CN104042607A - 用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法,所述药物组合物包括白果内酯与银杏内酯A、C中的任一种或两种的组合。本发明提供的含有白果内酯的药物组合物具有多方面的神经保护作用,包括促进神经生长、改善老年记忆功能、防止老年痴呆的发生等。实验表明,在治疗痴呆方面,本品对小鼠记忆障碍有一定改善作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物,具体地说,涉及一种用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法。
背景技术
痴呆包括阿尔茨海默氏症(AD)和脑血管性痴呆(VD),其中阿尔茨海默氏症是最常见的一种痴呆形式,这一神经退行性疾病可造成记忆丧失、认知功能受损,并最终导致死亡。AD的临床治疗是一个尚未攻破的世界性难题,目前临床上使用的抗痴呆药物多为对症治疗(以改善认知功能为主),如胆碱酯酶抑制剂、多肽类、促智药、抗氧化剂等。所显示的效果也只能部分和暂时改善认知功能,但不能阻碍病程的进行性过程。由于西药在治疗AD上表现出治疗范围狭窄、副作用明显等缺陷,许多研究者开始将目光投向了治疗AD的中药上来。
银杏内酯化合物属于萜类化合物,由倍半萜内酯和二萜内酯组成,即白果内酯和银杏内酯A、B、C、J、M,是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯(hilobalide;BB)属倍半萜内酯,是目前从银杏叶中发现的唯一的倍半萜内酯化合物。银杏内酯A(ginkgolide A;GA)、银杏内酯B(ginkgolide B;GB)、银杏内酯C(ginkgolide C;GC)、银杏内脂M(ginkgolide M;GM)、银杏内脂J(ginkgolide J;GJ)为二萜类化合物,其差别在于含有的羟基数目和羟基连接的位置不同。
银杏内酯分子具有独特的十二碳骨架结构,嵌有一个叔丁基和六个五元环,包括一个螺壬烷,一个四氢呋喃环和三个内酯环。
据文献报道,含有白果内酯的银杏内酯组合物对脑血管疾病的治疗,具有一定的作用。在银杏内酯中,银杏内酯B的活性生理活性最强,是迄今发现的最强的血小板活化因子拮抗剂,对损伤神经元也有保护作用,然而随着研究的逐渐深入,对其安全性的研究也日渐增多。例如,银杏内酯B注射液在Beagle犬的毒代动力学研究结果显示,连续给药后银杏内酯B在Beagle犬体内出现蓄积,且较高剂量可能对Beagle犬产生毒性作用,影响其体内药物代谢过程(参见宋浩静等,银杏内酯B注射液在Beagle犬药代及毒代动力学研究,中国药理学与毒理学杂志,2011年9月第25卷增刊)。
注射用银杏内酯B毒性试验研究表明,小鼠静脉注射银杏内酯B的LD50(95%置信限)为424mg·kg-1(371-552mg·kg-1);对犬静脉滴注3个月,80mg·kg-1·d-1引起肺脏和肾脏的可逆性毒性反应(参见余启枝等,注射用银杏内酯B毒性试验研究,中国药师,2011年第14卷第11期)。
白果内酯对血管性痴呆小鼠的保护研究表明,白果内酯具有一定的抗氧化、清除自由基,扩张脑血管,并且能够改善血管痴呆小鼠的学习记忆能力,对血管性痴呆小鼠中枢神经系统的损害有较明显的保护和治疗作用(参见黄欢等,白果内酯对血管性痴呆小鼠的保护作用,安徽医药,2013年第17卷第3期)。
银杏内酯组合物可降低急性不完全性脑缺血大鼠的脑水肿及脑毛细血管通透性,降低全脑缺血大鼠的血液黏度,改善血液流变学指标;改善脑组织神经细胞缺血后病理改变,具有明显的脑保护作用(参见陈西娟等,银杏叶化学成分及其应用研究进展,生物质化学工程,2008年第42卷第4期)。
CN103494802A公开了白果内酯在制备促进银杏二萜类内酯抗血小板凝集活性的药物中的用途。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗痴呆症的药物组合物及其制备方法。
为了实现本发明目的,本发明的一种用于治疗痴呆症的药物组合物,所述药物组合物包括白果内酯与银杏内酯A、C中任一种或两种的组合。
所述药物组合物中:
(1)白果内酯与银杏内酯A的重量比为6-9:1-4;或
(2)白果内酯与银杏内酯C的重量比为6-9:1-4;或
(3)白果内酯与银杏内酯A、C的重量比为6-9:1-4:1-4。
