CN103948028B - 一种具有缓解肝损伤作用的组合物及其制备方法 - Google Patents
一种具有缓解肝损伤作用的组合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种具有缓解肝损伤作用的组合物及其制备方法，该组合物由葛根、白芍、五味子、余甘子、枳椇子、姜黄提取物和番茄红素组成。本发明还提供了一种该组合物的含量测定方法。本发明组合物可以用于制备缓解肝损伤的保健品。
Description
技术领域
本发明涉及保健品领域，特别涉及一种具有缓解肝损伤作用的保健品组合物。
背景技术
肝脏损伤是由病毒、药物、毒剂、酒精、缺氧等因素导致的肝脏病理改变。肝损伤的发生机制较为复杂，可分为化学性和免疫性两种。化学机制主要是通过质膜的损害、自由基损害、线粒体功能失调、代谢紊乱等。化学性肝损伤可因酒精、环境中的化学毒物及某些药物的作用而引起。
现代医学研究证明，质膜损害是肝细胞(HC)受损的最基本表现。细胞膜结构和功能的受损，可使肝脏可溶性酶的活性升高，进而不能保持正常的膜流动性和电解质的平衡，尤其是钙离子的稳态失调，使细胞内钙堆聚，最终引起细胞坏死。
此外，身体受有害物质的损伤后，导致自由基大量产生和抗氧化物显著减少，引起组织细胞的脂质发生过氧化连锁反应，从而破坏组织细胞的正常结构，影响其正常代谢和功能，出现组织细胞损伤性变化。脂质过氧化反应是肝损伤发生的重要机制。脂质过氧化的主要降解产物丙二醛(MDA)，可严重损伤肝细胞膜结构，导致HC的肿胀、坏死。
改善肝脏的供血供氧是缓解肝损伤的重要环节之一。肝脏正常的血液循环对维持肝脏正常的生理功能有十分重要的意义。如果血流减慢易使各种炎症细胞附壁聚集，造成和加重局部的炎症反应。同时，缺血缺氧使肝细胞线粒体内尼克酞胺腺嗓吟二核昔酸的氧化型和还原型的比例下降，三磷酸腺苷(ATP)酶受抑制，出现细胞内ATP耗竭和酸中毒，持续缺氧使细胞内Ca浓度上升，激活蛋白、脂质和DNA的降解，形成以小叶中央区为主的肝组织变性、坏死。
缓解肝损伤的另一重要环节是促进HC再生。HC有强烈的再生能力，促进HC的再生是改善肝脏功能、提高患者生存力的重要手段和环节。
目前，临床上大部分化学性肝损伤是由酒精引起，即酒精性肝病。
酒精性肝病(alcoholicliverdisease，ALD)，是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病，其发病率高，后果严重，已成为一种严重危害人民健康的疾病。过量饮酒是当今世界范围内一个重要的公共卫生问题，它不仅危害社会治安，且严重影响身体健康。酒精性肝病是西方国家中肝硬化的主要致病因素，据统计，20世纪80年代美国肝硬化患病率为360/1000人口，其中40％～90％为酒精相关性肝病，每10万人口中酒精性肝硬化死亡率为4.4。近年来，我国酒类产量逐年增加，从1984年产711.3万吨，1993年的1846万吨，到2000年的20万吨，酒精性肝病也有随之增加之趋势，据估计，20世纪90年代酒精性肝病的发病率较20世纪80年代以前约增加了30倍。由此可见，随着我国人民生活条件的日益改善，我国酒精消耗量呈直线上升，因而我国近年来酒精性肝病的发生有明显增多的趋势。
目前为止，在国家食品药品监督管理总局已审批的抗肝损伤类保健品有254种，其中审批已上市保肝类产品较为有名的：海王金樽(成分牡蛎粉提取物，偏向于解酒)；昂立多邦(乳酸杆菌，维生素C、E、B1、B2、B6、葡萄糖酸锌，)；安泰胶囊(卵白蛋白、珍珠粉，解酒、肝腹水、肝硬化、脂肪肝)；大汉灵芝(灵芝多肽、多糖，免疫力低下者、有化学性肝损伤危险者及肝病患，偏向于肿瘤)；“陪酒师”解酒茶(紫葛花、葛根、枳椇子、低聚木糖醇、富硒野山茶，能醒酒护肝、健胃、养生)；莱福宝保肝丸(新西兰，主要成分为圣玛利草精华素、维生素E、维生素C等精制而成，可防止病毒侵入肝细胞，强肝功能，促进胆汁分泌，分解肝脏脂肪并排除进入血液的毒素)。
与上市品种相比，本发明组合物采用药食同源的植物品种，长期服用对人身体没有毒副作用；同时，本发明组合物能够降低脂质过氧化产物丙二醛、清除超氧自由基、减轻肝纤维化病变，有效降低肝脏病理性损伤。
本发明组合物能够有效改善肝损伤模型的生化指标，特别是酒精性肝损伤模型，具有的一定缓解肝损伤的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有缓解肝损伤作用的组合物；
本发明的另一目的是提供该组合物的制备方法；
本发明的再一个目的是提供该组合物在制备具有缓解肝损伤作用的保健品组合物中的应用。
本发明的再一个目的是提供一种该组合物的含量测定方法。
本发明通过以下方式实现：
一种具有缓解肝损伤作用的组合物，其特征在于，该组合物是由包含以下重量份的成分组成：葛根4～6重量份、白芍1～3重量份、五味子0.50～2重量份、余甘子2～4重量份、枳椇子3～6重量份、姜黄提取物0.10～0.25重量份、番茄红0.05～0.20重量份。
上述组合物优选以下重量份的成分组成：葛根4重量份、白芍1重量份、五味子0.50重量份、余甘子2重量份、枳椇子3重量份、姜黄提取物0.10重量份、番茄红素0.05重量份。
上述组合物优选以下重量份的成分组成：葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份。
上述组合物优选以下重量份的成分组成：葛根5重量份、白芍2重量份、五味子1重量份、余甘子3重量份、枳椇子0.45重量份、姜黄提取物0.15重量份、番茄红素0.10重量份
上述组合物中还可以加入常用辅料，包括但不限于微晶纤维素、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠、甲基硅油、乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。
一种具有缓解肝损伤作用的组合物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
