발명의 키트는 BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제 및 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP-3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제를 포함한다.
바람직하게, 상기 키트는 본 발명의 방법, 즉 심방 세동을 평가하기 위한 방법, 또는 심부전을 진단하기 위한 방법, 또는 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하기 위한 방법을 수행하기 위해 적합화된다. 임의로, 상기 키트는 상기 방법을 수행하기 위한 지시서를 포함한다.
본 명세서에서 사용시 용어 "키트"는 바람직하게, 별개로 또는 단일 용기에 제공되는, 상기 언급된 성분의 수집물을 의미한다. 용기는 또한 본 발명의 방법을 수행하기 위한 지시서를 포함한다. 이들 지시서는 수동의 형태일 수 있거나 또는 본 발명의 방법에서 언급되고 컴퓨터 또는 데이타 처리 장치에서 실행될 때 그에 따라 평가 또는 진단을 확립하기 위해 비교 및 계산을 수행할 수 있는 컴퓨터 프로그램 코드로 제공될 수 있다. 컴퓨터 프로그램 코드는 데이터 저장 매체 또는 장치, 예를 들어 광학 저장 매체 (예를 들어, 컴팩트 디스크) 상에 또는 컴퓨터 또는 데이터 가공 장치 상에 직접 제공될 수 있다. 게다가, 키트는 바람직하게 보정 목적을 위해 BMP10-유형 펩티드의 표준량을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 키트는 교정 목적을 위해 본원에 언급된 적어도 하나의 추가 바이오마커 (예컨대 나트륨이뇨 펩티드, 또는 ESM-1)에 대한 표준량을 추가로 포함한다.
일 구체예에서, 상기 키트는 시험관내에서 심방 세동을 평가하는데 사용된다. 대안적인 구체예에서, 상기 키트는 시험관 내에서 심부전을 진단하는데 사용된다. 대안적인 구체예에서, 상기 키트는 시험관 내에서 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는데 사용된다.
도면은 하기를 나타낸다:
도 1: 3 개의 환자 그룹 (발작성 심방 세동, 지속성 심방 세동 및 부비동 리듬 환자) 에서 BMP10 ELISA 의 측정
도 2: 발작성 Afib 에서 BMP10 에 대한 ROC 곡선; AUC = 0.68
도 3: 지속성 Afib 에서 BMP10 에 대한 ROC 곡선; AUC = 0.90 (탐색적 AFib 패널: 발작성 AFib의 14가지 사례, 지속성 Afib의 16가지 사례 및 30 명의 대조군을 포괄하는 심방 세동의 병력이 있는 환자).
도 4: 심부전 환자 및 심부전이 없는 환자의 구별에서 BMP10 [단위: ng/ml]
도 5. 심부전의 구별에서의 BMP10; BMP10 에 대한 ROC 곡선; AUC = 0.76
도 6. 카플란-마이어 (Kaplan-Meier) 곡선은 이전의 심부전 병력이 있는 환자에서 BMP-10 의 4분위수에 의한 HF 입원에 대한 위험성을 보여준다.
도 7. 카플란-마이어 곡선은 이전의 심부전 병력이 없는 환자에서 BMP-10 의 4분위수에 의한 HF 입원에 대한 위험성을 보여준다.
도 8. 카플란-마이어 곡선은 BMP-10(중간값)의 이중화에 의한 뇌졸중의 위험성을 보여준다.
