CN103892050A - 一种乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明在于提供一种乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法，它能够增加采食量、提高日增重、提高饲料转化率、显著促进生长、残留低和活性稳定等优点。乳铁蛋白肽饲料添加剂使猪只的生产性能得到很大提高，也可替代部分抗生素使用。

Description

一种乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，具体是指一种促进牲畜保健与快速生长的乳铁蛋白肽饲料添加剂。属于抗菌肽相关添加剂技术领域。

背景技术

近年来，由于饲用抗生素的大量使用而引起的药物残留，使动物肉蛋奶及水产品的质量日趋下降，抗药性致病菌的大量出现使畜禽等动物的抗病能力也在不断下降。随着抗生素药物的迅速发展，并广泛应用于兽医临床，使用的剂量也越来越大，耐药菌株也逐渐增多，给临床治疗疾病造成不良影响，导致食品安全、环境污染和耐药性问题备受关注。目前各国正积极鼓励和倡导绿色安全饲料添加剂的研制与推广应用。

抗菌肽（antibacterial peptides，ABP）是生物体产生的一种具有强抗菌作用的阳离子小肽，是生物先天免疫的重要组成成分。迄今为止，已在许多生物包括昆虫、鸟类、动物、植物及原核生物中发现2000多种抗菌活性肽。效果研究表明，抗菌肽不但广谱抗菌，能抑杀耐药性菌株，而且它的杀菌机制使病原菌不易产生耐药性突变，从而成为最具开发前景的抗生素替代品之一。

乳铁蛋白（Lactoferrin，LF）是一种分子质量约为80000Da的铁结合性糖蛋白，主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中，如乳汁、眼泪、唾液等。乳汁，尤其是初乳中LF的含量很高，如牛初乳中的LF质量浓度为1g/L。它不仅参与铁的转运，而且具有抗菌、抗病毒、抗癌、调节免疫系统和抗氧化等功能。乳铁蛋白肽（lactoferricin，Lfcin）是乳铁蛋白在消化道内经酸性胃蛋白酶水解后的小肽，其功能与乳铁蛋白的功能密切相关，除不能结合铁离子外，乳铁蛋白肽具备乳铁蛋白的所有生物学活性，并且杀菌活性比乳铁蛋白高。

BeUamy首先在牛乳中发现乳铁蛋白肽。此后陆续在人、小鼠、猪等动物中发现了同源物，乳铁蛋白肽的一级结构具有较高的同源性，不同动物的Lfcin包括的氨基酸长度不同，基本上都是几十个氨基酸的小肽。其中，牛的乳铁蛋白肽（Lfcin B）的抗菌活性最高。

乳铁蛋白肽（Lactoferricin，Lfcin）是LF在消化道内经酸性胃蛋白酶水解后的小肽。大量研究表明，Lfcin具有广谱抗细菌、抗病毒和抗真菌活性，它们虽然没有铁离子结合位点，但杀菌活性却比LF高，可用于开发新型的保健食品和绿色饲料添加剂。

本发明提供一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，它能增强机体免疫机能，提高动物抗应激和抗疾病能力，改善动物生产性能；具有低残留、不易产生耐药性，而且长期稳定等优点，具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法，它具有增强机体免疫机能、残留低和稳定期长等优点。

本发明涉及一种稳定、增强机体免疫力的乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法，含有：乳铁蛋白肽或修饰后的乳铁蛋白肽、保护剂和辅料，各组分的重量含量配比为：

乳铁蛋白肽        20～40%

保护剂              2～10%

辅料              补齐至100%

本发明所包含的乳铁蛋白肽可以是从动物、植物或微生物中分离提取得到的，也可以是基因工程方式表达的，可以是修饰过的或未修饰过的。

本发明所选用的保护剂为精氨酸、赖氨酸中的一种或两种与甘露醇、山梨醇中的一种或两种组成，保护剂的优选比例为：精氨酸和赖氨酸共占质量比1-5％，甘露醇和山梨醇共占质量比1-5％，精氨酸与赖氨酸的质量比为任意比，甘露醇与山梨醇的质量比也为任意比。