(1)葛根、白芍、五味子加6～10倍量50％～80％乙醇，提取2～4次，每次1～3小时，提取液浓缩至1.00～1.30，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加6～10倍量水，提取2～4次，每次1～3小时，提取液浓缩至1.00～1.30，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入辅料，得所需制剂。
所述制剂包括片剂、丸剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂。
优选的，该制备方法包括以下步骤：
(1)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2h，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加8倍量水，提取3次，每次1.5h，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入辅料，得所需制剂。
一种具有缓解肝损伤作用的组合物的含量测定方法，其特征在于，该测定方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液制备；
(2)取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品溶于甲醇，制备混合对照品溶液；
(3)利用高效液相色谱法在三波长条件下，同时测定供试品溶液中没食子酸、葛根素和姜黄素的含量；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.2％磷酸或4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为2～5％，B为98～95％；15→16min，A从2～5％上升到12～17％，B从98～95％下降到88～83％；16→45min，A从12～17％上升到40～60％，B从88～83％降到60～40％；45→46min，A从40～60％上升到75～85％，B从60～40％下降到25～15％；46→55min，A为75～85％，B为25～15％；柱温20～40℃；流速0.8～1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm；
(4)根据高效液相色谱分析结果计算供试品中没食子酸、葛根素和姜黄素的含量。
优选的，供试品溶液是依照以下步骤制备：
(1)取葛根5重量份、白芍2重量份、五味子1重量份、余甘子3重量份、枳椇子4.5重量份、姜黄提取物0.15重量份、番茄红素0.10重量份；
(2)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2h，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(3)余甘子、枳椇子加8倍量水，提取3次，每次1.5h，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(4)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入辅料，得所需制剂；
(5)取0.1g制剂研细后于50mL容量瓶中加入甲醇或乙醇至刻度，超声提取30min，用甲醇或乙醇定容，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
优选的，对照品溶液按以下步骤制备：取没食子酸、葛根素和姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇或，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液。
优选的，色谱条件为：HPLC色谱柱为Waters C18，以甲醇流动相A，以0.2％磷酸或4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为3％，B为97％；15→16min，A从3％上升到15％，B从97％下降到85％；16→45min，A从15％上升到50％，B从85％降到50％；45→46min，A从50％上升到80％，B从50％下降到20％；46→55min，A为80％，B为20％；柱温30℃；流速1.0mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
附图说明
图1提取溶剂考察图谱，依次为30％乙醇、50％乙醇、30％甲醇、50％甲醇和70％甲醇。
图2流动相考察图谱，依次为甲醇-4％乙酸、乙腈-4％乙酸、乙腈-0.2％磷酸、甲醇-0.2％磷酸。
图3样品含量测定图谱。
具体实施方式
对本发明组合物药效学的研究与说明：
发明人对本发明提供的技术方案进行了实验研究，用来证明本发明的技术效果，下述实验用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。
实施例1：本发明组合物抗酒精性肝损伤的作用研究
1.实验材料
1.1动物
ICR小鼠，清洁级，18～22g，雄性，购自扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK(苏)27～0001。
1.2药物与试剂
无水乙醇：南京化学试剂有限公司，批号：09071610663；
冰醋酸：南京化学试剂有限公司，批号：081010779；
丙二醛(MDA)测定试剂盒、谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒、甘油三酯测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所。
