CN104007190B

CN104007190B - 一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法

Info

Publication number: CN104007190B
Application number: CN201410106935.8A
Authority: CN
Inventors: 邵宏宏; 周秀锦; 王�琦
Original assignee: Complex Art Service Centre Of Zhoushan Entry-Exit Inspection And Quarantine Bureau
Current assignee: Zhoushan Customs Comprehensive Technical Service Center
Priority date: 2014-03-21
Filing date: 2014-03-21
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2034-03-21
Also published as: CN104007190A

Abstract

本发明涉及多种具有抑菌效果的添加剂的检测方法，特别涉及一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法。本发明采用快速超声辅助萃取-固相萃取-离子色谱法（UAE-SPE-IC）同时检测水产品中的丙酸盐、柠檬酸和多聚磷酸盐，通过快速超声辅助萃取，大大提高了丙酸盐、柠檬酸和多聚磷酸盐的回收率，并结合C18小柱及Onguard Π Ag前处理净化柱，有效去除蛋白质等大分子物质及其水产品中高浓度氯离子的干扰，提高了实际检测的灵敏度，且离子色谱法（IC）对电解系数较大的物质尤其是阴离子具有较强的分离能力、可进行不同价态分析、检测限低等优点，本发明适合水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐的定量测定及食品安全监测。

Description

一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法

技术领域

本发明涉及多种抑菌性添加剂的检测方法，特别涉及一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法。

背景技术

丙酸及丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐是水产品保存和加工中常用的添加剂，均具有一定的抑菌作用。丙酸及丙酸盐是我国近年来发展起来的一种新型食品防腐剂，具抗菌作用，比山梨酸弱，比乙酸强，可有效抑制食品中霉菌、好气性芽孢杆菌、革兰阴性菌等的生长繁殖，也可以抑制黄曲霉毒素的产生。丙酸及丙酸盐是国家批准使用的人工合成防腐剂，但是其添加必须在规定范围内按规定限量使用，而且添加之后必须在食品标签上注明。因此对丙酸的快速准确检测方法的研究十分必要。目前，测定丙酸的检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和离子色谱法。我国现有的标准中采用气相色谱法、高效液相色谱法，但需用到大量有机试剂，丙酸不稳定，通常采用加入酸后蒸馏提取，前处理繁琐。离子色谱法可采用直接浸泡体取，且所使用试剂对实验人员的健康危害小，灵敏度高，但是由于甲酸本身的性质，检测回收率不是很理想。

磷酸盐可分为正磷酸盐和缩聚磷酸盐，目前,在水产加工中,多聚磷酸盐主要是指焦磷酸盐、三聚磷酸盐、三偏磷酸盐。多聚磷酸盐是一类性能优异的保水剂和抗冻剂，被许多水产企业大量用于海产品特别是冷冻海产品的加工和保存过程中，用来提高海产品的有效持水能力，并有效延长海产品的货架期，减少解冻后的流滴损失。同时，有研究证明多聚磷酸盐对水产品中的微生物生长有抑制作用。近些年来，有一些不法商贩利用了多聚磷酸盐可以加大水产品吸水性、抑制微生物生长等特点，在商品中人为注水，以次充好，以少充多。但是，人体如过多地摄入磷酸盐，则会降低钙吸收导致肌体钙磷失衡，继而引发疾病,因此各国对水产品中多聚磷酸盐含量作了明确的限量要求。针对这种情况，许多不法经营者采用各种措施，用不含磷酸盐成分的添加剂代替多聚磷酸盐，向水产品中人为注水，在提高利润的同时损害消费者利益，柠檬酸盐即是这种无磷添加剂的主要成分，由于其具有较强的广谱抗菌作用和稳定性，与保湿剂等合用，可用于延缓水产品的腐败，并能保持肉的持水性.但是柠檬酸的使用范围是受到严格限制的，因此水产品中柠檬酸的定性与定量分析对食品营养的研究意义重大，而且在食品生产过程的质量管理中也必不可少。

我国输欧水产品曾多次被欧盟通报多聚磷酸盐超标问题，且其5g/kg的限量要求针对焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐的总和，既不包含正磷酸盐的含量，因生物体中均含有一定量的正磷酸盐，传统方法中通过用双氧水和硫酸将磷酸盐的多聚体转化为正磷酸盐，测定总磷含量对多聚磷酸盐的含量进行判定已不能满足实际需求。目前我国还没有现行的检测水产品中多聚磷酸盐含量的国家标准和行业标准。有一些科研工作者曾尝试不同的前处理方法，对海产品进行提取后用核磁共振法直接检测多聚磷酸盐，但由于设备昂贵，效果也不甚理想。因此目前还缺少一种适应当前食品安全控制要求的准确度较高的检测方法。