所述辅料为维生素BB2、山楂、茯苓、夏枯草；辅料的优选比例为：维生素B2：山楂：茯苓：夏枯草=5:35:25:35。

本发明通过以下制备方法获得：

（1）先将保护剂进行配比，充分混合均匀；

（2）将保护剂与乳铁蛋白肽充分混合均匀；

（3）将维生素BB2和中药原料山楂、茯苓和夏枯草洗净，粉碎，过80目筛；全部辅料进行配比，混合均匀；

（4）最后将上述三种混合物按比例混合均匀，在粉碎机上微粉，过600目筛网，搅拌均匀后封装。即得所述乳铁蛋白肽饲料添加剂。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

（1）采用本发明制得的乳铁蛋白肽饲料添加剂加入到普通猪饲料中，可以使健康猪生长速度快，提高免疫力，预防猪流感，降低患病率，提高养殖效果；

（2）在4-25℃下贮藏24个月后仍然保持着乳铁蛋白肽的高化学和生物学稳定性。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1一种乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法

除非另外说明，所述样品包含

乳铁蛋白肽饲料添加剂的配制方法是：

（1）先将保护剂进行配比：按比例称取精氨酸、甘露醇，充分混合均匀获得保护剂组分；

（2）将保护剂与乳铁蛋白肽按比例充分混合均匀，获得组分A；

（3）将中药原料山楂、茯苓和夏枯草洗净，粉碎，过80目筛；维生素B₂按比例加入到粉碎后的中药原料中，混合均匀，获得组分B；

（4）最后将上述A和B混合物按比例混合均匀，在粉碎机上微粉，过600目筛网，搅拌均匀后封装。即得所述乳铁蛋白肽饲料添加剂。

实施例2一种乳铁蛋白肽饲料添加剂及其制备方法

除非另外说明，所述样品包含

乳铁蛋白肽饲料添加剂的配制方法是：

（1）先将保护剂进行配比：按比例称取精氨酸、甘露醇，充分混合均匀获得保护剂组分；

（2）将保护剂与乳铁蛋白肽按比例充分混合均匀，获得组分A；

（3）将中药原料山楂、茯苓和夏枯草洗净，粉碎，过80目筛；维生素B₂按比例加入到粉碎后的中药原料中，混合均匀，获得组分B；

（4）最后将上述A和B混合物按比例混合均匀，在粉碎机上微粉，过600目筛网，搅拌均匀后封装。即得所述乳铁蛋白肽饲料添加剂。

实施例3动物实验

将54头健康的28±2日龄断奶仔猪(体重平均为6.92±0.41kg)按公母各半的原则随机分为3组，每组3个重复，每个重复6头猪，组1是空白对照组，饲喂基础日粮，组2饲喂添加实施例1乳铁蛋白肽饲料添剂的基础日粮，添加量为2‰，组3饲喂添加实施例2乳铁蛋白肽饲料添剂的基础日粮，添加量为1‰。仔猪自由采食和自由饮水。试验期间按猪场常规方法进行饲养管理。试验第28天晚上8点停止喂料，照常供水，于次日早上8点对猪只空腹称重，计算试验的平均日增重，平均日采食量与饲料转化效率。

表1乳铁蛋白肽饲料添加剂对断乳仔猪生长性能的影响

结果表明：乳铁蛋白肽饲料添加剂可以有效的改善断奶乳猪的生长性能。整个试验期，添加乳铁蛋白肽饲料添加剂组的日增重显著高于空白对照组（P＜0.05），料重比显著低于空白对照组（P＜0.05）（见表1）。试验证明，在仔猪的日粮中添加本发明的乳铁蛋白肽饲料添加剂能增加采食量，提高日增重，提高饲料转换率，能显著促进仔猪生长，生长表现优异。乳铁蛋白肽饲料添加剂使猪只的生产性能得到很大提高，也可替代部分抗生素使用。