1.3仪器
电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。
紫外分光光度计UV～2550，日本岛津公司。
电子恒温水浴锅DK～S26，型，上海精宏实验设备有限公司；
CENTRIFUGE5804R冷冻离心机，Eppendorf公司。
2.实验方法
2.1分组与剂量设置
空白组：给予蒸馏水，0.2mL/20g体重灌胃；
模型组：给予蒸馏水，0.2mL/20g体重灌胃；
低含量组：权利要求2所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
中含量组：权利要求4所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
高含量组：权利要求3所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A1组：缺葛根，白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A2组：缺白芍，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A3组：缺五味子，葛根6重量份、白芍3重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A4组：缺余甘子，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A5组：缺枳椇子，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A6组：缺姜黄提取物，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A7组：缺番茄红素，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A8组：缺葛根、枳椇子，白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A9组：缺葛根、枳椇子、五味子，白芍3重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A10组：缺枳椇子、五味子，葛根6重量份、白芍3重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃。
2.2模型制作与给药
150只ICR小鼠随机分为15组，每组10只。每日经口灌胃给予各实验组组合物，空白组、模型组给予蒸馏水。30天后，将模型组及各实验组一次灌胃50％乙醇12mL/kg体重(折合乙醇的剂量为6g/kg体重)，空白组给蒸馏水，禁食16小时处死动物，取肝脏进行肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)的测定。
2.3检测指标
肝脏组织中丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)含量、肝脏病理检测。
3.实验结果
3.1动物一般表现
造模前，各组小鼠可正常饮食，体重逐期增长。酒精造模后，空白对照组小鼠动作自如，反应灵敏，毛发光泽；模型对照组、实验组小鼠步态不稳，活动减少。
3.2实验结果
空白组、模型组及各实验组的实验结果见表1。
表1：肝匀浆中MDA、GSH、TG含量、肝脏病理检测的结果
动物一次性给予50％乙醇后，与空白组比较，模型组肝匀浆中MDA水平显著升高(P＜0.05)；与模型组比较，高\中\低含量组的肝匀浆中MDA含量显著降低，其中高含量组效果最为明显，中\低含量组效果相近；其他实验组与模型组相比，没有显著差异。
动物一次性给予50％乙醇后，与空白组比较，模型组肝匀浆中GSH水平明显降低；与模型组比较，高\中\低含量组的肝匀浆中GSH含量均显著升高，趋近空白组水平，其中，中\高含量组与模型组的差异显著，低含量组也有一定的效果；其他实验组与模型组相比，没有显著差异。
动物一次性给予50％乙醇后，与空白组比较，模型组肝匀浆中TG水平明显升高；与模型组比较，高\中\低含量组的肝匀浆中TG含量显著降低，其中高含量组效果最为明显，中\低含量组效果相近；其他实验组与模型组相比，没有显著差异。
动物一次性给予50％乙醇后，肝脏病理检测结果发现，模型组小鼠主要表现为肝细胞脂变，肝细胞无明显坏死。本发明组合物各给药组小鼠的肝脏脂肪变性减轻，与模型组比较有统计学上的差异，有改善小鼠急性酒精性肝损伤的作用。
4.实验结论
摄入过量乙醇能在体内代谢产生大量氧自由基，导致细胞脂质过氧化反应，造成肝细胞的氧化损伤，而肝脏中MDA含量常可反映出机体内脂质过氧化的程度，间接地表明细胞损伤程度；同时乙醇导致肝脏脂质过氧化损伤，也可引起肝脏中GSH耗竭。另外乙醇在体内通过动员外周脂肪分解释放大量脂肪酶，促进肝脏TG合成增加，可致使脂肪在肝细胞内沉积。
在本次实验中，动物一次性给予50％乙醇后，与空白组比较，模型组肝匀浆中MDA含量显著升高，GSH含量有所降低，肝脏病理检测主要表现为肝细胞脂变，说明急性酒精性肝损伤模型成功；与模型比较，高\中\低含量组中肝匀浆中MDA含量显著降低、GSH含量显著升高，TG含量显著降低。根据结果判断，本发明组合物具有一定改善急性酒精性肝损伤的作用。
实施例2本发明组合物抗化学性肝损伤的作用研究
1.实验材料
1.1动物
ICR小鼠，清洁级，18～22g，雄性，购自扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK(苏)27～0001。
1.2药物与试剂
联苯双酯片：江苏鹏鹞药业有限公司，规格：25mg×100片，批号：1010071。
1.3仪器
电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。
CENTRIFUGE5804R冷冻离心机，Eppendorf公司。