本发明中所述痴呆症为阿尔茨海默氏症(AD)或脑血管性痴呆(VD)。优选为阿尔茨海默氏症。
本发明还提供上述药物组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)取银杏叶提取物,用有机溶剂萃取,减压蒸干即得银杏总内酯;
2)将上述银杏总内酯加水溶解后,加样于D101吸附树脂,吸附时间0.5-2h,然后用10-20%乙醇洗脱1-4个柱体积,收集洗脱液减压回收至干,得白果内酯粗品;
3)取上述白果内酯粗品,加入10-80%乙醇,加热溶解,过滤后,于2-10℃放置12-48h,析出结晶;最后在60℃真空条件下烘干,即得。
前述制备方法中,步骤1)中所述银杏叶提取物由黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供,其中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为1-5:1-2:1-3:1-10。
前述制备方法中,步骤1)中所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇等中的一种或两种以上混合。有机溶剂的加入量为银杏叶提取物重量的8-20倍。
优选地,步骤1)中所述有机溶剂为乙酸乙酯或丙酮,萃取次数为1-6次。更优选地,萃取次数为3次。
前述制备方法中,步骤2)中将收集的洗脱液于55-65℃,-0.09~-0.1MPa条件下减压旋转蒸发至干。
前述制备方法中,步骤3)中向白果内酯粗品中加入乙醇,加热至40℃-70℃溶解,趁热过滤。
本发明提供的药物组合物在使用过程中,其用量范围为每天0.5-500mg/kg体重,优选为1-200mg/kg体重。
本发明的用于治疗痴呆症的药物组合物,还可用于改善记忆障碍。
本发明进一步提供上述药物组合物在制备用于改善记忆障碍的药物中的应用。
经药效研究,急性毒性研究及临床统计证明,与含有银杏内酯B组分的银杏内酯组合物相比,本发明药物组合物的药效相当,但急性毒性、异常毒性大幅降低,不良反应发生率亦随之大为下降。
本发明提供的含有白果内酯的银杏内酯组合物具有多方面的神经保护作用,包括促进神经生长、改善老年记忆功能、防止老年痴呆的发生等。实验表明,在治疗痴呆方面,本品对小鼠记忆障碍有一定改善作用。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段,所用原料均为市售商品。
实施例1用于治疗痴呆症的药物组合物(白果内酯与银杏内酯A)及其制备方法
取银杏叶提取物100g(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为1:1:1:1),加2000ml乙酸乙酯萃取3次,减压蒸干,即得银杏总内酯;将银杏总内酯用200ml水溶解,通过D101吸附树脂,吸附时间1h,然后用200ml10%的乙醇洗脱1-4个柱体积,收集洗脱液,将收集的洗脱液于60℃,-0.09MPa条件下减压旋转蒸发至干,得白果内酯粗品;将白果内酯粗品用400ml80%乙醇加热至50℃,溶解后趁热过滤,4℃冷藏放置12h,析出结晶,于60℃真空烘干,即得白果内酯组合物43g。
经检测,总银杏酸:HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
含量:HPLC法测定,按干燥品计算,含白果内酯(C15H18O8)36.96g、银杏内酯A(C20H24O9)4.11g,且白果内酯及银杏内酯A的总量大于95%。
实施例2用于治疗痴呆症的药物组合物(白果内酯与银杏内酯A、银杏内酯C)及其制备方法
取银杏叶提取物80g(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为5:2:3:10),加1600ml正丁醇萃取6次,减压蒸干,即得银杏总内酯;将银杏总内酯用200ml水溶解,通过D101吸附树脂,吸附时间2h,用300ml10%的乙醇洗脱1-4个柱体积,收集洗脱液,将收集的洗脱液于55℃,-0.1MPa条件下减压旋转蒸发至干,减压回收溶剂至干,得白果内酯粗品;将白果内酯粗品用300ml60%乙醇加热至70℃,溶解后趁热过滤,4℃冷藏放置24h,析出结晶,于60℃真空烘干,即得白果内酯组合物35g。