离子色谱法能较好的分离无机阴离子，且能对离子的不同形态进行分析。近年来有文献报道采用抑制型离子色谱-电导法对水产品中多聚磷酸盐进行分离和测定。另外有研究人员采用离子色谱法分析水产品、酱油中的包含丙酸在内的有机酸。索德成等人采用高效液相色谱法对饲用酸化剂中丙酸和柠檬酸进行了同时测定，但该法不能用于多聚磷酸盐的测定。目前，关于丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的方法还未见报道。本文首次建立了一种碱液快速超声辅助萃取-串联式固相萃取-离子色谱法（UAE-SPE-IC）同时检测水产品中的丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐的检测方法，该法分离效果良好，灵敏度高，不需特殊试剂，在短时间内即可同时完成水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐的定量分析，避免了样品的重复处理和测定，大大提高了检测效率，有效降低了检测成本，加快进出口水产品的通关速度。

国内已经在申报的相关的发明专利有申请号201210014139.2、申请日2012-01-18公开的一种检测酸腌菜中亚硝酸盐、硝酸盐的方法，但是这些方法实际检测时灵敏度不高，对于同时检测水产品中的硝酸盐、亚硝酸盐和多聚磷酸盐快速检测应用难度较大。

发明内容

本发明提供一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法，该方法定量分析结果可靠、检测限低、适用于同时测定水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐（包括正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐）的快速检测。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法，该方法包括如下步骤：

a、样品前处理：将待测的水产品样品充分混匀并搅碎，装入容器内，密封、冷藏备用；

b、碱溶液快速超声辅助提取：准确称取经前处理的水产品样品放于玻璃容器中，加入适量超纯水制成均质系统，加入碱溶液封盖后超声波提取；

c、蛋白质沉淀：将超声波提取后的样品倒入离心管中，离心过滤，取滤液与三氟乙酸溶液混合，滤液与三氟乙酸溶液的体积比为20：3-4，0-4℃保存；

d、串联式固相萃取：将蛋白质沉淀后的样品离心，过滤后对滤液采用C18柱和OnguardΠAg柱进行串联式固相萃取，将过柱液经尼龙滤膜过滤后收集于5mL自动进样器样品瓶中，供离子色谱仪测定；

e、三级梯度淋洗离子色谱分析；

f、标准曲线的制备，取丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐配制成系列浓度，求出回归方程与相关系数，根据标准曲线以确定被检测样品中丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐的含量。

本发明采用碱液快速超声辅助萃取-串联式固相萃取-离子色谱法（UAE-SPE-IC）同时检测水产品中的丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐，通过碱液快速超声辅助萃取，大大提高了丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐稳定性和回收率，结合C18小柱及OnguardΠAg串联式前处理净化柱，有效去除蛋白质等大分子物质及其水产品中高浓度氯离子的干扰，利用离子色谱法（IC）对电解系数较大的物质尤其是阴离子具有较强的分离能力、可进行不同价态分析、检测限低等优点，对水产品中多种抑菌性添加剂进行分离和测定，本发明适合水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐的定量检测及食品安全监测。

作为优选，前处理中所用到的实验用水均为超纯水，电阻率18.2MΩ·cm。离子色谱法对实验用水的要求较高，如超纯水电阻率低，说明水中含有较多的离子，导致电导背景过高，并对检测过程中待测物质产生干扰，影响实验结果。

作为优选，快速超声辅助萃取的条件为：样品经均质后，超声波振荡提取30min，每5min振摇一次，以保持固相完全分散。超声波振荡会加速待测离子溶解进入提取液，因水产品为固体样品且粘稠，长时间静置会逐渐凝结成块，影响提取效率，因此需每5min振摇一次，以保持固相完全分散。

作为优选，加入的碱溶液是浓度为0.2mol/L NaOH溶液0.5mL，封盖后超声波提取。加入碱液使提取液偏碱液，增加丙酸的稳定性，因丙酸在酸性条件下易挥发，多聚磷酸盐在碱性条件下不易发生水解和转换。

