CN104045594B - 一类1,3-二氢-1-氧-2h-异吲哚类化合物及其用途 - Google Patents

一类1,3-二氢-1-氧-2h-异吲哚类化合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一类1,3‑二氢‑1‑氧‑2H‑异吲哚类化合物（I）及其药学上可接受的盐，还公开了该类化合物在制备预防或/和治疗各种因整合素αvβ3介导所引起的肿瘤转移、肿瘤生长、实体瘤生长、血管新生、视网膜病变、黄斑变性、骨质疏松、关节炎、平滑肌细胞移行、和动脉粥样硬化症状或疾病药物中的用途，

Description

一类 1,3- 二氢 -1- 氧 -2H- 异吲哚类化合物及其用途
相关申请
本申请是一件分案申请，原申请的申请号为201210038183.7，申请日为2012年2月21日，发明创造名称为“1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物、其制备方法和用途”。
技术领域
本发明属药物化学领域，涉及一类1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）及其药学上可接受的盐、其制备方法、药物组合物和在制备预防或/和治疗各种因整合素αvβ3介导所引起的症状或疾病药物中的用途，包括但不限于肿瘤转移、肿瘤生长、实体瘤生长、血管新生、视网膜病变、黄斑变性、骨质疏松、关节炎、平滑肌细胞移行、和动脉粥样硬化等。
背景技术
血管新生（angiogenesis）是指从已存在的血管床中产生新生血管系统的过程，在正常生理情况下，血管生成被严格控制于某些短暂的、特定的生理过程，如生殖、发育过程和伤口愈合过程等，而存续的血管生成是某些病变，如：肿瘤组织的恶性生长、视网膜病变、黄斑变性、关节炎、骨质疏松等的特性。研究表明，肿瘤诱导的血管新生与肿瘤细胞的增殖、侵润和转移密切相关，新生血管不仅为肿瘤细胞的恶性生长提供充足的营养物质，而且还为肿瘤细胞的远位转移提供了通路，因此，抑制肿瘤诱导的血管新生，减少或阻断肿瘤组织的血液供应而将肿瘤细胞“饿死”，是防治肿瘤转移的有效途径。该饥饿疗法与传统的细胞毒类抗肿瘤药物相比，由于抗血管新生药物是通过减少或阻断肿瘤组织的血液供应而使肿瘤细胞增殖周期延长，促进肿瘤细胞坏死而起作用，而不是直接杀死肿瘤细胞，因此，这类药物对正常细胞无明显毒副作用，表现出较好的肿瘤靶向性；并且该疗法可克服传统化疗药物治疗过程中的抗药性问题，而抗药性是目前化疗治疗手段失败的重要原因之一。
最近研究表明，肿瘤诱导的血管新生和肿瘤的转移与整合素（Integrins）的作用密切相关。整合素属细胞表面粘附分子家族，由α和β两个亚基通过非共价键连接而成的异源二聚体跨膜糖蛋白。迄今为止共发现了20多种整合素亚型，不同的亚型具有不同的细胞特性与粘附特性，它们通过介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的粘附以及参与细胞的信号转导，而对细胞的粘附、增殖、转移、凋亡等起重要调控作用，其中整合素αvβ3在肿瘤生长、局部浸润、转移，特别是肿瘤诱导的血管生成等过程中起重要作用。
整合素αvβ3是由αv和β3两个亚基组成，分为胞外区、跨膜区和胞内区三部分，其中αv亚基有1018个氨基酸残基，分子量125kD，β3亚基有762个氨基酸残基，分子量105kD；对整合素αvβ3胞外区及其与配体复合物的晶体结构研究表明，其胞外区由12个结构域组成，其中α与β亚基的N末端部分组装成一个卵形的“头”，从“头”延伸出两条几乎平行的“尾巴”；配体的结合发生在α和β亚基的接触区，配体结合区主要包括α亚基的β-propeller结构域和β亚基的βA结构域，并且需二价阳离子的参与，阳离子在配体结合中不仅与配体的酸性基团作用介导配体与αvβ3的结合，还能稳定αvβ3的配体结合表面。整合素αvβ3的内源性配基为细胞外基质成分（如：纤连蛋白（fibronectin）、层连蛋白（laminin）、透明质粘连蛋白（vitronectin）和血小板反应素（thromobospondin）等）中含精氨酰-甘氨酰-天冬氨酰（Arg-Gly-Asp, RGD,1）三肽的序列，并对细胞外基质成分的识别具有选择性，当αvβ3与基质成分中的RGD结合后，通过丝裂原激活的蛋白激酶途径使血管内皮细胞增殖、分化和迁移，促进管腔形成而成为新生血管。实验证明，使用外源性含RGD的序列肽或类似物，可抑制肿瘤细胞的粘附与迁移、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管新生，最终导致肿瘤生长受到抑制，甚至肿瘤消退。由于整合素αvβ3在正常的血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统上很少表达，只是在受到血管生长因子（angiogenic growth factors）刺激下激活的血管内皮细胞、激活的破骨细胞和侵袭性的肿瘤细胞上高表达；并且新生血管内皮细胞属于遗传稳定的非恶性细胞，其表面的αvβ3受体没发生突变，在与抑制剂作用过程中不会产生耐药性问题；另外，αvβ3受体位于细胞表面，直接与血液接触，药物易于到达靶点；因此，整合素αvβ3是设计高效、高选择性的抗血管新生和抗肿瘤转移药物较理想的靶标。
寻找整合素αvβ3抑制剂，对于发现抗血管新生和抗肿瘤转移药物具有重要意义，还能用于治疗因新生血管过度增生所导致的肿瘤生长、实体瘤生长、视网膜病变、黄斑变性、骨质疏松、关节炎、平滑肌细胞移行、和动脉粥样硬化等常见病症。
。
目前，以整合素αvβ3为作用靶点的抗血管新生和抗肿瘤转移药物尚处于临床或临床前试验阶段，这些抑制剂可分为三类，即：单克隆抗体、多肽和环肽及其模拟物、非肽类小分子。Vitaxin和Vitaxin II为Eli Lilly公司开发的αvβ3的单克隆抗体，能够与整合素αvβ3特异性结合，抑制肿瘤生长和血管新生，目前正进行II期临床试验，用来治疗前列腺癌、转移的黑色素瘤、晚期结肠癌以及风湿性关节炎。研究发现，使用外源性含RGD序列的线性肽或聚合肽，如：RGDS、GRGDS、poly-RGDS等可阻止bFGF、TNF-α和人各种肿瘤片段诱导的血管新生，而对已存在的血管无影响。但这些肽类分子柔性强，导致对整合素αvβ3受体的选择性及亲和力都较差。环肽由于其构象被束缚在一定范围内，因此对不同的整合素具有较好的选择性。环肽cyclo(RGDfV)（Cyclo(-Arg-Gly-Asp- D-Phe-Val-),2）是一种高活性和高选择性的整合素αvβ3抑制剂，其体外抑制αvβ3与其配体蛋白结合的IC50为2.5 nmol/L；在此基础上Merck公司研究人员将cyclo(RGDfV)肽链骨架甲基化，得到更高活性的多肽模拟物cyclo(RGDf-N(Me)V)（3，通用名Cilengitide），其IC50为0.58 nmol/L，能够拮抗整合素αvβ3介导的血管内皮细胞与细胞外基质的相互作用，抑制黑色素瘤的生长和血管新生，并能够诱导在vitronectin上生长的脑肿瘤细胞的凋亡，目前Cliengitide正在进行II/III期临床试验，用于治疗肺癌、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肾脏肿瘤以及结肠癌。由于抗体和肽类药物存在体内降解、半衰期短、生物利用度低需静脉给药、大量制备困难等不足，因此，寻找和发现高效、高选择性可口服给药的非肽类整合素αvβ3抑制剂是目前国内外抗血管新生和抗肿瘤转移药物研究的重要领域之一。
发明内容
本发明的目的在于公开一类具有1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化学结构（I）的整合素αvβ3抑制剂或其药学上可接受的盐。
本发明的另一目的在于公开该1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）的制备方法。
本发明的又一目的在于公开包含1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐的药物组合物。
