CN103993054B - 一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法 - Google Patents
一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103993054B CN103993054B CN201410212066.7A CN201410212066A CN103993054B CN 103993054 B CN103993054 B CN 103993054B CN 201410212066 A CN201410212066 A CN 201410212066A CN 103993054 B CN103993054 B CN 103993054B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- enzyme
- liquid
- lactose
- beta
- coordinate system
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 40
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 40
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 33
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 21
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 27
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims description 11
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 abstract description 25
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 25
- 101710168454 Beta-galactosidase A Proteins 0.000 abstract description 9
- 101710084887 Beta-glucosidase B Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 125000002519 galactosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002918 waste heat Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,将乳糖加水加热溶解,调节pH值在4.5-7.0;向乳糖溶液加入β-半乳糖苷酶A和β-葡萄糖苷酶B,先在50~70℃下转化10~30min,然后在35~55℃条件下保持4~24h;灭酶活,冷却至室温,向灭酶后糖液中加入耐高渗酿酒酵母35℃条件下反应12~24h;产物脱色、离子交换、浓缩、喷雾干燥得高纯度低聚半乳糖。本发明同时加入两种酶产低聚半乳糖纯度显著提高低聚半乳糖的含量,降低乳糖含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种低聚半乳糖的制备方法,具体地说,尤其涉及一种利用酶协同转化乳糖制备高纯度低聚半乳糖的方法。
背景技术
低聚半乳糖(Galactooligosaccharides,GOS)是一种具有天然属性的功能性多聚糖,其分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1~7个半乳糖基,即Gal-(Gal)n-Glc/Gal(n为0~6)。在自然界中,动物的乳汁中存在微量的GOS,而人母乳中含量较多,婴儿体内的双歧杆菌菌群的建立很大程度上依赖母乳中的GOS成分。低聚半乳糖具有专一促进肠道双歧杆菌增殖、难消化和低能量、减少和防止便秘、低龋齿性、改善矿物质吸收、脂质代谢、增强免疫力等功效。另外,低聚半乳糖是一种低分子量的水溶性膳食纤维,黏度低,水溶性好;热值低;对酸和热都有很强的稳定性,使低聚半乳糖成为一种非常优质的食品工业和饮料加工的添加剂,市场前景广阔。
目前国内研究得到的β-半乳糖苷酶转化乳糖效果不好,转化后低聚半乳糖纯度约为35%-45%,特别是乳糖含量较高达30%左右,造成直接转化的低聚半乳糖不符合新资源食品标准。在此基础上要想获得高纯度的低聚半乳糖产品,需要引入色谱分离设备,分离出糖液中的低聚半乳糖成分,制成符合标准的产品。低聚半乳糖是通过β-半乳糖苷酶的水解作用和转糖苷作用协同转化而成的,但是单一酶的两种作用协同效果不好,不能充分转化乳糖,造成原料浪费,低聚半乳糖纯度低。目前国内外尚未有酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法报道。
发明内容
本发明的目的是克服上述不足而提供一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,从而解决目前低聚半乳糖纯度普遍较低,高纯度低聚半乳糖制备成本高的问题。