实施例4稳定性试验

将实施例1和实施例2中的样品分别置于温度为4℃±2℃的冰箱、温度为25℃±2℃和湿度为60％±5％的恒温恒湿箱中。稳定性考察过程中测量所述乳铁蛋白肽饲料添加剂的外观性状、乳铁蛋白肽活性。采用“抑制液体生长菌活性测定”方法检测乳铁蛋白肽活性，具体方法如下：

采用液体生长抑制方法检测乳铁蛋白肽的活性。将新鲜的E.coli菌液稀释为OD₆₀₀约0.05。在96孔板上，各加入50μL用0.22μm滤器过滤过的0.1g/L实施例1和0.05g/L实施例2产品（实验组）、LB阴性对照液、1mg/ml Amp的阳性对照液，再将稀释好的100μL E.coli菌液与其混合，每个样品重复3次。于37℃温箱培养12h，用ELX800型Universal MicroplateReader测定OD₆₃₀值。

OD₆₃₀值等同于各孔中细菌的浓度，OD₆₃₀值越高，乳铁蛋白肽活性越小。为了比较各乳铁蛋白肽的抑菌活性，我们按以下公式计算各乳铁蛋白肽的抑菌效价。在加入相同剂量乳铁蛋白肽时，抑菌效价越高则抑菌效果越好。

实施例1和实施例2中的组合物在4℃±2℃的冰箱条件下放置24个月后，与初始配制样品无外观性状和活性上的明显差异，在25℃±2℃和湿度为60％±5％条件下放置6个月内，添加剂没有明显外观性状和活性上的变化。因此添加剂在4℃条件下放置24月以及25℃条件下放置12个月均是稳定的。

表2实施例1和实施例2中乳铁蛋白肽饲料添剂稳定性

Claims (5)

1.一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，其特征为：由乳铁蛋白肽或修饰后的乳铁蛋白肽、保护剂和辅料组成，其组成的质量配比为：乳铁蛋白肽占比20~40%，保护剂占比2~10%，添加辅料补齐至100%；其保护剂为精氨酸、赖氨酸中的一种或两种与甘露醇、山梨醇中的一种或两种组成，其辅料为维生素B₂、山楂、茯苓和夏枯草组成。

2.根据权利要求1所述的一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，其保护剂为精氨酸、赖氨酸中的一种或两种与甘露醇、山梨醇中的一种或两种组成，保护剂的优选比例为：精氨酸和赖氨酸共占质量比1-5％，甘露醇和山梨醇共占质量比1-5％，精氨酸与赖氨酸的质量比为任意比，甘露醇与山梨醇的质量比也为任意比。

3.根据权利要求1所述的一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，所述辅料为维生素B₂、山楂、茯苓和夏枯草，辅料的优选比例为：维生素B2：山楂：茯苓：夏枯草=5:35:25:35。

4.权利要求1所述的一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，其制备方法为：

（1）先将保护剂进行配比：按比例称取精氨酸、赖氨酸、甘露醇和山梨醇，充分混合均匀获得保护剂组分；

（2）将保护剂与乳铁蛋白肽按比例充分混合均匀，获得组分A； 

（3）将中药原料山楂、茯苓和夏枯草洗净，粉碎，过80目筛；维生素B₂按比例加入到粉碎后的中药原料中，混合均匀，获得组分B；

（4）最后将上述A和B混合物按比例混合均匀，在粉碎机上微粉，过600目筛网，搅拌均匀后封装，即得所述乳铁蛋白肽饲料添加剂。

5.权利要求1所述的一种乳铁蛋白肽饲料添加剂，其特征在于：所述的一种乳铁蛋白肽饲料添加剂主要用于母猪、仔猪和育肥猪饲养。