CN104082141B

CN104082141B - 一种盐肤木优良株系高效快繁的方法

Info

Publication number: CN104082141B
Application number: CN201410306866.5A
Authority: CN
Inventors: 吴丽芳; 侯金艳; 沈羊城; 刘文博; 杨鸣雷; 吴影; 毛颖基; 赵薇微; 李明浩
Original assignee: Hefei Institutes of Physical Science of CAS
Current assignee: Hefei Institutes of Physical Science of CAS
Priority date: 2014-06-30
Filing date: 2014-06-30
Publication date: 2016-10-26
Anticipated expiration: 2034-06-30
Also published as: CN104082141A

Abstract

本发明公开了一种盐肤木优良株系高效快繁的方法，步骤包括：取野外多年生优良盐肤木地表根进行压根繁殖，经25‑40d培养长出完整植株；取完整植株的幼苗的叶片，经表面消毒后，切取叶脉接种于诱导培养基上，经28‑35d光照培养后叶脉两端长出不定芽丛；再将不定芽丛接种在丛生芽增殖和伸长培养基上进行芽的扩繁和伸长；待芽长至2‑3cm，转入生根培养基进行生根，获得健壮的盐肤木试管苗。本发明的优点在于，通过压根繁殖健壮幼苗，克服了野外材料直接取材作为外植体所带来的污染和褐化严重问题，便于实现再生、获得组培苗。

Description

一种盐肤木优良株系高效快繁的方法

技术领域

本发明涉及一种高效快繁的方法，尤其是盐肤木优良株系高效快繁的方法。

背景技术

盐肤木为漆树科盐肤木属落叶小乔木，适应性强，分布广，其种子含有大量的不饱和脂肪酸，油脂具有较高的食用价值，也是生物能源原料油脂的潜力树种，可供榨油、观赏和做工业染料的原料等。盐肤木具有较高的药用价值，寄生在其叶片上的蚜虫虫瘿所形成的五倍子是重要的中药材和工业原料，是我国重要林特产品。随着盐肤木相关产品需求量的不断增大，培育高产优质的盐肤木品种及建立一种对现有的盐肤木优良品种进行高效快速繁殖的方法具有重要意义。

盐肤木常用的育苗方式有播种育苗和插根育苗，但育苗过程繁琐，费时费力，且育苗时间易受季节限制。同时对于优良株系的繁殖而言，以种子育苗的方式由于种子杂合性高，实生苗后代变异大，往往不能保持优良株系的特性；而插根繁殖需要大量的根，取材受限，因而这种繁殖方法无法规模化。随着组织培养技术的发展，研究人员尝试以野外盐肤木优良株系的不同组织为外植体，利用组织培养技术，对优良株系进行快繁，但由于野外直接取材的组织中含有较高的次生代谢物，致使组培过程中褐化和污染现象严重，导致再生困难。因此，针对上述问题，急需开发一种盐肤木高效快繁的方法，以满足盐肤木优良株系的快速繁殖和品种改良的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种盐肤木优良株系高效快繁的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的。

一种盐肤木优良株系高效快繁的方法，步骤包括：

取野外多年生优良盐肤木地表根进行压根繁殖，经25-40d培养长出完整植株；

取完整植株的幼苗的叶片，经表面消毒后，切取叶脉接种于诱导培养基上，经28-35d光照培养后叶脉两端长出不定芽丛；

再将不定芽丛接种在丛生芽增殖和伸长培养基上进行芽的扩繁和伸长；

待芽长至2-3cm，转入生根培养基进行生根，获得健壮的盐肤木试管苗。

进一步地，上述取完整植株的幼苗的叶片为压根繁殖25-40d获得的未木质化的小苗的叶片。

进一步地，上述表面消毒为：叶片经流水冲洗10min后，用75％酒精消毒25-30s,之后用0.1％的HgCl2消毒55-80s,最后用无菌水冲洗3-5遍，消毒期间不停摇动。

进一步地，上述切取叶脉为切取(0.3-0.5)×(0.2-0.5)cm²大小带叶脉的叶片切块。

进一步地，上述丛生芽诱导培养基包括MS、0.5～4.0mg/L TDZ、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂。

进一步地，上述丛生芽增殖和伸长培养基包括：MS、0.2～0.5mg/LTDZ、0.01～0.3mg/L IBA或NAA、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂。

进一步地，上述生根培养基包括：1/2MS、0.2～2.0mg/L NAA或IBA、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂。