为了解决上述问题本发明所采用的技术方案是:
一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,包括步骤如下:
(1)将乳糖加水加热溶解,调节pH值在4.5-7.0;
(2)向乳糖溶液加入β-半乳糖苷酶A和β-葡萄糖苷酶B,β-半乳糖苷酶A与β-葡萄糖苷酶B的酶活力控制在1~50:1,先在50~70℃下转化10~30min,然后在35-55℃条件下保持4-24h;
(3)灭酶活,冷却至室温;
(4)耐高渗酿酒酵母的制备:取少量灭酶后糖液,经稀释后接入安琪耐高温酵母培养,然后转入高浓度糖液中培养制备成耐高渗酵母;
(5)向剩余灭酶后糖液中加入耐高渗酿酒酵母30~40℃条件下反应12-48h;
(6)产物脱色、离子交换、浓缩、喷雾干燥得高纯度低聚半乳糖。
上述方法中步骤(1)乳糖质量浓度控制在30%-60%。调节pH值用盐酸或氢氧化钠。
步骤(2)中β-半乳糖苷酶A的加入量与乳糖溶液质量的比例为1~20U/g,β-葡萄糖苷酶B的加入量与乳糖溶液的比例为0.2~20U/g。A酶和B酶不分先后,优先选择先加0.2~20U/g的β-葡萄糖苷酶B,50~70℃转化10~30min,然后加入1~20U/g(乳糖溶液质量)β-半乳糖苷酶A于35~55℃条件下保持4~24h,有利于乳糖水解作用,有利于β-半乳糖酶的转苷作用。
步骤(4)所述的耐高渗酿酒酵母的具体制备方法为:取少量灭酶后糖液,按照1:2体积比分为两份I液和II液,将I液稀释1倍(糖浓度为15~20%),接入稀释后I液质量0.2%~1%的安琪耐高温酵母,32℃培养2~6h后,按照1%~50%的接种量转入II液中,34~37℃培养6~8h。
步骤(5)所述耐高渗酿酒酵母的加入量为剩余灭酶后糖液质量的0.1%~10%。
步骤(6)中添加活性炭进行脱色,活性炭添加量为干物质量的1.5~2.5‰,脱色温度为70-80℃,时间控制在15~60min。所述的浓缩为用MVR蒸发器蒸发后糖液固形物控制在40~60%,然后通过三效蒸发余热浓缩至75~85%。喷雾干燥采用75~85%的低聚半乳糖糖液进料,进风温度为80-130℃,出风温度控制为90-100℃。
本发明的特点为:
(1)采用β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶双酶协同转化乳糖的方法,转化后低聚半乳糖的纯度即达到65%以上。与传统工艺中低聚半乳糖45%的纯度相比,本发明使低聚半乳糖纯度大幅度提高。
(2)通过一步法驯化实现商用酵母的高耐受性,转化后糖液可以直接加入耐高渗酵母发酵比直接普通酿酒酵母需要稀释糖液降低固形物含量,再通过蒸发浓缩除去多于的水分,单糖去除率高。
具体实施方式
通过下面给出本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明。但是它们不是对本发明的限定。
实施例1
称50g乳糖加入50g水配置成50%的乳糖溶液100g,用碱调节糖液pH值5.0;加入用量为20U/g的β-葡萄糖苷酶B和20U/g的β-半乳糖苷酶A,β-半乳糖苷酶A与β-葡萄糖苷酶B的酶活比例为1:1;先于65℃条件下保持10min,45℃转化4h,低聚半乳糖62.53%、乳糖2.03%、半乳糖9.11%、葡萄糖26.33%。100℃水浴5min,灭酶后,取5g糖液,分为I液、II液,I液取1g,加水稀释1倍为2g(此时糖浓度约20%),接入0.01g酵母干粉,34℃活化2h,然后转接至4g的II液中培养6h后直接转入剩余糖液中,发酵48h,发酵后糖液成分为低聚半乳糖91.45%、乳糖3.0%、半乳糖5.05%、葡萄糖0.5%。脱色:向发酵后糖液中添加活性炭进行脱色,脱色温度为75℃,活性炭添加量为2.0kg/t干物,脱色时间控制在30min。
过滤:脱色后糖液经过板框过滤,滤液备用。
离子交换:将滤液通过树脂进行离子交换降低糖液电导率。滤液固形物控制在25%、温度为45℃。
浓缩:经过MVR蒸发器蒸发浓缩,浓缩后糖液固形物控制在60%。
喷雾干燥:将浓缩后的60%低聚半乳糖产品经过喷雾干燥制得高纯度低聚半乳糖粉。其中进风温度为80℃,出风温度控制为100℃。
实施例2
水溶解乳糖,加热溶解使乳糖质量浓度控制在60%,用盐酸或氢氧化钠调节糖液pH5.5;加入用量为8U/g的β-半乳糖苷酶A和6U/g的β-葡萄糖苷酶B,β-半乳糖苷酶A与β-半乳糖苷酶B的酶活力比例控制在1.33:1;于50℃条件下保持15min,降温至45℃转化6h。转化后,糖液成分为:低聚半乳糖55.96%,乳糖9.15%,半乳糖7.31%,葡萄糖29.15%。
灭酶:100℃水浴10min,冷却至室温。
耐高渗酿酒酵母制备:取灭酶糖液5g,分为I液、II液,I液取2g,稀释1.5倍为5g(糖浓度约20%),接入0.05g酵母干粉,32℃条件下发酵4h后,取0.4g直接4gII液中发酵6h后直接转入剩余糖液中发酵26h。发酵后糖液成分为低聚半乳糖70.27%、乳糖17.01%、半乳糖5.05%、葡萄糖0.3%。
脱色:向发酵后糖液中添加活性炭进行脱色,脱色温度为80℃,活性炭添加量为2.5kg/t干物,脱色时间控制在60min。
过滤:脱色后糖液经过板框过滤,滤液备用。
离子交换:将滤液通过树脂进行离子交换降低糖液电导率。滤液固形物控制在20%、温度为42℃。
浓缩:经过MVR蒸发器蒸发浓缩,浓缩后糖液固形物控制65%。
喷雾干燥:将MVR浓缩后的65wt%低聚半乳糖产品经过喷雾干燥制得符合新资源食品标准的低聚半乳糖粉。其中进风温度为120℃,出风温度控制为100℃。
实施例3
称30g乳糖加入70g水配置成30%的乳糖溶液100g,用盐酸调节糖液pH值在5.0;按照乳糖质量加入用量为20.0U/g的β-半乳糖苷酶A和0.4U/g的β-半乳糖苷酶B,β-半乳糖苷酶A与β-半乳糖苷酶B的酶活比例控制在50:1;于55℃条件下保持15min,然后降温至40℃转化8h,煮沸5min灭酶。取5mL糖液,分为I液、II液,I液取1g,稀释1倍为2g(糖浓度约15%),接入0.004g酵母干粉,34℃活化4h,然后转接至4g的II液中培养6h后直接转入剩余转化液中,发酵16h,转化与发酵结果见表一。
表一β-半乳糖苷酶单独转化与实施例3协同转化效果比较结果
对比例1
直接转化:称30g乳糖加入70g水配置成30%的乳糖溶液,用盐酸调节糖液pH值在5.0;按照乳糖质量加入用量为20.0U/g的β-半乳糖苷酶A40℃转化8h,煮沸5min灭酶。取5mL糖液,分为I液、II液,I液取1mL,稀释1倍为2mL,接入0.02g酵母干粉,34℃活化4h,然后转接至4mL的II液中培养6h后直接转入剩余转化液中,发酵16h,转化与发酵结果见表一。
Claims (6)
1.一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,其特征是,包括步骤如下:
(1)将乳糖加水加热溶解,调节pH值在4.5-7.0;
(2)向乳糖溶液加入β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶,β-半乳糖苷酶与β-葡萄糖苷酶的酶活力控制在1~50:1,先在50~70℃下转化10~30min,然后在35~55℃条件下保持4~24h;
(3)灭酶活,冷却至室温;
(4)耐高渗酿酒酵母的制备:取少量灭酶后糖液,接入安琪耐高温酵母培养;
(5)向剩余灭酶后糖液中加入耐高渗酿酒酵母30~40℃条件下反应12~48h;
(6)产物脱色、离子交换、浓缩、喷雾干燥得高纯度低聚半乳糖。
2.根据权利要求1所述的一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,其特征是,步骤(1)乳糖质量浓度控制在30%~60%。
3.根据权利要求1所述的一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,其特征是,β-半乳糖苷酶的加入量与乳糖溶液的比例为1~20U/g,β-葡萄糖苷酶的加入量与乳糖溶液的比例为0.2-20U/g。
4.根据权利要求1所述的一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,其特征是,步骤(2)为加β-葡萄糖苷酶,50~70℃转化10~30min,然后加入β-半乳糖苷酶于35-55℃条件下保持4~24h。
5.根据权利要求1所述的一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,其特征是,步骤(4)所述的耐高渗酿酒酵母的具体制备方法为:取少量灭酶后糖液,按照1:2体积比分为两份-I液和II液,将I液稀释1倍,接入稀释后I液质量0.2%~1%的安琪耐高温酵母,32℃培养2~6h后转入II液中,34~37℃培养6~8h。
6.根据权利要求1所述的一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法,其特征是,步骤(5)所述耐高渗酿酒酵母的加入量为剩余灭酶后糖液质量的0.1%~10%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410212066.7A CN103993054B (zh) | 2014-05-19 | 2014-05-19 | 一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410212066.7A CN103993054B (zh) | 2014-05-19 | 2014-05-19 | 一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103993054A CN103993054A (zh) | 2014-08-20 |
CN103993054B true CN103993054B (zh) | 2016-05-25 |
Family
ID=51307384
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410212066.7A Active CN103993054B (zh) | 2014-05-19 | 2014-05-19 | 一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103993054B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017120678A1 (en) * | 2016-01-12 | 2017-07-20 | Vitalus Nutrition Inc. | Method for producing galactooligosaccharides from lactose |
