CN104083443B - 复方妥布霉素滴眼液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复方妥布霉素滴眼液，其中包括妥布霉素、牛磺酸和秦皮提取物作为活性成分，对于抗菌和治疗眼部炎症疾病具有协同作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方妥布霉素滴眼液，其中包括妥布霉素、牛磺酸和秦皮提取物作为活性成分。
背景技术
妥布霉素是一种氨基糖苷类药，经主动转运通过细菌细胞膜，与细菌核糖体30S亚单位的特殊受体蛋白结合，干扰信息核糖核酸与30S亚单位间起始复合物的形成，抑制蛋白合成；使DNA发生错读，导致无功能蛋白质的合成；使多聚核糖体分裂而失去合成蛋白的功能。临床用于敏感细菌所致的外眼及附属器的局部感染。它与其他氨基糖苷类抗生素相比，抗菌谱更广，疗效更高，毒性反应小。革兰阳性菌中的金黄色葡萄球菌、链球菌等及革兰阴性菌中的某些沙雷杆菌和志贺菌等均对妥布霉素敏感。临床用于治疗结膜炎、角膜炎、泪囊炎、眼睑炎、睑板腺炎等。
秦皮是一种中药材。ZL01126388.1公开了一种秦皮滴眼液，其中主要成分为秦皮和冰片，该药物对结膜炎有效率达88.57％。该专利在此全文引入作为说明书的一部分。秦皮具有祛风清热，解毒明目之功效。经研究证实，秦皮煎剂对金黄色葡萄球菌有抑制作用。
氨基乙磺酸(即牛磺酸)首先从牛的胆汁中发现，是一种游离氨基酸，但不是蛋白质的组成成分，自1977年被认为是猫的必需营养素，亦是婴儿营养所必需。实验发现缺乏牛磺酸时，则导致猫视网膜变性，视觉功能减退；猴视网膜超微结构有退行性变化。眼科临床主要用做抑制眼过敏时炎症反应、维持晶体的透明状态、与光损伤有关的视网膜疾病的治疗和防止或延缓白内障的形成。
现有技术中，尚未公开过妥布霉素、牛磺酸和秦皮组合用作滴眼液的报道。
发明概述
本发明申请人意外地发现将妥布霉素、牛磺酸和ZL01126388.1公开的秦皮滴眼液以特定比例组合作为滴眼液使用，对于抗菌和治疗眼部炎症疾病具有协同作用。
本发明提供了一种滴眼液，其中包含妥布霉素。
本发明提供了一种滴眼液，其中包含妥布霉素、牛磺酸和秦皮提取物。
本发明提供了一种滴眼液，其中包含妥布霉素、牛磺酸和秦皮提取物，三者的重量比例为1:0.5:5.5。
除非特别指明，本发明所述剂量单位均为重量。
本发明经实验证实，只有特定比例的妥布霉素和秦皮提取物的组合物才具有协同抗菌和治疗眼部炎症疾病的作用。活性成分不同或者活性成分相同但用量不同均会降低治疗效果。
具体实施方式
实施例1
滴眼液处方：
妥布霉素4g
秦皮提取物22g
牛磺酸2g
氯化钠3g
注射用水加至1000ml。
制备方法：
(1)秦皮提取物的制备：陈皮除杂质、洗净，粉碎至20目，筛成秦皮粗粉。秦皮粗粉中加入其重量10倍的90％浓度的乙醇，常温常压回流提取三次，每次一小时，合并三次回流液，200目滤网过滤。滤液减压浓缩至生药量与浓缩液重量之比为0.8:1，浓缩液冷至室温后通过大孔树脂1300型柱，药液经大孔树脂吸附完毕用水冲洗至流出液无色为止，继续用浓度为50％的乙醇洗脱到流出液在339nm波长处检测紫外吸收，并且与浓度1％三氯化铁水溶液无墨绿色沉淀反应为止。收集浓度为50％的乙醇洗脱液，洗脱液先减压回收到无乙醇为止，再浓缩至生药量与浓缩液重量之比为0.8:1，所得浓缩液再次通过大孔树脂1300型柱，操作同上。再收集浓度为50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，继续浓缩至比重为1.15-1.20，浓缩液冻干成粉末，得秦皮提取物药粉，药粉经紫外分光光度法检测，总香豆素含量约55％。