本发明的再一目的在于公开1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐在制备预防或/和治疗各种因整合素αvβ3介导所引起的症状或疾病药物中的用途，包括但不限于肿瘤转移、肿瘤生长、实体瘤生长、血管新生、视网膜病变、黄斑变性、骨质疏松、关节炎、平滑肌细胞移行、和动脉粥样硬化等。
本发明提供的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）的化学结构通式为：
式中：R1表示H、苯基、2-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、3-吡啶基、4-吡啶基、3,4-亚甲基二氧基苯基、2,3-亚甲基二氧基苯基、、、、或；R3、R4、R5各自独立地表示H、C1~C6烷基、C1~C6烷氧基、羟基、卤素、氨基、硝基、氰基、羧基、CF3、NR7R8，R6表示H、C1~C6烷基、C1~C6烷氧基、卤素、硝基、氰基或CF3，R7、R8各自独立地表示C1~C6烷基，R3、R4、R5、R6可在苯环的任意可能位置，R3、R4、R5可以相同，也可以不同；R2表示、、、，n表示1-3、m表示0-2，R9表示C1~C6烷基、卤素、羟基或CF3。
对于本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）分子中存在手性碳时，化合物（I）为消旋体或光学活性体。
本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）可通过以下方法制备得到：
式中：R1和R2的定义与化学结构通式（I）相同；
以2-甲酰基-5-硝基苯甲酸（4）和β-丙氨酸甲酯类衍生物（5）为起始原料，在合适溶剂中经还原、环合得3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯（6），所得中间体（6）用还原剂将硝基还原为氨基，得3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯（7），然后与含胍基的羧酸类化合物（8）在缩合剂存在条件下缩合，得1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚甲酯类化合物（9），再经碱水解、酸中和，即得1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）。
上述方法各反应步骤具体描述如下：
A) 以2-甲酰基-5-硝基苯甲酸（4）和β-丙氨酸甲酯类衍生物（5）为起始原料，在合适溶剂中经还原、环合得3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯（6）；其中，反应所用溶剂为：C1-8脂肪醇、N,N-二甲基甲酰胺、醚类（如：乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙二醇二甲醚等）、C1-6脂肪酸、C1-6脂肪酸与C1-6脂肪醇所形成酯、卤代烃（如：二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等）、芳香烃或取代芳香烃（如：苯、甲苯、二甲苯、氯苯、邻二氯苯等）、或乙腈，优选为甲醇、乙醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷或四氢呋喃；所用还原剂为：KBH4、NaBH4、LiBH4、NaBH3CN，优选还原剂为NaBH4、KBH4；2-甲酰基-5-硝基苯甲酸（4）、β-丙氨酸甲酯类衍生物（5）和还原剂的摩尔投料比为1.0：1.0~5.0：0.5~5.0，优选摩尔投料比为1.0：1.1~3.0：1.0~3.0；反应温度为-20℃~120℃，优选为0℃~100℃；反应时间为30分钟~72小时，优选为1~15小时。
由步骤A) 得到的3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯（6）在合适溶剂中，经化学还原或催化氢化还原，将硝基还原为氨基，得3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯（7）；
其中，用化学还原法时，反应所用溶剂为：C1~C6脂肪醇、四氢呋喃、乙醚、C1-6脂肪酸、C1-6脂肪酸与C1-6脂肪醇所形成酯、苯、甲苯、1,4-二氧六环、乙二醇二甲醚、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、浓度为1%-36%的盐酸水溶液、浓度为1%-30%的氯化铵水溶液、或上述溶剂的混合物，优选为甲醇、乙醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷或四氢呋喃；所用还原剂为：锌粉、铁粉或二氯化锡；化合物（6）与还原剂的摩尔投料比为1.0：1.0~10.0，优选摩尔投料比为1.0：1.5~5.0；反应温度为0℃~150℃，优选反应温度为室温~溶剂回流温度；还原反应时间为0.5~72小时，优选反应时间为1~12小时；
采用催化氢化还原时，反应所用溶剂为：C1-8脂肪醇、乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、C1-6脂肪酸、C1-6脂肪酸与C1-6脂肪醇所形成酯、苯、甲苯、二甲苯或乙腈，优选为甲醇、乙醇、乙酸或乙酸乙酯；所用催化剂为：1%~30%Pd-C、1%~30% Pd(OH)2-C、Raney-Ni，优选催化剂为：Raney-Ni、5%~20%Pd-C、5%~20% Pd(OH)2-C；化合物（6）与催化剂的质量比为1.0：0.01~1.0；反应压力为常压~10.0 MPa，优选为常压~2.0 MPa；反应温度为室温~150℃，优选为室温~80℃；反应时间为1~48小时，优选为1~24小时。
由步骤B) 得到的3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯（7）在合适溶剂中与含胍基的羧酸类化合物（8）在缩合剂存在条件下缩合，得1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚甲酯类化合物（9）；其中，反应所用溶剂为：吡啶、N,N-二甲基甲酰胺、C3-8脂肪酮、醚类（如：乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙二醇二甲醚等）、C1-6脂肪酸与C1-6脂肪醇所形成酯、卤代烃（如：二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等）、芳香烃或取代芳香烃（如：苯、甲苯、二甲苯、氯苯、邻二氯苯等）或乙腈，反应可在上述单一溶剂中进行，也可在上述混合溶剂中进行，混合溶剂体积比为1：0.1~10，优选溶剂为吡啶、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、氯苯或乙腈；所用缩合剂为：氯甲酸C1-8脂肪醇酯类化合物（如：氯甲酸乙酯、氯甲酸叔丁酯、氯甲酸苄酯等）、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉（EEDQ）、碳二亚胺类化合物（如：二环己基碳二亚胺（简称为DCC）、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐（简称为EDCI））、氰基磷酸二乙酯（DEPC）、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪（简称为CDMT）、氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐（简称为DMTMM），其中，DMTMM中的阴离子为氯、溴、高氯酸根、氟硼酸根、甲烷磺酸基、苯磺酸基、对甲苯磺酸基、樟脑磺酸基、氨基磺酸基，优选缩合剂为：氯甲酸乙酯、二环己基碳二亚胺（DCC）、EDCI、DMTMM；化合物（7）：化合物（8）：缩合剂的摩尔投料比为1.0：1.0~4.5：1.0~4.5，优选摩尔投料比为1.0：1.0~2.0：1.0~2.0；缩合反应温度为0~130℃，优选反应温度为0~50℃；缩合反应时间为30分钟~72小时，优选反应时间为2~48小时。