进一步地，获得的盐肤木试管苗的茎段接种于丛生芽诱导培养基中，进行丛生芽的诱导、增殖和伸长。

进一步地，上述丛生芽诱导培养基包括：MS、0.25～3.5mg/L TDZ、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂。

本发明的有益效果：

1)通过压根繁殖健壮幼苗，克服了野外材料直接取材作为外植体所带来的污染和褐化严重问题，便于实现再生、获得组培苗；2)通过本发明的方法可以以少量的优良株系的根作为出发材料，实现批量和规模化优良株系的繁殖；3)本发明克服了传统种子育苗所存在的发芽率低、后代变异率大、难以保持亲本优良性状等问题；4)本发明解决了插根繁殖所存在的费时费力，繁殖时间受限和繁殖系数低等问题。5)本发明所需出发实验材料少，适合优良单株的繁殖，繁殖系数高，可以保持原种的优良性状，有利于盐肤木优良株系快繁的大规模应用，同时也为后期的通过基因工程技术进行品种改良研究奠定了基础。

附图说明

图1为盐肤木地表根(a)及根埋获得的幼苗(b)的示意图；

图2为盐肤木优良株系根埋获得的幼苗叶片再生过程示意图；

(a)消毒后接种于丛生芽诱导培养基上的叶脉

(b)叶脉诱导的丛生芽

(c)丛生芽的增殖与伸长

(d)盐肤木芽生根

图3为盐肤木无菌苗茎段丛生芽茎段再生过程示意图。

(a)诱导前茎段

(b)茎段诱导丛生芽

图4为盐肤木试管苗驯化示意图。

具体实施方式

下面根据实施例对本发明作进一步详细说明。

一种盐肤木野外优良株系高效快繁的方法，具体如下：

1)取2-5cm长的待繁育盐肤木植株的根，埋入2-5cm厚的土中进行育苗。

2)取经过压根繁殖25-40d获得的未木质化小苗的叶片，进行表面消毒(图1)；

3)将叶片切成0.5×0.5cm²大小带叶脉的切块接种于丛生芽诱导培养基(MS+0.5～4.0mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂)，3～4周后获得翠绿色不定芽丛；后将丛生芽转接于丛生芽增殖和伸长培养基(MS+0.2～0.5mg/L TDZ+0.01～0.3mg/L IBA或NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂)；待芽伸长至2.0～3.0cm时转接到生根培养基91/2MS+0.2～2.0mg/L NAA或IBA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂)中进行生根培养(图2)。

4)切取健壮的组培苗茎段转接于茎段丛生芽诱导培养基(MS+0.25～3.5mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂)中进行丛生芽诱导、增殖和伸长(图3)；

5)组培苗按上述方法生根后进行炼苗驯化，获得完整的再生植株(图4)。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种盐肤木优良株系高效快繁的方法，其特征在于，步骤包括：

取完整植株的幼苗的叶片，经表面消毒后，切取带叶脉的叶片接种于丛生芽诱导培养基上，经28-35d光照培养后叶脉两端长出不定芽丛；

待芽长至2-3cm，转入生根培养基进行生根，获得健壮的盐肤木试管苗；

所述丛生芽增殖和伸长培养基由以下组分组成：MS、0.2～0.5mg/L TDZ、0.01～0.3mg/L IBA或NAA、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂；

所述生根培养基由以下组分组成：1/2MS、0.2～2.0mg/L NAA或IBA、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂；

所述丛生芽诱导培养基由以下组分组成MS、0.5～4.0mg/LTDZ、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂。

2.根据权利要求1所述的盐肤木优良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述完整植株的幼苗的叶片为压根繁殖25-40d获得的未木质化的小苗的叶片。

3.根据权利要求1所述的盐肤木优良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述表面消毒为：叶片经流水冲洗10min后，用75％酒精消毒25-30s,之后用0.1％的HgCl2消毒55-80s,最后用无菌水冲洗3-5遍，消毒期间不停摇动。

4.根据权利要求1所述的盐肤木优良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述切取的带叶脉的叶片为(0.3-0.5)×(0.2-0.5)cm²大小带叶脉的叶片切块。

5.根据权利要求1所述的盐肤木优良株系高效快繁的方法，其特征在于，获得的盐肤木试管苗的茎段接种于茎段丛生芽诱导培养基中，进行丛生芽的诱导、增殖和伸长，所述茎段丛生芽诱导培养基由以下组分组成：MS、0.25～3.5mg/L TDZ、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂。