CN103975074A - 一种用于测定亚精胺/精胺n1-乙酰基转移酶活性的方法 - Google Patents
一种用于测定亚精胺/精胺n1-乙酰基转移酶活性的方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种用于测定亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,该方法是利用SSAT的底物,通过检测其乙酰化形式来测定SSAT的活性。SSAT的底物可能包括金刚乙胺和妥卡尼,其中它们分别产生乙酰化代谢产物N-乙酰基金刚乙胺和N-乙酰基妥卡尼的代谢的发生在一定程度上由可诱导的酶SSAT的行为引起。SSAT的活性可能与病理状况相关。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求在美国专利商标局2012年11月16日提交的临时申请的权益,其公开的内容通过引用的方式并入本申请,并且本申请要求该专利的优先权。
背景技术
技术领域
美国专利号6,811,967于2004年11月4日颁发给SITAR等人,其全部公开的内容通过引用合并于此。该专利公开了一种利用亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)的底物,通过检测SSAT底物的乙酰化形式来测定SSAT的活性的方法。SSAT的底物可能包括金刚胺,其中金刚胺产生乙酰化代谢产物N-乙酰基金刚胺的代谢的发生在一定程度上由可诱导的酶SSAT的行为引起。还公开了SSAT的活性与病理状况的相关性。
SSAT普遍分布在哺乳动物组织中,并在细胞中聚胺的分解代谢和消除中起作用。SSAT是一种催化乙酰基从乙酰辅酶A转移到聚胺的氨丙基部分的诱导酶。SSAT的这一行为促进了聚胺的降解、排泄以及循环和/或细胞内循环。SSAT以这种方式参与维持哺乳动物细胞内聚胺的动态平衡。然而,在正常的或未经诱导的哺乳动物组织中SSAT以非常低的水平存在。
可以通过不同的药物、生长因子、聚胺、聚胺类似物、有毒物质、激素和生理刺激诱导SSAT的表达。虽然所有上述化合物可以诱导SSAT的表达,但是对于每个单独的化合物,诱导发生的时间不同。SSAT表达的调节在转录、mRNA稳定、mRNA翻译和蛋白质稳定的水平发生。体外实验能成功地进行前,为使细胞中存在足够的SSAT酶通常需要SSAT的诱导或过表达或有100,000×g离心的上清液。
目前的文献教导SSAT是一种对包括精胺和亚精胺或其类似物在内的底物特异性乙酰化酶,然而SSAT作用于非精胺/亚精胺底物的SSAT活性、SSAT的酶动力学以及测定方法还是没有被理解。现有量化SSAT活性的方法。然而,这些技术都依赖于技术高度熟练的人员和复杂的实验方法。更具体地说,一直存在对一种测定方法的需求,这种测定方法通过检测SSAT的非精胺/亚精胺底物的乙酰化形式来量化SSAT的活性,该方法可用于检测各种病理状况。
发明内容
本发明提供一种确定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:测定来自哺乳动物的样本中一种非精胺/亚精胺或其类似物、SSAT底物的乙酰化形式的水平。
在该方法的第一个实施例中,SSAT底物是金刚乙胺,SSAT底物的乙酰化形式是乙酰基-金刚乙胺。该方法可以包括在1-10mg/kg,或者可选择地在3-6mg/kg范围内的特定SSAT底物剂量水平,将SSAT底物和哺乳动物的组织或细胞一起孵育。供测定的样本可以是来自于哺乳动物的尿液、血液和/或唾液,样本在底物孵育后的2-24小时采集,可选择地在孵育后的2-4小时。
