CN103908667A - 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法 - Google Patents

吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103908667A
CN103908667A CN201410156859.1A CN201410156859A CN103908667A CN 103908667 A CN103908667 A CN 103908667A CN 201410156859 A CN201410156859 A CN 201410156859A CN 103908667 A CN103908667 A CN 103908667A
Authority
CN
China
Prior art keywords
type
sipv
fha
vaccine
sabin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410156859.1A
Other languages
English (en)
Inventor
孙明波
姜述德
杨净思
廖国阳
姜莉
衡燮
马艳
高娜
奚光跃
姬光
宋霞
陈洪波
梁疆莉
周健
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chinese Academy of Medical Sciences CAMS
Institute of Medical Biology of CAMS and PUMC
Original Assignee
Institute of Medical Biology of CAMS and PUMC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Medical Biology of CAMS and PUMC filed Critical Institute of Medical Biology of CAMS and PUMC
Priority to CN201410156859.1A priority Critical patent/CN103908667A/zh
Publication of CN103908667A publication Critical patent/CN103908667A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供一种吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法，每100ml联合疫苗中含有下列组份：百日咳毒素3000~6000ugPN、丝状血细胞凝集素3000~6000ugPN、百日咳杆菌粘附素1000~2000ugPN、破伤风类毒素1000～3000Lf、白喉类毒素3000~6000Lf、Al(OH)3126～154mg、sIPVⅠ型3000~6000DU、sIPVⅡ型5700~7100DU、sIPVⅢ型4500~9000DU、NaCl765~935mg、2-苯氧乙醇0~600mg、余量H2O。该疫苗能预防多种目标疾病，减少接种针次，简化免疫程序，提高接种率，降低交叉感染机会。

Description

吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法
技术领域
本发明涉及一种吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风和Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及其制备方法，属于生物医学技术领域。 
背景技术
百日咳是由百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis)引起的小儿呼吸道传染病，传染性很强。临床特征为咳嗽逐渐加重、呈阵发性痉挛性咳嗽，未经治疗的病人，病程可延续2～3月。百日咳病是影响儿童健康和导致死亡的主要疾病之一，在未实行计划免疫前，5岁以下儿童发病率达到20～60%。最初应用的疫苗是基于用甲醛处理以杀死细菌并使有毒物质失活后的完整菌体。自二十世纪70年代后期实施计划免疫后，全菌体百白破（Daphtheria Tetanus and whole Pertussis Combined Vaccine, 简称DTwP）联合疫苗覆盖率大大提高。但该疫苗与包括发热和局部反应的副作用相关。近年来，无细胞百白破是经培养，提纯百日咳抗原成分、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素，用氢氧化铝吸附制成，无细胞百白破（DTaP）联合疫苗的人群血清学效果和人群保护率与DTwP疫苗相近，副反应明显低于DTwP疫苗。因具有良好的免疫原性和安全性，而广泛用于儿童的预防接种。但是基于对百日咳有效抗原更明确的认识，现有较少数量的高度纯化的抗原的疫苗，即组份疫苗。本发明的疫苗中使用的百日咳抗原包括百日咳毒素PT，丝状血细胞凝集素FHA，百日咳杆菌粘附素PRN。 
白喉是由白喉杆菌引起的急性呼吸道传染病，以咽、喉等处粘膜充血、肿胀并有灰白色伪膜形成为突出临床特征，严重者可引起心肌炎与末梢神经麻痹。因呼吸道堵塞和心脏衰竭的致死率高达10%。破伤风是由破伤风杆菌侵入伤口，并在伤口内繁殖、分泌毒素而引起的急性特异性感染，主要表现为全身或局部肌肉的持续性收缩和阵发性痉挛。这些细菌的毒素是相应疾病的主要病因，针对这些细菌提供保护作用的疫苗包含被弱毒化的失去侵染性的类毒素，使用甲醛进行处理来制备白喉类毒素（DT）和破伤风类毒素（TT）。 