由步骤C) 得到的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚甲酯类化合物（9）经碱水解、酸中和，得1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I），所得（I）再按照常规方法与相应的酸成盐，即得化合物（I）的盐；其中，水解所用碱为碱金属或碱土金属氢氧化物、碱金属或碱土金属碳酸盐、碱金属或碱土金属碳酸氢盐，优选碱为：氢氧化锂、碳酸钠；碱与化合物（9）的摩尔投料比为1.0~5.0:1.0，优选摩尔投料比为1.1~2.5:1.0；水解反应温度为室温~150℃，优选反应温度为室温反应；水解时间为0.5~24小时，优选反应时间为1~7小时。
本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）可与任何合适的酸通过药学上常规的成盐方法得到其药物学上可接受的盐，所述的酸为盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、三氟乙酸、乙酸、丙酸、草酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、扁桃酸、柠檬酸、甲基磺酸、乙基磺酸、樟脑磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。
本发明的起始原料——2-甲酰基-5-硝基苯甲酸（4）和β-丙氨酸甲酯类衍生物（5）可用本领域常见的技术制得，包括但不局限于以下文献中所公开的方法：1. R.L. Shriner, F.J. Wolf.Org. Syn. Coll. Vol. 3 (1955) 737; 2. V.T. Abaev, A.S. Dmitriev, A. V. GutnovJ. Heterocyclic Chem., 43 (2006) 1195; 3. C.Y.K. Tana, D.F. Weaver.Tetrahedron 58 (2002) 7449。
本发明所公开的药物组合物包括治疗有效量的一种或多种1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐，该药物组合物可进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。所述“治疗有效量”是指引起研究者或医生所针对的组织、系统或动物的生物或医药反应的药物或药剂的量；所述“组合物”是指通过将一种以上物质或组份混和而成的产品；所述“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的物质、组合物或载体，如：液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊物质，它们携带或转运某种化学物质。
本发明所提出的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐进行了如下的生物活性筛选：
（ 1 ）固相受体筛选
筛选在96孔培养板中进行。整合素αvβ3蛋白用Coating Buffer溶液（Tris-HCl 20mM、NaCl 150mM、CaCl2 1mM和NaN3 0.02%）配成浓度为4µg/mL，加入96孔板中，每孔100µL，4℃包被过夜，阴性对照用2%BSA同法包被，弃去上清液，每孔加入100µL的2% BSA，37℃封闭1小时后用Binding Buffer溶液（Tris-HCl 50mM、CaCl2 2mM、NaN3 0.02%和BSA 1mg/mL(0.1%)）清洗。将待筛选化合物用Binding Buffer溶液稀释成不同浓度，取用生物素标记的Bio-Fibronectin溶液（8µg/mL）与不同浓度的待筛选化合物混匀，加入96孔板中，每孔100µL，阴性对照组和模型组加入等量Binding Buffer溶液，37℃孵育3小时，用Binding Buffer溶液清洗后，每孔加入100µL的HRP-链霉亲和素（1:500），37℃孵育1小时，用Binding Buffer溶液清洗三遍，每孔加入100µL的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺原液（TMB），室温孵育10分钟，然后加入1.0M硫酸溶液（每孔100µL）终止反应，在酶标仪上测定各孔OD值（波长为450 nm），计算待筛选化合物与整合素αvβ3蛋白的结合抑制率，抑制率(%)=[1-(受试品OD值-阴性组OD)/(模型组OD-阴性组OD))×100。
利用上述方法，测定了目标物对整合素αvβ3蛋白的亲和力，结果显示本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐与整合素αvβ3蛋白的结合抑制IC50在1.8nM~2000nM，而阳性对照药cyclo(RGDfV)的IC50为10.0nM。
（ 2 ）细胞粘附抑制作用的测定
96孔培养板用2.0µg/mL的Fibronectin包被过夜，对照孔用1% BSA包被，弃去上清液，每孔加入100µL的1% BSA，室温封闭1小时。将待筛选化合物用0.01M的PBS溶液配成不同浓度，加入浓度为5×105/ml的M21细胞悬液中，阳性对照用cyclo(RGDfV)，空白对照用0.01M的PBS溶液代替，37℃孵育30分钟，然后将M21细胞悬液加入上述预先封闭的96孔培养板中，每孔100µL，37℃孵育1小时，轻轻吸出孔中的细胞悬液，用预温的PBS洗3次，除去未粘附的细胞，每孔加入100µL的10%戊二醛固定30分钟，用去离子水洗涤至戊二醛彻底洗净，置37℃烘箱彻底干燥，加入0.1%的结晶紫对细胞进行染色，振摇30分钟，用蒸馏水将多余的结晶紫洗净，置37℃烘箱彻底干燥，加入10%的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取，1小时后在酶标仪上测定OD值（波长为595 nm），计算细胞粘附抑制率，即可得出目标物对整合素αvβ3的抑制活性。利用上述方法，测定了部分目标物对M21细胞的粘附抑制活性，其结果见实施例10。
（ 3 ）目标物细胞毒活性的测定
为了排除目标物对M21细胞的抗细胞粘附活性是由细胞毒因素所造成的，为此，我们测试了目标物对人肝癌细胞HepG2、人肺腺癌细胞A549、小鼠黑色素瘤细胞B16、人黑色素瘤细胞M21及小鼠结肠癌细胞C26的抑制活性。将肿瘤细胞分别消化计数，并接种于96孔板(5000个细胞/孔)，24小时后以pH7.4的PBS液洗涤2遍，加入含不同浓度的药物，培养48小时，洗涤后，用0.4%磺酰罗丹明（SRB）溶液室温下染色15分钟，1%冰醋酸洗3遍，空气中将染色的细胞干燥，以10mM的Tris-HCl溶解，并用Dynatech MR 7000仪测540nm波长的吸光度值，计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。
试验结果表明，本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐对这些肿瘤细胞抑制的IC50均大于80µg/mL，说明此类化合物的细胞毒较小。
本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐具有显著的整合素αvβ3抑制活性，可作为整合素αvβ3抑制剂用于预防或/和治疗各种因新生血管过度增生所引起的症状或疾病药物中的用途，包括但不限于肿瘤转移、肿瘤生长、实体瘤生长、血管新生、视网膜病变、黄斑变性、骨质疏松、关节炎、平滑肌细胞移行和动脉粥样硬化等。
具体实施方式
通过下面的实施例可对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
实施例 1
3-(6-(3- 胍基苯甲酰胺基 )-1- 氧异吲哚 -2- 基 )-3- 苯基丙酸盐酸盐（ I-1 ）和三氟乙酸盐的制备
步骤（a）：在反应瓶中加入2-甲酰基-5-硝基苯甲酸（4）10.0 mmol、β-苯基-β-丙氨酸甲酯12.0 mmol和甲醇80ml，室温搅拌反应2.0h，置冰水浴冷却下缓慢加入NaBH4 10.0 mmol，保温搅拌反应（反应进程用TLC监测），反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物中加入醋酸20ml，80℃保温反应40min，向反应瓶中加入去离子水100ml，过滤析出的固体，滤饼用碳酸钠水溶液洗涤，干燥，即得3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯，收率90.0%，ESI-MS (m/z, +Q): 341.0 [M+H]+；
步骤（b）：在反应瓶中加入3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯10.0 mmol和甲醇200ml，搅拌均匀后，加入10%Pd/C 0.5g，用氢气置换反应瓶中空气后，于常温常压下通氢还原反应12 h（反应进程用TLC监测，石油醚/乙酸乙酯=1: 2 v/v），反应结束后，过滤，滤液减压蒸除溶剂，残余物经重结晶或柱层析纯化，即得3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯，收率99.0%，ESI-MS (m/z, +Q): 311.1 [M+H]+；
步骤（c）：在反应瓶中加入3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯1.0 mmol、间胍基苯甲酸盐酸盐1.2 mmol和吡啶25ml，室温搅拌至固体全溶后，加入1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐1.5 mmol，室温搅拌24～48h（反应进程用TLC监测，氯仿/甲醇=5: 1 v/v），反应结束后，过滤，滤液减压蒸除溶剂，残余物经重结晶或柱层析纯化，即得3-(6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯盐酸盐，收率80.5%，ESI-MS (m/z, +Q): 472.1 [M-Cl]+；
步骤（d）：在反应瓶中加入3-(6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯盐酸盐0.5 mmol、甲醇10ml、四氢呋喃5ml和去离子水5ml，室温搅拌均匀后加入氢氧化锂2.0 mmol、室温搅拌反应1.5h（反应进程用TLC监测，氯仿/甲醇/HOAc=3/1/0.5 v/v），反应结束后，用10%盐酸水溶液调节溶液pH至1-2，减压蒸除溶剂，残余物经重结晶或柱层析纯化，即得3-(6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸盐酸盐，收率65.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.45(brs, 1H, COOH) 10.64(s, 1H, CONH), 10.52(brs, 1H, HCl), 8.21(d, 1H,J=1.6Hz, Ar-H), 7.95(dd, 1H,J 1 =1.6Hz,J 2 =8.4Hz, Ar-H), 7.89(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.86(s, 1H, Ar-H), 7.69(brs, 4H, NH2C(NH)NH), 7.59(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.59(t, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.53(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.43(d, 2H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.41-7.27(m, 5H, Ar-H), 5.76(t, 1H,J=8.0Hz, CH), 4.51(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.14(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.18-3.05(m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 458.10 [M-Cl]+；
在上述步骤（d）中，水解结束后用三氟乙酸调节溶液pH至1-2，减压蒸除溶剂，残余物经重结晶或柱层析纯化，即得3-(6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸三氟乙酸盐，收率60.0%。
实施例 2
3-(6-(4- 胍基苯甲酰胺基 )-1- 氧异吲哚 -2- 基 )-3- 苯基丙酸盐酸盐（ I-2 ）的制备
操作过程同实施例1，只是将步骤（c）中的间胍基苯甲酸盐酸盐用对胍基苯甲酸盐酸盐替代，缩合剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐用DCC替代，得3-(6-(4-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸盐酸盐，收率74.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.42(brs, 1H, COOH), 11.01(brs, 1H, HCl), 10.64(s, 1H, CONH), 8.26(d, 1H,J=1.6Hz, Ar-H), 8.11(d, 2H,J=8.4Hz, Ar-H), 7.98(dd, 1H,J 1 /=1.6Hz,J 2 /=8.0Hz, Ar-H), 7.97(brs, 4H, NH2C(NH)NH), 7.52(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.33(d, 2H,J=8.4Hz, Ar-H), 7.40-7.27(m, 5H, Ar-H), 5.77(t, 1H,J=8.0Hz, CH), 4.52(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.14(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.13-3.02(m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 458.15 [M-Cl]+。
实施例 3
3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ]-3- 苯基丙酸盐酸盐（ I-3 ）的制备