在该方法的第二个实施例中,SSAT底物是妥卡尼,SSAT底物的乙酰化形式是乙酰基-妥卡尼。该方法可以包括在1-10mg/kg,或者可选择地在3-6mg/kg范围的内的特定SSAT底物剂量水平,将SSAT底物和哺乳动物的组织或细胞一起孵育。供测定的样本可以是来自于哺乳动物的尿液、血液和/或唾液,样本在底物孵育后的2-24小时采集,可选择地在孵育后的2-4小时。
在该方法的第三个实施例中,SSAT的活性在肝细胞中检测,所述方法包括以下步骤:
a.获得肝细胞并在合适的培养物中孵育该肝细胞;以及
b.用一种非精胺/亚精胺SSAT底物孵育该肝细胞;
c.检测从该培养物中获得的样本中的一种乙酰化代谢产物;以及
d.将该乙酰化代谢产物的存在量与SSAT活性相关联,其中该样本中的乙酰化代谢产物的存在量是哺乳动物体内SSAT活性的表征。
药物可以是0-220μΜ浓度范围内的金刚乙胺。将该乙酰化代谢产物的存在量与SSAT活性相关联的步骤包括将该乙酰化代谢产物的量关联至一条标准曲线来确定在哺乳动物体内的SSAT活性水平。
在该方法的第四个实施例中,SSAT活性在哺乳动物的细胞内测定。SSAT底物是金刚乙胺,SSAT底物的乙酰化形式是乙酰基-金刚乙胺。该方法包括以下步骤:
a.将从细胞培养物中获得的测试样本与金刚乙胺接触;
b.测量产生的乙酰化代谢产物的量;以及
c.将产生的乙酰化代谢产物的量与SSAT的活性水平相关联。
该细胞培养物可以是哺乳动物细胞培养物,测试样本可以是肝细胞。将从细胞培养物中获得的测试样本与药物接触的步骤可以包括用底物孵育样本大约24小时。
在该方法的第五个实施例中,SSAT活性在哺乳动物中检测。该方法包括以下步骤:
a.向哺乳动物体内引入金刚乙胺
b.采集来自哺乳动物的生物体液样本
c.检测该样本中的一种乙酰化代谢产物;以及
d.将该乙酰化代谢产物的存在量与SSAT活性相关联,其中该样本中的乙酰化代谢产物的存在量是哺乳动物中SSAT活性的表征。
该生物体液样本可以是,但不限于,血液、唾液和尿液。
在该方法的第六个实施例中,SSAT活性在哺乳动物中检测。该方法包括以下步骤:
a.向哺乳动物体内引入金刚乙胺
b.采集来自哺乳动物的生物体液样本
c.检测该样本中的一种乙酰化代谢产物;以及
d.将该乙酰化代谢产物的存在量与SSAT活性相关联,其中该样本中的乙酰化代谢产物的存在水平是哺乳动物体内的癌细胞的表征。
该生物体液样本可以是,但不限于,血液、唾液和尿液。
在该方法的各实施例中,样本中非精胺/亚精胺底物的相对水平可以被关联至一条代表已知活性水平的标准曲线,并且可以通过多种技术测定,包括但不限于气相色谱、放射性标记、高压液相色谱(HPLC)、薄层色谱;质谱可以和具有特异性抗体或多种抗体的色谱以及亲和色谱联用。
本文中公开的测定方法可用于将SSAT活性与哺乳动物体内的病理状况相关联,病理状况包括但不限于肺癌、胃癌、卵巢癌、急性髓细胞性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肾癌、结直肠癌和/或前列腺癌。
附图说明
通过以下给出的对具体实施方式的描述,仅以实施例的方式,并参照附图,本发明将更容易理解,其中:
图1的表格显示了可接种的冻存原代大鼠肝细胞中SSAT介导的金刚胺、金刚乙胺、妥卡尼和亚精胺的N-乙酰化的参数(Km和Vmax);
图2的表格显示了金刚胺被SSAT N-乙酰化的酶动力学数据;
图3的表格显示了金刚乙胺被SSAT N-乙酰化的酶动力学数据;
图4的表格显示了妥卡尼被SSAT N-乙酰化的酶动力学数据;
图5的表格显示了亚精胺被SSAT N-乙酰化的酶动力学数据;
图6的表格显示了预实验中(二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-溴代四唑或MTT法测定的结果;
图7的表格显示了验证实验中MTT法测定的结果;
图8显示了金刚胺被SSAT N-乙酰化的代谢产物的形成和Lineweaver-Burk曲线图;
图9显示了金刚乙胺被SSAT N-乙酰化的代谢产物的形成和Lineweaver-Burk曲线图;
图10显示了妥卡尼被SSAT N-乙酰化的代谢产物的形成和Lineweaver-Burk曲线图;
图11显示了亚精胺被SSAT N-乙酰化的代谢产物的形成和Lineweaver-Burk曲线图;
图12显示了预实验中一次MTT测定的结果;
图13显示了验证实验中一次MTT测定的结果;
图14显示了定量孵育样本中N-乙酰金刚胺的代表性LC/MS/MS测定校准标准曲线;
图15显示了定量孵育样本中N-乙酰金刚乙胺的代表性LC/MS/MS测定校准标准曲线;
图16显示了定量孵育样本中N-乙酰妥卡尼的代表性LC/MS/MS测定校准标准曲线;
图17显示了定量孵育样本中N-乙酰亚精胺的代表性LC/MS/MS测定校准标准曲线;
图18显示了孵育样本中N-乙酰金刚胺的代表性LC/MS/MS色谱图;
图19显示了孵育样本中N-乙酰金刚乙胺的代表性LC/MS/MS色谱图;
图20显示了孵育样本中N-乙酰妥卡尼的代表性LC/MS/MS色谱图;
图21显示了孵育样本中N-乙酰亚精胺的代表性LC/MS/MS色谱图;
图22是一个流程图,它显示了一种利用本文所公开的测定SSAT的方法的诊断方法。
具体实施方式
本文描述了一种用于在体外和体内模型中测定亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法。
SSAT是聚胺代谢中的重要酶。SSAT被高度调节,已被提出其在调节肿瘤生长、肥胖、应激反应和氧平衡中起作用。SSAT利用N1–乙酰精胺作为底物形成N1,N12-二乙酰精胺。在体内,SSAT是一种胞质酶,而N1–乙酰精胺相对于精胺是首选的底物,虽然精胺的Km值实际上比N1–乙酰精胺的低。除了SSAT,芳基胺N-乙酰基转移酶(NATs)也是药物和含有芳香胺和肼基团的外源性化学物质的N-乙酰化中重要的胞质酶。在人类中,已经鉴定了两种功能性NAT的同工酶(NAT1和NAT2)以及该两种NAT同工酶超过25个的等位基因。
基于来自过表达SSAT的CD2F1转基因小鼠的肝匀浆评估SSAT的活性的体外和体内测定法已经公开。同样地,基于人类肝细胞溶质和人重组NAT1和NAT2同工酶的NAT1和NAT2活性的体外测定法也已经被阐述。在体外SSAT和NAT测定中,需要乙酰辅酶A(辅助因子)提供激活的乙酰基团乙酰化活性。
大鼠和人原代肝细胞体外测定法也在SSAT和NAT活性的研究中被阐述。由于完整的原代肝细胞具有所有必需的天然药物的代谢辅助因子,一种完整的原代肝细胞测定法的利用与另一种基于微粒体或亚细胞胞浆酶组分的体外模型相比,往往能提供更高水平的体外对应体内药物代谢相关性。
冻存的原代大鼠肝细胞
本研究使用以下可接种的原代冻存大鼠肝细胞:
名称: 冻存雌性斯普拉-道来氏大鼠肝细胞
BRIVAL参考号: STM-1351(TSY)
供应商: Celsis
批号: ASM
名称: 冻存雌性斯普拉-道来氏大鼠肝细胞
BRIVAL参考号: STM-1352(TSY)和STM-1407(TSY)
供应商: Celsis
批号: SKN
两个批次都被用了在预实验中。验证实验只用到了批号SKN。
实验方法
先进行预实验用来筛选底物浓度的合适测试范围,并确定可能导致显著的细胞毒性(相对存活率<50%)的浓度。在这些初步的结果的基础上,用调整后的底物浓度进行验证实验。有显著细胞毒性的底物浓度产生的数据不参与酶动力学分析。请参考下表中的测试浓度。从孵育反应物中采集代谢产物用LC/MS/MS进行分析。
1预实验中没有测试
总体来说,预实验方法和验证实验方法是一致的。
底物溶液的制备
精确称量底物,用合适的溶剂(妥卡尼用10%的二甲亚砜蒸馏水溶液(预实验)或100%的二甲亚砜(验证实验);金刚胺、金刚乙胺和亚精胺用去离子水)溶解并进一步稀释到上表中所列测试浓度的100倍的一系列溶液。