실시예
본 발명은 단지 하기 실시예에 의해 예시될 것이다. 상기 실시예는 본 발명의 범주를 제한하는 방식으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1: 맵핑 실험 - 그들의 상이한 순환성 BMP10 수준을 기반으로 환자와 비교하여 심방 세동을 갖는 환자의 진단
맵핑 실험은 개흉 수술을 겪은 환자와 관련되었다. 샘플은 마취 및 수술 전에 수득하였다. 환자는 다극 어레이에 의한 고밀도 심외막 맵핑 (고밀도 맵핑)을 사용하여 전기생리적으로 특징규명되었다. 실험은 발작성 심방 세동을 갖는 14명 환자, 지속성 심방 세동을 갖는 10명 환자, 및 최고 가능성 (연령, 성별, 동반이환)에 부응되는, 28명 대조군으로 구성되었다. BMP10은 맵핑 실험의 혈청 샘플에서 결정하였다. 상승된 BMP10 수준은 대조군 대비 심방 세동을 갖는 환자에서 관찰되었다. BMP10 수준은 부응하는 대조군 대비 발작성 심방 세동을 갖는 환자를 비롯하여, 대조군 대비 지속성 심방 세동을 갖는 환자에서 상승하였다.
또한, 바이오마커 ESM-1은 맵핑 코호트 유래 샘플에서 결정하였다. 흥미롭게도, BMP10 및 ESM-1의 조합된 결정치는 지속성 AF 대 SR (동리듬) 간 구별을 위해 0.92까지 AUC의 증가를 가능하게 한다는 것을 확인하였다.
또한, 바이오마커 FABP-3 은 맵핑 코호트 유래 샘플에서 결정하였다. 흥미롭게도, BMP10 및 FABP-3의 조합된 결정치는 발작성 AF 대 SR (동리듬) 간 구별을 위해 0.73까지 AUC의 증가를 가능하게 한다는 것을 확인하였다.
실시예 2: 심부전 패널
심부전 패널은 만성 심부전을 갖는 60명 환자를 포함하였다. ESC 지침 기준에 따라서, 심부전은 휴식 시 심장의 구조적 또는 기능적 이상의 전형적인 징후 및 증상 및 객관적 증거를 갖는 환자에서 진단되었다. 허혈성 또는 확장성 심근병증 또는 유의한 심장판박증을 갖고 동의서에 서명을 할 수 있는 18세 내지 80세의 환자가 실험에 포함되었다. 지난 6개월 동안 급성 심근 경색, 폐 색전증 또는 뇌졸중을 가졌고, 중증 폐 고혈압 및 말기 신장 질환을 더 갖는 환자는 배제되었다. 환자는 대부분 심부전 병기 NYHA II-IV를 앓았다.
건강한 대조군 코호트는 33명 대상체를 포함하였다. 건강한 상태는 ECG 및 심장초음파 결과의 상태를 평가함으로써 검증되었다. 임의의 이상성을 갖는 참여자는 배제하였다.
상승된 BMP10 수준은 대조군 대비 심부전을 갖는 환자의 혈청 샘플에서 관찰되었다.
실시예 3: 바이오마커 측정
BMP10 은 골형성 단백질 10(BMP10) 에 대한 연구 등급 ECLIA 어세이; Roche Diagnostics, Germany의 ECLIA 어세이에서 측정하였다.
인간 혈청 및 혈장 샘플에서 BMP10의 검출을 위해, BMP10의 N-말단 프로세그먼트에 특이적으로 결합하는 항체 샌드위치를 사용하였다. 이러한 항체는 또한 proBMP10 및 preproBMP10에 결합한다. 따라서, BMP10, proBMP10, 및 preproBMP10 의 N-말단 프로세그먼트의 양의 합이 결정된다. 예를 들어, BMP9 와 같은 다른 BMP-유형 단백질로부터의 발견에 기초한 구조적 예측은 BMP10 이 proBMP10 과 복합체로 남아있다는 것을 보여주며, 따라서 N-말단 프로세그먼트의 검출은 또한 BMP10 의 양을 반영한다. 또한, BMP10의 동종이량체 형태, 뿐만 아니라 이종이량체 구조, 예를 들어 BMP9 또는 다른 BMP-유형 단백질과의 조합을 검출할 수 있다.
