CN103937841A - 烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用 - Google Patents

烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103937841A
CN103937841A CN201410200482.5A CN201410200482A CN103937841A CN 103937841 A CN103937841 A CN 103937841A CN 201410200482 A CN201410200482 A CN 201410200482A CN 103937841 A CN103937841 A CN 103937841A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gene
enoyl
hydratase
coenzyme
coding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410200482.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103937841B (zh
Inventor
钱志刚
於佳乐
夏小霞
钟建江
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN201410200482.5A priority Critical patent/CN103937841B/zh
Publication of CN103937841A publication Critical patent/CN103937841A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103937841B publication Critical patent/CN103937841B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种烯酰辅酶A水合酶在己二酸生物合成中的应用，本发明所采用的烯酰辅酶A水合酶不仅具有催化3‐羟基己二酰辅酶A向2,3‐烯‐己二酰辅酶A转化的活性，它在己二酸合成途径中还具有更好的催化能力。通过将其替换已有烯酰辅酶A水合酶(Crt)，大肠杆菌内己二酸的产量提高了数倍。本发明所鉴定的烯酰辅酶A水合酶从一定程度克服了现有己二酸生物合成途径效率不高的瓶颈，为己二酸以及类似化合物的生物合成提供了更大的潜力。

Description

烯酰辅酶A水合酶在己二酸生物合成中的应用
技术领域
本发明涉及的是一种生物工程技术领域的基因应用，具体是一种来源于Ralstoniaeutropha H16的烯酰辅酶A水合酶在己二酸生物合成中的应用。
背景技术
己二酸是一种重要的化工原料，其主要用途是作为尼龙‐6，6合成的前体。己二酸全球每年的需求量达到260万吨。目前己二酸的主要制备方法是通过在石油中提炼得到环己烷，再将其进一步氧化得到己二酸。由于石油资源的日趋紧缺，这种基于石油化工的生产方法的主要问题是资源的不可再生性。
针对这个问题，人们提出了各种利用可再生资源生物合成己二酸的途径，其中包括利用己二酸以及脂肪酸降解的逆向反应合成己二酸。这个合成途径主要包括5个步骤：1)乙酰辅酶A及琥珀酰辅酶A缩合形成3‐羰基己二酰辅酶A；2)3‐羰基己二酰辅酶A还原成3‐羟基己二酰辅酶A；3)3‐羟基己二酰辅酶A脱水形成2，3‐烯‐己二酰辅酶A；4)2，3‐烯‐己二酰辅酶A加氢形成己二酰辅酶A；5)己二酰辅酶A水解成己二酸。目前本实验室已在大肠杆菌中成功构建该途径，并在导入该途径的工程菌株发酵液中检测到少量的己二酸生成。
烯酰辅酶A水合酶是脂肪酸b‐氧化途径中的一个关键酶，它能催化Δ‐2，3‐烯酰辅酶A水化生成3‐羟酰辅酶A。同时该酶也能催化3‐羟酰辅酶A的脱水反应，这个特性已被应用到基于逆向β‐氧化的一系列C4‐C6化合物生物合成途径中。目前使用最多的是来源于Clostridiumacetobutylicum中的烯酰辅酶A水合酶(Crt),该酶已被证明可催化多种C4‐C63‐羟酰辅酶A的脱水反应，同时也用在了上述己二酸的合成途径中。作为一种主要天然生产正丁醇的菌种，来源于Clostridium acetobutylicum中的酶很可能对于C4的化合物更有亲和性，而对C6化合物的催化效率可能不高。因此从其它菌种中筛选到更适合C6合成的烯酰辅酶A水合酶来进一步提高工程菌株中己二酸的产量将具有重大的工业意义。