经检测,总银杏酸:HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
含量:HPLC法测定,按干燥品计算,含白果内酯(C15H18O8)19.95g、银杏内酯A(C20H24O9)8.31g、银杏内酯C(C20H24O11)4.98g,且白果内酯、银杏内酯A及银杏内酯C总量大于95%。
实施例3用于治疗痴呆症的药物组合物(白果内酯与银杏内酯C)及其制备方法
取银杏叶提取物100g(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为1:2:3:10),加800ml丙酮萃取3次,减压蒸干,即得银杏总内酯;将银杏总内酯用200ml水溶解,通过D101吸附树脂,吸附时间0.5h,用200ml20%的乙醇洗脱1-4个柱体积,收集洗脱液,将收集的洗脱液于65℃,-0.09MPa条件下减压旋转蒸发至干,减压回收溶剂至干,得白果内酯粗品;将白果内酯粗品用400ml40%乙醇加热至60℃,溶解后趁热过滤,4℃冷藏放置18h,析出结晶,于60℃真空烘干,即得白果内酯组合物37g。
经检测,总银杏酸:HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
含量:HPLC法测定,按干燥品计算,含白果内酯(C15H18O8)31.97g、银杏内酯C(C20H24O11)3.55g,且白果内酯、银杏内酯C总量大于95%。
实施例4用于治疗痴呆症的药物组合物(白果内酯与银杏内酯A、银杏内酯C)及其制备方法
取银杏叶提取物100g(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为3:2:3:8),加1200ml异丁醇萃取4次,减压蒸干,即得银杏总内酯;将银杏总内酯用300ml水溶解,通过D101吸附树脂,吸附时间0.5h,用300ml20%的乙醇洗脱1-4个柱体积,收集洗脱液,将收集的洗脱液于65℃,-0.09MPa条件下减压旋转蒸发至干,减压回收溶剂至干,得白果内酯粗品;将白果内酯粗品用600ml60%乙醇加热至60℃,溶解后趁热过滤,4℃冷藏放置12h,析出结晶,于60℃真空烘干,即得白果内酯组合物33g。
经检测,总银杏酸:HPLC法测定总银杏酸含量小于5ppm。
含量:HPLC法测定,按干燥品计算,含白果内酯(C15H18O8)17.24g、银杏内酯A(C20H24O9)9.41g、银杏内酯C(C20H24O11)4.70g,且白果内酯、银杏内酯A及银杏内酯C总量大于95%。
实验例1白果内酯组合物急性毒性研究
1.材料与方法
1.1仪器
称量毒麻药品天平:S型METTLER TOLEDO,感量:0.1mg;编号:GLP146(TC),瑞士梅特勒公司。
称量大鼠体重天平:型号TP-2101,感量:0.1g,编号:GLP342(A),北京赛多利斯仪器系统有限公司。
1.2药品
实施例2中制备的白果内酯组合物。
银杏叶提取物由黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供,其中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为5:2:3:10。
对比例:参照CN103494802A中的试验例2,银杏内酯AC+白果内酯组[银杏内醋A(含量:5.0mg/ml),银杏内醋C(含量:5.0mg/ml)白果内醋(含量:5.0mg/ml),银杏内酯AC与白果内酯的重量比为52:48]。
1.3实验动物
SD大鼠SPF级,雌雄各半。
1.4方法
1.4.1剂量的选择:
按照预试验的Dm(最大致死量)和Dn(最小致死量)结果,白果内酯组合物Dm取1000mg/kg,Dn取729mg/kg;银杏叶提取物Dm取800mg/kg,Dn取582mg/kg;对比例组合物1000mg/kg,Dn取729mg/kg,采用均衡设计(即剂量组之间相等剂量间距,每组动物数相等)。
在1000mg/kg与729mg/kg之间,按照剂量间距为1:0.92分成5个组。如果白果内酯组合物920mg/kg剂量组大鼠在给药后至1000mg/kg剂量组给药前全部死亡,1000mg/kg剂量组大鼠则按照659mg/kg(716mg/kg×0.92)剂量给药(表1)。