大鼠肝细胞的制备
预实验中用到了两个批次的雌性大鼠肝细胞(批号ASM和SKN;对应BRIVAL编号分别为:STM-1351(TSY)和STM-1352(TSY))。验证实验中只用到了货号SKN(对应BRIVAL编号:STM-1407(TSY))。预实验和验证实验均采用了下文所述的制备过程。
即将使用前,将冻存的原代大鼠肝细胞在37℃水浴中解冻,并在预热的InVitroGROTMCP大鼠培养基中重悬。肝细胞的存活率用台盼蓝排斥法确认为在70%以上。添加InVitroGROTMCP大鼠培养基调节肝细胞的浓度,使之达到0.70×106个细胞/mL的目标接种浓度。肝细胞的等分试样接种于(0.5毫升/孔)24孔CellAffix培养板中,将培养板放置于95%空气和5%二氧化碳的高湿度环境的培养箱中37℃恒温孵育4小时,以使肝细胞在用所选的底物溶液剂量处理前贴壁。
处理和孵育
细胞贴壁以后,将培养基从各孔中吸出,并替换以预热的InVitroGROTMHI大鼠培养基(在验证实验中添加Torpedo抗生素混合物)和适当浓度的底物溶液。经处理的细胞再放回孵育24小时。孵育结束后,各孔中的培养基都被收集到含有冰冷甲醇的1.7毫升的小瓶中并在标称-80℃(-72℃至-88℃)贮存直至进行LC/MS/MS分析。对留在孔中的肝细胞进行MTT测定来评估测试浓度的底物潜在的细胞毒性。
MTT细胞毒性测定
收集反应培养基后,立即向每孔剩余的肝细胞中加入等量的0.5毫克/毫升的MTT的KHB溶液,然后孵育约30分钟。孵育后,用二甲亚砜(DMSO)替代培养基以溶解甲瓒。用酶标仪测定96孔平底板每个孔的等分试样在540nm处的吸光度,并用DMSO作为校正的背景吸光度。
稳定性对照
测试了稳定性对照以监测在所采用的实验条件下任何底物的非酶N-乙酰化。平行于肝细胞的样本,一组在InVitroGROTMHI大鼠培养基中仅包括测试浓度的底物溶液而没有肝细胞的稳定性对照,在和肝细胞样本相同的条件下孵育24小时。孵育结束后,收集稳定性对照样本用于LC/MS/MS分析,分析方法与肝细胞样本相同。
LC/MS/MS分析
采用四种LC/MS/MS测定法来分别定量孵育样本中的四种代谢产物。
用于每种代谢产物的测定参考标准品请参见下表。参考标准储备液用于制备校准标准品和质量控制样品。
*一些代谢产物的参考标准品不市售;因此,它们相应的底物被作为参考标准品来校准孵育样本中代谢产物的测定。
加入氘代N-乙酰基-d3金刚胺作为所有测定的内标。
总的来说,不同的代谢产物的测定采用相同的下述制备步骤:
校准标准品和质量控制样品:稀释参考标准储备液并和等分试样的甲醇测定基质一起加入空白孵育反应缓冲液(1:1v/v)和内标中,得到一系列进行LC/MS/MS分析的校准标准品和质量控制样品。
孵育样品:在进行LC/MS/MS分析以前,向每个解冻的孵育样本的上清液中加入等分试样的测定基质和等分试样的内标。
例外:用于N-乙酰妥卡尼和N-乙酰亚精胺测定的解冻的孵育样本在按上述方法进一步制备前用甲酸(甲酸终浓度在0.5%v/v)酸化。此外,在制备校准标准品、质量控制样品和孵育样本时,还要使用酸化的测定基质。这是为了最小化代谢产物结合到制备容器上的可能性。
用于N-乙酰亚精胺定量的校准标准品、质量控制样品和孵育样本在加内标和进行LC/MS/MS分析前用含0.1%甲酸的去离子水稀释10倍。
分析仪器参数
N-乙酰金刚胺、N-乙酰金刚乙胺和N-乙酰妥卡尼
仪器:Waters AcquityTMUPLC系统和MicromassTMUltima
采集软件:MassLynxTM4.1版
流动相A:含0.1%甲酸的去离子水
流动相B:含0.1%甲酸的甲醇
柱:SYNERGITM4μHydro-RP(BRIVAL编号:LC-270)
进样量:10μL
质谱模式:ESI正离子MRM模式