(2)将处方量的步骤(1)得到的秦皮提取物药粉加入3/4注射用水中，搅拌溶解。
(3)将妥布霉素、牛磺酸和氯化钠加入步骤(2)得到的溶液中，补齐注射用水量。
(4)使用硫酸或氢氧化钠调节pH值为6.5-6.8。
(5)采用0.20μm膜过滤除菌，得到滴眼液。
(6)测定滴眼液pH值、渗透压、含量，检查合格后灌装于滴眼液瓶中。
抗菌效果试验
1.体外实验
以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、白色念珠菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌为试验菌，采用浊度法，考察抑菌剂的抑菌效果。
菌悬液的制备：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌分别在无菌条件下接种至10ml营养肉汤培养基中，35℃，培养24h。菌悬液用无菌生理盐水稀释，使菌液浓度达106cfu/ml。白色念珠菌在无菌条件下接种至10ml改良马丁液体培养基中，25℃，培养48h。菌悬液用无菌生理盐水稀释，使菌液浓度达106cfu/ml。
供试液的配制：分别称取对羟基苯甲酸酯0.2g和称(量)取对羟基苯甲酸酯0.2g、苯乙醇5ml，溶于100ml营养肉汤培养基中，供大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌测试用。分别称取对羟基苯甲酸酯0.2g和称(量)取对羟基苯甲酸酯0.2g、苯乙醇5ml，溶于100ml改良马丁液体培养基中，供白色念珠菌试用。取10ml供试液至试管中，高压灭菌。每个测试菌设8管供试液，并设一组对照管。无菌条件下，每支试管添加菌悬液0.2ml。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌35℃，培养24h，白色念珠菌25℃，培养48h。观察试管中溶液是否澄清。
供试液组别：表1
说明：对比实施例1-3仅含有妥布霉素、秦皮提取物和牛磺酸其中一种单一组分，对比实施例4-6含有两种组分，对比实施例7-8含有妥布霉素、秦皮提取物和牛磺酸三种组分但用量有所变化。
按照《中国药典2010年版二部》附录规定的抑菌剂效力检查法指导原则，对本发明供试液进行抑菌效力验证试验。
实验结果如下：
表2实施例1抑菌效力试验菌数下降lg值
表3对比实施例1抑菌效力试验菌数下降lg值
表4对比实施例2抑菌效力试验菌数下降lg值
表5对比实施例3抑菌效力试验菌数下降lg值
表6对比实施例4抑菌效力试验菌数下降lg值
表7对比实施例5抑菌效力试验菌数下降lg值
表8实施例6抑菌效力试验菌数下降lg值
表9对比实施例7抑菌效力试验菌数下降lg值
表10实施例8抑菌效力试验菌数下降lg值
从表2-表9的数据可知，本发明实施例1包含妥布霉素、秦皮提取物和牛磺酸的滴眼液抑菌效果最强，相对于单一组分、两种组分的组合以及不同用量的三种组分的组合(对比实施例1-8)均明显具有协同抑菌效果。
2.体内试验
将接种于普通琼脂培养基平板上的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和血琼脂培养板的化脓性链球菌用接种环刮下，生理盐水分别配成2×1012CFU/L(光电比浊仪测定浓度)。按方法(肖毅，李晨，梅其炳，张峰，陈水英，马吉献.家兔眼损伤型细菌性角膜炎动物模型的建立.陕西医学杂志，2003；32(2):187-188)用角膜环钻致家兔角膜损伤(双眼)，家兔每眼感染细菌0.1mL，2d用无菌盐水棉签取眼睛分泌物，放入4mL无菌生理盐水瓶中，用琼脂平板培养法对其液体做细菌培养。