CN103919141A - 花豆种子萃取物及其制备方法与用途 - Google Patents

花豆种子萃取物及其制备方法与用途 Download PDF

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Abstract

一种花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物，以包含以下步骤的方法制得：a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液，其中，该步骤b)是约以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。

Description

花豆种子萃取物及其制备方法与用途
技术领域
本发明与花豆种子萃取物有关，更详细地是指一种可调控哺乳动物血糖的花豆种子萃取物及其制备方法与用途。
背景技术
花豆种子营养价值极高，富含多种矿物元素(钙、铜、铁、锰、镁、锌)、蛋白质、维生素和多酚类化合物。其鲜荚除可作蔬菜食用外，尚可制成盐渍品、罐头，种子亦可加工为豆馅、糕点、酱油和味精等。此外全株皆可为饲料。由于花豆富含各种机能性成分，因此也被认为是于有益人体健康的保健食品。
历史文献显示多酚类化合物会于消化系统中作用，并调整人体内碳水化合物的分解及吸收，因此存在庞大市场需求，并且相关的机能性食品或保健食品纷纷问市，从而如何提升既有花豆有效萃取出高含量多酚类化合物与其他活性成分的技术存在改善空间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种花豆种子萃取物及其制备方法与用途。
为实现上述目的，本发明提供的花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物，是以包含以下步骤的方法制得：
a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及
c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液；
其中，该步骤b)是以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
其中，该第一溶剂是选自以下群组：水、C1-C4醇类及其组合任一种。
其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
其中，该第一溶剂为50％乙醇水溶液(v/v)。
其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
其中，该第一溶剂为80％甲醇水溶液(v/v)。
其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10,000×g离心30分钟。
其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系。
其中，该花豆是选自该花荚种。
其中，该花豆是选自该诱变系。
其中，该诱变为SA-05品系。
其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.62毫克/每公克花豆种子至3.69毫克/每公克花豆种子。
其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
其中，该步骤d)之后，包括一冷冻真空干燥步骤e)以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物包含有至少一蛋白质。
其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于52至95毫克/每公克花豆种子。
其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于0.29至1.9毫克/每公克花豆种子。
其中，该萃取物具有抑制醛糖还原酶的活性，其IC50为0.36mg/ml至0.40mg/ml。
其中，该萃取物具有抑制醛糖还原酶的活性，其IC50为0.39mg/ml至0.46mg/ml。
其中，该萃取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50为1.46mg/ml至1.92mg/ml。
其中，该萃取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50为1.32mg/ml至1.94mg/ml。
本发明提供的一种调节哺乳动物血糖的饮食品，包含一有效量的根据上述任一种的萃取物与至少一食品添加剂。
本发明提供的一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据上述任一种的萃取物与至少一药学上可接受的赋型剂。
本发明提供的一种使用上述任一种的花豆种子萃取物在制造药剂的用途，其中该药剂是用于调节哺乳动物血糖。
本发明提供的一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据上述任一种的萃取物、一代谢抑制剂以及至少一药学上可接受的赋型剂。
其中，该代谢抑制剂是选自以下群组：醛糖还原酶抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、α-淀粉分解酶抑制剂及其组合任一种。
本发明提供的一种花豆种子(Phaseolus vulgaris L.)萃取物制备方法，包含有：
a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及
c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液；
其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，该步骤b)是以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行，并且该第一溶剂是选自C1-C4醇类水溶液。
其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10,000×g离心30分钟。
其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
本发明提供的一种花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物制备方法，是以包含以下步骤的方法制得：
a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；
c)离心该均质花豆萃取液并收集一沉淀物；
d)添加一第二溶剂溶解该沉淀物以获得一第一粗萃液；
e)离心该第一粗萃液并取其上清部分以获得一第二粗萃液；
f)加热该第二粗萃液；
g)冷却该第二粗萃液；以及
h)离心该第二粗萃液并取其上清部分以获得一最终花豆萃取物；
其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，并且该步骤b)是以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
其中，该第二溶剂为蒸馏水。
其中，该第二溶剂为0.5％氯化钠(w/v)水溶液。
其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤d)的溶解过程是在室温120rpm震荡40分钟的条件下进行，该步骤f)的加热过程是在温度70℃处理15分钟条件下进行，该步骤g)的冷却过程是在温度4℃条件下进行，该步骤h)的离心过程是在离心力10,000×g处理30分钟条件下进行。
附图说明
图1所示为本发明花豆种子萃取物制备方法的一具体实施例流程图；
图2所示为本发明花豆种子萃取物制备方法的另一具体实施例流程图。
具体实施方式
本发明提供了一种花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物，其是以包含以下步骤的方法制得：a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液，其中，该步骤b)是约以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行，该第一溶剂选自以下群组：水、C1-C4醇类及其组合任一种。
本发明提供了一种制备上述萃取物的方法。
本发明提供了一种用于调节哺乳动物血糖之饮食品，其包含有效量的上述萃取物。
本发明提供了一种使用上述萃取物在制造药剂的用途，该药剂是用于调节哺乳动物血糖。
本发明提供了一种用于调节哺乳动物血糖胞的医药组合物，其包含有效量的上述萃取物。
本发明提供了一种用于调节哺乳动物血糖胞的医药组合物，其包含有效量的上述萃取物以及至少一种醣类代谢相关抑制剂。
在本发明中，萃取物可单独或以含有萃取物及医药上可接受的载体、稀释剂及/或赋形剂的组合物投予。投予剂量可根据个体的健康状况或所欲预防或治疗的疾病而调整。
除非另有定义，否则本说明书中所使用的本发明有所相关的科学或技术术语应为本领域技术人员所理解的意义。这些术语的意义及范围应为明确，然而，一旦有任何不明确的地方，本说明书中的定义优先于任何字典或外部定义。
本发明的技术及较佳实施态样，将描述于以下内容中，以供本领域技术人员据以明了本发明的特征，其中该些实施态样仅提供作为说明，而非用以限制本发明的范畴。
本发明各具体实施例所涉及田间产量试验、成分分析和酵素抑制活性分析样品测定均为三重复，并以统计软件SAS(statistics analysis syatem)进行统计分析，使用变方分析(ANOVA)比较品系、处理和期作间差异，再以最小显著差异性测验法(Fisher’s least siginificant difference method，LSD)进行品系间或各处理组合间显著差异性比较，已P＜0.05为标准。
实施例1：含高总多酚量的花豆种子萃取物的制备方法
I、花豆材料来源
本发明植物材料为中国台湾花豆栽培种花荚(Hwachia)与其迭氮化钠诱变品系SA-05品系。前述材料种植于中国台湾农业试验所，依惯行的花豆栽培管理方法栽培，分别于2011年春作、2011年秋作和2012年春作进行种植。收获干荚进行产量构成要素调查，并将种子保存于4℃备用。
II、花豆种子萃取物制备流程
请参阅图1，首先于步骤S11，研磨前述花豆种子以获得一花豆粉末，该花豆较佳地是选自花荚种(Hwachia)，最佳地是选用该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系。于本实施例中，该诱变是选用SA-05品系。
随后于步骤S12，使用第一溶剂溶解花豆粉末，其处理过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行。该第一溶剂是选自以下群组：水、C1-C4醇类及其组合任一种。于本实施例中较佳地该第一溶剂为甲醇水溶液，使用体积百分比浓度该甲醇水溶液为约70体积％至约90体积％。最佳地则选用80％甲醇水溶液。在另一具体实施例中，较佳地该第一溶剂为乙醇水溶液，使用体积百分比浓度该乙醇水溶液为约40体积％至约60体积％。最佳地则选用50％乙醇水溶液。
接着于步骤S13，离心该均质花豆萃取液30分钟后收集一上清花豆萃取液，离心条件为10,000×g。
在步骤S14，过滤该上清花豆萃取液以获得一纯化花豆萃取物，过滤所使用针筒过滤器(syringe filter)购自瑞柏生物科技股份有限公司(PallCorporation)，所使用膜孔径为0.2μm。
最后于步骤S15，保存该纯化花豆萃取物于零下20度即获得含高总多酚量的纯化花豆种子萃取物。
使用者可视后续需要，将前述纯化花豆种子萃取物进行冷冻真空干燥处理以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物将可保存数种蛋白质。
III、花豆种子萃取物所含总酚、总类黄酮化合物以及总花青素含量测定
针对总酚化合物含量测定，是将公知技术(Taga et al.，1984)略加修改，取花豆材料10μl与200μl 2％Na2CO3在血清盘中混合，室温下反应2分钟后加入10μl 50％Folin&Ciocalteau′s酚类试剂震荡混合，于室温下避光反应30分钟。以全波长微量分析仪(Molecular Devices，Spectra Max 250)测定750nm下吸光值，标准曲线以gallic acid测试绘制。
针对总类黄酮化合物测定，是将公知技术(Jeng et al.，2011)略加修改，取花豆材料20μl依序与112ml二次蒸馏水(ddH2O)、60ml乙醇(95∶5，v/v)、4ml氯化铝(1∶10，w/v)和4ml 1M醋酸钾混合均匀于血清盘中。将血清盘置于室温下避光反应40分钟，以全波长微量分析仪(Molecular Devices，Spectra Max 250)检测415nm时吸光值，标准曲线以quercetin测试绘制。
针对总花青素化合物测定，是将公知技术(Jeng et al.，2010)略加修改，配置缓冲溶液0.025M氯化钾(pH 1.0)和0.4M醋酸钠(pH 4.5)，1ml花豆材料分别以缓冲溶液调整至pH 1.0和pH 4.5，混合均匀后测定530nm和700nm下吸光值。总花青素含量计算公式：
Total anthocyanins ( mg / ml ) = AxMWxVxDF 8
A＝(A 530nm-A700nm)pH1.0-(A530nm-A700nm)pH4.5。
MW＝矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside)分子量449.2。
V＝样品体积。
DF＝稀释倍数。
ε＝矢车菊素-3-葡萄糖苷分子量消光系数26,900。
承上，本实施例花豆种子萃取物在多酚类化合物的总酚类、总黄酮类和总花青素类含量测定结果如表1所示。
由表1可知，以萃取物产量面向来看，本实施例最佳地是选用SA-05品系作为植物材料并经50％乙醇水溶液萃取可获得较高含量，其总酚类含量为约2.08至约3.55mg/g。其次，若以期作面向来看，则以春作表现最佳。
实施例2：花豆种子萃取物对醛糖还原酶以及α-葡萄糖苷酶的抑制作用
I、花豆种子萃取物对醛糖还原酶抑制活性测定
(一)猪水晶体醛糖还原酶萃取
将公知技术(Saraswat et al.，2008)略加修改，向市场猪贩购得当日现杀猪只眼睛，于冰上切取得水晶体。以下过程均保持4℃下进行，将水晶体与3倍体积4℃0.1M磷酸缓冲液(0.1M K2HPO4，0.1M KH2PO4，pH7.0)混合后以均质机均质，10,000×g离心30分钟，取上清液为醛糖还原酶粗萃液分装后于-80℃保存备用。
(二)醛糖还原酶抑制活性测定
将公知技术(Fujita et al.，2004)略加修改，配置0.05M磷酸缓冲液(0.1M K2HPO4，0.1M KH2PO4，pH7.0)含有0.01M DL-甘油醛(G5001，Sigma)、0.00015Mβ-NADPH(N6505，Sigma)、20μl猪水晶体醛糖还原酶粗萃液和10μl花豆酚类萃取液，总体积为1ml。将其混合均匀后，置于37℃水浴锅中反应20分钟，加入10μl氯化铵终止反应。取200μl检品于血清盘中，以全波长微量分析仪(Molecular Devices，Spectra Max 250)检测340nm时吸光值。酶活性定义为37℃下每分钟每0.001unit吸光值变化为1unit。
II、花豆种子萃取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性测定
将公知技术(Kang at al.，2012)略加修改，于血清盘中加入112μl 0.1M磷酸缓冲液(pH6.8)、20μl 0.2unit/ml α-葡萄糖苷酶(G0660，Sigma)和8μl花豆种子萃取物，置于37℃下反应15分钟。再加入20ml 2.5mM 4-硝基苯基α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG；N1377，Sigma)，置于37℃下反应15分钟后，加入80ml 0.2M Na2CO3震荡混合，以全波长微量分析仪(MolecularDevices，Spectra Max 250)检测405nm时吸光值。标准曲线以不同浓度4-硝基苯酚(PNP)绘制。酶活性定义：37℃下，每分钟促使PNPG生成1μMPNP为1unit。
III、醛糖还原酶与α-葡萄糖苷酶之抑制作用的阳性对照组
于本实施例中，阳性对照组使用阿卡波糖(acarbose)、依帕司他(epalrestat)和阿魏酸(ferulic acid)。Acarbose为针对α-葡萄糖苷酶设计的抑制药物系治疗第二型(非胰岛素依赖型)糖尿病。Epalrestat则为针对醛糖还原酶活性的抑制药物。阿魏酸属酚酸类化合物，其对醛糖还原酶亦具抑制活性。各萃取物及阳性对照组抑制酵素活性的效果以IC50表示，其定义为酵素活性被抑制达50％时的萃取物含量或使用量。
承上，本实施例花豆种子萃取物在对醛糖还原酶以及α-葡萄糖苷酶的抑制作用测定结果如表2所示。
表2显示，若以萃取物中多酚类含量为基准，本实施例对醛糖还原酶抑制活性较佳地是以50％乙醇水溶液萃取的SA-05品系抑制效果较好，其IC50约为10.95μg/ml，花荚种(Hwachia)则约为11.35μg/ml。最佳地则是选用80％甲醇水溶液萃取花荚种(Hwachia)，其IC50约为7.55μg/ml，萃取SA-05品系所得抑制效果较弱，其IC50约为8.11μg/ml。
此外，同上述以萃取物中多酚类含量为基准，本实施例对α-葡萄糖苷酶抑制活性较佳地是以80％甲醇水溶液萃取SA-05品系，其IC50约为50.07μg/ml，花荚种(Hwachia)则约为58.93μg/ml。最佳地则是选用50％乙醇水溶液萃取SA-05品系，其IC50为36.39μg/ml，萃取花荚种(Hwachia)所得抑制效果较弱，其IC50为43.21μg/ml。
各阳性对照组所测定数值IC50分别如后，阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的IC50数值为11.23mg/ml，依帕司他对醛糖还原酶之IC50数值为0.16μg/ml，阿魏酸对醛糖还原酶亦具抑制活性，其IC50为8.44μg/ml。相对于阳性对照组阿卡波糖，本实施例中使用50％乙醇水溶液所得萃取物具有更强的α-葡萄糖苷酶活性抑制能力，应可用于取代阿卡波糖用来制备来α-葡萄糖苷酶抑制剂或含有其有效量的医药组合物。
简言之，本实施例较佳地是以SA-05品系为植物材料，所得萃取物在抑制酵母α-葡萄糖苷酶优于选用花荚种(Hwachia)。若比较以不同溶剂萃取而得的花豆萃取物对于两种参与碳水化合物代谢酵素抑制活性的差异，针对猪水晶体醛醣还原酶抑制效果较佳地是选用80％甲醇水溶液；针对酵母α-葡萄糖苷酶抑制活性较佳地是选用50％乙醇水溶液。
实施例3：含α-淀粉分解酶的花豆种子萃取物的制备方法
I、花豆材料来源
本实施例所使用植物材料请参照实施例1。
II、花豆种子萃取物制备流程
本实施例的制备方法是将公知技术(Kotaru et al.，1987)略加修改，请参详图2，首先于步骤S21，研磨前述花豆种子以获得一花豆粉末，该花豆较佳地是选自花荚种(Hwachia)，最佳地是选用该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系。于本实施例中，该诱变是选用SA-05品系。
随后于步骤S22，使用第一溶剂溶解花豆粉末，其处理过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行。该第一溶剂是选自以下群组：水、C1-C4醇类及其组合任一种。于本实施例中较佳地该第一溶剂为甲醇水溶液，使用体积百分比浓度该甲醇水溶液为约70体积％至约90体积％。最佳地则选用80％甲醇水溶液。在另一具体实施例中，较佳地该第一溶剂为乙醇水溶液，使用体积百分比浓度该乙醇水溶液为约40体积％至约60体积％。最佳地则选用50％乙醇水溶液。
接着于步骤S23，离心该均质花豆萃取液30分钟后收集一沉淀物，离心条件为10,000×g。
在步骤S24，添加二次蒸馏水或0.5％氯化钠(w/v)水溶液溶解该沉淀物并且在120rpm震荡40分钟的条件下进行处理以获得一第一粗萃液。
随后于步骤S25，离心该第一粗萃液30分钟后取其上清部分以获得一第二粗萃液，离心条件为10,000×g。
接着在步骤S26，于70℃加热该第二粗萃液15分钟。
在步骤S27，将该第二粗萃液放入冰水浴中15分钟，之后置入冰箱4℃冷藏30分钟。
最后于步骤S28，离心该第二粗萃液30分钟后取其上清部分以获得一最终花豆萃取物，离心条件为10,000×g。其中，该最终花豆萃取物含有α-淀粉分解酶抑制剂1(α-AI1)并且可保存于4℃条件下。使用者可视后续需要，将前述最终花豆萃取物进行冷冻真空干燥处理以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物将可保存数种蛋白质。
III、蛋白质含量检测
取10μl前述最终花豆萃取物检品加入200μl bradford试剂(B6916，Sigma)，混合均匀后避光反应5分钟，以全波长微量分析仪(MolecularDevices，Spectra Max 250)检测595nm下吸光值。标准曲线以0.6mg/ml小牛血清蛋白(Albumin bovine，BSA；A4503，Sigma)稀释至不同浓度后绘制。
实施例4：花豆种子萃取物对α-淀粉分解酶的抑制作用
将公知技术(Pueyo et al.，1993)略加修改，配置25unit/ml猪胰脏α-淀粉分解酶(A4268，Sigma)，使用SS缓冲液(15mM NaOH，20mM CaCl2，0.5M NaCl，pH 5.6)。取100μl萃取液与100μl猪胰脏α-淀粉分解酶于离心管中，混合均匀后于37℃水浴锅中反应30分钟后，加入600μl 2％淀粉液(w/v，20mM sodium phosphate buffer，6.7mM NaCl，pH 6.9)，37℃反应1分钟。将800μl 3，5-二硝基水杨酸(DNSA)呈色试剂加入离心管中混合均匀，放入95℃沸水浴中加热12分钟，置于室温中冷却。以1％麦芽糖溶液稀释至不同浓度绘制标准曲线。检品以二次蒸馏水稀释6倍后，以全波长微量分析仪(Molecular Devices，Spectra Max 250)检测530nm时吸光值。
承上，本实施例花豆种子萃取物在对α-淀粉分解酶的抑制作用测定结果如表3所示。
表3显示，若以萃取物中多酚类含量为基准，本实施例对α-淀粉分解酶抑制活性较佳地是以80％甲醇水溶液萃取的SA-05品系抑制效果较好。再者，若以萃取干物质重为基准为基准，本实施例对α-淀粉分解酶抑制活性最佳地是第一溶剂选用80％甲醇水溶液且选用0.5％氯化钠(w/v)水溶液作为第二溶剂所萃取的SA-05品系抑制效果最好，其IC50约为17.68μg/ml。次佳地则是第一溶剂选用50％乙醇水溶液且选用0.5％氯化钠(w/v)水溶液作为第二溶剂所萃取的SA-05品系进行萃取，所得IC50约为31.11μg/ml至约38.68μg/ml。
倘若进一步以蛋白质含量为基准，比较不同萃取液间的抑制效果，可得知当选用SA-05品系作为植物材料并以0.5％氯化钠(w/v)水溶液作为第二溶剂进行萃取时，确实对于获得含有高活性α-AI1蛋白有所帮助，所得萃取物的IC50约为0.17μg/ml至约0.24μg/ml。于本实施例中作为阳性对照组的阿卡波糖的IC50数值约为3.70μg/ml，相比较下，前述萃取物抑制效果亦优于阿卡波糖。
实施例5：含花豆种子萃取物的饮食品与医药组合物
在一具体实施例中，本发明提供一种用于调节哺乳动物血糖的饮食品，其包含有效量的上述萃取物。
鉴于上述已提供本发明花豆种子萃取物对于醛糖还原酶、α-葡萄糖苷酶以及α-淀粉分解酶抑制效用的左证，因此在另一具体实施例中，提供一种使用上述萃取物在制造药剂的用途，该药剂是用于调节哺乳动物血糖。同时亦提供一种用于调节哺乳动物血糖胞的医药组合物，其包含有效量的上述萃取物。
又一具体实施例中，亦提供一种用于调节哺乳动物血糖胞的医药组合物，其包含有效量的上述萃取物以及至少一种醣类代谢相关抑制剂。
特定言之，本发明医药组合物可以任何合宜的方式施用本发明医药组合物，举例言之，但不以此为限，例如口服、皮下或静脉内等投药方式施用之。该医药组合物可单独或与医药佐剂一起使用，且实际上可使用于兽医与人类医药上。
以制备适于口服投药的药剂形式为例，可于本发明医药组合物中含有不会不利影响萃取物活性的佐剂，例如：溶剂、油性溶剂、稀释剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、乳化剂、黏合剂、润滑剂、吸湿剂等。举例言之，溶剂可选自水及蔗糖溶液，稀释剂可选自乳糖、淀粉及微晶纤维素，吸收延迟剂可选自几丁聚醣及葡萄胺基聚醣，润滑剂可选自碳酸镁，油性溶剂可选自植物或动物油类，如橄榄油、葵花油及鱼肝油等。可利用公知方法，将该组合物制成合宜的口服投药形式，例如：锭剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、乳剂、及酊剂等等。
至于具适于皮下或静脉内投药之药剂形式，则可于本发明医药组合物中含有一或多种例如增溶剂、乳化剂、以及其他佐剂等成分，以制成如静脉输注液、乳剂静脉输注液、注射剂、干粉注射剂、悬液注射剂、或干粉悬液注射剂等。可能采用的溶剂例如：水、生理食盐溶液、醇类(例如：乙醇、丙醇、或甘油等)、糖溶液(例如：葡萄糖或甘露糖溶液)、或前述的组合。
视需要地，本发明医药组合物可另含有调味剂、调色剂、着色剂等添加剂，以提高所得药剂服用时的口适感及视觉感受；另可添加合理用量的保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等，以改善所得药剂的储存性。
本发明医药组合物中的萃取物的含量，可依照所施用对象的年纪及施用目的(例如)而加以调整，亦可视需要调整使用频率。
再者，可视需要于本发明医药组合物中并含一或多种其他活性成分，进一步加强本发明医药组合物的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度。举例言之，可于本发明医药组合物含有一或多种可调控体内糖类代谢相关的活性成分：阿卡波糖(acarbose)、依帕司他(epalrestat)、阿魏酸(ferulic acid)以及其他活性成分等，只要该其他活性成分对萃取物的效益没有不利的影响即可。
以上所述仅为本发明较佳可行实施例而已，举凡应用本发明说明书及申请的权利范围所为的等效变化，理应包含在本发明的权利要求范围内。
表1
表2
表3

Claims (40)

1.一种花豆种子萃取物，是以包含以下步骤的方法制得：
a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及
c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液；
其中，该步骤b)是以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
2.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂是选自以下群组：水、C1-C4醇类及其组合任一种。
3.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
4.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为50％乙醇水溶液(v/v)。
5.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
6.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为80％甲醇水溶液(v/v)。
7.根据权利要求1的萃取物，其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10,000×g离心30分钟。
8.根据权利要求1的萃取物，其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
9.根据权利要求1的萃取物，其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系。
10.根据权利要求9的萃取物，其中，该花豆是选自该花荚种。
11.根据权利要求9的萃取物，其中，该花豆是选自该诱变系。
12.根据权利要求11的萃取物，其中，该诱变为SA-05品系。
13.根据权利要求10的萃取物，其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
14.根据权利要求13的萃取物，其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
15.根据权利要求11的萃取物，其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.62毫克/每公克花豆种子至3.69毫克/每公克花豆种子。
16.根据权利要求15的萃取物，其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
17.根据权利要求3的萃取物，其中，该步骤d)之后，包括一冷冻真空干燥步骤e)以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物包含有至少一蛋白质。
18.根据权利要求17的萃取物，其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于52至95毫克/每公克花豆种子。
19.根据权利要求17的萃取物，其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于0.29至1.9毫克/每公克花豆种子。
20.根据权利要求10的萃取物，其中，该萃取物具有抑制醛糖还原酶的活性，其IC50为0.36mg/ml至0.40mg/ml。
21.根据权利要求12的萃取物，其中，该萃取物具有抑制醛糖还原酶的活性，其IC50为0.39mg/ml至0.46mg/ml。
22.根据权利要求10的萃取物，其中，该萃取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50为1.46mg/ml至1.92mg/ml。
23.根据权利要求12的萃取物，其中，该萃取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50为1.32mg/ml至1.94mg/ml。
24.一种调节哺乳动物血糖的饮食品，包含一有效量的根据权利要求1至23中任一种的萃取物与至少一食品添加剂。
25.一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据权利要求1至23中任一种的萃取物与至少一药学上可接受的赋型剂。
26.一种使用根据权利要求1至23中任一种的花豆种子萃取物在制造药剂的用途，其中该药剂是用于调节哺乳动物血糖。
27.一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据权利要求1至23中任一种的萃取物、一代谢抑制剂以及至少一药学上可接受的赋型剂。
28.根据权利要求27的医药组合物，其中，该代谢抑制剂是选自以下群组：醛糖还原酶抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、α-淀粉分解酶抑制剂及其组合任一种。
29.一种花豆种子萃取物制备方法，包含有：
a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及
c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液；
其中，该花豆是选自花荚种或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，该步骤b)是以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行，并且该第一溶剂是选自C1-C4醇类水溶液。
30.根据权利要求29的制备方法，其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
31.根据权利要求29的制备方法，其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
32.根据权利要求29的萃取物，其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10,000×g离心30分钟。
33.根据权利要求29的制备方法，其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
34.根据权利要求29的制备方法，其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
35.一种花豆种子萃取物制备方法，是以包含以下步骤的方法制得：
a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；
c)离心该均质花豆萃取液并收集一沉淀物；
d)添加一第二溶剂溶解该沉淀物以获得一第一粗萃液；
e)离心该第一粗萃液并取其上清部分以获得一第二粗萃液；
f)加热该第二粗萃液；
g)冷却该第二粗萃液；以及
h)离心该第二粗萃液并取其上清部分以获得一最终花豆萃取物；
其中，该花豆是选自花荚种或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，并且该步骤b)是以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
36.根据权利要求35的制备方法，其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
37.根据权利要求35的制备方法，其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
38.根据权利要求35的制备方法，其中，该第二溶剂为蒸馏水。
39.根据权利要求35的制备方法，其中，该第二溶剂为0.5％氯化钠(w/v)水溶液。
40.根据权利要求35的萃取物，其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤d)的溶解过程是在室温120rpm震荡40分钟的条件下进行，该步骤f)的加热过程是在温度70℃处理15分钟条件下进行，该步骤g)的冷却过程是在温度4℃条件下进行，该步骤h)的离心过程是在离心力10,000×g处理30分钟条件下进行。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107287020A (zh) * 2016-04-01 2017-10-24 全辉生物医学股份有限公司 苦茶油及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010110001A (ko) * 2000-06-05 2001-12-12 최희진 개암풀 추출물을 함유하는 화장료 조성물
CN1665521A (zh) * 2002-06-28 2005-09-07 法蒙凯姆实验室公司 纯化淀粉酶抑制剂及用于获得该纯化淀粉酶抑制剂的新颖方法
CN101340923A (zh) * 2005-12-22 2009-01-07 因德纳有限公司 用乙醇沉淀的菜豆提取物，其应用及制剂

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010110001A (ko) * 2000-06-05 2001-12-12 최희진 개암풀 추출물을 함유하는 화장료 조성물
CN1665521A (zh) * 2002-06-28 2005-09-07 法蒙凯姆实验室公司 纯化淀粉酶抑制剂及用于获得该纯化淀粉酶抑制剂的新颖方法
CN101340923A (zh) * 2005-12-22 2009-01-07 因德纳有限公司 用乙醇沉淀的菜豆提取物，其应用及制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
H.H. WANG, ETAL.,: "Comparisons of a-amylase inhibitors from seeds of common bean mutants extracted through three phase partitioning", 《FOOD CHEMISTRY》 *
无: "Isolation of nicotianamine - by extn. of plant seeds, DD226880A1", 《德温特数据库》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107287020A (zh) * 2016-04-01 2017-10-24 全辉生物医学股份有限公司 苦茶油及其制备方法

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