2.实验方法
2.1分组与剂量设置
空白组：给予蒸馏水，0.2mL/20g体重灌胃；
模型组：给予蒸馏水，0.2mL/20g体重灌胃；
阳性对照组：给予联苯双酯，0.2mL/20g体重灌胃；
低含量组：权利要求2所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
中含量组：权利要求4所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
高含量组：权利要求3所述组合物，以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A1组：缺葛根，白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A2组：缺白芍，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A3组：缺五味子，葛根6重量份、白芍3重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A4组：缺余甘子，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A5组：缺枳椇子，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A6组：缺姜黄提取物，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A7组：缺番茄红素，葛根6重量份、白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、枳椇子6重量份、姜黄提取物0.25重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A8组：缺葛根、枳椇子，白芍3重量份、五味子2重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A9组：缺葛根、枳椇子、五味子，白芍3重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A10组：缺枳椇子、五味子，葛根6重量份、白芍3重量份、余甘子4重量份、姜黄提取物0.25重量份、番茄红素0.20重量份；以上成分按照优选的制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.638g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃。
2.2模型制作与给药
160只ICR小鼠随机分为16组，每组10只。每日经口灌胃给予各实验组组合物，正常组、模型组给予蒸馏水，阳性组给予联苯双酯片。给予实验组组合物30天后，各组动物隔夜禁食16小时，模型组、阳性组及各给药组一次灌胃0.5％四氯化碳10mL/kg体重(折合四氯化碳的剂量为80mg/kg体重)，正常组给植物油，阳性组、各实验组继续给予药物至实验结束(与四氯化碳灌胃间隔4小时以上)。给予四氯化碳24小时后处死动物，取血分离血清，测定ALT、AST、TG，并取肝脏进行病理组织学检测。
2.3检测指标
血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、肝脏病理组织检查。
3.实验结果
3.1空白组、模型组及各实验组的实验结果见表2。
表2血清中ALT、AST、TG含量、肝脏病理检测的结果
与空白组比较：+P＜0.05++P＜0.01+++P＜0.001
与模型组比较：*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001
由表2可见，动物一次灌胃0.5％四氯化碳后，与正常组比较，模型组小鼠血清中ALT、AST及TG水平明显升高(P＜0.001)；阳性药联苯双酯能显著降低ALT和TG水平，对血清AST水平的无显著影响；与模型比较，高\中\低含量组能显著降低ALT、AST、TG，表明本发明组合物对化学性肝损伤有良好的缓解作用。
4.实验结论
四氯化碳是长期以来公认的复制肝损伤动物模型的化学物质，许多研究均认为四氯化碳复制的肝损伤可模拟病毒性肝损伤，其表现出来的症状、肝功能检测指标、肝脏病理改变与病毒性肝炎具有相似性。本次实验中，小鼠灌胃0.5％四氯化碳24小时后，模型组小鼠肝脏病变主要表现为肝细胞坏死。坏死为凝固性坏死，多数肝细胞的轮廓存留、细胞核消失。坏死区位于中央静脉周围，严重区域坏死区扩大、连接两个肝小叶的中央静脉，或中央静脉与门管区(桥接坏死)。此外模型组小鼠血清ALT、AST、TG水平均升高，表明本次肝损伤模型的诱导成功。
联苯双酯和本发明组合物高\中\低含量组给药后，小鼠血清ALT、AST水平显著降低，给药组小鼠肝脏损伤程度远低于模型组，同时本发明组合物还能显著降低小鼠血清中TG水平，说明本发明组合物对四氯化碳诱导的化学性肝损伤有显著的保护作用。
实施例3本发明组合物的含量测定方法筛选与考察
本发明提供了一种具有缓解肝损伤作用的组合物的含量测定方法，在发明过程中用到的仪器与试药包括：Aginent 12高效液相色谱仪，没食子酸、葛根素、姜黄素对照品；甲醇、乙醇(色谱纯)，超纯水，其余试剂均为分析纯。
本发明提供的含量测定方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液制备；
(2)取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品溶于甲醇，制备混合对照品溶液；