经过对现有技术的检索发现，中国专利文献号CN103555643A公开(公告)日2014.02.05，公开了一种用于产生己二酸和其他化合物的微生物，其具有己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺途径。所述微生物生物体含有至少一种编码己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺途径中各自的酶的外源性核酸。本发明另外提供了产生己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺的方法。该方法可以包括在产生己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺的条件下和足以产生己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺的时间内培养产生己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺的微生物生物体，其中所述微生物生物体以足以产生各自产物的量表达至少一种编码己二酸、6‐氨基己酸或己内酰胺途径酶的外源性核酸。但该技术并没有实验数据支撑其所述的己二酸合成途径，也没有任何细节表明在该途径中采用何种基因更适合己二酸合成。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种烯酰辅酶A水合酶在己二酸生物合成中的应用，采用来源于Ralstoniaeutropha H16的烯酰辅酶A水合酶Ech代替来源于ClostridiumacetobutylicumATCC824的烯酰辅酶A水合酶Crt，在其它遗传背景与发酵培养条件都一致的情况下，显著提高了己二酸产量，为解决现有问题提供了新的思路和方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一种烯酰辅酶A水合酶在己二酸生物合成中的应用，将来源于Ralstoniaeutropha H16的烯酰辅酶A水合酶用于己二酸的发酵生产。
所述的应用具体是指：在含有葡萄糖的培养基中培养含有编码3‐羰基己二酰辅酶A硫解酶的基因、编码3‐羟基酰基辅酶A脱氢酶的基因、编码反‐2‐烯酰辅酶A还原酶的基因、编码磷酸丁酰转移酶的基因、编码丁酸激酶的基因以及编码烯酰辅酶A水合酶基因的基因工程菌，并从培养液中回收得到己二酸。
所述的编码3‐羰基己二酰辅酶A硫解酶的基因为PaaJ，来源于大肠杆菌；
所述的编码3‐羟基酰基辅酶A脱氢酶的基因为PaaH1，来源于真氧产碱杆菌H16RalstoniaeutrophaH16；
所述的编码反‐2‐烯酰辅酶A还原酶的基因为Ter，来源于眼虫藻Euglena gracilis；
所述的编码磷酸丁酰转移酶的基因为Ptb，来源于丙酮丁酸梭菌ClostridiumacetobutylicumATCC824；
所述的编码丁酸激酶的基因为Buk1，来源于丙酮丁酸梭菌ClostridiumacetobutylicumATCC824；
所述的编码烯酰辅酶A水合酶基因为Crt，来源于丙酮丁酸梭菌ClostridiumacetobutylicumATCC824；
所述的编码烯酰辅酶A水合酶基因为Ech，来源于真氧产碱杆菌RalstoniaeutrophaH16。
所述的基因工程菌通过PCR或化学合成得到核苷酸序列，连接表达载体得到重组质粒，最后通过将重组质粒转化大肠杆菌获得。
所述的核苷酸序列包括：Ter、PaaJ、PaaH1、Crt、Ech、Ptb、Buk1。
所述的表达载体包括：pTrc99A质粒和pZS*27mcherry质粒，具体为Ter和PaaJ在pTrc99A质粒表达，PaaH1、Crt/Ech、Ptb、Buk1在pZS*27mcherry质粒表达。
所述的大肠杆菌是指：大肠杆菌E.coliQZ1111，记载于中国专利申请号201310203945.9申请日:2013.05.28，公开号:CN103243064A。
所述的基因通过对Clostridium acetobutylicumATCC824crt基因进行同源性比对(BLAST)到，来源于Ralstoniaeutropha H16的编码烯酰辅酶A水合酶的核苷酸序列如Seq ID No.1所示(GENBANK序号：4249793)，其氨基酸序列如Seq ID No.2所示。
附图说明
图1为本发明己二酸体内合成途径中涉及的质粒图谱。
图2为实施例中不同的烯酰辅酶A水合酶在己二酸生产中的效果示意图；
图中样品取自第120小时发酵液上清，每组样品有3个平行样。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
己二酸生物合成途径的构建
本实施例中生物合成途径的构建是基于质粒的异源表达方式，所采用的菌株、质粒、酶与培养基等包括：表达质粒为pTrc99A及pZS*27mcherry；表达宿主为大肠杆菌E.coliQZ1111；克隆宿主为大肠杆菌E.coliDH5α；基因操作工具包括：限制性内切酶、DNA聚合酶、T4DNA连接酶；LB培养基：每升含胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，氨苄青霉素浓度为100mg/L，卡那霉素浓度为50mg/L。