在743mg/kg与508mg/kg之间,按照剂量间距为1:0.92分成5个组。如果银杏叶提取物680mg/kg剂量组大鼠在给药后至743mg/kg剂量组给药前全部死亡,743mg/kg剂量组大鼠则按照467mg/kg(508mg/kg×0.92)剂量给药(表2)。
在900mg/kg与667mg/kg之间,按照剂量间距为1:0.92分成5个组。如果对比例组合物840mg/kg剂量组大鼠在给药后至900mg/kg剂量组给药前全部死亡,900mg/kg剂量组大鼠则按照614mg/kg(667mg/kg×0.92)剂量给药(表3)。
表1白果内酯组合物对SD大鼠灌胃给药急性毒性试验剂量设计
表2银杏叶提取物对SD大鼠灌胃给药急性毒性试验剂量设计
表3对比例组合物对SD大鼠灌胃给药急性毒性试验剂量设计
1.4.2观察指标:观察指标表4。
表4白果内酯组合物、银杏叶提取物、对比例组合物对SD大鼠灌胃给药急性毒性试验观测指标、内容和时间
1.4.3统计分析:
LD50计算使用新药开发权威统计(Drug And Statistics ver1.0)软件,简称DAS软件,版权所有(C)2002-DAS开发组,孙瑞元教授等研发。具体操作步骤:1、得出试验期间,各剂量组动物的死亡数;进入DAS软件操作界面,依次选择“定量药理”→“半数有效量”→正规Bliss法。
1.5结果与讨论
在本实验条件下,白果内酯组合物对SD大鼠24h内1次灌胃给药,给药后1min~30min出现不同程度的四肢及耳廓潮红、四肢肿胀、抽搐、呼吸困难等症状。白果内酯组合物对体重无明显影响,病理学检查结果显示未见明显病变及异常。半数致死量LD50=806.340mg/kg,LD50的95%可信限=775.133~838.805mg/kg。
银杏叶提取物对SD大鼠24h内1次灌胃给药,给药后1min~30min出现不同程度的四肢及耳廓潮红、四肢肿胀、抽搐、呼吸困难等症状。银杏叶提取物对体重无明显影响,病理学检查结果显示未见明显病变及异常。半数致死量LD50=615.252mg/kg,LD50的95%可信限为602.248~681.916mg/kg。
对比例组合物对SD大鼠24h内1次灌胃给药,给药后1~30min出现不同程度的四肢及耳廓潮红、四肢肿胀、抽搐、呼吸困难等症状。白果内酯组合物对体重无明显影响,病理学检查结果显示未见明显病变及异常。半数致死量LD50=784.120mg/kg,LD50的95%可信限为757.233~814.625mg/kg。
实验例2白果内酯组合物对SD大鼠长期毒性试验研究
1、受试物
实施例2中制备的白果内酯组合物。
2、试验动物
SPF级6周龄SD大鼠40只,雌雄各半。随机分为高、中、低三个剂量组,及空白对照组,每组10只。
3、给药途径
灌胃给药:经灌胃给予相应浓度的供试品及对照品。
4、给药频率
每周1-周6给药,周日停药,且每天给药时间相同。
5、给药期限
根据临床给药时间,确定为3个月,停药恢复期为1个月。
6、给药剂量
低剂量组55mg/kg,中剂量组120mg/kg,高剂量组250mg/kg。
7、观察指标
(1)一般状态
各给药组大鼠从给药开始(D0)至恢复期结束(D120),眼、耳、口、鼻和会阴部等一般状况良好,未见异常分泌物;步态、被毛未见异常,无抽搐、稀便等现象出现;大鼠精神、外观、呼吸、行为及自主活动均无异常。
(2)体重及摄食量
给药及恢复观察期间各给药组雌、雄大鼠摄食量未见与供试品相关的明显异常改变。
(3)血液学指标
给药90天(D90),高剂量组雌鼠、雄鼠红细胞数(RBC)偏低,结合同期的TBIL升高,网织红细胞计数(Ret%)增加,认为大鼠产生溶血性贫血;恢复期结束(D120),高剂量组雄鼠红细胞数(RBC)偏低,但波动在正常范围内,且结合同期的TBIL下降,网织红细胞计数(Ret%)未见异常,表明RBC的偏低非药物因素所致,即停药14天后溶血性贫血明显改善。
(4)血生化指标
给药90天(D90)及恢复期结束(D120),低剂量组血生化各指标均未见与药物相关的毒性改变。给药90天(D90),中剂量组雄鼠Urea偏低、TBIL、ALB、TP偏高;高剂量组雌鼠Urea偏高、高剂量组雄鼠TBIL、ALB、TP偏高;其他检测指标未见异常。Urea偏高,同时高剂量组肾脏病理学检查结果显示肾小管上皮细胞变性坏死,提示药物对肾脏有损伤;ALB、TP变化无剂量依赖性,故认为无毒理学意义;TBIL的升高结合同期红细胞数(RBC)偏低,网织红细胞计数升高,表明发生溶血性贫血。恢复期结束(D120),中剂量组雌鼠GLU、TBIL偏低、中剂量组雄鼠TBIL偏低、ALB偏高;高剂量组雄鼠GLU偏低,高剂量组雌鼠TBIL、ALB偏低。GLU该指标降低无临床意义,ALB变化无剂量依赖性,故认为非药物因素所致,TBIL改变结合同期红细胞数(RBC)、网织红细胞计数未见异常,表明停药后贫血已明显改善。
