CN103918611A - 一种简易的麦蚜生物测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物保护领域，提供一种简易的麦蚜生物测定方法，包括如下步骤：A水培得到根叶完整的麦苗；B取一束麦苗，将其根系放入离心管内，以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口，保持叶片在离心管外，得到带离心管的麦苗；C在铺有滤纸的培养皿内喷雾保湿，放入带离心管的麦苗；D在带离心管的麦苗的叶片上接种麦蚜，按实验设计进行处理并记录测定结果。本发明在生物测定时巧妙地把水培带根麦苗放入离心管内从而保证整个实验过程中麦苗保持活体状态，大幅度地提高了生物活性测定的准确性。本发明只需要培养皿、离心管和脱脂棉，成本低，操作简单，实用性强，能够更较好的体现测试对象在自然条件下表现出的生物活性。

Description

一种简易的麦蚜生物测定方法

技术领域

本发明属于植物保护领域，具体涉及一种简易的麦蚜生物测定方法。

背景技术

麦蚜以刺吸口器吮吸麦株、叶和嫩穗汁液，并分泌蜜露引起霉菌滋生进而影响作物正常发育，而且还传播麦类病毒病，导致作物减产和品质下降（李光博等，1990）。由于缺少抗蚜品种，目前对麦蚜的防控技术主要采用化学防治，长期以来，各地农民防治麦蚜危害主要依赖化学农药，导致化学农药用量的不断增加和滥用农药现象日趋严重；在控制麦蚜的同时也带来了环境污染、种植成本提高、杀伤天敌、不同程度的抗药性和麦蚜再猖撅的问题（曹雅忠等，2006；张云慧等，2013）。因此，生物农药的研发也是未来麦蚜防控技术的研究热点，生物测定是新型农药是否可以大范围推广应用的前提。

生物测定的方法是利用生物活体在类似自然环境条件下测试样品活性，不同的生物活性测定方法要求的测定条件各不相同，其中环境因素如温度、湿度、光照强度和风雨等是影响测定结果的主要因素。由于麦蚜是典型的r对策昆虫，抗环境因子的能力差，其种群容易受到生态和气象因素的干扰（李光博等，1990）。现有常规田间生物测定受外界环境影响较大，一些生物学习性研究和生物农药的研发测试主要采用室内生物测定的方法进行。目前室内生物测定主要采用作物离体组织进行，植株离体部分短时间的培养、保鲜和实验湿度却很难控制，造成作物叶片易干燥失水；麦蚜为刺吸式口器，主要通过口针刺入植物组织内部获得营养物质，频繁更换离体组织对麦蚜口针易造成人为伤害，直接导致麦蚜因无法取食而死亡。另外，植株离体部分短时间培养的营养也不能保证，从而影响测定的结果。因此急需一种生物活性测定新方法来解决这些问题。

发明内容

为解决目前离体组织生物测定方法中存在的测定结果明显受环境因素影响的问题，本发明以小麦活体作为材料，提供一种简易的麦蚜生物测定方法。

本发明提供一种简易的麦蚜生物测定方法，包括如下步骤：

A水培得到根叶完整的麦苗；

B取一束麦苗，将其根系放入离心管内，以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口，保持叶片在离心管外，得到带离心管的麦苗；

C在铺有滤纸的培养皿内喷雾保湿，放入带离心管的麦苗；

D在带离心管的麦苗的叶片上接种麦蚜，按实验设计进行处理并记录测定结果。

其中，所述麦蚜为麦长管蚜、禾谷缢管蚜、小麦二叉蚜等常见麦蚜中的一种或几种。

其中，A所述水培得到根叶完整的麦苗，优选包括如下步骤：

A1在透明容器内平铺一层小麦种子，加水至没过种子，浸种24小时后倒掉多余水分，种子上盖两层浸湿的白色纱布，每天隔着纱布冲洗1次；

A2待麦苗长至株高20～30mm时去掉纱布，每天冲洗麦苗1次，保持种植温度20℃，光照时间16L:8D，相对湿度为65±5%。

其中，A1、A2中冲洗的目的是保持湿润并防止霉变。

其中，B所述一束麦苗为一束株高50～80mm的麦苗；B所述一束优选为3-6株。

其中，B所述湿润的脱脂棉为以清水浸透但不滴水的脱脂棉。

以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口，其目的是保持根部湿润，同时避免测试时麦蚜进入离心管。

其中，C所述滤纸为与培养皿同规格的定性滤纸。

其中，D所述按实验设计进行处理为按照具体测试目标设计处理，例如：需测定麦蚜对药剂的反应时，设定放置药剂的浓度；需测定麦蚜对环境调节的要求时，设置不同的温度或/和湿度。

其中，D所述记录测定结果为定时观测记录麦蚜蜕皮率、死亡率、有翅率等生命参数中的一种或几种。

如实验设计不涉及温度、光照时间、湿度，则D所述麦蚜，饲养温度为20℃，光照时间为16L:8D，相对湿度为65±5%。

本发明还提供所述一种简易的麦蚜生物测定方法在植物保护领域的应用，具体为在小麦蚜虫防治中的应用。

本发明的有益效果在于：

在室内环境下，以离体小麦饲喂麦蚜，其生长发育会受到不同程度的抑制，从而影响生物测定结果。本发明通过麦苗水培，生物测定时又巧妙地把麦苗放入离心管内从而保证整个实验过程中麦苗保持活体状态，大幅度地提高了生物活性测定的准确性。本发明只需要培养皿、离心管和脱脂棉，成本低，操作简单，实用性强，能够更较好的体现测试对象在自然条件下表现出的生物活性，尤其适合研究麦蚜的各种生物学习性和生物农药对麦蚜等刺吸式口器昆虫在小麦上的生物活性测定。

附图说明

图1为实施例1小麦种子浸种的照片。

图2为实施例1麦苗去掉纱布前的照片。

图3为实施例1麦苗去掉纱布后继续水培的照片。

图4为实施例1麦苗接于离心管后的照片。

图5为实施例1带离心管的麦苗放入培养皿中的照片。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1麦长管蚜生殖前期生命参数测定

用160mm玻璃培养皿，把小麦种子均匀铺在培养皿的底部。用清水浸泡种子24h，促使种子生根发芽。24h后，倒掉培养皿内水分，种子上面盖两层以清水浸湿的白色纱布，每天隔纱布冲洗已经发芽的种子1次；等植株生长至株高（从茎基部到稍端的高度）30mm时左右去掉纱布，继续每天冲洗植株一次，用于植株根部保湿和防止种子霉变。

待植株生长至株高60mm左右时，把麦苗整株拔起（小心不伤及根部），取4～6株麦苗将其根茎部放入2ml离心管中；脱脂棉用清水浸透，以不滴水为宜，以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口，保持叶片在离心管外得到带离心管的麦苗。以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口用于根部保湿和防治麦蚜进入离心管。

取直径120mm塑料或玻璃培养皿，底部铺上同等规格的定性滤纸，在定性滤纸上用清水喷雾保湿。把带离心管的麦苗放入培养皿中。

把室内连续饲养多代的麦长管蚜成虫，用毛笔接种于小麦叶片上，等成虫产下幼虫后，移去成虫，麦蚜饲养温度20℃，光照时间16L:8D，相对湿度为65±5%。连续10日每日定时观测记录麦长管蚜幼虫蜕皮率、死亡率、有翅率等生命参数。同时用小麦叶片离体组织作为对照，为了给离体叶片保湿，对照培养皿用封口膜封闭。

麦长管蚜生殖前期生命参数的测定结果见表1。试验结果可以看出，用传统离体组织进行饲养，由于小麦叶片易干燥失水，一般3d左右必须重新更换叶片，为了能够让小麦叶片尽量保湿，在小麦数量需求上是本发明的5倍左右。因此，一个周期为10d的实验至少需要更换叶片3次，由于叶片过多，麦长管蚜体型较小，在调查时需要不断翻动叶片才能找到目标麦蚜，费时费力。麦蚜主要通过口针刺吸植物组织吸取营养，不断翻动小麦叶片对其取食产生一定的影响，使麦长管蚜有翅率显著升高，另外由于在更换叶片时对麦蚜口针照成的人为伤害，导致麦长管蚜非正常死亡，使对照死亡率明显增加，而用

本发明饲养的麦长管蚜死亡率在1%以下。

表1麦长管蚜生殖前期生命参数的测定

实施2生物碱类杀虫剂对麦长管蚜的生物测定

用直径160mm玻璃培养皿，把小麦种子均匀铺在培养皿的底部。用清水浸泡种子24h，促使种子生根发芽。24h后，倒掉培养皿内水分，种子上面盖两层浸湿的白色纱布，每天隔纱布冲洗已经发芽的种子1次；等植株生长至25mm左右时去掉纱布，继续每天冲洗植株一次，用于植株根部保湿和防止种子霉变。

待植株生长至80mm左右时，把麦苗整株拔起（小心不伤及根部），取3～4株麦苗，把其根茎部放入1.5ml离心管中；脱脂棉用清水浸透，以不滴水为宜，以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口，保持叶片在离心管外得到带离心管的麦苗。

取直径90mm的塑料或玻璃培养皿，底部铺上同等规格的定性滤纸，在定性滤纸上用清水喷雾保湿。把带离心管的麦苗放入培养皿中。

把待测试麦蚜，用毛笔接种于小麦叶片上。接种完毕后，在12h、24h、36h、48h、72h定时观测麦蚜死亡率。同时用小麦叶片离体组织作为对照，为了给离体小麦叶片保湿，对照培养皿用封口膜封闭。麦蚜饲养温度20℃，光照时间16L:8D，相对湿度为65±5%。

表2生物碱类杀虫剂对麦长管蚜毒杀效果

实验结果可以看出，在36h之前离体小麦组织和本发明在小麦死亡率上没有明显差异，但48h以后，由于受小麦叶片翻动频繁和离体叶片营养缺失的影响，对照死亡率比本发明明显增加，是生物测定结果出现偏差。另外由于对照需要封口膜封口，每次调查都需要重新封口增加了工作量。

小麦上的主要蚜虫如麦长管蚜、禾谷缢管蚜、麦无网蚜均适用于本方法。按照以上设定，由于整个实验过程中麦苗保持活体状态，失水少，无需更换，均能取得避免更换植物材料对所带来的对待测蚜虫的影响，从而大幅度地提高了生物活性测定的准确性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

A水培得到根叶完整的麦苗；

B取一束麦苗，将其根系放入离心管内，以湿润的脱脂棉包裹茎基部后塞封离心管口，保持叶片在离心管外，得到带离心管的麦苗；

C在铺有滤纸的培养皿内喷雾保湿，放入带离心管的麦苗；

D在带离心管的麦苗的叶片上接种麦蚜，按实验设计进行处理并记录测定结果。

2.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，所述麦蚜为常见麦蚜中的一种或几种。

3.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，A所述水培得到根叶完整的麦苗，包括如下步骤：

A1在透明容器内平铺一层小麦种子，加水至没过种子，浸种24小时后倒掉多余水分，种子上盖两层浸湿的白色纱布，每天隔着纱布冲洗1次；

A2待麦苗长至株高20～30mm时去掉纱布，每天冲洗麦苗1次，保持种植温度20℃，光照时间16L:8D，相对湿度为65±5%。

4.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，B所述一束麦苗为一束株高50～80mm的麦苗。

5.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，所述一束为3-6株。

6.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，B所述湿润的脱脂棉为以清水浸透但不滴水的脱脂棉。

7.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，C所述滤纸为与培养皿同规格的定性滤纸。

8.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，D所述记录测定结果为定时观测记录麦蚜蜕皮率、死亡率、有翅率中的一种或几种。

9.如权利要求1所述简易的麦蚜生物测定方法，其特征在于，D所述麦蚜，饲养温度为20℃，光照时间为16L:8D，相对湿度为65±5%。

10.权利要求1-9任一项所述的简易的麦蚜生物测定方法在植物保护领域的应用。