실시예 4: SWISS AF 연구 - 심부전 입원의 위험성 예측
SWISS-AF 연구로부터의 데이터는 2387명의 환자를 포함하고, 이로부터 617명이 심부전(HF)의 병력을 갖는다. BMP-10은 이러한 환자에서 심부전으로 인한 입원의 위험성을 예측하는 능력을 평가하기 위해 측정하였다.
심부전 입원이 심부전 병력이 있는 환자 및 알려진 심부전 병력이 없는 환자에서 발생할 수 있기 때문에, 향후 심부전 입원을 예측하기 위해 능력을 이들 그룹에서 독립적으로 평가하였다. 총 233명의 환자에 대해 HF로 인한 입원이 추적 조사(follow-up) 동안 기록되었다. 233명의 입원 중 125명은 이전에 공지된 HF를 갖는 환자에서 발생했다.
HF에서 공지된 병력이 있는 환자에서 HF 입원의 예측
표 1은 HF의 공지된 병력이 있는 환자를 포함하는 콕스 비례 위험 모델의 결과를 나타낸다. 의존적 변수는 HF 입원 및 독립적 변수가 log-2 변환된 BMP-10 값일 때까지의 시간이다.
위험비 및 낮은 p-값 BMP-10에 의해 보이는 바와 같이, HF의 공지된 병력이 있는 환자에서 HF 입원에 대한 위험성을 상당히 예측할 수 있다. BMP-10 값이 모델에 들어가기 전에 log-2 변형되었기 때문에, 위험비는 BMP-10의 값이 2배로 증가한다면 환자에 대해 3.43만큼 위험성이 증가한다고 해석될 수 있다.
Figure pct00001
표 1: HF의 공지된 병력이 있는 환자에서 HF 입원의 위험성을 예측하는 BMP-10에 대한 콕스 비례 위험 모델(log-2 변형됨)의 요약.
도 6은 BMP-10의 4분위수에 의한 HF 입원의 위험성을 나타내는 카플란-마이어 곡선을 도시한다. 위험성은 BMP-10 값의 증가에 따라 일정하게 증가하며, 가장 높은 위험성은 가장 높은 4분위수 내에서 BMP-10 수준을 갖는 환자에 대해 관찰된다.
HF에서 공지된 병력이 없는 환자에서 HF 입원의 예측
표 2는 HF의 공지된 병력이 없는 환자를 포함하는 콕스 비례 위험 모델의 결과를 나타낸다. 의존적 변수는 HF 입원 및 독립적 변수가 log-2 변환된 BMP-10 값일 때까지의 시간이다.
위험비 및 낮은 p-값 BMP-10에 의해 보이는 바와 같이, HF의 공지된 병력이 없는 환자에서 HF 입원에 대한 위험성을 상당히 예측할 수 있다. BMP-10 값이 모델에 들어가기 전에 log-2 변형되었기 때문에, 위험비는 BMP-10의 값이 2배로 증가한다면 환자에 대해 3.43만큼 위험성이 증가한다고 해석될 수 있다
Figure pct00002
표 2: HF의 공지된 병력이 없는 환자에서 HF 입원의 위험성을 예측하는 BMP-10에 대한 콕스 비례 위험 모델(log-2 변형됨)의 요약.
도 7은 BMP-10의 4분위수에 의한 HF 입원의 위험성을 나타내는 카플란-마이어 곡선을 도시한다. 위험성은 BMP-10 값의 증가에 따라 일정하게 증가하며, 위험성은 2 개의 가장 높은 4분위수 내에서 BMP-10 수준을 갖는 환자에 대해 가장 높다.
실시예 5: SWISS AF 연구 - 뇌졸중의 위험성 예측
뇌졸중 발병의 위험성을 예측하는 순환성 ESM-1의 능력은 기록된 심방 세동을 갖는 환자의 유망한, 다센터 등록소에서 입증하였다 (실시예 3 참조) (Conen D., Swiss Med Wkly. 2017 Jul 10;147:w14467).
BMP10 결과는 이벤트가 있는 65명 환자 및 이벤트가 없는 2269명 환자에 대해 입수가능하였다.
BMP10 비례 위험 모델의 단변량 예후 값을 정량하기 위해, 결과 뇌졸중과 함께 사용하였다.
BMP10의 단변량 예후 수행력은 BMP10에 의해 제공된 예후 정보의 2개의 상이한 도입에 의해 평가되었다.
제1 비례 위험 모델은 중앙값에서 이진화된 BMP10 (2.2 ng/mL)을 포함하였고 그러므로 상기 중앙값 이상의 BMP10을 갖는 환자 대비 중앙값 이하의 BMP10을 갖는 환자의 위험도를 비교하였다.
제2 비례 위험 모델은 본래의 ESM-1 수준을 포함하였지만 log2 스케일로 변환시켰다. log2 변환은 더 나은 모델 교정을 가능하게 하기 위해 수행되었다.
이초최적화된 기준선 BMP10 측정 (<=2.2 ng/mL vs > 2.2 ng/mL)에 기초하여 2개의 그룹에서 절대 생존율에 대한 추정을 얻기 위해, 카플란-마이어 플롯을 생성하였다.
BMP10의 예후 값이 기지의 임상적 및 인구통계학적 위험 요인과 독립적인지 여부를 평가하기 위해서 변수 연령에 더하여 뇌졸중/TIA/혈전색전증 병력을 포함한 가중 비례 콕스 모델을 계산하였다. 이들은 전체 코호트 (모든 대조군 포함) 에 대한 유일한 중요한 임상 위험 예측자였다.
뇌졸중의 예후를 위한 기존의 위험 점수를 개선하는 BMP10의 능력을 평가하기 위해, CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc 및 ABC 점수를 BMP10 (log2 변환됨) 에 의해 연장시켰다. BMP10 및 각각의 위험 점수를 독립적 변수로서 포함하는 분할된 위험 모델을 생성함으로써 연장을 수행하였다.
CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc 및 ABC 점수의 c-지수를 이들 연장된 모델의 c-지수와 비교하였다.
결과
표 1은 이진화 또는 log2 변환 BMP10을 포함하는 2개의 단변량 가중 비례 위험 모델의 결과를 보여준다. BMP10의 기준선 값과 뇌졸중 경험의 위험 간의 연관성은 log2-변환된 BMP10을 위험 예측자로 사용하는 모델에서 유의적이지 않지만, 유의성 수준 0.05에 가깝다.
이진화된 BMP10을 사용하는 모델의 경우 p-값이 약간 더 높다. 그러나, 더 많은 수의 이벤트로, 그 효과는 통계적으로 유의할 수 있다.
이진화 BMP10에 대한 위험율은 기준치 BMP10 <= 2.2 ng/mL 를 갖는 환자 그룹 대비 기준치 BMP10 > 2.2 ng/mL 를 갖는 환자 그룹에서 뇌졸중에 대한 1.5배 더 높은 위험성을 암시한다. 이는 두 그룹에 대한 카플란-마이어 곡선을 표시하는 도 8 에서도 확인할 수 있다.
log2 변환 선형 위험 예측자로서 BMP10 을 포함하는 비례 위험 모델의 결과는 log2 변환 값 BMP10 이 뇌졸중을 경험할 위험성에 비례한다는 것을 의미한다. 2.038의 위험비는 BMP10의 2배 감소가 뇌졸중 위험성의 2.038 증가와 연관된다는 방식으로 해석될 수 있다.
표 1: 이진화 및 log2 변환 BMP10을 포함하는 단변량 가중 비례 위험 모델의 결과.
Figure pct00003
표 2는 임상적 및 인구통계적 변수와 조합하여 BMP10 (log2 변환)을 포함하는 비례 위험 모델의 결과를 도시한다. BMP10의 예후 값은 일부 연장으로 감소하지만, 이는 모델의 낮은 통계력에 의해 부분적으로 설명될 수 있다.
표 2: BMP10 및 관련 임상 및 인구통계 변수를 포함하는 다변량 비례 위험 모델.
Figure pct00004
표 3은 CHADS2 점수를 BMP10 (log2 변환)과 조합한 가중 비례 위험 모델의 결과를 보여준다. 이 모델에서, BMP10은 CHADS 점수에 예후 정보를 추가할 수 있지만, 낮은 샘플 크기에 대해 허용될 수 있는 0.05 초과의 p-값을 갖는다.
표 3: CHADS 점수를 BMP10 (log2 변환)과 조합한 가중 비례 위험 모델
Figure pct00005
표 4는 CHA₂DS₂-VASc 점수를 BMP10 (log2 변환)과 조합한 가중 비례 위험 모델의 결과를 보여준다. 또한 이 모델에서, BMP10은 CHA₂DS-VASc 점수에 예후 정보를 추가할 수 있지만, 낮은 샘플 크기에 대해 허용될 수 있는 0.05 초과의 p-값을 갖는다.
표 4: CHA₂DS₂-VASc 점수를 BMP10 (log2 변환)과 조합한 가중 비례 위험 모델
Figure pct00006
표 5는 ABC 점수를 BMP10 (log2 변환)과 조합한 가중 비례 위험 모델의 결과를 보여준다. 이 모델에서, 추정된 위험 비율은 감소하고, BMP-10은 어떠한 예후 수행력도 추가할 수 없을 것이다.
표 5: ABC 점수를 BMP10 (log2 변환)과 조합한 가중 비례 위험 모델
Figure pct00007
표 6은 사례 코호트 선택 상의 CHADS, CHA DS-VASc, ABC 스코어 및 CHADS, CHA-VASc, ABC 스코어₂과 BMP10(log2)를 조합한 가중 비례 위험 모델₂의 BMP10 단독의 추정된 c-지수를 나타낸다. BMP10의 첨가는 CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc 점수의 c-지수는 개선하나 ABC 점수는 그러하지 않다는 것을 볼 수 있다.
c-지수의 차이는 CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc, ABC 점수 각각에 대해 0.019, 0.015 및 -0.002이다.
표 6: BMP10, CHA₂DS₂-VASc 점수 및 CHA₂DS₂-VASc 점수와 BMP10의 조합의 c-지수 및, CHADS₂ 및 ABC 점수 및 이들의 BMP10 와의 조합의 c-지수.
Figure pct00008
SEQUENCE LISTING <110> Roche Diagnostics GmbH, F. Hoffmann-La Roche AG, Maastricht University Medical Center <120> BMP10 for the assessment of Afib <130> RD34961PC <150> EP18189551.7 <151> 2018-08-17 <160> 1 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 424 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> unprocessed preproBMP10 <400> 1 Met Gly Ser Leu Val Leu Thr Leu Cys Ala Leu Phe Cys Leu Ala Ala 1 5 10 15 Tyr Leu Val Ser Gly Ser Pro Ile Met Asn Leu Glu Gln Ser Pro Leu 20 25 30 Glu Glu Asp Met Ser Leu Phe Gly Asp Val Phe Ser Glu Gln Asp Gly 35 40 45 Val Asp Phe Asn Thr Leu Leu Gln Ser Met Lys Asp Glu Phe Leu Lys 50 55 60 Thr Leu Asn Leu Ser Asp Ile Pro Thr Gln Asp Ser Ala Lys Val Asp 65 70 75 80 Pro Pro Glu Tyr Met Leu Glu Leu Tyr Asn Lys Phe Ala Thr Asp Arg 85 90 95 Thr Ser Met Pro Ser Ala Asn Ile Ile Arg Ser Phe Lys Asn Glu Asp 100 105 110 Leu Phe Ser Gln Pro Val Ser Phe Asn Gly Leu Arg Lys Tyr Pro Leu 115 120 125 Leu Phe Asn Val Ser Ile Pro His His Glu Glu Val Ile Met Ala Glu 130 135 140 Leu Arg Leu Tyr Thr Leu Val Gln Arg Asp Arg Met Ile Tyr Asp Gly 145 150 155 160 Val Asp Arg Lys Ile Thr Ile Phe Glu Val Leu Glu Ser Lys Gly Asp 165 170 175 Asn Glu Gly Glu Arg Asn Met Leu Val Leu Val Ser Gly Glu Ile Tyr 180 185 190 Gly Thr Asn Ser Glu Trp Glu Thr Phe Asp Val Thr Asp Ala Ile Arg 195 200 205 