N-乙酰亚精胺
仪器:Waters AcquityTMUPLC系统和MicromassTMUltima
采集软件:MassLynxTM4.1版
流动相A:含5mM甲酸铵和0.1%甲酸的去离子水
流动相B:含5mM甲酸铵和0.1%甲酸的乙腈:去离子水(9:1v/v)
柱:KinexTM2.6μHILIC(BRIVAL编号:LC-309)
进样量:1μL
质谱模式:ESI正离子MRM模式
数据分析软件
MassLynxTM4.1版和微软Excel2007用于数据分析。
分析数据
分析数据打印在硬拷贝上并根据BRIVAL标准操作规程处理。电子数据备份根据BRIVAL标准操作规程,用BRIPHARM Windows Server2008进行处理。
数据归档
所有的实验原始数据、相关文件和研究报告将按BRIVAL标准操作规程的规定在BRIVAL的档案库(加拿大不列颠哥伦比亚省温哥华市Heather街103-8898)存档至少五年。
结果与讨论
在可接种的冻存原代大鼠肝细胞上SSAT介导的金刚胺、金刚乙胺、妥卡尼和亚精胺的N-乙酰化的相对酶动力学参数(Km和Vmax)的汇总如图1所示。基于测试浓度范围的底物经24小时孵育反应过程转变为N-乙酰化代谢产物的酶转化率评估酶动力学。从不同的测试底物浓度孵育后形成的代谢产物用LC/MS/MS测定,结果数据构建入反应速率对应底物浓度的Lineweaver-Burk双倒数曲线图,以估计SSAT介导的各测试底物的N-乙酰化的Km和Vmax值。
从验证实验中估计的亚精胺乙酰化的Km值为287μΜ,可堪比来源于的转基因小鼠的胞质肝组分中的SSAT的文献参考值267±46μΜ。Vmax无法与文献值相比较,因为这些值用不同的单元表示。从全部的稳定性对照来看,只观察到极少量的N-乙酰基代谢产物,这表明非酶N-乙酰化通常不发生于该实验条件下。
验证实验中每一种底物的结果都汇总在图2至图5中。图1至图4显示了代谢产物的形成对应底物浓度的曲线图以及相应的Lineweaver-Burk曲线图。观察到亚精胺乙酰化的最低Km值和最高Vmax值分别为287μΜ和7.21pmol/min/百万个细胞。因此,在所有测试的底物中,它具有最高的相对最大反应速率。测试的其它底物的Km值,按升序排列分别为金刚胺1659μΜ;金刚乙胺1835μΜ;以及与妥卡尼5033μΜ。测试底物的Vmax值,按降序排列(对应于相对最大反应速率的降序排列)为妥卡尼0.617pmol/min/百万个细胞;金刚乙胺0.364pmol/min/百万个细胞和金刚胺0.00197pmol/min/百万个细胞。
底物对大鼠肝细胞的潜在细胞毒性用MTT细胞毒性测定法进行评估。该测定在预实验和验证实验中都进行。预实验的结果汇总于图6和图12中。显著细胞毒性(相对存活率<50%)在较高浓度的金刚胺和金刚乙胺处理后被观察到。观察到的导致广泛细胞毒性的底物浓度,金刚胺约为1170μΜ和金刚乙约为胺280μΜ。没有观察到妥卡尼的细胞毒性。基于这些结果,对后续验证实验的测试浓度做了相应调整。
验证实验的MTT测定结果显示于图7和图13。观察到的导致广泛的细胞毒性的底物浓度,金刚胺约为1140μΜ和金刚乙胺约为220μΜ,验证了预实验的初步结果。在测试的范围内没有观察到妥卡尼和亚精胺的细胞毒性。会导致显著细胞毒性的底物浓度产生的数据被排除在酶动力学分析以外。
所有的校准标准品和质量控制样品的结果满足了按BRIVAL SOP-GP-011(7.0版)和SOP-QA-025(l.0版)的一般批量接受标准,该标准根据FDA生物分析方法验证指导原则的建立。例如参见“行业指南:生物分析方法验证”,美国健康和人类服务部、食品药品监督管理局(FDA)、药品审评及研究中心(CDER)和兽药中心(CVM),2001年5月,其全部公开内容通过引用合并于此。所有测定都用内标法进行定量,除了N-乙酰妥卡,其定量没有使用内标物。代表性的校正曲线和LC/MS/MS色谱图显示于图7至图14中。
对亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)介导的金刚胺、金刚乙胺、妥卡尼和亚精胺N-乙酰化的酶动力学参数(Km和Vmax)进行了表征。在受测的底物中,观察到亚精胺的乙酰化具有最低的Km值和最高的Vmax值,分别在287μΜ和7.21pmol/min/百万个细胞。因此,它具有最高的相对最大反应速率。其它受测底物的Km值,按升序排列为金刚胺1659μΜ;金刚乙胺1835μΜ;和妥卡尼5033μΜ。其他受测底物的Vmax值,按降序排列(对应于相对最大反应速率的降序排列)为妥卡尼0.617pmol/min/百万个细胞;金刚乙胺0.364pmol/min/百万个细胞和金刚胺0.00197pmol/min/百万个细胞。
总结如下,如图22所示,通过测定来自于哺乳动物的样本中的一种非精胺/亚精胺SSAT底物的乙酰化形式的水平来确定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)的活性可以被用于将SSAT活性与哺乳动物体中的病理状况相关联。
本领域技术人员应当理解,上述提供的诸多细节仅作为示例,而不旨在限制本发明的范围,本发明的范围将由权利要求来确定。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种测定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:
向所述哺乳动物中引入金刚乙胺;
从所述哺乳动物采集生物样本;
检测所述生物样本中所述金刚乙胺的乙酰化代谢产物;
将所述生物样本中所述金刚乙胺的所述乙酰化代谢产物的存在量与所述哺乳动物中的SSAT活性相关联。
2.如权利要求1所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与病理状况相关联。
3.如权利要求1所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与癌症相关联。
4.一种测定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:
从哺乳动物身上获得一种细胞并在合适的细胞培养物中孵育所述细胞;
向所述细胞培养物引入金刚乙胺;
检测所述细胞培养物中所述金刚乙胺的乙酰化代谢产物;
将所述细胞培养物中所述金刚乙胺的所述乙酰化代谢产物的存在量与所述哺乳动物中的SSAT活性相关联。
5.如权利要求4所述的方法,其中,检测所述细胞培养物中所述金刚乙胺的乙酰化代谢产物的存在量的步骤包括:
在向所述细胞培养物引入所述金刚乙胺后,从所述细胞培养物中获取样本;
测定所述样本中所述金刚乙胺的乙酰化代谢产物的量。
6.如权利要求4所述的方法,其中,来自于所述哺乳动物的所述细胞是肝细胞。
7.如权利要求4所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与病理状况相关联。
8.如权利要求4所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与癌症相关联。
9.一种测定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:
向所述哺乳动物中引入妥卡尼;
从所述哺乳动物采集生物样本;
检测所述生物样本中所述妥卡尼的乙酰化代谢产物;
将所述生物样本中所述妥卡尼的所述乙酰化代谢产物的存在量与所述哺乳动物中的SSAT活性相关联。
10.如权利要求9所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与病理状况相关联。