操作过程同实施例1，只是将步骤（c）中的间胍基苯甲酸盐酸盐用3-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酸盐酸盐替代，缩合剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐用DCC替代，得3-[6-[3-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]-3-苯基丙酸盐酸盐，收率85.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.44(brs, 1H, COOH), 10.89(s, 1H, HCl), 10.78(s, 1H, CONH), 8.58(s, 2H, NHCNH), 8.25(d, 1H,J=1.2Hz, Ar-H), 7.95(dd, 1H,J 1 /=1.2Hz,J 2 =8.4Hz, Ar-H), 7.88-7.86(m, 2H, Ar-H), 7.59(t, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.53(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.45(d, 2H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.41-7.28(m, 5H, Ar-H), 5.76(t, 1H,J=8.0Hz, CH), 4.50(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.12(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.69(s, 4H, CH2CH2), 3.23-3.09 (m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 484.20 [M-Cl]+。
实施例 4
3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ]-3- 苯基丙酸盐酸盐（ I-4 ）的制备
操作过程同实施例1，只是将步骤（c）中的间胍基苯甲酸盐酸盐用4-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酸盐酸盐替代，缩合剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐用DCC替代，得3-[6-[4-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]-3-苯基丙酸盐酸盐，收率78.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.10(brs, 1H, COOH), 11.00(s, 1H, HCl), 10.51(s, 1H, CONH), 8.75(brs, 2H, NHCNH), 8.22(d, 1H,J=1.6Hz, Ar-H), 8.07(d, 2H,J=8.8Hz, Ar-H), 7.94(dd, 1H,J 1 =1.2Hz, J 2 =8.4Hz, Ar-H), 7.54(d, 1H,J=8.4Hz, Ar-H), 7.33(d, 2H,J=8.8Hz, Ar-H), 7.40-7.28(m, 5H, Ar-H), 5.76(t, 1H,J=8.0Hz, CH), 4.51(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH 2 ), 4.13(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH 2 ), 3.69(s, 4H, CH 2 CH 2 ), 3.20-3.07(m, 2H, CH 2 COOH); ESI-MS (m/z): 484.20 [M-Cl]+。
实施例 5
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[6-(3- 胍基苯甲酰胺基 )-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-5 ）的制备
步骤（a）：操作过程同实施例1步骤（a），只是将β-苯基-β-丙氨酸甲酯用β-(3,5-二氯苯基)-β-丙氨酸甲酯替代，得3-(3,5-二氯苯基)-3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯，收率82.0%，ESI-MS (m/z, +Q): 409.0 [M+H]+；
步骤（b）：将3-(3,5-二氯苯基)-3-(6-硝基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯10.0 mmol溶于四氢呋喃150ml中，加入乙酸25ml和锌粉160.0 mmol，加热回流4h（反应进程用TLC监测，石油醚/乙酸乙酯=1: 2 v/v），反应结束后，冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液调节溶液pH至碱性，过滤，滤液用3×70ml CH2Cl2萃取，合并有机层并用饱和食盐水洗涤，有机层经无水NaSO4干燥，减压蒸除溶剂，残余物经重结晶或柱层析纯化，即得3-(3,5-二氯苯基)-3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯，收率96.0%，ESI-MS (m/z, +Q): 365.1 [M+H]+；
步骤（c）：操作过程同实施例1步骤（c），只是将3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯用3-(3,5-二氯苯基)-3-(6-氨基-1-氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯替代，得3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基]丙酸甲酯盐酸盐，收率80.0%，ESI-MS (m/z, +Q): 540.0 [M-Cl]+；
步骤（d）：操作过程同实施例1步骤（d），只是将3-(6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基)-3-苯基丙酸甲酯盐酸盐用3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基]丙酸甲酯盐酸盐替代，得3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-(3-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基]丙酸盐酸盐，收率93.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.53(brs, 1H, COOH), 10.62(s, 1H, HCl), 10.12(s, 1H, CONH), 8.23(d, 1H,J=1.2Hz, Ar-H), 7.96(dd, 1H,J 1 =2.0Hz,J 2 =8.4Hz, Ar-H), 7.91(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.87(s, 1H, Ar-H), 7.63(brs, 4H, NH2C(NH)NH), 7.59(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.57(d, 1H,J=2.0Hz, Ar-H), 7.56(d, 1H,J=8.4Hz, Ar-H), 7.48(d, 2H,J=1.6Hz, Ar-H), 7.45(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 5.65(t, 1H,J=7.6Hz, CH), 4.52(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.30(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.27-3.18(m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 526.15 [M-Cl]+。