Arg Trp Gln Lys Ser Gly Ser Ser Thr His Gln Leu Glu Val His Ile 210 215 220 Glu Ser Lys His Asp Glu Ala Glu Asp Ala Ser Ser Gly Arg Leu Glu 225 230 235 240 Ile Asp Thr Ser Ala Gln Asn Lys His Asn Pro Leu Leu Ile Val Phe 245 250 255 Ser Asp Asp Gln Ser Ser Asp Lys Glu Arg Lys Glu Glu Leu Asn Glu 260 265 270 Met Ile Ser His Glu Gln Leu Pro Glu Leu Asp Asn Leu Gly Leu Asp 275 280 285 Ser Phe Ser Ser Gly Pro Gly Glu Glu Ala Leu Leu Gln Met Arg Ser 290 295 300 Asn Ile Ile Tyr Asp Ser Thr Ala Arg Ile Arg Arg Asn Ala Lys Gly 305 310 315 320 Asn Tyr Cys Lys Arg Thr Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Lys Glu Ile Gly 325 330 335 Trp Asp Ser Trp Ile Ile Ala Pro Pro Gly Tyr Glu Ala Tyr Glu Cys 340 345 350 Arg Gly Val Cys Asn Tyr Pro Leu Ala Glu His Leu Thr Pro Thr Lys 355 360 365 His Ala Ile Ile Gln Ala Leu Val His Leu Lys Asn Ser Gln Lys Ala 370 375 380 Ser Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Lys Leu Glu Pro Ile Ser Ile Leu 385 390 395 400 Tyr Leu Asp Lys Gly Val Val Thr Tyr Lys Phe Lys Tyr Glu Gly Met 405 410 415 Ala Val Ser Glu Cys Gly Cys Arg 420

Claims (19)

  1. 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 심방 세동을 평가하기 위한 방법:
    a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 (안지오포이에틴 2) 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
    b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심방 세동이 평가되는 단계.
  2. 제 1 항에 있어서, 샘플이 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플이고/이거나, 대상체가 인간인 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 심방 세동의 평가는 심방 세동의 진단인 방법.
  4. 제 3 항에 있어서, 기준량 초과의 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양이 심방 세동을 앓고 있는 대상체에 대한 지표이고/이거나, 기준량 미만의 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양이 심방 세동을 앓고 있지 않은 대상체에 대한 지표인 방법.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 대상체는 심방 세동을 앓고 있고, 심방 세동의 평가는 발작성 및 지속성 심방 세동 간 구별인 방법.
  6. 제 5 항에 있어서, 기준량 초과의 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양이 지속성 심방 세동을 앓고 있는 대상체에 대한 지표이고/이거나, 기준량 미만의 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양이 발작성 심방 세동을 앓고 있는 대상체에 대한 지표인 방법.
  7. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 심방 세동의 평가는 심방 세동과 연관된 부작용의 위험성의 예측이고, 특히, 심방 세동과 연관된 부작용은 심방 세동 및/또는 뇌졸중의 재발인 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 기준량 초과의 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양이 심방 세동과 연관된 부작용을 겪을 위험성이 있는 대상체에 대한 지표이고/이거나, 기준량 미만의 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양이 심방 세동과 연관된 부작용을 겪을 위험성이 없는 대상체에 대한 지표인 방법.
  9. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 심방 세동의 평가는 심방 세동에 대한 요법의 평가인 방법.
  10. 하기 단계를 포함하는, 심방 세동의 평가를 보조하는 방법:
    a) 대상체로부터 적어도 하나의 샘플을 제공하는 단계,
    b) 단계 a) 에서 제공된 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
    c) BMP10-유형 펩티드의 결정된 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 결정된 양에 관한 정보를 의사에게 제공하여, 심방 세동의 평가를 보조하는 단계.
  11. 하기 단계를 포함하는, 심방 세동의 평가를 보조하기 위한 방법:
    a) BMP10-유형 펩티드에 대한 어세이 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 바이오마커에 대한 적어도 하나의 추가 어세이를 제공하는 단계, 및
    b) 심방 세동의 평가에서 상기 어세이(들) 에 의해 수득되거나 또는 수득가능한 어세이 결과의 사용을 위한 지침을 제공하는 단계.
  12. 하기 단계를 포함하는, 심방 세동을 평가하기 위한 컴퓨터-구현 방법:
    a) 프로세싱 유닛에서 BMP10-유형 펩티드의 양에 대한 값, 및 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양에 대한 적어도 하나의 추가 값을 수신하는 단계, 여기서 상기 BMP10-유형 펩티드의 양 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양은 대상체 유래의 샘플에서 결정되었음,
    b) 상기 프로세싱 유닛에 의해, 단계 a) 에서 수신된 값 또는 값들을 기준 또는 기준들과 비교하는 단계, 및
    c) 비교 단계 b) 에 기반하여 심방 세동을 평가하는 단계.
  13. 하기 단계를 포함하는, 심부전을 진단하기 위한 방법:
    (a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계, 및
    (b) BMP10-유형 펩티드의 양을 BMP10-유형 펩티드에 대한 기준량과 비교하고 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교함으로써, 심부전이 진단되는 단계.
  14. 하기 단계를 포함하는, 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하기 위한 방법:
    (a) 대상체 유래의 적어도 하나의 샘플에서, BMP10-유형 펩티드 (골형성 단백질 10-유형 펩티드) 의 양 및, 선택적으로, 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 결정하는 단계,
    (b) BMP10-유형 펩티드의 양을 기준량과 비교하는 단계, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가 바이오마커의 양을 상기 적어도 하나의 추가 바이오마커에 대한 기준량과 비교하는 단계, 및
    (c) 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하는 단계.
  15. BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제 및, 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제를 포함하는 키트.
  16. 대상체의 심부전으로 인한 입원 위험성을 예측하기 위한,
    (a) BMP10-유형 펩티드 및/또는
    (b) BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제
    의 시험관 내 용도.
  17. 심방 세동을 평가하기 위한 또는 심부전을 진단하기 위한,
    i) BMP10-유형 펩티드 및, 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드, ESM-1 (엔도칸), Ang2 및 FABP3 (지방산 결합 단백질 3) 로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이오마커, 및/또는
    ii) BMP10-유형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 및, 선택적으로 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제, ESM-1 에 특이적으로 결합하는 작용제, Ang2 에 특이적으로 결합하는 작용제 및 FABP3 에 특이적으로 결합하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 작용제
    의 시험관 내 용도.
  18. 제 16 항 또는 제 17 항에 있어서, 작용제가 항체 또는 이의 항원-결합 단편인 시험관 내 용도.
  19. 제 19 항에 있어서, 항체가 단일클론 항체인 시험관 내 용도.
KR1020217007363A 2018-08-17 2019-08-16 심방 세동의 평가에서의 순환 bmp10 (골형성 단백질 10) KR20210044257A (ko)

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