(5)尿液指标
连续用药3个月,各给药组尿液各指标未见异常改变。
(6)脏器重量及脏器系数
白果内酯组合物给药时和停药后对各脏器指数均无明显影响,与空白对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
(7)系统尸解和组织病理学检查
①系统尸解
给药结束大体解剖可见:高剂量组引起溶血性贫血,肾脏出现肾小管上皮细胞变性坏死;停药30天,溶血性贫血明显改善,肾组织亦未见病变。其他组别给药时和停药后对各脏器指数均无明显影响,与空白对照组比较差异无显著性。
②组织病理学检查
各组大鼠所有被检脏器大小、形态、颜色、光滑度及切面均未见明显异常改变。
8、观察指标的时间和次数
给药期及停药恢复期每天观察大鼠外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便性状、生殖器、死亡等情况及其他中毒表现。
9、结果及分析
白果内酯组合物高、中、低剂量组与生理盐水(空白)对照组比较,连续给药3个月过程中,动物饮食、活动、排泄均未见明显异常,无一动物死亡。药结束大体解剖可见:高剂量组引起溶血性贫血,肾脏出现肾小管上皮细胞变性坏死;停药30天,溶血性贫血明显改善,肾组织亦未见病变。其他组别给药时和停药后对各脏器指数均无明显影响,与空白对照组比较差异无显著性。停药后各组动物在饮食、活动、排泄、精神状态等方面均未见明显差异;脏器系数、血液学检测结果、病理检查均在正常范围内;停药后无迟缓性毒性发生。因此,在本实验条件下,其无毒性反应剂量为:120mg/kg,为拟临床用量的60多倍。
实验例3白果内酯组合物对Beagle犬长期毒性试验研究
1、受试物
实施例2中制备的白果内酯组合物。
2、试验动物
SPF级8周龄Beagle犬40只,雌雄各半。随机分为高、中、低三个剂量组及空白组,每组10只。
3、给药途径
灌胃给药;灌胃给予相应浓度的供试品及对照品。
4、给药频率
每周1-周6给药,周日停药,且每天给药时间相同。
5、给药期限
根据临床给药时间,确定为3个月,停药恢复期为1个月。
6、给药剂量
低剂量组22mg/kg,中剂量组45mg/kg,高剂量组100mg/kg。
7、观察指标
(1)一般状态
Beagle犬给药及恢复观察期外观体征、一般行为活动、精神状态、呼吸、生殖器及肛周、粪尿均未见异常改变。
(2)体重、组胺、心电图、体温、眼科检查
给药及恢复观察期各检测时间点,各组Beagle犬体重、组胺、心电图、体温、眼科检查等均未见与供试品相关的异常改变。
(3)血液学指标
给药90天,100mg/kg剂量组血红蛋白(HGB)、红细胞容积(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、血小板(PLT)值略微降低。给药结束及恢复期,上述指标的改变均可恢复至正常水平。除此之外,其余各组血液学、血凝指标在各检测时间点未见与供试品相关的明显异常改变。
(4)血生化指标
给药及恢复观察期,各组血生化、电解质指标在各检测时间点未见与供试品相关的明显异常改变。
(5)尿液指标
给药及恢复观察期,各组尿液各指标在各检测时间点未见与供试品相关的明显异常改变。
(6)骨髓指标
给药结束及恢复期结束,各组骨髓各指标未见与供试品相关的明显异常改变。
(7)脏器重量及系数
给药结束及恢复期结束,各组脏器重量及系数未见与供试品相关的明显异常改变。
(8)病理组织学检查
各组病理组织未见与供试品相关的明显异常改变。
8、观察指标的时间和次数
给药期及停药恢复期每天观察Beagle犬外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便性状、生殖器、死亡等情况及其他中毒表现。
9、结果及分析
Beagle犬连续灌胃白果内酯组合物3个月试验中,低剂量组、中剂量组无明显毒性反应,因此,在本实验条件下,其无毒性反应剂量为:100mg/kg,为拟临床用量的50多倍。