脊髓灰质炎（WPV）是由脊髓灰质炎病毒I、II、III型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病，能侵袭任何年龄段人群，但主要是3岁以下的儿童（占所有病例的50%），严重造成肢体不可逆转的麻痹甚至死亡。在疫苗问世前，该病在全世界范围内流行。50年代中后期，美国的两位科学家Salk和Sabin先后研制成功脊髓灰质炎灭活疫苗（Inactivated Poliovirus Vaccine, 简称IPV）和口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（Oral Poliovirus Vaccine ，简称OPV）。从此人们有了预防和消灭脊髓灰质炎的有力武器，实践证明这两种疫苗都是安全有效的。世界卫生组织（World Health Organization, WHO）1988年发起全球范围内消灭脊髓灰质炎的倡议，此后，消灭脊髓灰质炎的活动在降低脊髓灰质炎的发病率和减少脊髓灰质炎病毒的传播范围方面都取得了重大进展。2007年1月～2008年6月，16个国家从AFP病例的粪便标本中检测到野毒株（WPV），只检测到WPVI型和WPVIII型，自1999年以来在全球范围内未检测到WPVII型，这些进步的取得归功于全世界共同实施的消灭脊髓灰质炎策略。在全球消灭脊髓灰质炎（WPV）行动中，口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV）得到广泛应用，已大幅度降低全球脊髓灰质炎的发病率。然而，由于疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎（Vaccine Associated Paralytic Poliomyelitis, VAPP）和疫苗衍生脊髓灰质炎病毒（Vaccine- derived Poliovirus, VDPV）风险，今后必须停止口服脊髓灰质炎减毒活疫苗OPV的使用，以彻底根除脊髓灰质炎。只有使用脊髓灰质炎灭活疫苗IPV才能避免VAPP和VDPV风险。脊髓灰质炎灭活疫苗IPV可预防脊髓灰质炎爆发，并能产生群体免疫力，是消灭脊髓灰质炎后续阶段的最佳选择。目前全球有6个厂商在生产IPV，但所使用的生产毒种均为野毒株。用野毒株生产IPV需达到生物安全水平3级（BSL-3）的要求，全世界消灭脊髓灰质炎后，甚至BSL-4的条件亦非绝对保证。对于疫苗生产厂家难以达到如此严格的生物安全要求，因而WHO鼓励疫苗生产厂家研发减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗Sabin IPV（Inactivated Poliovirus Vaccine, Sabin strain，简称sIPV）。 
在我国实施的儿童计划免疫中，无细胞百白破疫苗、脊髓灰质炎灭活疫苗都是分开接种的，较多的接种针次，复杂化的免疫程序，不仅给家长们带来诸多麻烦，给儿童带来痛苦，且增加各种费用，而且会影响接种率，增加交叉感染机会，不利于计划免疫的推进。 
发明内容
为解决现有疫苗接种次数多，接种程序复杂等问题，本发明提供一种方便、安全、有效的吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗（DTaP-sIPV）及其制备方法，以彻底消灭脊髓灰质炎和预防白百破，保障儿童健康成长。 
本发明提供的是这样一种吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于每100mL联合疫苗中含有下列组份： 
百日咳毒素（PT）                           3000～6000ugPN
丝状血细胞凝集素（FHA）                    3000～6000ugPN
百日咳杆菌粘附素（PRN）                    1000～2000ugPN
破伤风类毒素（TT）                         1000～3000Lf
白喉类毒素（DT）                           3000～6000Lf
Al(OH)3                                     126～154mg
sIPV Ⅰ型                                   3000～6000 DU
sIPV Ⅱ型                                   5700～7100DU
sIPV Ⅲ型                                   4500～9000DU
NaCl                                       765～935mg
2-苯氧乙醇                                  0～600mg
H2O                                        余量。
所述百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN、破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT、Al(OH)3、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型、NaCl、2-苯氧乙醇均是常规产品。 
所述H2O为医用注射用水。 
本发明的另一目的是提供一种吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗的制备方法，其特征在于经过下列各步骤： 
（1）按常规方法分别制备无细胞百日咳抗原(PT、FHA、PRN)、破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)，以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型；
（2）按每100mL联合疫苗中含有下列组份进行备料：
百日咳毒素（PT）                           3000～6000ugPN
丝状血细胞凝集素（FHA）                    3000～6000ugPN
百日咳杆菌粘附素（PRN）                    1000～2000ugPN