(3)利用高效液相色谱法在三波长条件下，同时测定供试品溶液中没食子酸、葛根素和姜黄素的含量；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.2％磷酸或4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为2～5％，B为98～95％；15→16min，A从2～5％上升到12～17％，B从98～95％下降到88～83％；16→45min，A从12～17％上升到40～60％，B从88～83％降到60～40％；45→46min，A从40～60％上升到75～85％，B从60～40％下降到25～15％；46→55min，A为75～85％，B为25～15％；柱温20～40℃；流速0.8～1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm；
(4)根据高效液相色谱分析结果计算供试品中没食子酸、葛根素和姜黄素的含量。
本发明中供试品溶液采用以下步骤制备：
①取葛根50g、白芍20g、五味子10g、余甘子30g、枳椇子45g、姜黄提取物1.5g、番茄红素1g；
②葛根、白芍、五味子加入8倍量60％乙醇提取，三次，2h/次，提取液浓缩至比重1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
③余甘子、枳椇子加入8倍量水提取，三次，1.5h/次，提取液浓缩至比重1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
④干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀；
⑤准确称取混合物0.1g于50mL容量瓶中，加甲醇或乙醇至近刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用甲醇或乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
发明人对供试品溶液制备过程中步骤⑤的提取溶剂进行了选择，分别选用30％乙醇、50％乙醇、30％甲醇、50％甲醇和70％甲醇，考察结果见附图1。结果表明，用50％甲醇作为提取溶剂时，供试品溶液中没食子酸、葛根素、姜黄素质量分数高、峰形和分离度好，因此选用50％甲醇作为提取溶剂。
本发明中对照品溶液采用以下方法制备：
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液。
本发明中高效液相色谱的条件为：
HPLC色谱柱为C18，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.2％磷酸或4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为2～5％，B为98～95％；15→16min，A从2～5％上升到12～17％，B从98～95％下降到88～83％；16→45min，A从12～17％上升到40～60％，B从88～83％降到60～40％；45→46min，A从40～60％上升到75～85％，B从60～40％下降到25～15％；46→55min，A为75～85％，B为25～15％；柱温20～40℃；流速0.8～1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
发明人对流动相进行了考察，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.2％磷酸或4％乙酸为流动相B，分别组合，得到四组流动相系统，即甲醇-4％乙酸、乙腈-4％乙酸、乙腈-0.2％磷酸、甲醇-0.2％磷酸。考察结果见图2。在其他色谱条件相同的情况下，以甲醇或乙腈为流动相A，0.2％磷酸为流动相B梯度洗脱时，供试品中没食子酸、葛根素、姜黄素峰达到基线分离，峰形对称。其中甲醇-0.2％磷酸的分离效果最好，乙腈-0.2％磷酸的效果次之。
综上所述，最优选的色谱条件为：
PLC色谱柱为C18，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为3％，B为97％；15→16min，A从3％上升到15％，B从97％下降到85％；16→45min，A从15％上升到50％，B从85％降到50％；45→46min，A从50％上升到80％，B从50％下降到20％；46→55min，A为80％，B为20％；柱温30℃；流速1.0mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
在确定最优选的含量测定方法后，发明人对本发明所述测定方法进行了方法学考察。需要指出的是，方法学考察用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。
定量限考察：按上述最优选的色谱条件用对照品溶液稀释进行试验，结果没食子酸、葛根素和姜黄素的定量限分别为2.121ng，1.248ng，0.306ng。
线性关系考察：①称取没食子酸对照品27.7mg于20mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；②称取葛根素对照品18.208mg于20mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；③称取姜黄素对照品7.651mg于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；④精密吸取没食子酸对照品贮备液、姜黄素贮备液各0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0mL，葛根素对照品贮备液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL分别于10mL量瓶中，加入50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。分别进样10μl，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线。得没食子酸回归方程为：Y＝31.433X+4.0593，r＝1，没食子酸在0.1248～2.4958μg范围内线性良好；葛根素回归方程为Y＝41.475X+50.359，r＝0.9999，在0.1748～1.748μg范围内线性良好；姜黄素回归方程为Y＝77.81X+12.48，r＝0.9999，在0.0306～0.6121μg范围内线性良好。
