CN104004060A - Cyclin D蛋白抑制剂多肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制Cyclin D蛋白表达，治疗套细胞淋巴瘤的多肽。其序列为QAQQNMDPKAAEEEEEE是全新的序列，该多肽可体外抑制套细胞淋巴瘤细胞Mino细胞增殖，治疗套细胞淋巴瘤；在体荷瘤模型实验中，抑制Cyclin D蛋白表达，增加了小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

Description

Cyclin D蛋白抑制剂多肽及其应用

技术领域

本发明涉及Cyclin D 蛋白抑制剂多肽2及其应用，具体涉及具有抑制Cyclin D 蛋白表达，治疗套细胞淋巴瘤的多肽。

背景技术

套细胞淋巴瘤（MCL）是一种以t（11；14）（q13；q32）和cyclin D1 过度表达为特征的B细胞性非霍奇金淋巴瘤， 属于中度恶性的淋巴瘤，长期生存率很低。常见于老年人，以男性居多，中位年龄60 岁。MCL 容易复发，是远期生存率最低的淋巴瘤亚型，中位生存期为3～5 年。临床表现为侵袭性，病情进展较快，多有广泛淋巴结累及，结外病变常见，肝、脾、外周血及骨髓多有浸润，常伴多发性胃肠道累及和神经系统浸润，80%～90%的患者确诊时为Ann Arbor Ⅲ～Ⅳ期。目前治疗以化疗或合并干细胞移植为主，虽然不同程度地提高了MCL 患者的CR率，但仍然不能提高患者的长期生存率。目前生物靶向治疗肿瘤是非常有前景的，靶向治疗是针对肿瘤发生过程中阻断某个或多个信号通路，达到治疗肿瘤的目的。

Cyclin蛋白作为“检查点”守卫者控制着细胞的休息、生长和分裂的周期。其中，Cyclin D是控制着细胞的生长周期重要靶点。Cyclin D决定了细胞何时开始生成DNA，为分裂形成新细胞做准备。在许多类型的癌症中Cyclin D异常高表达，刺激细胞过快生长形成肿瘤。研究发现，阻断cyclin D1蛋白可驱使乳腺癌细胞进入衰老状态，不可逆地终止它们的生长周期。在T-ALL白血病小鼠中抑制Cyclin D可引起癌细胞自毁（一个称作凋亡的程序性死亡过程）。因此，抑制Cyclin D 蛋白表达，抑制套细胞淋巴瘤发展，是治疗套细胞淋巴瘤的新靶点。但是，尚未有开发成熟的Cyclin D 蛋白抑制剂多肽的治疗套细胞淋巴瘤的药物

本专利中的Cyclin D蛋白抑制剂多肽2已证明在套细胞淋巴瘤中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。

 

发明内容

发明目的

    本发明提供全新的序列，该序列抑制Cyclin D 蛋白表达，对治疗套细胞淋巴瘤具有很好的疗效。

技术方案

       Cyclin D 蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为QAQQNMDPKAAEEEEEE。

包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

所述组合物为注射剂。

所述的Cyclin D 蛋白抑制剂多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。

Cyclin D 蛋白抑制剂多肽在治疗套细胞淋巴瘤药物中的应用。

有益效果

Cyclin D 蛋白抑制剂多肽2，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外抑制套细胞淋巴瘤细胞Mino细胞增殖，治疗套细胞淋巴瘤；在体荷瘤模型实验中，抑制Cyclin D 蛋白表达，增加了小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

具体实施方式

本发明涉及多肽由吉尔生化（上海）合成。

实施例1

Cyclin D 蛋白抑制剂多肽2人套细胞淋巴瘤细胞Mino增殖的作用。

采用MTT 比色法。将对数生长的Mino细胞，以 1.0×105加入 96 孔培养板中，培养 24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物Cyclin D 蛋白抑制剂多肽2和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养 48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。对Mino的最大增殖抑制率为70.29%。

表1整合素阻断剂多肽对Mino细胞增殖抑制作用

实施例2

Cyclin D 蛋白抑制剂多肽对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

取对数生长期的人套细胞淋巴瘤细胞Mino细胞株，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。试验结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。

表1多肽对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表1，紫杉醇10mg/kg组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤的抑瘤率为72.12%；恩度2.5mg/kg组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤的抑瘤率为34.45%；多肽高、中、低剂量组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达76.16%，74.26%，68.72%。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应，存活率提高。

实施例3

用肿瘤模型检测Cyclin D 蛋白抑制剂多肽2对肿瘤中Cyclin D蛋白表达的影响。

取实施例2的肿瘤组织进行Cyclin D蛋白免疫结果实验，采用Motic Images Advanced 3.2图像分析仪，在200倍镜下连续观察5个视野检测，测量灰度值，以灰度值表示Cyclin D蛋白阳性表达的高低，灰度值越小，说明Cyclin D蛋白阳性表达越低；灰度值越大，说明Cyclin D蛋白阳性表达越高。结果，Cyclin D蛋白抑制剂多肽具有抑制肿瘤Cyclin D蛋白表达的作用。

                         SEQUENCE LISTING

 

<110>  苏州普罗达生物科技有限公司

 

<120>  Cyclin D 蛋白抑制剂多肽及其应用

 

<130> 

 

<160>  1    

 

<170>  PatentIn version 3.3

 

<210>  1

<211>  17

<212>  PRT

<213>  人工序列

 

<400>  1

 

Gln Ala Gln Gln Asn Met Asp Pro Lys Ala Ala Glu Glu Glu Glu Glu

1               5                   10                  15     

 

 

Glu

   

Claims (5)

1.Cyclin D 蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为QAQQNMDPKAAEEEEEE。

2.一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。

4.如权利要求1所述的Cyclin D 蛋白抑制剂多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。

5.如权利要求1所述的Cyclin D 蛋白抑制剂多肽在治疗套细胞淋巴瘤药物中的应用。