破伤风类毒素（TT）                         1000～3000Lf
白喉类毒素（DT）                           3000～6000Lf
Al(OH)3                                     126～154mg
sIPV Ⅰ型                                   3000～6000 DU
sIPV Ⅱ型                                   5700～7100DU
sIPV Ⅲ型                                   4500～9000DU
NaCl                                       765～935mg
2-苯氧乙醇                                  0～600mg
H2O                                        余量；
（3）将步骤（2）所备Al(OH)3、NaCl和H2O混合后，进行高压灭菌，再在室温下连续搅拌，并依次加入白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳毒素、丝状血细胞凝集素、百日咳杆菌粘附素、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型，然后调节pH值为5.8～7.2，再加入2-苯氧乙醇作为防腐剂，即得到吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
所述步骤（1）的常规方法是根据中华人民共和国药典2010年版的要求制备各原液，其中制备百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN所用的百日咳Ⅰ相CS菌株的菌号为58003-3；制备破伤风类毒素TT所用的破伤风梭状芽孢杆菌的菌号为64008；制备白喉类毒素DT所用的白喉杆菌PW8株的菌号为38007，均购自中国食品药品检定研究院血清室；制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液所用的脊髓灰质炎病毒分别是Ⅰ型为SabinSO+2，Ⅱ型为SabinSO+2，Ⅲ型为PfizerSOR+1，均购自世界卫生组织WHO。 
所述步骤（3）的pH值用pH8.0的PB缓冲液进行调节。 
本发明与传统疫苗相比具有以下优点和效果： 
1、本发明提供的联合疫苗为儿童免疫规划的连续、简化和扩大所必需，具有预防多种目标疾病，减少接种针次，简化免疫程序，提高接种率，降低交叉感染机会，为广大家长和儿童乐于接受，而且节约各种费用，有利于扩大免疫计划的推广等优越性，是当今世界疫苗研究的发展方向。
2、本发明提供的DTaP-sIPV疫苗在生物安全性及疫苗副反应等方面优于现有产品，能够进一步推进sIPV的使用，对全球最终消灭脊髓灰质炎和预防白百破具有重要意义，并为进一步开发以DTaP-sIPV为基础的多价联合疫苗打下良好基础。 
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明。 
实施例1 
（1）根据中华人民共和国药典2010年版的要求，分别制备无细胞百日咳抗原(PT、FHA、PRN)、破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)，以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型；其中制备百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN所用的百日咳Ⅰ相CS菌株的菌号为58003-3；制备破伤风类毒素TT所用的破伤风梭状芽孢杆菌的菌号为64008；制备白喉类毒素DT所用的白喉杆菌PW8株的菌号为38007，均购自中国食品药品检定研究院血清室；制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液所用的脊髓灰质炎病毒分别是Ⅰ型为SabinSO+2，Ⅱ型为SabinSO+2，Ⅲ型为PfizerSOR+1，均购自世界卫生组织WHO；
（2）按每100mL联合疫苗中含有下列组份进行备料：
百日咳毒素（PT）                           3000ugPN
丝状血细胞凝集素（FHA）                    3000ugPN
百日咳杆菌粘附素（PRN）                    1000ugPN
破伤风类毒素（TT）                          3000Lf
白喉类毒素（DT）                            6000Lf
Al(OH)3                                      154mg
sIPV Ⅰ型                                    6000 DU
sIPV Ⅱ型                                    7100DU
sIPV Ⅲ型                                     9000DU
NaCl                                         935mg
2-苯氧乙醇                                   600mg
医用注射用水                                 27.8g；
（3）将步骤（2）所备Al(OH)3、NaCl和医用注射用水混合后，进行高压灭菌，再在室温下连续搅拌，并依次加入白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳毒素、丝状血细胞凝集素、百日咳杆菌粘附素、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型，然后用pH8.0的PB缓冲液调节pH值为5.8，再加入2-苯氧乙醇作为防腐剂，即得到吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
实施例2 
（1）根据中华人民共和国药典2010年版的要求，分别制备无细胞百日咳抗原(PT、FHA、PRN)、破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)，以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型；其中制备百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN所用的百日咳Ⅰ相CS菌株的菌号为58003-3；制备破伤风类毒素TT所用的破伤风梭状芽孢杆菌的菌号为64008；制备白喉类毒素DT所用的白喉杆菌PW8株的菌号为38007，均购自中国食品药品检定研究院血清室；制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液所用的脊髓灰质炎病毒分别是Ⅰ型为SabinSO+2，Ⅱ型为SabinSO+2，Ⅲ型为PfizerSOR+1，均购自世界卫生组织WHO；
（2）按每100mL联合疫苗中含有下列组份进行备料：
百日咳毒素（PT）                            6000ugPN
丝状血细胞凝集素（FHA）                    6000ugPN
百日咳杆菌粘附素（PRN）                    2000ugPN
破伤风类毒素（TT）                          1000Lf
白喉类毒素（DT）                            3000Lf
Al(OH)3                                      126mg
sIPV Ⅰ型                                    6000 DU
sIPV Ⅱ型                                    5700DU
sIPV Ⅲ型                                    9000DU
NaCl                                         765mg
医用注射用水                                  8.6g；
（3）将步骤（2）所备Al(OH)3、NaCl和医用注射用水混合后，进行高压灭菌，再在室温下连续搅拌，并依次加入白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳毒素、丝状血细胞凝集素、百日咳杆菌粘附素、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型，然后用pH8.0的PB缓冲液调节pH值为7.2，即得到吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
实施例3 
（1）根据中华人民共和国药典2010年版的要求，分别制备无细胞百日咳抗原(PT、FHA、PRN)、破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)，以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型；其中制备百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN所用的百日咳Ⅰ相CS菌株的菌号为58003-3；制备破伤风类毒素TT所用的破伤风梭状芽孢杆菌的菌号为64008；制备白喉类毒素DT所用的白喉杆菌PW8株的菌号为38007，均购自中国食品药品检定研究院血清室；制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液所用的脊髓灰质炎病毒分别是Ⅰ型为SabinSO+2，Ⅱ型为SabinSO+2，Ⅲ型为PfizerSOR+1，均购自世界卫生组织WHO；
（2）按每100mL联合疫苗中含有下列组份进行备料：
百日咳毒素（PT）                           4500ugPN
丝状血细胞凝集素（FHA）                    4500ugPN
百日咳杆菌粘附素（PRN）                    1500ugPN
破伤风类毒素（TT）                          2000Lf
白喉类毒素（DT）                            4500Lf
Al(OH)3                                      140mg
sIPV Ⅰ型                                    4500 DU
sIPV Ⅱ型                                    6400DU
sIPV Ⅲ型                                     6600DU
NaCl                                         850mg
2-苯氧乙醇                                    300mg
医用注射用水                                 26.8g；
（3）将步骤（2）所备Al(OH)3、NaCl和医用注射用水混合后，进行高压灭菌，再在室温下连续搅拌，并依次加入白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳毒素、丝状血细胞凝集素、百日咳杆菌粘附素、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型，然后用pH8.0的PB缓冲液调节pH值为6.8，再加入2-苯氧乙醇作为防腐剂，即得到吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