作为优选，三氟乙酸溶液的体积浓度为20%。步骤c中沉淀剂采用三氟乙酸，通常采用20%的浓度，沉淀效果较好，若待测样品蛋白质含量较少，可适当降低三氟乙酸浓度。三氟乙酸沉淀蛋白质的效果较好，且氟离子对待测离子不产生干扰，氯离子与丙酸出峰较为接近，高浓度的氯离子会遮盖丙酸根。因水产品蛋白质含量较高，因此，三氟乙酸浓度为20%，浓度过低，蛋白质未完全沉淀，对色谱柱会造成污染。

作为优选，SPE固相萃取C₁₈柱上样前，用5mL甲醇进行活化后15mL高纯水进行清洗，流速小于3ml／min，样品过柱时前处理柱保持垂直。C₁₈柱使用前需进行活化，流速过快，杂质不易被填料吸附。

作为优选，固相萃取OnguardΠAg前处理净化柱上样前，用10mL去离子水活化后，流速小于3ml／min，弃去前3ml，取中间液2～3ml，定容后上机检测。OnguardΠAg前处理净化柱可有效去除氯离子，因氯离子与丙酸根出峰时间较为接近，而海水和海产品中氯离子含量较高，未避免过高的氯离子含量对待测物质产生干扰，因此采用OnguardΠAg前处理净化柱，并需经过活化，且流速不易过快。

作为优选，步骤e中色谱条件为：色谱柱：分离柱：IonPac AS11－HC；保护柱IonPacAG11－HC；淋洗液：KOH溶液，流速1.0mL/min；AMMS-ICE300(4mm)抑制器自动抑制模式，抑制电流200mA，抑制型电导检测器检测；柱温：30.0℃；进样量：30.0μL；外接水模式；以保留时间定性，峰面积定量。IonPac AS11－HC主要用于分析常规阴离子及有机酸，并且其对多聚磷酸盐的分离效果在常规离子色谱柱中最佳。采用KOH溶液作为淋洗液，有效降低背景电导，不易产生基线漂移；因三聚磷酸盐和三偏磷酸盐需在较高淋洗液浓度下才能分离，因此抑制电流设为200mA，有效降低背景电导。

作为优选，步骤e中的淋洗液梯度程序具体为：0-10min内，浓度为2.5mM/L，之后在0.5min内将浓度升高至25mM/L保持4.5min，15-25min之间将浓度从25mM/L升至55mM/L，保持7min，再在1min内将浓度调整并稳定在25mM/L，保持2min，对色谱柱进行冲洗，在35min时，结束整个检测流程。丙酸与氯离子分离需采用较低浓度的淋洗液，当淋洗液浓度过高，氯离子与丙酸同时出峰，且丙酸峰形不佳，而多聚磷酸盐尤其是三聚和三偏磷酸盐需在较高淋洗液浓度下才能分离，最后为减少整个检测时间，采用中等浓度的淋洗液，对色谱柱进行快速冲洗。因此需采用三级梯度淋洗可将丙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐及三种多聚磷酸盐有效分离，且去除水产品中常见阴离子的干扰。

作为优选，所述的步骤还包括回收率实验。

本发明具有以下优点：

1、应用范围广。本发明可加强水产品中抑菌性添加剂丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐的监控，有利于水产品流通环节中产品质量的监控，减少水产品中添加剂过量使用对人体健康造成的危害，并为水产品中微生物的检测提供参考，保障食品安全。

2、本发明采用了快速超声辅助萃取（UAE）进行提取，利用其空化效应、强化扩散等理化特性对目标产物进行提取，与传统提取方法相比，具有快速、常温、能耗低、提取率高等优点。提高了提取效率，且经济环保。

3、本发明采用了碱液提取，增加了待测物质丙酸的稳定性、有效抑制了多聚磷酸盐的水解，提高了待测物质的提取效率。

4、本发明采用了OnguardΠAg前处理净化柱与C18柱串联使用，不仅可有效去除Cl-，由于水产品中常含有较高浓度的Cl-，且出峰时间与丙酸根较为接近，该净化柱可避免水产品中高浓度的Cl-对丙酸根出峰的影响，而且可除去水产品中较高含量的蛋白质杂质。

5、本发明采用了离子色谱法对丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐进行测定，该法是目前有效分离多种多聚磷酸盐以及有机酸的首选方法，且能对不同价态的离子进行分离。本方法中以水作为流动相，无需特殊试剂，对环境和人员健康不产生有害影响。