精密度试验：按照优选的供试品制备方法制备供试品溶液，重复进样6次，测得峰面积，计算RSD，结果没食子酸、葛根素和姜黄素峰面积的RSD分别为0.22％，0.25％，0.31％。表明仪器和方法精密度良好。
稳定性试验：按照优选的供试品制备方法制备供试品溶液，分别于配制后0，2，4，6，8，10，12h进样测定，测得峰面积，计算RSD，结果没食子酸、葛根素和姜黄素峰面积的RSD分别为0.15％，0.14％，0.68％.结果表明供试品溶液在12h内稳定。
重复性试验：按照优选的供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，份供试品溶液，按照最优选的色谱条件进行测定。结果没食子酸、葛根素和姜黄素质量分数的RSD分别为0.58％，0.77％，0.96％。结果表明本方法重复性良好。
回收率试验：取精密度试验中的供试品溶液，按照最优选的色谱条件测定没食子酸、葛根素、姜黄素含量；取同一混合物50mg，精密称定，加入没食子酸0.7487mg，葛根素0.9614mg，没食子酸0.2754mg，按照优选的供试品制备方法制备供试品溶液，平行制备共6份，按最优选的色谱条件进行测定，计算含量，并计算回收率。结果平均回收率没食子酸为1.25％，RSD 1.81％；葛根素为97.29％，RSD 1.69％；姜黄素为97.53，％，RSD 0.92％。结果见3～5。
表3没食子酸加样回收率试验结果(n＝6)
表4葛根素加样回收率试验结果(n＝6)
表5姜黄素加样回收率试验结果(n＝6)
样品含量测定
葛根5 白芍2 五味子1 余甘子3 枳椇子4.5 姜黄提取物0.15 番茄红素0.10
(1)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加8倍量水，提取3次，每次1.5小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀；
(4)准确称取混合物0.1g于50mL容量瓶中，加甲醇或乙醇至近刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用甲醇或乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；
(5)取续滤液10μL，注入高效液相色谱仪，按照优选的色谱条件，进行含量测定，测定结果为含没食子酸1.49％、葛根素1.98％、姜黄素0.58％，结果见图3。
实施例4片剂
葛根4 白芍1 五味子0.50 余甘子2 枳椇子3
姜黄提取物0.10 番茄红素0.05
(1)葛根、白芍、五味子加10倍量80％乙醇，提取4次，每次3小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加10倍量水，提取4次，每次3小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入30％微晶纤维素、1％硬脂酸镁、4％交联羧甲基纤维素钠，制粒、整粒、压片，即得。
含量测定：
取10片样品，研碎、混匀，取0.1g制剂研细后于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件：色谱柱为C18，以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为2％，B为98％；15→16min，A从2％上升到12％，B从98％下降到88％；16→45min，A从12％上升到400％，B从88％降到60％；45→46min，A从40％上升到75％，B从60％下降到25％；46→55min，A为75～8％，B为25％；柱温20℃；流速0.8mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
实施例5硬胶囊剂
葛根6 白芍3 五味子2 余甘子4 枳椇子6
姜黄提取物0.25 番茄红素0.20
(1)葛根、白芍、五味子加6倍量50％乙醇，提取2次，每次1小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加6倍量水，提取2次，每次1小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入适量淀粉，以聚丙烯酸树脂制粒，装胶囊，即得。
含量测定：
取10粒样品，研碎、混匀，取0.1g制剂研细后于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为5％，B为95％；15→16min，A从5％上升到17％，B从95％下降到83％；16→45min，A从17％上升到60％，B从83％降到40％；45→46min，A从60％上升到85％，B从40％下降到15％；46→55min，A为85％，B为15％；柱温40℃；流速1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
实施例6软胶囊剂
葛根5 白芍2 五味子1 余甘子3 枳椇子4.5
姜黄提取物0.15 番茄红素0.10
(1)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加8倍量水，提取3次，每次1.5小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入玉米油、大豆磷脂、蜂蜡制成的混合油基质适量，充分混合，用胶体磨研至均匀，采用压制法，制成软胶囊，即得。
