CN103908559A - 新型抗糖尿病中药薤白类化合物或有效部位的提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提出一种质量稳定、路线简单、适于规模化生产的中药薤白类化合物或有效部位的纯化工艺。本发明采用天然药物化学和分子药理相结合的方法，研究中药薤白治疗糖尿病的同时保护心血管方面的有效物质基础，明确薤白皂苷类化合物等的结构、性质以及活性情况，通过不同比例的单体配伍可产生新的活性组分。本发明提取工艺简单、原料易得、成本低、提取率高，同时具有药物质量容易控制，口服剂量小，病人顺从性高等优势，适于规模型工业化生产。

Description

新型抗糖尿病中药薤白类化合物或有效部位的提取工艺

技术领域

本发明属于中药研究领域。本发明涉及一种新型糖尿病中药薤白类化合物或有效部位的提取工艺，以研究其在抗糖尿病的同时又能保护心血管方面的疗效。主要以中药薤白为研究对象，属于生物医药领域。

背景技术

据世界卫生组织预测，到2025年全世界糖尿病患者将达到3亿人，其中2.3亿人在发展中国家。糖尿病主要分为I型和II型糖尿病，其中97％以上均属于II型糖尿病。中国目前糖尿病的发病率约为5％左右，糖尿病患者的人数仅次于印度居世界第2位。我国正处于一个糖尿病的高发期，特别是近几年来随着人们生活水平的提高糖尿病的发病出现了一个快速上升的趋势。糖尿病的主要危害来自于其心血管等并发症，而不是糖尿病如高血糖本身。由II型糖尿病引起的主要死因来自于心血管疾病，特别是冠状动脉性疾病作为糖尿病的并发症，其死亡危险性较非糖尿病者高2～4倍。

糖尿病经典口服治疗药物和近年来研发的新药虽能很好的控制一些微血管事件，但对大血管事件无能为力。甚至，糖尿病药物在治疗过程中本身就存在诱发一些大血管事件的可能性，如常用的磺酰脲类降糖药及噻唑烷二酮类(罗格列酮)都会增加心脏病风险。而目前降糖药物的主要开发思路都是基于降低血糖这个目标。因此，开发具有心血管保护功能的降糖药物，能够让糖尿病患者受益，降低终点死亡事件的发生。

糖尿病晚期有另外一个主要死因那就是酮症酸中毒和引起的感染，这些症状须依赖胰岛素来进行降血糖的治疗，因此降血糖的治疗在晚期糖尿病中仍占极其重要的地位。然而长期的胰岛素治疗特别是注射会出现使用不方便和胰岛素抗性等缺点。长期使用胰岛素也会导致血管壁增厚，增加心血管事件，这也是医药工作者一直在寻求合适的小分子化合物来治疗糖尿病的原因。胰岛素拟似物，促进胰岛素分泌或胰岛素样物质的研究与开发一直是抗糖尿病药物的一个重要方向。Visfatin是2005年发表在《Science》上的一种新型的重要的脂肪细胞因子，可与胰岛素受体不同位点结合抑制肝葡萄糖的释放，促进脂肪和肌肉对葡萄糖的利用，发挥胰岛素样降糖作用，其与II型糖尿病有一直接的联系。一种促进Visfatin表达和释放的小分子药物也许能减少胰岛素的用量，减少胰岛素抗性。

II型糖尿病的发生与生活水平的提高，高营养食物的过量摄取等环境因素有直接的联系。因此市场需要那种能刺激体内能量过度“燃烧”的药物来应对高营养食物的摄取。由糖尿病引起的常见心脏病主要表现为心肌缺血缺氧。增加心肌供血供氧或能量供应可能会一定程度预防和降低由糖尿病引起的冠状动脉疾病。骨骼肌是能量代谢一个主要的器官。增加骨骼肌和心肌能量供应也许能改善糖尿病及其心血管并发症。腺苷酸激酶(AMPK)是一种能量代谢关键的限速酶，提高其活性可促进骨骼肌的能量代谢而发挥降糖效应。双胍类降糖药具有激活AMPK的作用。AMPK在骨骼肌和心脏均高度表达，以AMPK为靶点，给发现抗糖尿病和心脏保护活性的新型化合物提供了新的思路。目前仍然没有明显降糖疗效的纯中药药物制剂。

薤白是一味传统的中药，为百合科植物小根蒜(Allium Macrostemon Bge)或薤(AlliumChinense G.Don)的干燥鳞茎。性味辛、苦、温，有温中通阳，理气宽胸，通阳散结之功效。薤白中医可用于治疗胸痹胀痛、心痛彻背等症，即西医临床所述心绞痛治疗。化学研究显示其含有挥发油、皂苷、含氮化合物、前列腺素等成分。薤白皂苷是主要的活性组分之一，新发现的薤白皂苷类化合物有19个，具有多种心血管保护活性如抑制血小板聚集，降低血脂，抗氧化舒张冠脉等。最近我们研究发现薤白皂苷A体内外均能促进visfatin的表达与释放，并具有显著的降糖活性和改善糖耐量和胰岛素敏感性的作用。并且在前期的研究中，我们对薤白皂苷A的作用器官和靶点进行了推测，摄食中枢、脂肪组织、肝脏可能都不是主要的作用器官，骨骼肌能量代谢的增加可能是主要的作用靶点。进一步的预实验发现薤白皂苷A可明显促进离体细胞AMPK的表达及其在体活性。因此薤白皂苷A及其它同系物很可能发展成为一种具有心血管保护作用的降糖候选药物。

发明内容

薤白皂苷A降糖活性的发现系首次在体内外实验中发现，具有较为明确的作用机制，这些研究已经走在国内外前列。新型化合物薤白皂苷A及其同系物在心血管保护和抗糖尿病双重活性的研究可望能够衍生新的知识产权产品。与同类产品比较，薤白皂苷来自于我国传统中药薤白，由于其化学组分和作用靶点新颖，同时又能减少心血管事件，与忽略和诱发心脏事件的同类产品相比较具有明显和更强的国际竞争力。

薤白皂苷中有许多薤白皂苷A的类似物，特别在抗心肌缺血和降糖双重性方面具有活性，可以衍生新的天然活性物。从薤白皂苷中开发出具有心血管保护活性的新型降糖中药单体或有效成份，可以帮助解决目前降血糖药物缺乏心血管保护活性，以及糖尿病心血管并发症高发的问题，也解决了当今中药作用机制不明确的问题。

本发明的目的在于提出一种质量稳定、路线简单、适于规模化生产的中药薤白类化合物或有效部位的纯化工艺。本发明采用天然药物化学和分子药理相结合的方法，研究中药薤白治疗糖尿病的同时保护心血管方面的有效物质基础，明确薤白皂苷类化合物等的结构、性质以及活性情况，通过不同比例的单体配伍可产生新的活性组分。本发明提取工艺简单、原料易得、成本低、提取率高，同时具有药物质量容易控制，口服剂量小，病人顺从性高等优势，适于规模型工业化生产。

具体实施方式

本发明提供了一种从薤白中提取皂苷类化合物或有效活性成分的提取工艺，内容主要包括：粉碎、提取、浓缩、洗脱、分离等步骤。其具体工艺如下：

(1)粉碎取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；

(2)提取小根蒜干燥鳞茎用60％乙醇浸泡，加热回流提取，得回流提取液；

(3)浓缩回流提取液减压浓缩，得稠厚浸膏；

(4)洗脱将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，用D101大孔吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至干，得各洗脱馏分浸膏；

(5)分离各洗脱浸膏运用HPLC的分离手段进行分离得各单体化合物。

甾体皂甙是薤白的主要活性成分之一，在分离出的众多皂甙中，19个均为首次分离得到的新化合物，其中macrostemonoside A→D从小根蒜和薤中均分离得到。

具体实施方式以下将做进一步详述：

实施例一

取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；用8倍量60％乙醇浸泡，加热回流提取2次，得回流提取液；回流提取液每次1小时30分钟减压浓缩，得稠厚浸膏；将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，分别用D101、AB-8、HPD-100吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至干，得各洗脱馏分浸膏；各洗脱浸膏运用HPLC分离手段进行分离。结果表明：1、D101、AB-8、HPD-100吸附树脂柱均有较大的吸附容量；2、在解吸附(洗脱)试验中，D101树脂的解吸量是最高的，洗脱率分别为96.8、94.3和92.6；3、所以用D101树脂吸附最好，得到总皂苷含量达到45％。

实施例二

取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；用8倍量60％乙醇浸泡，加热回流提取2次，得回流提取液；回流提取液每次1小时30分钟减压浓缩，得稠厚浸膏；将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，用D101吸附树脂柱吸附，再分别用5％、10％、30％、60％、95％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至干，得各洗脱馏分浸膏；各洗脱浸膏运用HPLC分离。结果表明：1、用60％的乙醇洗脱能力最强，可以把薤白皂苷基本洗脱完全；2、所以用60％乙醇洗脱最好，得到总皂苷含量达到45％。

实施例三

取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；用8倍量60％乙醇浸泡，加热回流提取2次，得回流提取液；回流提取液每次2小时减压浓缩，得稠厚浸膏；将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，用D101大孔吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至干，得各洗脱馏分浸膏；各洗脱浸膏运用HPLC分离手段进行分离。结果表明：回流提取液每次2小时减压浓缩比1个半小时得到总皂苷含量可提高5％，达到55％。

实施例四

取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；用10倍量60％乙醇浸泡，加热回流提取2次，得回流提取液；回流提取液每次2小时减压浓缩，得稠厚浸膏；将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，用D101大孔吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至干，得各洗脱馏分浸膏；各洗脱浸膏运用HPLC分离手段进行分离。结果表明：用10倍量和8倍量60％乙醇浸泡小根蒜干燥鳞茎加热回流提取得到总皂苷含量接近，得到总皂苷含量约为55％。

实施例五

取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；用10倍量60％乙醇浸泡，加热回流提取2次，得回流提取液；回流提取液每次2小时减压浓缩，得稠厚浸膏；将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，用D101大孔吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至于，得各洗脱馏分浸膏；各洗脱浸膏运用硅胶、ODS、Sephedax LH-20、HPLC等分离手段进行分离。结果表明：用HPLC的分离手段分离得到的总皂苷含量最高，得率为55％。

因此，用本提取工艺，主要包括：用10倍量60％乙醇浸泡，加热回流提取2次，回流提取液每次2小时减压浓缩用D101大孔吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，运用HPLC分离手段进行分离等方法可以得到较高的皂苷总量。

Claims (2)

1.本发明提供了一种从薤白中提取皂苷类化合物或有效活性成分的提取工艺，内容主要包括：粉碎、提取、浓缩、洗脱、分离等步骤。具体工艺包括下述步骤：

(1)粉碎取新鲜小根蒜鳞茎洗净，蒸透，干燥，简单粉碎，得小根蒜干燥鳞茎；

(2)提取小根蒜干燥鳞茎用60％乙醇浸泡，加热回流提取，得回流提取液；

(3)浓缩回流提取液减压浓缩，得稠厚浸膏；

(4)洗脱将浓缩得到的稠厚浸膏捏溶、混悬于水中，用D101大孔吸附树脂柱吸附，再用60％的乙醇洗柱，各洗脱馏分在55℃下减压蒸发至干，得各洗脱馏分浸膏；

(5)分离各洗脱浸膏运用HPLC的分离手段进行分离得各单体化合物。

2.如权利要求1所述的工艺方法，本工艺质量稳定、路线简单、适于规模化生产。