CN103960351A - 一种酪氨酸酶抑制剂微乳及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酪氨酸酶抑制剂微乳及其制备方法与应用,属于食品、医药和化妆品技术领域。微乳含有基质、酪氨酸酶抑制剂steppogenin、artocarpanone和水;其中基质由45%~60%的表面活性剂、20%~30%的助表面活性剂和10~30%的油相组成。微乳由各原料组分按一定配比投料制成。本发明克服了天然酪氨酸酶抑制剂steppogenin和artocarpanone在水中溶解度极低的缺陷,提供了一种操作简单自发形成微乳的方法,用水或水溶液稀释形成粒径为纳米级的微乳。所得微乳液能够有效用于抗果蔬酶促褐变、制备美白化妆品、用于预防和治疗黑色素过多导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一种酪氨酸酶抑制剂微乳及其制备方法与应用,属于食品、医药和化妆品技术领域。
背景技术
酪氨酸酶(EC1.14.18.1),为多酚氧化酶的一种,广泛存在于生物体中。其通过催化作用,先使单酚羟基化成邻二酚,然后进一步氧化邻二酚成邻二醌类,随后再经过一系列复杂的非酶反应,最终生成黑色素。在这个过程中,酪氨酸酶起着关键的作用。人体中产生的黑色素可以使人体皮肤免受太阳紫外线的伤害,同时,皮肤中不同黑色素的含量和种类决定人类的肤色和头发颜色,但过多黑色素分泌会引起严重的美容问题,如色斑、黑斑、老年斑等。在食品加工过程中,酪氨酸酶由于催化反应导致新鲜水果、蔬菜和饮料产生褐变,从而降低其贮藏周期、营养价值、以及经济价值。
酪氨酸酶抑制剂可以抑制酪氨酸酶的活性,从而降低酪氨酸酶引起的不利影响。到目前为止,人们从低等菌类到高等植物中发现了许多天然酪氨酸酶抑制剂,如曲酸(kojic acid)和壬二酸(azelaic acid);从高等植物中获得的酪氨酸酶抑制剂多数属于多酚类物质(主要分为黄酮类和二苯乙烯类)。许多黄酮及其苷类物质显示出酪氨酸酶抑制活性,但只有少数具有很强的酪氨酸酶抑制活性如steppogenin或artocarpanone,但此类物质却存在几乎不溶或难溶于水等缺点,极大限制了其应用前景。所以,虽然天然酪氨酸酶抑制剂作为生物活性物质在食品、医药和化妆品领域中具有广阔的开发前景,但由于受其有效性、溶解性等因素制约而难于得到广泛应用。
微乳是由互不相溶的两相(一般为油相和水相)经过简单搅拌自发形成的热力学稳定的、各向同性的、外观透明或者半透明的分散体系。从结构上来说,分为水包油型(O/W)、油包水型(W/O)和双连续型三种类型。微乳的油相和水相之间被混合活性剂膜分开,混合活性剂膜由表面活性剂,助表面活性剂以及其中的油、水分子构成。制作合适的微乳液是增加溶解度的一个适当方法。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种酪氨酸酶抑制剂微乳,尤其是针对酪氨酸酶抑制剂steppogenin(草大戟素)或artocarpanone(桂木二氢黄素)的高活性、无毒、纳米粒径的天然酪氨酸酶抑制剂微乳,解决天然酪氨酸酶抑制剂在水中不溶及溶解度低的问题。
所述微乳含有基质、酪氨酸酶抑制剂和水。
所述基质由表面活性剂、助表面活性剂和油相组成,其中表面活性剂质量分数为45%~60%,助表面活性剂质量分数为20%~30%,油相质量分数为10%~30%;上述质量分数是各组分占基质质量的比例。
所述水是去离子水、纯净水或自来水,根据需要添加适量水。
所述表面活性剂选自下列一种或几种的混合:吐温20、吐温40、吐温60、吐温80。
所述助表面活性剂选自下列任意一种:乙醇、PEG400。
所述油相选自下列任意一种:丁酸乙酯、薄荷油、柠檬油。根据酪氨酸酶抑制剂在油中的溶解度进行选择。
一种优选的酪氨酸酶抑制剂微乳,其基质是由20%的丁酸乙酯、53%的吐温80和27%的乙醇组成(上述质量分数是各组分占基质质量的比例),所述酪氨酸酶抑制剂中微乳含质量分数为80%的水和1.08mg/mL的steppogenin或1.25mg/mL的artocarpanone。
一种优选的酪氨酸酶抑制剂微乳,其基质含有46.7%的表面活性剂吐温80、23.3%的助表面活性剂聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯;所述微乳含质量分数为80%的水和1.02mg/mL的steppogenin。
一种优选的酪氨酸酶抑制剂微乳,其基质含有46.7%的表面活性剂吐温80、23.3%的助表面活性剂聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯;所述微乳含质量分数为80%的水和1.06mg/mL的artocarpanone。
所用上述试剂都是食品级。
本发明要解决的第二个技术问题是提供所述酪氨酸酶抑制剂微乳的制备方法,通过以下步骤实现:
按配比将表面活性剂和助表面活性剂混合为混合活性剂,再加入一定比例的油相并搅拌均匀,最后加入一定量的酪氨酸酶抑制剂超声搅拌使其完全溶解,待上述体系混合均匀后,采用滴水法将水慢慢加入上述混合溶液中,充分搅拌直至体系透明澄清,即得到酪氨酸酶抑制剂微乳。
上述方法制备的微乳液在8000r/min下高速离心15min不分层,粒径为15~35nm。
微乳制备过程中表面活性剂过多,易形成凝胶状态,微乳形态不易形成。助表面活性剂过多,则体系不易稳定,难以形成微乳澄清透明的结构。本发明具有以下优点和有益效果:
(1)本发明借助微乳液的超小粒径和超强增溶能力的特性,选用食品级非离子型表面活性剂、助剂和油相,解决了天然酪氨酸酶抑制剂在水中难溶和几乎不溶的问题,将其溶解度提高了5~100倍,提高了天然酪氨酸酶抑制剂在实际使用中的生物活性,为其在食品、医药和化妆品工业中的应用提供了方法。
(2)本发明工艺简单,选用的表面活性剂、助剂和油相均为价格较低廉、应用广泛的食品级物质,对人体安全无毒副作用。
(3)本发明的微乳体系可用任意比例的水稀释,无需复杂的均质工艺,加水搅拌即可自动形成纳米级别微乳,体系澄清稳定,目标物不会析出。本发明所制备的微乳,根据不实际需要可配置不同浓度的天然酪氨酸酶抑制剂使用。
附图说明
图1、苹果切片在steppogenin微乳及各种溶液中处理后抗褐变的a值。
附图1中附图标记含义:◆--steppogenin微乳水溶液,■--0.01%(w/v)steppogenin微乳水溶液加0.1%(w/v)的维生素C,×--0.1%4-己基间苯二酚+0.1%VC的水溶液,﹡--0.1%Vc水溶液,●--未加目标物的空白微乳水溶液,|--去离子水。
图2、苹果切片在artocarpanone微乳及各种溶液中处理后抗褐变的a值。
附图2中附图标记含义:◆--steppogenin微乳水溶液,■--0.01%(w/v)steppogenin微乳水溶液加0.1%(w/v)的维生素C,×--0.1%4-己基间苯二酚+0.1%VC的水溶液,﹡--0.1%Vc水溶液,●--未加目标物的空白微乳水溶液,|--去离子水。
图3Steppogenin的结构式。
图4Artocarpanone的结构式。
具体实施方式
实施例1Steppogenin样品的制备方法
Steppogenin是从菠萝蜜中提取,将2kg波罗蜜木材(木材采自海南省文昌县)用6倍量95%乙醇超声波提取2次,每次1h,减压浓缩至干燥,称重。然后以95%乙醇溶解,定性滤纸过滤,加入Amberlite XAD16中,自然晾干或减压蒸干,上Amberlite XAD16层析柱,分别用20%、30%、40%、50%及95%的乙醇洗脱6个柱体积,收集40%乙醇洗脱部分,浓缩得干燥样品,用甲醇溶解后用葡萄糖凝胶柱层析进行分离,甲醇-水(v/v,1:1)洗脱,即得化合物steppogenin。
Steppogenin的核磁共振光谱数据如下:
1H NMR(Acetone-d6,400MHz)δ:12.21(1H,s,OH-5),9.72(1H,s,OH-7),8.74(1H,s,OH-2'),8.47(1H,s,OH-4'),7.30(1H,d,J=8.4Hz,H-6'),6.47(1H,d,J=2.1Hz,H-3'),6.42(1H,dd,J=8.4,2.4Hz,H-5'),5.96(1H,d,J=2.4Hz,H-8),5.94(1H,d,J=2.4Hz,H-6),5.70(1H,dd,J=13.2,2.8Hz,H-2),3.17(1H,dd,J=17.2,13.2Hz,H-3),2.71(1H,dd,J=17.2,2.8Hz,H-3);13C NMR(Acetone-d6,100MHz)δ:197.8(C=O,C-4),167.5(C,C-7),165.4(C,C-5),164.9(C,C-9),159.7(C,C-2'),156.5(C,C-4'),129.1(CH,C-6'),117.5(C,C-1'),107.9(CH,C-5'),103.6(CH,C-3'),103.2(C,C-10),96.8(CH,C-6),95.9(CH,C-8),75.4(CH,C-2),42.7(CH2,C-3)。
实施例2Steppogenin微乳液的制备方法一
Steppogenin是一种存在于桑科植物的天然黄酮类酪氨酸酶抑制剂,具有很强的酪氨酸酶抑制活性,而其在水中却很难溶解,实验测得其在水中的溶解度为8.19μg/mL。
Steppogenin微乳制备工艺:选择表面活性剂为吐温80,助表面活性剂为聚乙二醇,油相为丁酸乙酯。20℃下选择油相、表面活性剂和助表面活性剂的质量比为2:5.3:2.7,将吐温80和聚乙二醇按质量比5.3:2.7先混合搅拌3h,再将混合活性剂与丁酸乙酯按8:2的质量比混合,搅拌均匀后取2g混合液加入10mg steppogenin,20℃下超声30min使其完全溶解。最后用滴水法加入8g水使其水含量达到80%。制备得到的微乳体系澄清透明稳定,经HPLC测得目标物steppogenin含量为1.08mg/mL,溶解度提高了132倍。用激光粒度仪测定steppogenin微乳的粒径为15~35nm。
高效液相检测条件:
仪器:岛津LC-20AT液相色谱仪配以DAD检测器。
色谱柱:Grace C18(250×4.6mm,5μm)。
流动相:A相:含0.2%甲酸的去离子水;B相:乙腈。线性洗脱梯度:0min,20%B;10min,60%B;20min,100%B;25min,100%B;30min,20%B。流速:1.0mL/min,检测波长:285nm。
实施例3Steppogenin微乳液的制备方法二
参照实施例2的制备方法,以吐温80作为表面活性剂,以乙醇作为助表面活性剂,以丁酸乙酯作为油相,混合液中油相、表面活性剂和助表面活性剂三者的比例为20%:53%:27%,所得微乳体系中steppogenin的浓度为0.93mg/mL,水含量为80%,体系澄清透明稳定,steppogenin溶解度提高了114倍。
实施例4Steppogenin微乳液的制备方法三
参照实施例2的制备方法,以吐温80作为表面活性剂,以聚乙二醇作为助表面活性剂,以丁酸乙酯作为油相,混合液中油相、表面活性剂和助表面活性剂三者的比例为3:4.67:2.33,所得微乳体系中steppogenin的浓度为1.02mg/mL,水含量为80%,体系澄清透明稳定,steppogenin溶解度提高了124倍。
实施例5Steppogenin微乳的酪氨酸酶抑制活性评价
取制备的微乳液用去离子水稀释为20、10、5、2.5,1.25μg/mL,取五种浓度的样品微乳液各1mL。阳性对照曲酸用DMSO分别配成50、25、10、5、2.5μg/mL浓度的溶液,取五种浓度的曲酸溶DMSO液各300μL,用700μL的磷酸盐缓冲溶液配成1mL。在阳性对照和样品微乳液中分别加入由pH值6.8的磷酸盐缓冲溶液配成0.1mg/mL的酪氨酸液1mL和200U/mL的酪氨酸酶溶液1mL,在37℃下孵育20min,于492nm处测定吸光值。
酶活性抑制率=[(A2-A1)-(B2-B1)]/(A2-A1)×100%
A1为0min时候未加抑制剂的吸收值;A2为20min后未加抑制剂的吸收值;
B1为0min时候加抑制剂的吸收值;B2为20min后加了抑制剂的吸收值。