1)PCR扩增及重组质粒的构建：设计引物序列，以相应菌株全基因组序列为模板进行扩增，用内切酶酶切并连接到经同样内切酶酶切的表达质粒载体上，其中：Ter和PaaJ在pTrc99A质粒表达，PaaH1、Crt/Ech、Ptb、Buk1在pZS*27mcherry质粒表达。
2)将表达质粒载体转化大肠杆菌E.coli DH5α，筛选重组质粒，并进行测序验证，其中：Ter是来源于Euglena gracilis的反‐2‐烯酰辅酶A还原酶，PaaJ是来源于大肠杆菌的3‐羰基己二酰辅酶A硫解酶，PaaH1是来源于Ralstoniaeutropha H16的3‐羟基酰基辅酶A脱氢酶，Ptb是来源于Clostridium acetobutylicumATCC824的磷酸丁酰转移酶，Buk1是来源于ClostridiumacetobutylicumATCC824的丁酸激酶，Crt是来源于Clostridium acetobutylicumATCC824的烯酰辅酶A水合酶，Ech是来源于Ralstoniaeutropha H16的烯酰辅酶A水合酶。
所述的引物序列如下：
PaaJ‐上游：5’‐CGTCGGTACCATTACAGGAGAAGCCTGATG‐3’
PaaJ‐下游：5’‐CTGCGGATCCTCAAACACGCTCCAGAATCAT‐3’
PaaH1‐上游：5’‐TAGAGGTACCATGAGCATCAGGACAGTGGG‐3’
PaaH1‐下游：5’‐CGGAGGATCCTTACTTGCTATAGACGTACA‐3’
Crt‐上游：5’‐GAGCGGATCCAGGAGGATTAGTCATGGAAC‐3’
Crt‐下游：5’‐CGTCACGCGTTTATCTATTTTTGAAGCCTTC‐3’
Ech‐上游：5’‐TTCAGGATCCAGGAGGATTAGTCATGCCGTACGAAAACATCCT‐3’
Ech‐下游：5’‐GCTGACGCGTTTAGCGATGCTGGAAATTCG‐3’
Ter‐上游：5’‐CCGACGATCGATGATTGTAAAACCAATGGT‐3’
Ter‐下游：5’‐CTTCACGCGTTTAAATCCTGTCGAACCTTTC‐3’
Ptb‐Buk1‐上游：5’‐CGTGGTACCGCTAGCGTGATTAAGAGTTTTAATGAAAT‐3’
Ptb‐Buk1‐下游：5’‐TTGGATCCCCCGGGTTATTTGTATTCCTTAGCTTTTTC‐3’
其中划线部分是相应的酶切位点。
3)通过将上述构建的质粒导入表达宿主，达到利用微生物发酵生产己二酸的目的，具体步骤包括：
3.1)菌株与培养条件：将上述构建的质粒pTrc99A‐Ter‐PaaJ连同pZS‐Buk1‐Ptb‐PaaH1‐Crt或pZS‐Buk1‐Ptb‐PaaH1‐Ech一同转化至E.coli QZ1111感受态细胞，即pTrc99A‐Ter‐PaaJ和pZS‐Buk1‐Ptb‐PaaH1‐Crt两个质粒共同转化或者pTrc99A‐Ter‐PaaJ和pZS‐Buk1‐Ptb‐PaaH1‐Ech两个质粒共同转化。
经过筛选及活化得到用于发酵生产的菌株。
所述的E.coli QZ1111感受态细胞采用的培养基为发酵培养基，具体为pH为6.8的R/2培养基，其组分及含量为：10g/L葡萄糖、2g/L磷酸氢二铵、6.75g/L磷酸二氢钾、0.85g/L柠檬酸、0.7g/L七水合硫酸镁、0.5％(v/v)微量金属溶液。
所述的微量金属溶液包括：10g/L七水合硫酸亚铁、2.25g/L七水合硫酸锌、1g/L五水合硫酸铜、0.5g/L五水合硫酸锰、0.23g/L十水合硼酸钠、2g/L二水合氯化钙、和0.1g/L钼酸铵。
所述的E.coli QZ1111感受态细胞首先经过LB培养基活化，条件同步骤1)，然后以初始接种量为OD600＝0.05接入到R/2培养基中，待细胞37℃培养至OD约为0.4时，加入50μM IPTG于30℃继续培养数天。
3.2)产物提取及定量测定
发酵液上清通过5倍体积的乙酸乙酯萃取，然后经过浓缩，溶于1倍体积乙酸乙酯，加入1/2体积的BSTFA衍生化试剂，60℃反应30分钟后进行三重四极杆气质联用检测。
通过对己二酸标品作定量标准曲线，检测样品111/55.1(m/z)特征碎片离子的信号强度，在表达Ralstoniaeutropha H16的烯酰辅酶A水合酶(ECH)的菌株中，可以检测到最终发酵液中己二酸的浓度为639±34μg/L。而相同培养条件以及途径中其它基因一致的情况下，表达
Clostridium acetobutylicum ATCC824的烯酰辅酶A水合酶(Crt)菌株的发酵液中己二酸的浓度仅为134±22μg/L。
如图2所示，为在其它遗传背景与发酵培养条件都一致的情况下，本实施例中表达Crt的大肠杆菌与表达Ech的大肠杆菌最终的己二酸产量差异。根据图2可见本发明方法显著提高了己二酸产量，达到476.9％。