含量测定：
取10粒样品，内容物混匀，取5mL内容物于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为3％，B为97％；15→16min，A从3％上升到15％，B从97％下降到85％；16→45min，A从15％上升到50％，B从85％降到50％；45→46min，A从50％上升到80％，B从50％下降到20％；46→55min，A为80％，B为20％；柱温30℃；流速1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
实施例7颗粒剂
葛根5 白芍2 五味子1 余甘子3 枳椇子4.5
姜黄提取物0.15 番茄红素0.10
(1)葛根、白芍、五味子加10倍量80％乙醇，提取4次，每次3小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加10倍量水，提取4次，每次3小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入30％微晶纤维素、1％硬脂酸镁、4％交联羧甲基纤维素钠，制粒、整粒，即得。
含量测定：
取10g样品，研碎、混匀，取0.1g制剂研细后于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇为流动相A，以4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为5％，B为95％；15→16min，A从5％上升到17％，B从95％下降到83％；16→45min，A从17％上升到60％，B从83％降到40％；45→46min，A从60％上升到85％，B从40％下降到15％；46→55min，A为85％，B为15％；柱温40℃；流速1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
实施例8滴丸剂
葛根6 白芍3 五味子2 余甘子4 枳椇子6
姜黄提取物0.25 番茄红素0.20
(1)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加86倍量水，提取3次，每次1.5小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，过筛，加入适量聚乙二醇4000，加热熔化，混匀，滴入甲基硅油冷却剂中，制丸，包薄膜衣，即得。
含量测定：
取10丸样品，研碎、混匀，取0.1g制剂研细后于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件：色谱柱为C18，以乙腈为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为2％，B为98％；15→16min，A从2％上升到12％，B从98％下降到88％；16→45min，A从12％上升到400％，B从88％降到60％；45→46min，A从40％上升到75％，B从60％下降到25％；46→55min，A为75～8％，B为25％；柱温20℃；流速0.8mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
实施例9口服液
葛根4 白芍1 五味子0.50 余甘子2 枳椇子3
姜黄提取物0.10 番茄红素0.05
(1)葛根、白芍、五味子加6倍量50％乙醇，提取2次，每次1小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加6倍量水，提取2次，每次1小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入适量糖粉、甜菊素、吐温，纯化水溶解，即得。
含量测定：
取10支样品，混匀，取5mL内容物于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以乙腈为流动相A，以4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为3％，B为97％；15→16min，A从3％上升到15％，B从97％下降到85％；16→45min，A从15％上升到50％，B从85％降到50％；45→46min，A从50％上升到80％，B从50％下降到20％；46→55min，A为80％，B为20％；柱温30℃；流速1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
实施例10水蜜丸
葛根5 白芍2 五味子1 余甘子3 枳椇子4.5
姜黄提取物0.15 番茄红素0.10
(1)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加8倍量水，提取3次，每次1.5小时，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，每100g粉末加炼蜜40g，与适量的开水，泛丸，干燥，即得。
含量测定：
取10g样品，研碎，混匀，取0.1g粉末于50mL容量瓶中加入50％乙醇至刻度，超声提取(250W，40kHz)30min，放冷，用50％乙醇定容，过滤，取续滤液；
准确称取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇为流动相A，以4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min，A为3％，B为97％；15→16min，A从3％上升到15％，B从97％下降到85％；16→45min，A从15％上升到50％，B从85％降到50％；45→46min，A从50％上升到80％，B从50％下降到20％；46→55min，A为80％，B为20％；柱温30℃；流速1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