实验例4白果内酯组合物给药对东莨菪碱致记忆获得性障碍小鼠学习记忆功能的影响
1、动物及分组:雌雄各半,7周龄,ICR小鼠。
2、治疗组的药物:实施例2中制备的白果内酯组合物。
阳性药组的药物:依达拉奉注射液(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮)
对照组的药物:银杏叶提取物由黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供,其中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为5:2:3:10。
对比例:参照CN103494802A中的试验例2,银杏内酯AC+白果内酯组[银杏内醋A(含量:5.0mg/ml),银杏内醋C(含量:5.0mg/ml)白果内醋(含量:5.0mg/ml),银杏内酯AC与白果内酯的重量比为52:48]。
3、实验分组:ICR小鼠180只,实验动物每组20只动物(雌、雄各10只)随机分为空白对照组20只、模型组20只,阳性药组20只,对照组20只,对比例组合物组20只,白果内酯组合物低、中、高剂量组各20只。
4、实验过程
白果内酯组合物低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg)采用腹腔注射给药,给药体积为40ml/kg,每日给药1次,连续给药4天。对照组和模型组腹腔注射给予同样体积的生理盐水。第4天给药1h后,除空白对照组小鼠外,其余各组小鼠分别于腹腔注射东莨菪碱溶液3mg/kg,注射后分别于10min、50min进行避暗测试。
记录5min内小鼠的潜伏期(首次进入暗室的时间)和进入暗室被电击的错误次数。
5、实验结果见表5。
表5白果内酯组合物给药对东莨菪碱造成的记忆障碍的影响
注:与模型组对比,P<0.05。
表5结果显示,给予东莨菪碱造模后10min,模型组的错误次数比对照组显著增加(P<0.05),潜伏期比对照组稍缩短;50min后,模型组的潜伏期比对照组有缩短趋势,错误次数也有增加趋势,说明东莨菪碱造成记忆障碍。白果内酯组合物腹腔注射给药后10min,10、20、40mg/kg三个剂量组的错误次数均明显低于模型组(与模型组比较,P<0.05),结果提示,白果内酯组合物与含有银杏内酯B组分的银杏内酯组合物、对比例组合物相比药效相当,并且白果内酯组合物腹腔注射给药对东莨菪碱造成的记忆障碍有明显改善作用。阳性药依达拉奉给药10min、50min的错误次数与模型相比均有减少趋势,但无统计学显著性差异。
结果提示,本发明的白果内酯组合物腹腔注射给药对东莨菪碱造成的记忆障碍有明显改善作用。
实验例5白果内酯组合物给药对亚硝酸钠致记忆巩固性障碍小鼠模型的影响
1、动物及分组:雌、雄各半,7周龄,ICR小鼠。
2、治疗组的药物:实施例2中制备的白果内酯组合物。
阳性药组的药物:依达拉奉注射液(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮)
对照组的药物:银杏叶提取物由黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供,其中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为5:2:3:10。
对比例:参照CN103494802A中的试验例2,银杏内酯AC+白果内酯组[银杏内醋A(含量:5.0mg/ml),银杏内醋C(含量:5.0mg/ml)白果内醋(含量:5.0mg/ml),银杏内酯AC与白果内酯的重量比为52:48]。
3、实验分组:ICR小鼠160只,实验动物每组20只动物(雌、雄各10只)随机分为空白对照组20只、模型组20只,阳性药组20只,对比例组合物组20只,白果内酯组合物低、中、高剂量组各20只。
4、实验过程
白果内酯组合物低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg)采用腹腔注射给药,给药体积为40ml/kg,每日给药1次,对照组和模型组腹腔注射给予同样体积的生理盐水,连续给药3天后,各组小鼠分别颈后皮下注射亚硝酸钠溶液120mg/kg,23h后,各组小鼠再给予相应剂量的药物,1h后采用穿梭箱进行主动回避测试。