实施例 6
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[6-(4- 胍基苯甲酰胺基 )-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-6 ）的制备
操作过程同实施例5，只是将步骤（c）中的间胍基苯甲酸盐酸盐用对胍基苯甲酸盐酸盐替代，缩合剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐用DCC替代，得3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-(4-胍基苯甲酰胺基)-1-氧异吲哚-2-基]丙酸盐酸盐，收率97.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.51(brs, 1H, COOH), 10.53(s, 1H, HCl), 10.32(brs, 1H, CONH), 8.24(d, 1H,J=1.6Hz, Ar-H), 8.08(d, 2H,J=8.8Hz, Ar-H), 7.96(dd, 1H,J 1 =2.0Hz,J 2 =8.4Hz, Ar-H), 7.74(brs, 4H, NH2C(NH)NH), 7.57(d, 1H,J=2.0Hz, Ar-H), 7.55(d, 1H,J=8.4Hz, Ar-H), 7.48(d, 2H,J=1.6Hz, Ar-H), 7.38(d, 2H,J=8.8Hz, Ar-H), 5.65(t, 1H,J=7.6Hz, CH), 4.52(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.30(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.29-3.27(m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 526.10 [M-Cl]+。
实施例 7
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-7 ）的制备
操作过程同实施例5，只是将步骤（c）中的间胍基苯甲酸盐酸盐用3-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酸盐酸盐替代，缩合剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐用DCC替代，得3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-[3-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]丙酸盐酸盐，收率98.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.53(brs, 1H, COOH), 10.90(s, 1H, HCl) 10.81(s, 1H, CONH), 8.60(brs, 2H, NHCNH), 8.26(d, 1H,J=2.0Hz, Ar-H), 8.01(dd, 1H,J 1 =2.0Hz,J 2 =8.4Hz, Ar-H), 7.88(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.87(s, 1H, Ar-H), 7.61(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.57(d, 1H,J=8.4Hz, Ar-H), 7.56(d, 1H,J=2.0Hz, Ar-H), 7.48(d, 2H,J=2.0Hz, Ar-H), 7.45(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 5.65(t, 1H,J=7.6Hz, CH), 4.52(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.30(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.70(s, 4H, CH2CH2), 3.30-3.18 (m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 552.20 [M-Cl]+。
实施例 8
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-8 ）的制备
操作过程同实施例5，只是将步骤（c）中的间胍基苯甲酸盐酸盐用4-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酸盐酸盐替代，缩合剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐用DCC替代，得3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-[4-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]丙酸盐酸盐，收率90.0%，1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.49(brs, 1H, COOH), 11.86(brs, 1H, HCl), 10.58(s, 1H, CONH), 8.85(brs, 2H, NHCNH), 8.25(d, 1H,J=2.4Hz, Ar-H), 8.08(d, 2H,J=8.8Hz, Ar-H), 7.97(dd, 1H,J 1 =1.2Hz, J 2 =8.0Hz, Ar-H), 7.56(d, 1H,J=1.2Hz, Ar-H), 7.55(d, 1H,J=8.0Hz, Ar-H), 7.47(d, 2H,J=2.4Hz, Ar-H), 7.37(d, 2H,J=8.8Hz, Ar-H), 5.66(t, 1H,J=7.6Hz, CH), 4.53(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 4.31(d, 1H,J=17.6Hz, ArCH2), 3.69(s, 4H, CH2CH2), 3.24-3.13 (m, 2H, CH2COOH); ESI-MS (m/z): 552.15 [M-Cl]+。
实施例 9
采用实施例1～8类似的合成方法，只是将相应的反应底物进行替换，即可得到相应的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I），其结构式如下：
3-[6-(2- 胍基乙酰胺基 )-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-9 ）
收率40.5%，ESI-MS (m/z): 320.10 [M-Cl]+；
3-[6-(3- 胍基丙酰胺基 )-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-10 ）
收率36.0%，ESI-MS (m/z): 334.20 [M-Cl]+；
3-[1- 氧 -6-[3-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ]-3- 苯基丙酸盐酸盐（ I-11 ）
收率79.5%，ESI-MS (m/z): 498.20 [M-Cl]+；
3-[1- 氧 -6-[4-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ]-3- 苯基丙酸盐酸盐（ I-12 ）