同时进行炎症评分，0级:眼明亮无分泌物；0.5级:无分泌物覆盖，眼稍有红肿；1级:分泌物覆盖小于6mm；2级:分泌物覆盖充满6mm；3级:分泌物覆盖大于6mm。根据评分标准随机分组。治疗组(感染细菌+本发明滴眼液)，未治疗对照组(感染细菌+滴生理盐水)，各组6只家兔。正常对照组(不造模、不感染细菌、滴生理盐水)2只。治疗组滴本发明滴眼液0.8mL/d(双眼)，未治疗对照组和正常对照组滴生理盐水0.8mL/d(双眼)，每眼0.1mL，4次/d，连续点药7d。每隔24h双眼进行一次评分，连续观察7d，评分结果作统计学t检验处理。并于给药前1d，给药后1，3，5，7d用无菌盐水棉签取眼分泌物作细菌培养，判断阴阳性结果。d8处死家兔，取角膜放入40g/L甲醛中固定作病理切片，HE染色检查。
四种菌感染兔眼24h后出现炎性症状，轻者结膜红肿眼充血。重者全身状态欠佳伴结膜红肿充血，角膜水肿增厚，大量分泌物呈黄白色，将上下眼睑粘住，双眼紧闭。绿脓杆菌感染的兔眼分泌物微显黄绿色。化脓性链球菌感染炎症反应较重，持续7d以上。评分标准在1.5～3级。细菌培养结果:给药前角膜分泌物4种细菌培养均为阳性，本发明实施例1滴眼液治疗5d的角膜分泌物细菌培养转阴率大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均为100％，化脓性链球菌96％。家兔眼评分结果，与未治疗对照组比较，本发明实施例1滴眼液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌感染组给药后4，5d都有明显差异(P<0.01，表11)。病理切片，本发明实施例1滴眼液治疗前3种菌感染的角膜各层结构基本完整，伤口表面被复层鳞状上皮覆盖，伤口处有纤维组织增生，伤口斑痕性愈合，未见炎细胞浸润；化脓性链球菌治疗组部分片子可见角膜水肿，伤口未愈合并有少量炎细胞浸润；未治疗对照组感染4种菌后兔眼均显示角膜水肿，血管扩张充血，伤口未愈合并有溃疡，有大量炎细胞浸润及坏死组织。正常对照组角膜完好无损。
表11给药5d后对四种细菌感染家兔眼疗效比较(评分值x±s,n＝12)
由表11数据可知，本发明实施例1包含妥布霉素、秦皮提取物和牛磺酸的滴眼液治疗细菌感染的眼部炎症效果最强，相对于单一组分、两种组分的组合以及不同用量的三种组分的组合(对比实施例1-8)均明显具有协同治疗效果。
Claims (1)
1.一种抗菌滴眼液，其中活性成分由妥布霉素、牛磺酸和秦皮提取物组成，三者的重量比例为1:0.5:5.5，其中秦皮提取物的制备方法为：秦皮除杂质、洗净，粉碎至20目，筛成秦皮粗粉；秦皮粗粉中加入其重量10倍的90％浓度的乙醇，常温常压回流提取三次，每次一小时，合并三次回流液，200目滤网过滤；滤液减压浓缩至生药量与浓缩液重量之比为0.8:1，浓缩液冷至室温后通过大孔树脂1300型柱，药液经大孔树脂吸附完毕用水冲洗至流出液无色为止，继续用浓度为50％的乙醇洗脱到流出液在339nm波长处检测紫外吸收，并且与浓度1％三氯化铁水溶液无墨绿色沉淀反应为止；收集浓度为50％的乙醇洗脱液，洗脱液先减压回收到无乙醇为止，再浓缩至生药量与浓缩液重量之比为0.8:1，所得浓缩液再次通过大孔树脂1300型柱，操作同上；再收集浓度为50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，继续浓缩至比重为1.15-1.20，浓缩液冻干成粉末，得秦皮提取物药粉，药粉经紫外分光光度法检测，总香豆素含量55％。
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