CN107354187A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-11-17 | 中国水产舟山海洋渔业公司 | 一种低灰分壳低聚糖的制备方法 |
CN109880813B (zh) * | 2019-03-20 | 2022-06-07 | 安徽大学 | 一种具有低聚半乳糖合成能力的β-葡萄糖苷酶及其表达菌株和应用 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102268421B (zh) * | 2011-08-03 | 2012-12-12 | 山西恩泽生物技术有限公司 | 一种β-葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及应用 |
-
2014
- 2014-05-19 CN CN201410212066.7A patent/CN103993054B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103993054A (zh) | 2014-08-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103609852B (zh) | 茶饲料及制备方法 | |
CN104531435B (zh) | 酒精处理-复合抑制剂法益生菌活菌格瓦斯制造方法 | |
CN104522803B (zh) | 一种苦荞胚芽、燕麦胚芽复合发酵饮料及其制备方法 | |
CN101756315B (zh) | 一种纯山药饮品及其制备方法 | |
CN103993054B (zh) | 一种酶协同制备高纯度低聚半乳糖的方法 | |
CN102940039B (zh) | 一种龙眼乳酸菌发酵饮料的制作方法 | |
CN103989038B (zh) | 条状仙草冻 | |
CN105219586A (zh) | 一种发酵型格瓦斯饮料及其制备方法 | |
CN103989039B (zh) | 仙草冻 | |
CN105285645A (zh) | 一种胶原蛋白香醋醋饮料及其制备方法 | |
CN105031289A (zh) | 一种铁皮石斛灵芝胶囊及其制备方法 | |
CN103960736A (zh) | 一种香菇多糖饮料及其制备方法 | |
CN103478411B (zh) | 一种黄姜淀粉益生菌活性饲料及其制备方法 | |
CN105647775A (zh) | 一种低聚甘露糖桑葚醋 | |
KR20120019988A (ko) | 흑마늘과 발효홍삼을 포함하는 음료 조성물 및 그 제조방법 | |
CN110106051A (zh) | 一种山药保健酒及其制备方法 | |
CN102796784B (zh) | 利用小麦淀粉制备抗性淀粉的方法 | |
CN104531804A (zh) | 一种结晶海藻糖联产保湿糖浆的生产方法 | |
CN104263628A (zh) | 一种以大米和甘蔗加工余料为原料发酵制备霍山石斛醋的方法 | |
CN106579416A (zh) | 一种具有改善肠胃功能的多糖多酚组合物及其制备方法 | |
CN106591080A (zh) | 一种抗氧化微胶囊食醋及其制备方法 | |
CN105602820B (zh) | 一种低聚甘露糖燕麦醋及其制备方法 | |
CN105820919A (zh) | 一种具有玉米味的嫩玉米蓝莓保健酒以及制备方法 | |
KR20170061344A (ko) | 발아 흑미 식초 및 그 제조방법 | |
CN105410584A (zh) | 一种清伙灵植物固体饮料及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
PP01 | Preservation of patent right | ||
PP01 | Preservation of patent right |
Effective date of registration: 20180312 Granted publication date: 20160525 |
|
PD01 | Discharge of preservation of patent |
Date of cancellation: 20210312 Granted publication date: 20160525 |
|
PD01 | Discharge of preservation of patent | ||
PP01 | Preservation of patent right |
Effective date of registration: 20210312 Granted publication date: 20160525 |
|
PP01 | Preservation of patent right | ||
PD01 | Discharge of preservation of patent |
Date of cancellation: 20230307 Granted publication date: 20160525 |
|
PD01 | Discharge of preservation of patent |