11.如权利要求9所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与癌症相关联。
12.一种测定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:
从哺乳动物身上获得一种细胞并在合适的细胞培养物中孵育所述细胞;
向所述细胞培养物中引入妥卡尼;
检测所述细胞培养物中所述妥卡尼的乙酰化代谢产物;
将所述细胞培养物中所述妥卡尼的所述乙酰化代谢产物的存在量与所述哺乳动物中的SSAT活性相关联。
13.如权利要求12所述的方法,其中检测所述细胞培养物中所述妥卡尼的一种乙酰化代谢产物存在量的步骤包括:
在向所述细胞培养物引入所述妥卡尼后,从所述细胞培养物中获取样本;
测定所述样本中所述妥卡尼的乙酰化代谢产物的量。
14.如权利要求12所述的方法,其中,来自于所述哺乳动物的所述细胞是肝细胞。
15.如权利要求12所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与病理状况相关联。
16.如权利要求12所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物体内的SSAT活性与癌症相关联。
Claims (12)
1.一种测定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:
向所述哺乳动物中引入非精胺/亚精胺SSAT底物;
从所述哺乳动物采集生物样本;
检测所述生物样本中所述非精胺/亚精胺SSAT底物的乙酰化代谢产物;
将所述生物样本中所述非精胺/亚精胺SSAT底物的所述乙酰化代谢产物的存在量与所述哺乳动物中的SSAT活性相关联。
2.如权利要求1所述的方法,其中,所述非精胺/亚精胺SSAT底物为金刚乙胺。
3.如权利要求1所述的方法,其中,所述非精胺/亚精胺SSAT底物为妥卡尼。
4.如权利要求1所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与病理状况相关联。
5.如权利要求1所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与癌症相关联。
6.一种测定哺乳动物中精胺/亚精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)活性的方法,包括步骤:
从哺乳动物身上获得一种细胞并在合适的细胞培养物中孵育所述细胞;
向所述细胞培养物引入一种非精胺/亚精胺SSAT底物;
检测所述细胞培养物中所述非精胺/亚精胺SSAT底物的乙酰化代谢产物;
将所述细胞培养物中所述非精胺/亚精胺SSAT底物的所述乙酰化代谢产物的存在量与所述哺乳动物中的SSAT活性相关联。
7.如权利要求6所述的方法,其中,检测所述细胞培养物中所述SSAT底物的乙酰化代谢产物存在量的步骤包括:
在向所述细胞培养物引入所述非精胺/亚精胺SSAT底物后,从所述细胞培养物中获取样本;
测定所述样本中所述SSAT底物的乙酰化代谢产物的量。
8.如权利要求6所述的方法,其中,所述SSAT底物为金刚乙胺。
9.如权利要求6所述的方法,其中,所述SSAT底物为妥卡尼。
10.如权利要求6所述的方法,其中,来自于所述哺乳动物的所述细胞是肝细胞。
11.如权利要求6所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与病理状况相关联。
12.如权利要求6所述的方法作为诊断工具的应用,其中,所述哺乳动物中的SSAT活性与癌症相关联。
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