Claims (8)

1.一种烯酰辅酶A水合酶在己二酸生物合成中的应用，其特征在于，将来源于Ralstoniaeutropha H16的烯酰辅酶A水合酶用于己二酸的发酵生产。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是，在含有葡萄糖的培养基中培养含有编码3‐羰基己二酰辅酶A硫解酶的基因、编码3‐羟基酰基辅酶A脱氢酶的基因、编码反‐2‐烯酰辅酶A还原酶的基因、编码磷酸丁酰转移酶的基因、编码丁酸激酶的基因以及编码烯酰辅酶A水合酶基因的基因工程菌，并从培养液中回收得到己二酸。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述的编码3‐羰基己二酰辅酶A硫解酶的基因为PaaJ，来源于大肠杆菌；
所述的编码3‐羟基酰基辅酶A脱氢酶的基因为PaaH1，来源于真氧产碱杆菌H16RalstoniaeutrophaH16；
所述的编码反‐2‐烯酰辅酶A还原酶的基因为Ter，来源于眼虫藻Euglena gracilis；
所述的编码磷酸丁酰转移酶的基因为Ptb，来源于丙酮丁酸梭菌ClostridiumacetobutylicumATCC824；
所述的编码丁酸激酶的基因为Buk1，来源于丙酮丁酸梭菌Clostridium acetobutylicumATCC824；
所述的编码烯酰辅酶A水合酶基因为Crt，来源于丙酮丁酸梭菌ClostridiumacetobutylicumATCC824；
所述的编码烯酰辅酶A水合酶基因为Ech，来源于真氧产碱杆菌RalstoniaeutrophaH16。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的基因工程菌通过PCR或化学合成得到核苷酸序列，连接表达载体得到重组质粒，最后通过将重组质粒转化大肠杆菌获得。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征是，所述的核苷酸序列包括：Ter、PaaJ、PaaH1、Crt、Ech、Ptb、Buk1。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征是，所述的表达载体包括：pTrc99A质粒和pZS*27mcherry质粒。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征是，Ter和PaaJ在pTrc99A质粒表达，PaaH1、Crt/Ech、Ptb、Buk1在pZS*27mcherry质粒表达。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的来源于Ralstoniaeutropha H16的编码烯酰辅酶A水合酶的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，其氨基酸序列如Seq ID No.2所示。
CN201410200482.5A 2014-05-13 2014-05-13 烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用 Active CN103937841B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410200482.5A CN103937841B (zh) 2014-05-13 2014-05-13 烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410200482.5A CN103937841B (zh) 2014-05-13 2014-05-13 烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103937841A true CN103937841A (zh) 2014-07-23
CN103937841B CN103937841B (zh) 2015-10-28

Family

ID=51185710

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410200482.5A Active CN103937841B (zh) 2014-05-13 2014-05-13 烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103937841B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105112436A (zh) * 2015-06-29 2015-12-02 江南大学 一种己二酸的全生物合成方法
CN106399343A (zh) * 2015-07-29 2017-02-15 上海交通大学 戊二酸生物改进合成方法
CN106715701A (zh) * 2014-05-13 2017-05-24 英威达技术有限责任公司 通过氧化切割从长链脂肪酸生产6‑碳化学物的方法
CN111386339A (zh) * 2017-11-30 2020-07-07 东丽株式会社 用于生产3-羟基己二酸、α-氢化己二烯二酸及/或己二酸的基因修饰微生物以及该化学产品的制造方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010129936A1 (en) * 2009-05-07 2010-11-11 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the biosynthesis of adipate, hexamethylenediamine and 6-aminocaproic acid
CN102027125A (zh) * 2008-03-11 2011-04-20 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 己二酸酯或硫代酯合成
WO2012031910A2 (en) * 2010-09-10 2012-03-15 Dsm Ip Assets B.V. Method for preparing alpha-ketopimelic acid by c1-elongation
WO2012177721A1 (en) * 2011-06-22 2012-12-27 Genomatica, Inc. Microorganisms for producing 6-aminocaproic acid
WO2013036812A1 (en) * 2011-09-07 2013-03-14 William Marsh Rice University Functionalized carboxylic acids and alcohols by riverse fatty acid oxidation
CN103555643A (zh) * 2008-03-27 2014-02-05 基因组股份公司 用于产生己二酸和其他化合物的微生物

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102027125A (zh) * 2008-03-11 2011-04-20 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 己二酸酯或硫代酯合成
CN103555643A (zh) * 2008-03-27 2014-02-05 基因组股份公司 用于产生己二酸和其他化合物的微生物
WO2010129936A1 (en) * 2009-05-07 2010-11-11 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the biosynthesis of adipate, hexamethylenediamine and 6-aminocaproic acid
WO2012031910A2 (en) * 2010-09-10 2012-03-15 Dsm Ip Assets B.V. Method for preparing alpha-ketopimelic acid by c1-elongation
WO2012031910A3 (en) * 2010-09-10 2012-06-07 Dsm Ip Assets B.V. Method for preparing alpha-ketopimelic acid by c1-elongation
WO2012177721A1 (en) * 2011-06-22 2012-12-27 Genomatica, Inc. Microorganisms for producing 6-aminocaproic acid
WO2013036812A1 (en) * 2011-09-07 2013-03-14 William Marsh Rice University Functionalized carboxylic acids and alcohols by riverse fatty acid oxidation

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANNE POHLMANN ET.AL.: "Genome sequence of the bioplastic-producing ‘‘Knallgas’’ bacterium Ralstonia eutropha H16", 《NATURE BIOTECHNOLOGY》 *
CHARLES M. ROBERTS,ET.AL.: "The Role of Enoyl-CoA Hydratase in the Metabolism of Isoleucine by Pseudomonas putida", 《ARCH. MICROBIOL.》 *
GAUTAM AGNIHOTRIY AND HUNG-WEN LIU: "Enoyl-CoA Hydratase: Reaction, Mechanism, and Inhibition", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 *
JUMIARTI AGUS等: "Molecular weight characterization of poly[(R)-3-hydroxybutyrate] synthesized by genetically engineered strains of Escherichia coli", 《POLYMER DEGRADATION AND STABILITY》 *
POHLMANN,A ET. AL.: "Accession no：AM260479，Ralstonia eutropha H16 chromosome 1", 《GENBANK DATABASE》 *
SHUN SATO,ET.AL.: "Poly[(R)-3-Hydroxybutyrate] Formation in Escherichia coli from Glucose through an Enoyl-CoA Hydratase-Mediated Pathway", 《JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING》 *
刘凯等: "罗氏真养菌W50的D-木糖代谢途径工程改造", 《微生物学报》 *
宋水山: "Ralstonia eutropha CH34酯酶基因的克隆和序列分析", 《微生物学报》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106715701A (zh) * 2014-05-13 2017-05-24 英威达技术有限责任公司 通过氧化切割从长链脂肪酸生产6‑碳化学物的方法
CN105112436A (zh) * 2015-06-29 2015-12-02 江南大学 一种己二酸的全生物合成方法
CN105112436B (zh) * 2015-06-29 2018-08-28 江南大学 一种己二酸的全生物合成方法
CN106399343A (zh) * 2015-07-29 2017-02-15 上海交通大学 戊二酸生物改进合成方法
CN106399343B (zh) * 2015-07-29 2019-07-05 上海交通大学 戊二酸生物改进合成方法
CN111386339A (zh) * 2017-11-30 2020-07-07 东丽株式会社 用于生产3-羟基己二酸、α-氢化己二烯二酸及/或己二酸的基因修饰微生物以及该化学产品的制造方法
CN111386339B (zh) * 2017-11-30 2024-05-10 东丽株式会社 用于生产3-羟基己二酸、α-氢化己二烯二酸及/或己二酸的基因修饰微生物以及该化学产品的制造方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103937841B (zh) 2015-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Claassens et al. A critical comparison of cellular and cell-free bioproduction systems
Yishai et al. The formate bio-economy
Liew et al. Gas fermentation—a flexible platform for commercial scale production of low-carbon-fuels and chemicals from waste and renewable feedstocks
JP4760951B2 (ja) ブタノール生産能を有する組換え微生物及びブタノールの製造方法
Garg et al. Bioconversion of methane to C-4 carboxylic acids using carbon flux through acetyl-CoA in engineered Methylomicrobium buryatense 5GB1C
Stolterfoht et al. Four distinct types of EC 1.2. 1.30 enzymes can catalyze the reduction of carboxylic acids to aldehydes
CN104232595B (zh) 鞘氨醇单胞菌的虾青素合成酶及其编码基因和鞘氨醇单胞菌遗传操作的方法
JP2013513384A (ja) 合成ガスまたは他のガス状の炭素源およびメタノールを１，３−ブタンジオールへ変換するための方法および生物
Park et al. Granular activated carbon supplementation alters the metabolic flux of Clostridium butyricum for enhanced biohydrogen production
CN103243065A (zh) 一种生产法尼烯的菌株及其应用
CN103937841B (zh) 烯酰辅酶a水合酶在己二酸生物合成中的应用
Mehrer et al. Growth-coupled bioconversion of levulinic acid to butanone
CN118256413A (zh) 用于稳健动态代谢控制的组合物和方法
CN114026246A (zh) 从可再生来源生产化学品
Song et al. Development of highly characterized genetic bioparts for efficient gene expression in CO2-fixing Eubacterium limosum
Yoon et al. Poly-3-hydroxybutyrate production in acetate minimal medium using engineered Methylorubrum extorquens AM1
Emelianov et al. Engineered Methylococcus capsulatus Bath for efficient methane conversion to isoprene
US11913052B2 (en) Cell-free protein synthesis driven metabolic engineering
JP6054872B2 (ja) ＣｏＡ転移酵素を用いる有機酸の製造方法
US11542533B2 (en) Method for producing 1,3-propanediol by fermentation of a recombinant microorganism
CN106399343A (zh) 戊二酸生物改进合成方法
CN105802984B (zh) 一种微生物生产丙酸的方法
Chainani et al. Coupling chemistry and biology for the synthesis of advanced bioproducts
CN103589756A (zh) 利用l-乳酸生物合成s-1,2-丙二醇的方法
EP4204569A1 (en) Synthetic growth on one-carbon substrates

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant