CN103965231A - 用于检测硼替佐米中间体纯度的酰胺硼酸酯、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于检测硼替佐米中间体纯度的酰胺硼酸酯，具有如下结构式的化合物：光学纯II化合物或非对映异构体II’

Description

用于检测硼替佐米中间体纯度的酰胺硼酸酯、制备方法及其应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种酰胺硼酸酯、制备方法及其应用。也是一种硼替佐米中间体的分析方法，及通过该中间体质量控制而制备高纯度硼替佐米的方法。

背景技术

硼替佐米，化学名为：[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧-3-苯基-2-[(吡嗪羧基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸，结构式如下：

硼替佐米是由美国千年制药公司（Millennium）开发的新型抗肿瘤药物，是一种合成的高选择性26S蛋白酶体糜蛋白酶样活性的可逆抑制剂，主要通过阻断细胞内多种调控细胞凋亡及信号传导的蛋白质的降解，导致肿瘤细胞的死亡。2003年FDA批准硼替佐米用于治疗那些先前至少接受过疗程并显示在最近一个疗程还在进展的多发性骨髓瘤患者，2006年批准其在套细胞淋巴瘤的使用，2008年批准了它作为多发性骨髓瘤的一线药物。硼替佐米是首个用于临床研究的蛋白酶体抑制剂，在单独或联合其它药物时，显现出优越的抗肿瘤作用和用药的安全性，与许多药物合用呈协同或增敏作用。同时，硼替佐米在其它类型的浆细胞疾病、急性髓系白血病及某些实体瘤的治疗上，也被报道具有良好的疗效。

在现有的硼替佐米合成方法中，(R)-亮氨酸硼酸酯硼替佐米合成工艺中最为关键的中间体，在全合成中在硼原子的α位构造手性碳，并引入手性氨基官能团，，不管是线性路线还是汇聚路线都必须要使用到(R)-亮氨酸硼酸酯。常用的(R)-亮氨酸硼酸酯为如下：

(R)-亮氨酸硼酸酯的主要通过手性合成得到，在构造其手性中心的同时，不可避免的会存在其异构体(S)-亮氨酸硼酸酯。

(R)-亮氨酸硼酸酯中α位异构体或差向异构体含量高低直接决定了最终产品二肽硼替佐米中异构体含量，也直接影响了产品的质量。但由于其紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测难以进行。

美国专利申请US2010226597A1中使用气相色谱进行检测分析合成初期新建立手性中心的ee值（对映体过量，即光学纯度）。但是(R)-亮氨酸硼酸酯本身不稳定，在气相中以及在空气中易被氧化发生C-B键断裂后的降解物又会干扰分析检测，因此文献方法不能完全准确地对产品的光学纯度进行检测。

因此，提供一种工艺操作简单、灵敏度和准确度高、检测快速的(R)-亮氨酸硼酸酯检测方法，对于硼替佐米药物的安全、稳定和有效的工业化生产具有非常重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测硼替佐米中间体纯度的酰胺硼酸酯、制备方法及其应用。

也可以说本发明提供一种式I化合物光学纯度的检测方法，由于该化合物是制备硼替佐米的关键中间体，其光学纯度对由其制备的硼替佐米的质量有重要意义。

本发明提供的酰胺硼酸酯，具有如下结构式的化合物：

光学纯II化合物或非对映异构体II’其中X为氟、氯、溴或碘。

上述的化合物，优先X为对位的溴，即所述化合物为：

由于式I化合物的紫外吸收很弱，难以直接使用常规的紫外检测方法进行检测

本发明还提供了一种式I化合物光学纯度的HPLC检测方法。

为实现式I化合物光学纯度的HPLC检测，本发明首先提供了一种将式I化合物通过衍生化得到的式II化合物：

X优选为氟、氯、溴或碘，更优选为溴，最优选为在对位的溴，即下式化合物：

本发明提供了一种由式I化合物制备式II化合物的方法，包括：式I化合物在二氯甲烷中，碱存在下，与X取代的苯甲酰氯反应得到，其中X的定义如上所述。

所述制备方法中，优选具有如下一种或几种条件：

所述式I化合物为式I化合物的单体或其盐；优选地为其与酸的加成盐；更优选地，为其盐酸盐或三氟乙酸盐。

优选地，所述碱为三乙胺；和/或

式I化合物、碱和X取代的苯甲酰氯的用量摩尔比优选为1：2~2.5：1.2~1.5；和/或

优选地，所述反应在0℃至室温下进行；和/或

优选地，所述反应时间1~10分钟；更优选地，反应时间为5～10分钟。

一种优选的上述制备方法的实施方式中，式Ib化合物与对溴苯甲酰氯反应得到式IIb化合物：

其制备步骤包括：式Ib化合物溶于二氯甲烷，然后加入对溴苯甲酰氯和三乙胺反应，反应结束后经柱层析得式IIb化合物。

发明人本来倾向于采用异氰酸酯和I反应，得到式IIe的脲结构，因为脲的结构含有2个酰胺氢，将有利于其在手性柱上的分离，但其反应产率很低，无法完成定量检测。在进一步的实验过程中发现，采用X取代的苯甲酰氯作为衍生化基团，可以定量的得到式II化合物，且反应速率很快。而且由于生色基团溴的引入使得式II化合物有较强的荧光，显著提高了手性HPLC检测的灵敏度，可以实现式I化合物光学纯度的HPLC检测。

为了实现式I化合物的HPLC光学纯度检测，本发明还提供了一种作为对照品的式II化合物及其非对映异构体式II’化合物的制备方法，包括：首先由式A化合物与X取代的苯甲酰氯反应得到式B化合物，然后式B化合物与式C的(+)-蒎烷二醇反应得到式II化合物及其非对映异构体式II’化合物。

由式A化合物制备式B化合物的方法可参照上述式I化合物制备式II化合物的方法进行。

一种优选的式II化合物及其非对映异构体式II’化合物的制备方法的实施方式包括：式B化合物溶于四氢呋喃中，加入式C化合物（+）-蒎烷二醇，室温反应即得。

一种优选的上述制备方法的实施方式中，式A化合物的盐酸盐A1与对溴苯甲酰氯反应得到式B1化合物，式B1化合物再与式C的(+)-蒎烷二醇反应得到式IIb化合物及其非对映异构体式II’b化合物：

在室温下和四氢呋喃中，式B化合物和C化合物（+）-蒎烷二醇反应0.5~10小时；

所述的式B化合物和C化合物（+）-蒎烷二醇的摩尔比为1：1~5。

本发明提供了一种硼替佐米中间体光学纯度的HPLC检测方法，及通过该中间体质量控制而制备高纯度硼替佐米的方法，其有益效果在于：

1、通过将式I所示硼替佐米中间体衍生化制备式II化合物，反应基本可以实现定量化，以HPLC方法进行光学纯度检测，灵敏度和准确度高。本发明衍生化反应工艺操作简单，反应时间较短，可以实现所述式I化合物的快速检测。本发明解决了硼替佐米中关键中间体(R)-亮氨酸硼酸酯的光学纯度检测难点，对于硼替佐米药物的安全、稳定和有效的工业化生产具有非常重要的现实意义。

2、通过对式I所示硼替佐米中间体进行质量控制，通过选择性地加入纯化步骤，可以得到高光学纯度的式I化合物。以其作为原料制备硼替佐米，所得硼替佐米光学纯度高，适合用于硼替佐米药品的制备。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明进行进一步的描述。应理解的是，以下实施例仅用于进一步说明本发明，而不是对本发明范围的限制。

本发明中的式I化合物可通过市场得到或参照现有文献制备得到。

本发明提供的使用手性HPLC检测氨基硼酸酯新建立的手性中心ee值的方法中，分析条件如下：

色谱柱： AD-H

洗脱剂： Hexane/iPrOH95-5

检测波长： 256nm

流速： 0.7mL/min

RT： 11.527,12.477min

实施例1：式B化合物的合成：

称取式A1化合物(200mg,0.8mmol,1eq)，置于25mL单口瓶中。冰浴降温，加入常规二氯甲烷(8mL)。然后称取对溴苯甲酰氯(263mg,1.2mmol,1.5eq)，加入到反应瓶中。量取三乙胺(0.22mL,1.6mmol,2.0eq)，逐滴加入到反应中。反应大约10min，反应结束，有白色固体析出，过滤得到白色固体244mg，母液柱层析另得到70mg，经1H NMR、ESI-MS鉴定，为式B1化合物，反应定量完成。

R_f=0.4(PE/AE=2:1)

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ7.65(d,J=8.4Hz,2H),7.56(d,J=8.4Hz,2H),7.04(brs,1H),3.08-3.02(m,1H),1.73-1.64(m,1H),1.52(t,J=7.2Hz,2H),1.27(s,6H),1.26(s,6H),0.95(d,J=7.2Hz,6H).

MS(ESI,m/z):418.1([M(⁷⁹Br)+Na]⁺),420.1([M(⁸¹Br)+Na]⁺).

实施例2：式IIb+II’b混合物的合成：

称取式B1化合物(317mg,0.80mmol,1eq)溶于THF(4mL)中，加入（+）-蒎烷二醇(272mg,1.60mmol,2eq),室温反应2小时得到IIb+II’b混合物(230mg,64%)。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ7.64,7.63(d,J=8.0Hz,2H),7.55(d,J=8.4Hz,2H),6.70,6.59(brs,1H),4.36-4.27(m,1H),3.36-3.19(m,1H),2.40-2.28(m,1H),2.26-2.13(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.95-1.80(m,2H),1.78-1.61(m,1H),1.61-1.51(m,2H),1.44,1.42(s,3H),1.41-1.33(m,1H),1.29(s,3H),0.95(d,J=6.4Hz,6H),0.86(s,3H).

MS(ESI,m/z):446.1([M(⁷⁹Br)-H]⁺),448.1([M(⁸¹Br)-H]⁺).

实施例3：式IIb化合物的合成：

称取式Ib化合物(90mg,0.3mmol,1eq)，置于25mL单口瓶中。冰浴降温，加入常规二氯甲烷(3mL)。然后称取对溴苯甲酰氯(99mg,0.45mmol,1.5eq)，加入到反应瓶中。量取Et₃N(84μL,0.6mmol,2.0eq)，逐滴加入到反应中。反应大约5min，反应结束。直接浓缩，干法上样，柱层析。得到目标产物(133mg，收率99%，ee值为97.0%)。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ7.64(d,J=8.4Hz,2H),7.56(d,J=8.4Hz,2H),6.64(brs,1H),4.34-4.29(m,1H),3.29-3.21(m,1H),2.40-2.29(m,1H),2.22-2.13(m,1H),2.07-1.99(m,1H),1.95-1.82(m,2H),1.78-1.67(m,1H),1.59-1.51(m,2H),1.44(s,3H),1.38-1.33(m,1H),1.29(s,3H),0.95(d,J=6.8Hz,6H),0.86(s,3H).

MS(ESI,m/z):446.1([M(⁷⁹Br)-H]⁺),448.1([M(⁸¹Br)-H]⁺).

实施例4：式IIb化合物的纯化

称取实施例3制得的式IIb化合物（1.00g），加入二氧六环（10mL），搅拌溶解，降温到0～5°C，滴加异丙醚（100mL），加完后，保持温度搅拌5～6小时。过滤，滤饼异丙醚洗涤，真空40-45°C干燥，得到0.88g白色固体（收率88%，ee值为98.6%）。

对照例：式IIe化合物的合成：

称取式I化合物的盐酸盐(200mg,0.8mmol,1eq)，置于25mL单口瓶中。冰浴降温，加入常规二氯甲烷(8mL)。然后称取对溴苯基异氰酸酯(238mg,1.2mmol,1.5eq)，加入到反应瓶中。量取三乙胺(0.22mL,1.6mmol,2.0eq)，逐滴加入到反应中。室温监测反应结束，直接浓缩，干法拌样，柱层析得到50mg，经¹HNMR鉴定，为式IIe化合物，产率15%。

¹H NMR(DMSO-d⁶,400MHz):δ9.13(br s,1H),7.44(d,J=8.8Hz,2H),7.30(d,J=8.8Hz,2H),7.00(brs,1H),2.60-2.51(m,1H),1.70-1.55(m,1H),1.31-1.15(m,2H),1.10(s,12H),0.91-0.80(m,6H).

Claims (7)

1.一种酰胺硼酸酯，具有如下结构式的化合物：

光学纯II化合物或非对映异构体II’

其中X为氟、氯、溴或碘。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，X为对位的溴，即所述化合物为：

3.一种如权利要求1所述的酰胺硼酸酯化合物的制备方法，其特征在于，通过步骤（1）获得光学纯II化合物或者通过步骤（2）获得光学纯式II化合物及其非对映异构体II’：

（1）在0℃至室温下和二氯甲烷中，由式I化合物的单体或其盐在碱存在下，与X取代的苯甲酰氯反应1～10分钟得到光学纯II化合物；

所述的式I化合物、三乙胺和X取代的苯甲酰氯的摩尔比为1：2~2.5：1.2~1.5；

其中，所述的式I化合物为

所述的式I化合物的盐指与酸的加成盐；

所述碱为三乙胺；

X同权利要求1的定义；或者

（2）由式B化合物和式C的（+）-蒎烷二醇经转酯化反应得到：

在室温下和四氢呋喃中，式B化合物和C化合物（+）-蒎烷二醇反应0.5~10小时；所述的式B化合物和C化合物（+）-蒎烷二醇的摩尔比为1：1~5。

4.一种如权利要求1所述的酰胺硼酸酯化合物用于氨酸硼酸酯的光学纯度的快速检测。

5.如权利要求4所述的酰胺硼酸酯化合物的应用，其特征在于，所述的氨酸硼酸酯的是如权利要求3所述的式I化合物，式I化合物经权利要求3所述的制备方法制备得到式II化合物，然后经HPLC检测。

6.如权利要求5所述的酰胺硼酸酯化合物的应用，其特征在于，所述的检测方法采用HPLC检测，检测条件为：

色谱柱：AD-H；

洗脱剂：Hexane/iPrOH95-5；

检测波长：256nm；

流速：0.7mL/min；

RT：11.527,12.477min。

7.一种如权利要求1所述的酰胺硼酸酯化合物用于制备光学纯度氨酸硼酸酯的光学纯式II化合物及其非对映异构体II’的制备。