按上述方法测得steppogenin微乳液的IC50为3.2μM,与化合物用DMSO溶解直接进行酪氨酸酶抑制活性测试结果相似,说明制得的微乳保留了酪氨酸酶抑制剂活性。
实施例6Steppogenin微乳液抗褐变效果实验
实验选用的微乳按实施例2中配方制得,再加水稀释微乳后,微乳水溶液浓度为0.01%(w/v),选用溶液体积为400mL,组1是steppogenin微乳溶液,组2是steppogenin微乳溶液加0.1%(w/v)的维生素C,组3是steppogenin饱和水溶液,组4是阳性对照0.01%(w/v)4-己基间苯二酚水溶液,组5是0.1%的VC水溶液,组6是未加steppogenin的空白微乳水溶液,组7是空白去离子水。实验方法为将苹果洗净后切成厚度为1~1.5cm片状,分成7组,每组3个,在各组水溶液中浸泡5min之后取出,用滤纸吸干水分后放入培养皿中并使用色差仪测其L值、b值和a值,20℃下保存。每隔0h,3h,6h,12h,24h继续测其L值、b值和a值,通过L值和a值的变化程度判断褐变程度。从苹果切片抗褐变实验结果上来看,组1、组2、组3、组4和组5具有不同程度的抗褐变效果,其中组4抗褐变效果明显,组2、组3有较好的抗褐变效果;组1和组5抗褐变效果微弱。这表明,第一,steppogenin微乳水溶液本身就具有极好的抗褐变能力;第二,虽然Vc水溶液抗褐变效果微弱,但是Vc在steppogenin微乳水溶液体系中能较好的促进这种抗褐变作用,起到协同作用。
参照上述的方法,也对其他配方下的steppogenin微乳也进行了苹果切片抗褐变效果实验,结果表明,实施例2的配方抗褐变效果最好,其他配方也具有一定的抗褐变效果,抗褐变效果与微乳体系增溶效果正相关。综上所述,说明steppogenin微乳液在果蔬抗酶促褐变方面有着潜在的应用前景。
实施例7Artocarpanone的制备方法
Artocarpanone是从菠萝蜜中提取,将2kg波罗蜜木材(木材采自海南省文昌县)用6倍量95%乙醇超声波提取2次,每次1h,减压浓缩至干燥,称重。然后以95%乙醇溶解,定性滤纸过滤,加入Amberlite XAD16中,自然晾干或减压蒸干,上Amberlite XAD16层析柱,分别用20%、30%、40%、50%及95%的乙醇洗脱6个柱体积,收集50%乙醇洗脱部分6个体积,浓缩得干燥样品,称重,用硅胶柱层析进行分离,乙酸乙酯-正己烷(1:2)洗脱。
Artocarpanone的核磁共振光谱数据如下:
1H NMR(Acetone-d6,400MHz)δ:12.17(1H,s,OH-5),8.64(1H,s,OH-2'),8.39(1H,s,OH-4'),7.32(1H,d,J=8.4Hz,H-6'),6.47(1H,d,J=2.4Hz,H-3'),6.44(1H,dd,J=8.4,2.4Hz,H-5'),6.05(1H,d,J=2.4Hz,H-8),6.03(1H,d,J=2.4Hz,H-6),5.73(1H,dd,J=13.2,2.8Hz,H-2),3.85(3H,s,OMe),3.21(1H,dd,J=17.2,13.2Hz,H-3),2.74(1H,dd,J=17.2,2.8Hz,H-3);13C NMR(Acetone-d6,100MHz)δ:198.2(C=O,C-4),168.9(C,C-7),165.1(C,C-5),164.8(C,C-9),159.7(C,C-4'),156.5(C,C-2'),129.2(CH,C-6'),117.4(C,C-1'),108.0(CH,C-5'),103.8(C,C-10),103.6(CH,C-3'),95.5(CH,C-8),94.6(CH,C-6),75.6(CH,C-2),56.3(CH3,OCH3),42.7(CH2,C-3)。
实施例8Artocarpanone微乳液的制备方法一
Artocarpanone是一种存在于桑科植物的天然黄酮类酪氨酸酶抑制剂,具有很强的酪氨酸酶抑制活性,而其在水中却很难溶解,实验测得其在水中的溶解度为3.36μg/mL。
Artocarpanone微乳制备工艺:选择表面活性剂为吐温80,助表面活性剂为聚乙二醇,油相为丁酸乙酯。20℃下选择油相、表面活性剂和助表面活性剂的质量比为2:5.3:2.7,将吐温80和聚乙二醇按质量比5.3:2.7先混合搅拌3h,再将混合活性剂与丁酸乙酯按8:2的质量比混合,搅拌均匀后取2g混合液加入10mg artocarpanone,20℃下超声30min使其完全溶解。最后用滴水法加入8g水使其水含量达到80%。制备得到的微乳体系澄清透明稳定,经HPLC测得目标物artocarpanone含量为1.25mg/mL,溶解度提高了372倍。用激光粒度仪测定artocarpanone微乳的粒径为10~30nm。
高效液相检测条件:
仪器:岛津LC-20AT液相色谱仪配以DAD检测器。
色谱柱:Grace C18(250×4.6mm,5μm)。
流动相:A相:含0.2%甲酸的去离子水;B相:乙腈。线性洗脱梯度:0min,20%B;10min,60%B;20min,100%B;25min,100%B;30min,20%B。流速:1.0mL/min,检测波长:285nm。
实施例9Artocarpanone微乳液的制备方法二
参照实施例8的制备方法,以吐温80作为表面活性剂,以乙醇作为助表面活性剂,以丁酸乙酯作为油相,混合液中油相、表面活性剂和助表面活性剂三者的比例为2:5.3:2.7,所得微乳体系中artocarpanone的浓度为1.02mg/mL,水含量为80%,体系澄清透明稳定,artocarpanone溶解度提高了303倍。
实施例10Artocarpanone微乳液的制备方法三
参照实施例8的制备方法,以吐温80作为表面活性剂,以聚乙二醇作为助表面活性剂,以丁酸乙酯作为油相,混合液中油相、表面活性剂和助表面活性剂三者的比例为3:4.67:2.33,得微乳体系中Artocarpanone的浓度为1.06mg/mL,水含量为80%,体系澄清透明稳定,Artocarpanone溶解度提高了315倍。
实施例11Artocarpanone微乳的酪氨酸酶抑制活性评价
取制备的微乳液用去离子水稀释为20、10、5、2.5,1.25μg/mL,取五种浓度的样品微乳液各1mL。阳性对照曲酸用DMSO分别配成50、25、10、5、2.5μg/mL浓度的溶液,取五种浓度的曲酸DMSO溶液各300μL,用700μL的磷酸盐缓冲溶液配成1mL。在阳性对照和样品微乳液中分别加入由pH值6.8的磷酸盐缓冲溶液配成0.1mg/mL的酪氨酸液1mL和200U/mL的酪氨酸酶溶液1mL,在37℃下孵育20min,于492nm处测定吸光值。
酶活性抑制率=[(A2-A1)-(B2-B1)]/(A2-A1)×100%
A1为0min时候未加抑制剂的吸收值;A2为20min后未加抑制剂的吸收值;
B1为0min时候加抑制剂的吸收值;B2为20min后加了抑制剂的吸收值。
按上述方法测得artocarpanone微乳液的IC50为18.5μM,与化合物用DMSO溶解直接进行酪氨酸酶抑制活性测试结果相似,说明制得的微乳保留了酪氨酸酶抑制剂活性。
实施例12Artocarpanon微乳液抗褐变效果实验
实验选用的微乳按实施例8中配方制得,再加水稀释微乳后,微乳水溶液浓度为0.01%(w/v),选用溶液体积为400mL,组1是artocarpanone微乳溶液,组2是artocarpanone微乳溶液加0.1%(w/v)的维生素C,组3是artocarpanone饱和水溶液,组4是阳性对照0.01%(w/v)4-己基间苯二酚水溶液,组5是0.1%的VC水溶液,组6是未加artocarpanone的空白微乳水溶液,组7是空白去离子水。实验方法为将苹果洗净后切成厚度为1~1.5cm片状,分成7组,每组3个,在各组水溶液中浸泡5min之后取出,用滤纸吸干水分后放入培养皿中并使用色差仪测其L值、b值和a值,20℃下保存。每隔1h,3h,6h,12h,24h继续测其L值、b值和a值,通过L值和a值的变化程度判断褐变程度。从苹果切片抗褐变实验结果上来看,组1、组2、组3、组4和组5具有不同程度的抗褐变效果,其中组2和组4抗褐变效果明显且没有显著性差异;组1和组3抗褐变效果微弱。这表明,第一,artocarpanone微乳水溶液本身就具有抗褐变能力;第二,虽然Vc水溶液抗褐变效果微弱,但是Vc在artocarpanone微乳水溶液体系中能很好的促进这种抗褐变作用,起到协同作用。
参照上述的方法,也对其他配方下的artocarpanone微乳也进行了苹果切片抗褐变效果实验,结果表明,实施例8的配方抗褐变效果最好,其他配方也具有一定的抗褐变效果,抗褐变效果与微乳体系增溶效果正相关。综上所述,说明artocarpanone微乳液在果蔬抗酶促褐变方面有着潜在的应用前景。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种酪氨酸酶抑制剂微乳,含有基质、酪氨酸酶抑制剂和水;所述基质由表面活性剂、助表面活性剂和油相组成,其中表面活性剂质量分数为45%~60%,助表面活性剂质量分数为20%~30%,油相质量分数为10%~30%;所述酪氨酸酶抑制剂是steppogenin、artocarpanone中的一种或两种。
2.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述水是去离子水、纯净水或自来水。
3.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述表面活性剂选自下列一种或几种的混合:吐温20、吐温40、吐温60、吐温80。
4.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述助表面活性剂选自乙醇、PEG400中任意一种。
5.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述油相选自丁酸乙酯、薄荷油、柠檬油的任意一种。
6.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述基质含有20%的丁酸乙酯、53%的吐温80和27%的乙醇;所述微乳含质量分数为80%的水和1.08mg/mL的steppogenin或1.25mg/mL的artocarpanone。
7.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述基质含有46.7%的表面活性剂吐温80、23.3%的助表面活性剂聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯;所述微乳含质量分数为80%的水和1.02mg/mL的steppogenin。
8.根据权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂微乳,其特征在于,所述基质含有46.7%的表面活性剂吐温80、23.3%的助表面活性剂聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯;所述微乳含质量分数为80%的水和1.06mg/mL的artocarpanone。
9.一种制备权利要求1-8任一所述酪氨酸酶抑制剂微乳的方法,是按配比将表面活性剂和助表面活性剂混合为混合活性剂,再按比例加入油相并搅拌均匀,加入一定量的酪氨酸酶抑制剂超声搅拌使其完全溶解,待上述体系混合均匀后,采用滴水法将水慢慢加入上述混合溶液中,充分搅拌直至体系透明澄清,即得到酪氨酸酶抑制剂微乳。
10.权利要求1-8任一所述酪氨酸酶抑制剂微乳的应用,是用于抑制果蔬的酶促褐变、制备美白化妆品,制备用于抑制酪氨酸酶活性的药物。
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CN201410186238.8A CN103960351A (zh) | 2014-05-05 | 2014-05-05 | 一种酪氨酸酶抑制剂微乳及其制备方法与应用 |
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