收率77.0%，ESI-MS (m/z): 498.10 [M-Cl]+；
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-13 ）
收率87.5%，ESI-MS (m/z): 566.10 [M-Cl]+；
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[1- 氧 -6-[4-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-14 ）
收率90.0%，ESI-MS (m/z): 566.05 [M-Cl]+；
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(5- 氟 -1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-15 ）
收率85.6%，ESI-MS (m/z): 584.10 [M-Cl]+；
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(5- 甲基 -1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-16 ）
收率87.3%，ESI-MS (m/z): 580.20 [M-Cl]+；
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(5- 三氟甲基 -1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-17 ）
收率93.5%，ESI-MS (m/z): 634.10 [M-Cl]+；
3-(3,5- 二氯苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(5- 羟基 -1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-18 ）
收率80.5%，ESI-MS (m/z): 582.15 [M-Cl]+；
3-(4- 甲氧基苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-19 ）
收率80.5%，ESI-MS (m/z): 514.20 [M-Cl]+；
3-(4- 甲氧基苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-20 ）
收率77.3%，ESI-MS (m/z): 528.20 [M-Cl]+；
3-(4- 甲氧基苯基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-21 ）
收率79.5%，ESI-MS (m/z): 514.15 [M-Cl]+；
3-(4- 甲氧基苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(5- 氟 -1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-22 ）
收率85.0%，ESI-MS (m/z): 546.30 [M-Cl]+；
3-(4- 溴苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-23 ）
收率88.5%，ESI-MS (m/z): 562.20 [M-Cl]+；
3-(4- 溴苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-24 ）
收率90.0%，ESI-MS (m/z): 576.15 [M-Cl]+；
3-(4- 溴苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(5- 三氟甲基 -1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-25 ）
收率82.3%，ESI-MS (m/z): 644.10 [M-Cl]+；
3-(3- 硝基苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-26 ）
收率75.5%，ESI-MS (m/z): 529.20 [M-Cl]+；
3-(3- 硝基苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-27 ）
收率73.2%，ESI-MS (m/z): 543.25 [M-Cl]+；
3-(4- 甲氧基 -3- 硝基苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-28 ）
收率83.2%，ESI-MS (m/z): 559.20 [M-Cl]+；
3-(4- 甲氧基 -3- 硝基苯基 )-3-[1- 氧 -6-[3-[(1,4,5,6- 四氢嘧啶 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ] 异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-29 ）
收率75.3%，ESI-MS (m/z): 573.15 [M-Cl]+；
3-(4- 二甲胺基 -3- 硝基苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-30 ）
收率70.0%，ESI-MS (m/z): 572.25 [M-Cl]+；
3-(4- 二甲胺基 -3- 硝基苯基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-31 ）
收率68.5%，ESI-MS (m/z): 572.20 [M-Cl]+；
3-(4- 氯 -3- 硝基苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-32 ）
收率82.0%，ESI-MS (m/z): 563.15 [M-Cl]+；
3-(4- 氯 -3- 硝基苯基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-33 ）
收率75.5%，ESI-MS (m/z): 563.15 [M-Cl]+；
3-(3,4- 二氯苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-34 ）
收率86.0%，ESI-MS (m/z): 552.10 [M-Cl]+；
3-(3,4- 二氯苯基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-35 ）
收率82.0%，ESI-MS (m/z): 552.20 [M-Cl]+；
3-(3,4- 二甲氧基苯基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-36 ）
收率75.0%，ESI-MS (m/z): 544.30 [M-Cl]+；
3-(3,4- 二甲氧基苯基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-37 ）
收率72.9%，ESI-MS (m/z): 544.20 [M-Cl]+；
3-( 苯并 [d][1,3] 二噁 -5- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-38 ）
收率77.5%，ESI-MS (m/z): 528.20 [M-Cl]+；
3-( 苯并 [d][1,3] 二噁 -5- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-39 ）
收率69.5%，ESI-MS (m/z): 528.10 [M-Cl]+；