记录主动逃避次数、潜伏期(从开始实验到产生第1次主动逃避反应的时间,未有主动逃避反应记为500s)、错误次数(在一个周期内小鼠从安全区返回电击区的次数)表示。
5、实验结果见表6。
表6白果内酯组合物给药对亚硝酸钠造成的记忆障碍的影响
表6结果显示,皮下注射给予亚硝酸钠120mg/kg24h后,模型组的主动逃避次数较对照组减少,错误次数增加。白果内酯组合物与含有银杏内酯B组分的银杏内酯组合物、对比例组合物相比药效相当,并且白果内酯组合物40mg/kg与模型组相比,主动逃避次数增高,逃避潜伏期缩短,提示对记忆障碍有一定改善作用。
以上实验表明,在东莨菪碱造成的小鼠记忆获得性障碍模型、亚硝酸钠造成的小鼠记忆获得性障碍模型中,应用被动回避试验和主动回避试验,表明白果内酯组合物对记忆障碍有改善作用。本发明为白果内酯组合物治疗阿尔茨海默病提供了全新的思路,具有较好的发展前景。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种用于治疗痴呆症的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物包括白果内酯与银杏内酯A、C中任一种或两种的组合。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述组合物中:
(1)白果内酯与银杏内酯A的重量比为6-9:1-4;或
(2)白果内酯与银杏内酯C的重量比为6-9:1-4;或
(3)白果内酯与银杏内酯A、C的重量比为6-9:1-4:1-4。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物,其特征在于,所述痴呆症为阿尔茨海默氏症或脑血管性痴呆症。
4.权利要求1-3任一项所述药物组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)取银杏叶提取物,用有机溶剂萃取,减压蒸干即得银杏总内酯;
2)将上述银杏总内酯加水溶解后,加样于D101吸附树脂,吸附时间0.5-2h,然后用10-20%乙醇洗脱1-4个柱体积,收集洗脱液减压回收至干,得白果内酯粗品;
3)取上述白果内酯粗品,加入10-80%乙醇,加热溶解,过滤后,于2-10℃放置12-48h,析出结晶;最后在60℃真空条件下烘干,即得。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述的银杏叶提取物,其中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的重量比为1-5:1-2:1-3:1-10。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或两种混合;有机溶剂的加入量为银杏叶提取物重量的8-20倍。
7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述有机溶剂为乙酸乙酯或丙酮,萃取次数为1-6次。
8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中将收集的洗脱液于55-65℃,-0.09~-0.1MPa条件下减压旋转蒸发至干。
9.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤3)中向白果内酯粗品中加入乙醇,加热至40℃-70℃溶解,趁热过滤。
10.权利要求1-3任一项所述药物组合物在制备用于改善记忆障碍的药物中的应用。
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CN103494802A (zh) * | 2013-10-12 | 2014-01-08 | 成都百裕科技制药有限公司 | 白果内酯的用途 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108125988A (zh) * | 2017-12-31 | 2018-06-08 | 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 | 银杏内酯b在抑制小胶质细胞炎症反应减轻阿尔茨海默病症状的应用 |
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