Claims (14)
1.一种具有缓解肝损伤作用的组合物，其特征在于，该组合物是由以下重量份的原料制成：
葛根 4～6重量份 白芍 1～3重量份 五味子 0.5～2重量份
余甘子 2～4重量份 枳椇子 3～6重量份
姜黄提取物 0.10～0.25重量份 番茄红素 0.05～0.20重量份。
2.如权利要求1所述组合物，其特征在于，该组合物是由以下重量份原料制成：
葛根 4重量份 白芍 1重量份 五味子 0.50重量份 余甘子 2重量份
枳椇子 3重量份 姜黄提取物 0.10重量份 番茄红素 0.05重量份。
3.如权利要求1所述组合物，其特征在于，该组合物是由以下重量份原料制成：
葛根 6重量份 白芍 3重量份 五味子 2重量份 余甘子 4重量份
枳椇子 6重量份 姜黄提取物 0.25重量份 番茄红素 0.20重量份。
4.如权利要求1所述组合物，其特征在于，该组合物是由以下重量份原料制成：
葛根 5重量份 白芍 2重量份 五味子 1重量份 余甘子 3重量份
枳椇子 4.5重量份 姜黄提取物 0.15重量份 番茄红素 0.10重量份。
5.如权利要求1～4任一所述的组合物，其特征在于，该组合物中加入常用辅料，选自微晶纤维素、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮或磷酸钙。
6.一种如权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
(1)葛根、白芍、五味子加6～10倍量50％～80％乙醇，提取2～4次，每次1～3小时，提取液浓缩至1.00～1.30，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加6～10倍量水，提取2～4次，每次1～3小时，提取液浓缩至1.00～1.30，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入辅料，得所需制剂。
7.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
(1)葛根、白芍、五味子加8倍量60％乙醇，提取3次，每次2h，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉A；
(2)余甘子、枳椇子加8倍量水，提取3次，每次1.5h，提取液浓缩至1.20，减压干燥，粉碎，得到干粉B；
(3)干粉A、干粉B混合，加入姜黄提取物及番茄红素，混匀，加入辅料，得所需制剂。
8.一种如权利要求1所述组合物的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液制备；
(2)取没食子酸、葛根素、姜黄素对照品溶于甲醇，制备混合对照品溶液；
(3)利用高效液相色谱法在三波长条件下，同时测定供试品溶液中没食子酸、葛根素和姜黄素的含量；
色谱条件为：HPLC色谱柱为C18，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.2％磷酸或4％乙酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min,A为2～5％，B为95～98％；15→16min，A从2～5％上升到12～17％，B从95～98％下降到83～88％；16→45min，A从12～17％上升到40～60％，B从83～88％降到40～60％；45→46min，A从40～60％上升到75～85％，B从40～60％下降到15～25％；46→55min，A为75～85％，B为15～25％；柱温20～40℃；流速0.8～1.2mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm；
(4)根据高效液相色谱分析结果计算供试品中没食子酸、葛根素和姜黄素的含量。
9.如权利要求8所述含量测定方法，其特征在于，所述供试品溶液是将权利要求1～5任一所述组合物及辅料依照权利要求6所述制备方法制成制剂，取0.1g制剂研细后于50mL容量瓶中加入甲醇或乙醇至刻度，超声提取30min,用甲醇或乙醇定容，过滤，取续滤液，即得。
10.如权利要求8所述含量测定方法，其特征在于，所述混合对照品溶液的制备方法是：取没食子酸、葛根素和姜黄素对照品适量于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇，待姜黄素完全溶解后，用水定容至刻度，摇匀，制得含没食子酸30μg/mL、葛根素40μg/mL、姜黄素10μg/mL的混合对照品溶液。
11.如权利要求8所述含量测定方法，其特征在于，色谱条件为：HPLC色谱柱为WatersC18，以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为0→15min,A为3％，B为97％；15→16min，A从3％上升到15％，B从97％下降到85％；16→45min，A从15％上升到50％，B从85％降到50％；45→46min，A从50％上升到80％，B从50％下降到20％；46→55min，A为80％，B为20％；柱温30℃；流速1.0mL·min-1；检测波长273nm、250nm、430nm。
12.如权利要求1～4任一所述组合物，其特征在于，该组合物是片剂、丸剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂。
13.如权利要求1～4任一所述组合物在制备抗化学性肝损伤的保健品中的应用。
14.如权利要求1～4任一所述组合物在制备抗酒精性肝损伤的保健品中的应用。
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