6、本发明采用了KOH自动发生淋洗液装置，采用三级梯度淋洗，可在短时间内产生准确浓度的淋洗液，适合于进行梯度淋洗，采用较低浓度的淋洗液可将丙酸与氯离子分离，多聚磷酸盐尤其是三聚和三偏磷酸盐需在较高淋洗液浓度下才能分离，因此梯度淋洗可将丙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐及三种多聚磷酸盐有效分离，且去除水产品中常见阴离子的干扰。

7、本发明采用了快速超声辅助萃取-固相萃取-离子色谱法（UAE-SPE-IC）检测水产品中的丙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐及三偏磷酸盐，通过碱液提取，大大提高了回收率，并结合C₁₈柱和OnguardΠAg柱串联式净化，有效去除了其他物质的干扰，提高了实际检测的灵敏度，且通过梯度淋洗具有较强的分离能力、检测限低等优点，与传统的检测方法相比，具有更好的利用价值。

8、仪器自动进样，适合大批量生物样品的检测。

9、本发明的方法实现了水产品中多种添加剂的同时检测，有效降低了测试成本。

附图说明

图1为丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐的标准色谱图，其中1-丙酸盐、2-正磷酸盐、3-柠檬酸盐、4-焦磷酸盐、5-三聚磷酸盐、6-三偏磷酸盐；

图2为丙酸盐、柠檬酸盐、正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐与常见阴离子色谱图，其中1-Cl^-，2-丙酸根离子，3-Br^-，4-F^-，5-NO^3-，6-SO₄ ^2-，7-PO₄ ^3-，8-柠檬酸根离子，9-P₂O₇ ^4-，10-P₃O₁₀ ^5-，11-P₃O₉ ^3-；

图3为实施例1中空白样品离子色谱图，其中1-正磷酸根；

图4为实施例1中样品加标离子色谱图，其中1-丙酸盐、2-正磷酸盐、3-柠檬酸盐、4-焦磷酸盐、5-三聚磷酸盐、6-三偏磷酸盐；

图5为实施例3中实际样品测定离子色谱图，其中1-正磷酸盐、2-柠檬酸盐、3-焦磷酸盐、4-三聚磷酸盐。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。

实施例1离子色谱法同时测定蟹肉中丙酸盐、柠檬酸和多聚磷酸盐

1、样品前处理：

将待测的蟹肉样品充分混匀并搅碎，装入容器内，密封、冷藏（-18℃）备用；

2、快速超声辅助萃取(UAE)：

称取经组织捣碎后的样品5g（精确到0.1g）于150mL锥形瓶中，加50mL去离子水，均质后加入0.2mol/LNaOH溶液0.5mL，混匀置超声波震荡器中超声30min,每5min振摇一次，以保持固相完全分散。然后以7000r/min离心10min，过滤，取滤液20mL，加3mL20%三氟乙酸溶液混合，放入0-4℃冰箱中保存30分钟，再在8000rpm的离心机中离心10分钟。

3、固相萃取（SPE）：

取SPE固相萃取C₁₈柱和OnguardΠAg柱，将两者串联，先用5mL甲醇进行活化后用15mL高纯水进行清洗，流速小于3mL／min。取步骤2中离心后的样品，过滤后，将滤液以小于3mL／min的流速过垂直放置的SPE-C₁₈和OnguardΠAg串联柱，弃去前3mL流出液，取流出液过OnguardΠAg柱，取0.5mL用去离子水定容至5mL，于自动进样器进样瓶中上机待测。

4、离子色谱分析：

离子色谱条件：分离柱：IonPac AS11-HC；保护柱IonPac AG11-HC；淋洗液：KOH溶液梯度淋洗，流速1.0mL/min；抑制器：AMMS-ICE300(4mm)抑制器，自动抑制模式自动抑制模式，抑制电流200mA；检测器：抑制型电导检测器；进样量：30μL；柱温：

30℃（样品为步骤3得到的水溶液）；以保留时间定性，峰面积定量。

步骤e中的淋洗液梯度程序具体为：0-10min内，浓度为2.5mM/L，之后在0.5min内将浓度升高至25mM/L保持4.5min，15-25min之间将浓度从25mM/L升至55mM/L，保持7min，再在1min内将浓度调整并稳定在25mM/L，保持2min，对色谱柱进行冲洗，

在35min时，结束整个检测流程。淋洗液梯度程序具体见表1。

表1梯度洗脱程序

5、标准曲线的制备，配置一系列浓度的丙酸、柠檬酸和多聚磷酸盐混合标准溶液，在最佳实验条件下制作标准曲线，以目标化合物浓度为横坐标，标准品峰面积响应值为纵坐标，绘制标准曲线。按照④离子色谱条件测定，得到待测物质的线性回归方程及相关系数（见表2）。式中X表示离子响应值峰面积，Y表示相应的物质浓度。标准溶液与阴离子色谱图见图1和图2。