3-( 苯并 [d][1,3] 二噁 -4- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-40 ）
收率65.6%，ESI-MS (m/z): 528.05 [M-Cl]+；
3-( 苯并 [d][1,3] 二噁 -4- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-41 ）
收率63.0%，ESI-MS (m/z): 528.20 [M-Cl]+；
3-(2- 呋喃基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-42 ）
收率55.0%，ESI-MS (m/z): 474.15 [M-Cl]+；
3-(2- 噻吩基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-43 ）
收率72.0%，ESI-MS (m/z): 490.20 [M-Cl]+；
3-(3- 噻吩基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-44 ）
收率70.3%，ESI-MS (m/z): 490.15 [M-Cl]+；
3-( 吡啶 -3- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-45 ）
收率62.5%，ESI-MS (m/z): 485.20 [M-Cl]+；
3-( 吡啶 -3- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-46 ）
收率60.0%，ESI-MS (m/z): 485.20 [M-Cl]+；
3-( 吡啶 -4- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-47 ）
收率65.5%，ESI-MS (m/z): 485.25 [M-Cl]+；
3-( 吡啶 -4- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-48 ）
收率57.0%，ESI-MS (m/z): 485.20 [M-Cl]+；
3-( 苯并呋喃 -4- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-49 ）
收率85.5%，ESI-MS (m/z): 524.25 [M-Cl]+；
3-( 苯并呋喃 -4- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-50 ）
收率87.0%，ESI-MS (m/z): 524.20 [M-Cl]+；
3-(7- 氯 - 苯并呋喃 -4- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-51 ）
收率90.0%，ESI-MS (m/z): 558.20 [M-Cl]+；
3-(7- 氯 - 苯并呋喃 -4- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-52 ）
收率93.2%，ESI-MS (m/z): 558.10 [M-Cl]+；
3-(2,3- 二氢苯并呋喃 -4- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-53 ）
收率87.5%，ESI-MS (m/z): 526.20 [M-Cl]+；
3-(2,3- 二氢苯并呋喃 -4- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-54 ）
收率85.6%，ESI-MS (m/z): 526.20 [M-Cl]+；
3-(2,3- 二氢苯并呋喃 -5- 基 )-3-[6-[3-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-55 ）
收率80.8%，ESI-MS (m/z): 526.25 [M-Cl]+；
3-(2,3- 二氢苯并呋喃 -5- 基 )-3-[6-[4-[(4,5- 二氢 -1H- 咪唑 -2- 基 ) 氨基 ] 苯甲酰胺基 ]-1- 氧异吲哚 -2- 基 ] 丙酸盐酸盐（ I-56 ）
收率82.0%，ESI-MS (m/z): 526.15 [M-Cl]+。
实施例 10 生物活性测试结果
表一：部分目标物对黑色素瘤M21细胞在Fibronectin上粘附的抑制率（n=3）
结论：本发明所公开的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）或其药学上可接受的盐可显著抑制黑色素瘤细胞M21对fibronectin的粘附，部分目标化合物的抑制活性较阳性对照药物——cyclo(RGDfV)强。

Claims (6)

1.一类具有如下通式（I）的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物及其药学上可接受的盐：
式中：R1表示；R3、R4、R5各自独立地表示H、卤素、C1~C6烷氧基、硝基、二甲氨基，R3、R4、R5可在苯环的任意可能位置，R3、R4、R5可以相同，也可以不同；R2表示，m表示0-2。
2.如权利要求1所述的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）及其药学上可接受的盐，其特征在于所述药学上可接受的盐为1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、三氟乙酸、乙酸、丙酸、草酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、扁桃酸、柠檬酸、甲基磺酸、乙基磺酸、樟脑磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸的盐。
3.如权利要求1所述的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）及其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物选自如下化合物或其药学上可接受的盐：3-[6-[3-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]-3-苯基丙酸，3-[6-[4-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]-3-苯基丙酸，3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-[3-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]丙酸，3-(3,5-二氯苯基)-3-[6-[4-[(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]苯甲酰胺基]-1-氧异吲哚-2-基]丙酸。
4.一种药物组合物，包括治疗有效量的一种或多种如权利要求1-3任一项所述的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）及其药学上可接受的盐。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
6.如权利要求1-3任一项所述的1,3-二氢-1-氧-2H-异吲哚类化合物（I）及其药学上可接受的盐在制备预防或/和治疗各种因整合素αvβ3介导所引起的肿瘤转移、肿瘤生长、血管新生、视网膜病变、黄斑变性、骨质疏松、关节炎、平滑肌细胞移行、和动脉粥样硬化症状或疾病药物中的用途。
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