实施例4 
（1）根据中华人民共和国药典2010年版的要求，分别制备无细胞百日咳抗原(PT、FHA、PRN)、破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)，以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型；其中制备百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN所用的百日咳Ⅰ相CS菌株的菌号为58003-3；制备破伤风类毒素TT所用的破伤风梭状芽孢杆菌的菌号为64008；制备白喉类毒素DT所用的白喉杆菌PW8株的菌号为38007，均购自中国食品药品检定研究院血清室；制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液所用的脊髓灰质炎病毒分别是Ⅰ型为SabinSO+2，Ⅱ型为SabinSO+2，Ⅲ型为PfizerSOR+1，均购自世界卫生组织WHO；
（2）按每100mL联合疫苗中含有下列组份进行备料：
百日咳毒素（PT）                           5000ugPN
丝状血细胞凝集素（FHA）                   5000ugPN
百日咳杆菌粘附素（PRN）                   1600ugPN
破伤风类毒素（TT）                        2000Lf
白喉类毒素（DT）                          5000Lf
Al(OH)3                                    145mg
sIPV Ⅰ型                                  3000DU
sIPV Ⅱ型                                  6400DU
sIPV Ⅲ型                                   4500DU
NaCl                                       850mg
2-苯氧乙醇                                 400mg
医用注射用水                                 26g；
（3）将步骤（2）所备Al(OH)3、NaCl和医用注射用水混合后，进行高压灭菌，再在室温下连续搅拌，并依次加入白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳毒素、丝状血细胞凝集素、百日咳杆菌粘附素、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型，然后用pH8.0的PB缓冲液调节pH值为6.2，再加入2-苯氧乙醇作为防腐剂，即得到吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
各实施例成品检定 
实施例1～4制备的各DTaP-sIPV联合疫苗分别按《中国药典》三部（2005版）要求进行毒性试验、抗原效力试验、无菌检查及热原质试验，结果见表1、表2。
表1 疫苗检定结果 
表2 疫苗检定结果
 
实施例1的免疫原性研究
1）将实施例1提供的联合疫苗DTaP-sIPV与已经注册上市的DTaP-wIPV联合疫苗分别免疫清洁级wistar大鼠，第1次免疫后30天进行第2次免疫，再隔30天进行第3次免疫，免疫方法及剂量均与第1次相同。并于免疫前及每次免疫后30天采血，分离血清。微量中和试验检测中和抗体水平，基础免疫完成后，各组IPV的中和抗体阳转率和几何平均滴度（Geometric mean titer,GMT)结果见表3。
表3 大鼠免疫后各组IPV的中和抗体阳转率及几何平均滴度之间的比较 
A、中和抗体阳转率的变化
大鼠免疫前采血，检测中和抗体均为阴性。第1针免疫后，部分实验组大鼠血清抗体出现阳转；第2针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度均不低于1:8，3个型抗体阳转率均达100%；第3针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度迅速升高，均可以诱导大鼠产生保护性中和抗体。
B、中和抗体水平差异显著性分析 
DTaP-sIPV与DTaP-wIPV相比较，第一针免疫后，DTaP-sIPV诱导的Ⅰ型中和抗体水平明显高于DTaP-wIPV组，差异有显著意义（P=0.041)；DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平明显低于DTaP-wIPV组，差异均有显著意义（P=0.044）；Ⅲ型中和抗体水平的差异无显著意义（P=0.687）；第二针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.143～0.646）；第三针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.144～0.501）。虽然在第一次免疫后DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平低于DTaP-wIPV组，但是在三针基础免疫完成后，均可以诱导产生高水平的保护性中和抗体。
实施例2的免疫原性研究 
1）将实施例2提供的联合疫苗DTaP-sIPV与已经注册上市的DTaP-wIPV联合疫苗分别免疫清洁级wistar大鼠，第1次免疫后30天进行第2次免疫，再隔30天进行第3次免疫，免疫方法及剂量均与第1次相同。并于免疫前及每次免疫后30天采血，分离血清。微量中和试验检测中和抗体水平，基础免疫完成后，各组IPV的中和抗体阳转率和几何平均滴度（Geometric mean titer,GMT)结果见表4。
表4 大鼠免疫后各组IPV的中和抗体阳转率及几何平均滴度之间的比较 
 
A、中和抗体阳转率的变化
大鼠免疫前采血，检测中和抗体均为阴性。第1针免疫后，部分实验组大鼠血清抗体出现阳转；第2针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度绝大部分阳转大于1：8；第3针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度迅速升高，均可以诱导大鼠产生保护性中和抗体。
B、中和抗体水平差异显著性分析 
DTaP-sIPV与DTaP-wIPV相比较，第一针免疫后，DTaP-sIPV诱导的Ⅰ型中和抗体水平明显高于DTaP-wIPV组，差异有显著意义（P=0.045)；DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平明显低于DTaP-wIPV组，差异均有显著意义（P=0.031）；Ⅲ型中和抗体水平的差异无显著意义（P=0.769）；第二针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.179～0.865）；第三针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.131～0.397）。虽然在第一次免疫后DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平低于DTaP-wIPV组，但是在三针基础免疫完成后，均可以诱导产生高水平的保护性中和抗体。
实施例3的免疫原性研究 
1）将实施例3提供的联合疫苗DTaP-sIPV与已经注册上市的DTaP-wIPV联合疫苗分别免疫清洁级wistar大鼠，第1次免疫后30天进行第2次免疫，再隔30天进行第3次免疫，免疫方法及剂量均与第1次相同。并于免疫前及每次免疫后30天采血，分离血清。微量中和试验检测中和抗体水平，基础免疫完成后，各组IPV的中和抗体阳转率和几何平均滴度（Geometric mean titer,GMT)结果见表5。
表5 大鼠免疫后各组IPV的中和抗体阳转率及几何平均滴度之间的比较 
A、中和抗体阳转率的变化
大鼠免疫前采血，检测中和抗体均为阴性。第1针免疫后，实验组大鼠血清抗体部分出现阳转；第2针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度均不低于1:8，3个型抗体阳转率均达100%；第3针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度迅速升高，均可以诱导大鼠产生保护性中和抗体。
B、中和抗体水平差异显著性分析 
DTaP-sIPV与DTaP-wIPV相比较，第一针免疫后，DTaP-sIPV诱导的Ⅰ型中和抗体水平明显高于DTaP-wIPV组，差异有显著意义（P=0.037)；DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平明显低于DTaP-wIPV组，差异均有显著意义（P=0.039）；Ⅲ型中和抗体水平的差异无显著意义（P=0.871）；第二针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.157～0.731）；第三针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.139～0.629）。虽然在第一次免疫后DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平低于DTaP-wIPV组，但是在三针基础免疫完成后，均可以诱导产生高水平的保护性中和抗体。
实施例4的免疫原性测定 
将实施例4提供的联合疫苗DTaP-sIPV与现有的DTaP-wIPV联合疫苗分别免疫清洁级wistar大鼠，第1次免疫后30天进行第2次免疫，再隔30天进行第3次免疫，免疫方法及剂量均与第1次相同。并于免疫前及每次免疫后30天采血，分离血清。微量中和试验检测中和抗体水平，基础免疫完成后，各组IPV的中和抗体阳转率和几何平均滴度（Geometric mean titer,GMT)结果见表6。
表6 大鼠免疫后各组IPV的中和抗体阳转率及几何平均滴度之间的比较 
A、中和抗体阳转率的变化
大鼠免疫前采血，检测中和抗体均为阴性。第1、2针免疫后，绝大部分实验组大鼠血清抗体出现阳转；第3针免疫后，实验组大鼠中和抗体滴度迅速升高，均不低于1:8，3个型抗体阳转率均达100%，均可以诱导大鼠产生保护性中和抗体。
B、中和抗体水平差异显著性分析 
DTaP-sIPV与DTaP-wIPV相比较，第一针免疫后，DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平明显低于DTaP-wIPV组，差异均有显著意义（P=0.048）；Ⅰ型、Ⅲ型中和抗体水平的差异无显著意义（P=0.172和P=0.817）；第二针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.143～0.674）；第三针免疫后，三个型别中和抗体水平的差异均无显著意义（P=0.126～0.944）。虽然在第一次免疫后DTaP-sIPV诱导的Ⅱ型中和抗体水平低于DTaP-wIPV组，但是在三针基础免疫完成后，均可以诱导产生高水平的保护性中和抗体。

Claims (6)

1.一种吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于每100mL联合疫苗中含有下列组份：
百日咳毒素PT                           3000～6000ugPN
丝状血细胞凝集素FHA                    3000～6000ugPN
百日咳杆菌粘附素PRN                    1000～2000ugPN
破伤风类毒素TT                          1000～3000Lf
白喉类毒素DT                            3000～6000Lf
Al(OH)3                                  126～154mg
sIPV Ⅰ型                                3000～6000 DU
sIPV Ⅱ型                                5700～7100DU
sIPV Ⅲ型                                 4500～9000DU
NaCl                                    765～935mg
2-苯氧乙醇                               0～600mg
H2O                                     余量。
2.根据权利要求1所述的吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于：所述百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN、破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT、Al(OH)3、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型、NaCl、2-苯氧乙醇均是常规产品。
3.根据权利要求1所述的吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于：所述H2O为医用注射用水。
4.一种吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗的制备方法，其特征在于经过下列各步骤：
（1）按常规方法分别制备无细胞百日咳抗原PT、FHA、PRN、破伤风类毒素TT和白喉类毒素DT，以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型；
（2）按每100mL联合疫苗中含有下列组份进行备料：
百日咳毒素PT                           3000～6000ugPN
丝状血细胞凝集素FHA                    3000～6000ugPN
百日咳杆菌粘附素PRN                    1000～2000ugPN
破伤风类毒素TT                          1000～3000Lf
白喉类毒素DT                            3000～6000Lf
Al(OH)3                                  126～154mg
sIPV Ⅰ型                                3000～6000 DU
sIPV Ⅱ型                                5700～7100DU
sIPV Ⅲ型                                 4500～9000DU
NaCl                                     765～935mg
2-苯氧乙醇                                0～600mg
H2O                                     余量；
（3）将步骤（2）所备Al(OH)3、NaCl和H2O混合后，进行高压灭菌，再在室温下连续搅拌，并依次加入白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳毒素、丝状血细胞凝集素、百日咳杆菌粘附素、sIPV Ⅰ型、sIPV Ⅱ型、sIPV Ⅲ型，然后调节pH值为5.8～7.2，再加入2-苯氧乙醇作为防腐剂，即得到吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）的常规方法是根据中华人民共和国药典2010年版的要求制备各原液，其中制备百日咳毒素PT、丝状血细胞凝集素FHA、百日咳杆菌粘附素PRN所用的百日咳Ⅰ相CS菌株的菌号为58003-3；制备破伤风类毒素TT所用的破伤风梭状芽孢杆菌的菌号为64008；制备白喉类毒素DT所用的白喉杆菌PW8株的菌号为38007，均购自中国食品药品检定研究院血清室；制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液所用的脊髓灰质炎病毒分别是Ⅰ型为SabinSO+2，Ⅱ型为SabinSO+2，Ⅲ型为PfizerSOR+1，均购自世界卫生组织WHO。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）的pH值用pH8.0的PB缓冲液进行调节。
CN201410156859.1A 2014-04-18 2014-04-18 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法 Pending CN103908667A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410156859.1A CN103908667A (zh) 2014-04-18 2014-04-18 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410156859.1A CN103908667A (zh) 2014-04-18 2014-04-18 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103908667A true CN103908667A (zh) 2014-07-09

Family

ID=51034869

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410156859.1A Pending CN103908667A (zh) 2014-04-18 2014-04-18 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103908667A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104707134A (zh) * 2015-03-27 2015-06-17 成都欧林生物科技股份有限公司 一种无细胞百日破联合疫苗及其制备方法
CN111053898A (zh) * 2019-12-26 2020-04-24 北京科兴中维生物技术有限公司 一种疫苗组合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101522217A (zh) * 2006-08-16 2009-09-02 诺华有限公司 抗原剂量降低的加强免疫疫苗的制造
CN101559223A (zh) * 2008-04-18 2009-10-21 重庆智仁生物技术有限公司 流脑白百破联合疫苗
CN102178949A (zh) * 2011-05-13 2011-09-14 中国医学科学院医学生物学研究所 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及其制备

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101522217A (zh) * 2006-08-16 2009-09-02 诺华有限公司 抗原剂量降低的加强免疫疫苗的制造
CN101559223A (zh) * 2008-04-18 2009-10-21 重庆智仁生物技术有限公司 流脑白百破联合疫苗
CN102178949A (zh) * 2011-05-13 2011-09-14 中国医学科学院医学生物学研究所 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及其制备

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
马艳: "DTaP-sIPV四联疫苗的制备及免疫原性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104707134A (zh) * 2015-03-27 2015-06-17 成都欧林生物科技股份有限公司 一种无细胞百日破联合疫苗及其制备方法
CN111053898A (zh) * 2019-12-26 2020-04-24 北京科兴中维生物技术有限公司 一种疫苗组合物及其应用
CN111053898B (zh) * 2019-12-26 2023-05-16 北京科兴中维生物技术有限公司 一种疫苗组合物及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sikes et al. Effective protection of monkeys against death from street virus by post-exposure administration of tissue-culture rabies vaccine
Chen et al. Formaldehyde-inactivated human enterovirus 71 vaccine is compatible for co-immunization with a commercial pentavalent vaccine
CN103442730B (zh) 组合七价疫苗
CN107177001B (zh) 一种防治猪流行性腹泻病的卵黄抗体及其制备方法
CN103386126B (zh) 一种含肠道病毒抗原的多价免疫原性组合物
CN106999569B (zh) 肠道病毒灭活的改进的方法、佐剂吸附及其获得的剂量减少的疫苗组合物
CN103394082B (zh) 多价免疫原性组合物
CN105963692B (zh) 一种预防手足口病的联合疫苗
CN102166356A (zh) α-甘露聚糖肽作为疫苗佐剂的应用及基于该应用制备的疫苗制剂
CN101450209B (zh) 透皮免疫流感多价疫苗的制备及其方法
CN103193869A (zh) 一种牛口蹄疫病毒a型合成肽及其制备和应用
CN103908667A (zh) 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及制备方法
CN102178949A (zh) 吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及其制备
CN106075423B (zh) 一种预防手足口病的联合疫苗
CN105999256B (zh) 一种预防手足口病的联合疫苗
CN104844708A (zh) 马抗H7N9亚型流感特异免疫球蛋白F(ab’)2及其制备方法
KR20110079816A (ko) 류마티즘성 관절염, 진전／파킨슨병, 다발성 경화증 및 비바이러스성 암의 치료방법
CN106381290A (zh) 重组欧洲禽源h1n1亚型猪流感疫苗株及其制备方法和应用
CN102988977B (zh) 多价疫苗
Wang et al. Research progress of rabies vaccine
CN107129527A (zh) 一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原hp0623及其制备方法
CN106699880A (zh) 一种治疗i型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法
CN100393358C (zh) 马属动物抗人、禽流感免疫球蛋白的制备及其药物制剂
CN102813920A (zh) 一种疫苗佐剂
CN100413536C (zh) 人用狂犬病裂解疫苗

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20140709