表2丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐的线性关系、检出限、工作曲线方程

注：多聚磷酸盐以五氧化二磷计

6、回收率实验：精密称取蟹肉样品5.0g，定量加入不同浓度标准品，测定不同水平的加标回收率。回收率=样品实测浓度/样品理论浓度×100%。结果表明，平均回收率在78.8%～93.7%（见表3），相对标准偏差（n=6）在6.5%以下，符合定量分析的要求。空白样品色谱图和加标样品色谱图分别见图3和图4。检出限以3倍信噪比(S/N)计算（见表2），能满足食品安全的检测需要。

表3不同加标量下的回收率（％）

上述实验结果证明，本方法针对丙酸、柠檬酸和多聚磷酸盐的检测，在相对应的浓度范围内线性良好，相关系数均在在0.999以上，加标的平均回收率在78.8%以上。本方法有较好的回收率和提取效率，且可同时检测多种物质，可减少检测成本。

实施例2离子色谱法同时测定干制品中丙酸盐、柠檬酸和多聚磷酸盐

具体方案同实施例1，不同之处是：称取样品量为2.5g（精确到0.1g）。根据测定结果，平均加标回收率在76.1%以上，符合检测要求。

实施例3利用离子色谱法监控水产品中丙酸盐、柠檬酸和多聚磷酸盐的含量

样品来源于水产品加工厂和流通市场随机购买，共10批样，所用仪器与试剂如前所述。

样品前处理方法、离子色谱参数及标准曲线的制备同实施例1。

未加工处理过的蟹肉其只含正磷酸盐，且正磷酸盐在水产品中含量较低，因此每批样品均采用同一蟹肉样品控制（只含正磷酸盐）和样品添加回收测定进行质量控制和保证。精密称取蟹肉样品5.0g，加入50mL去离子水，均质后定量加入标准品，混匀后样品同时前处理和上机。

实际样品测定离子色谱图见图3。结果表明：随阴性控制样品检测结果均只含正磷酸盐，其余几种待测物质均为阴性，加标回收率范围77.1％-87.3％，符合方法要求。对来源于水产品加工厂和流通市场随机购买的10份各类水产品的检测结果表明，10份样品中均不含丙酸，其中2份样品中含有柠檬酸，另外3份样品中只含有正磷酸盐，其余7份样品中均不同程度含有焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐，其中一个样品中焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐含量的总和（以五氧化二磷计）超过5g/kg。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些改进和变化都落入要求保护的本发明范围内。

Claims

1.一种水产品中丙酸盐、柠檬酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

d、串联式固相萃取：将蛋白质沉淀后的样品离心，过滤后对滤液采用C18柱和Onguard Π Ag柱进行串联式固相萃取，将过柱液经尼龙滤膜过滤后收集于5mL自动进样器样品瓶中，供离子色谱仪测定；

e、三级梯度淋洗离子色谱分析；色谱条件为：色谱柱：分离柱：IonPac AS11－HC；保护柱IonPac AG11－HC；淋洗液： KOH溶液，流速1.0 mL/min； AMMS-ICE 300 膜厚4mm抑制器自动抑制模式，抑制电流200 mA，抑制型电导检测器检测；柱温：30.0℃；进样量：30.0μL；外接水模式；以保留时间定性，峰面积定量；

淋洗液梯度程序具体为： 0-10min内，浓度为2.5mM，之后在0.5min内将浓度升高至25mM保持4.5min，15-25min之间将浓度从25mM升至55mM，保持7min，再在1min内将浓度调整并稳定在25mM，保持2min，对色谱柱进行冲洗，在35min时，结束整个检测流程；

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤b中快速超声辅助提取的条件为：样品经均质后，超声波振荡提取30min，每5min振摇一次。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤b中加入的碱溶液是浓度为0.2mol/L NaOH溶液0.5mL。

4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：三氟乙酸溶液的体积浓度为20%。

5.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：固相萃取C₁₈柱上样前，用5mL甲醇进行活化后15mL高纯水进行清洗，流速小于3mL／min，样品过柱时前处理柱保持垂直；固相萃取Onguard Π Ag前处理净化柱上样前，用10mL去离子水活化后，流速小于3ml／min，弃去前3 ml，取中间液2~3 ml，定容后上机检测。