CN103891617B - 一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法 - Google Patents

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Abstract

本发明在于提供一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法，包括诱导培养基的配制、果实或茎芽的消毒、原球茎的冷冻诱导三个步骤，取消毒后的铁皮石斛成熟果实中的种子或成年植株的茎芽接种在诱导培养基上，置于-7~-10oC环境中，暗培养4~6小时，再转移至20~25oC环境中，光照强度2000~3000Lx下培养3~4个月，原球茎的诱导发生比一般培养提高15~20%以上，并且成苗一致整齐，本发明使原球茎的诱导发生比一般培养提高15~20%以上，并且成苗一致整齐，另外，摆脱了传统生产中添加激素成分等繁琐步骤，不存在诱变、污染等食品安全问题，操作简单，成本较低，可工厂化生产。

Description

一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法
技术领域
本发明涉及铁皮石斛组培技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法。
背景技术
《中国药学大词典》称铁皮石斛“专滋肺胃之气液,气液冲旺,肾水自生”,说它善于养阴生津，治疗阴虚津亏诸症。铁皮石斛除滋阴外,还有养血的功能,清代《药性论》说铁皮石斛能补肾积精，养胃阴、益气力。铁皮石解内含有丰富的多糖类物质,可促进人体平衡,有效增强体质,从而有效增强免疫力。综上所述，铁皮石斛具有巨大的商业价值，但是因为人们长期的野外采挖，野生的铁皮石斛已经到了濒危的状况，另外铁皮石斛坐果率很低，种子不易发芽，自然繁殖率极低。采用组培方法进行铁皮石斛的快速繁殖是最实用的一种技术，但存在繁殖率较低，分化慢，难于进行批量生产和工厂化生产等问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明在于提供一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法。
为实现上述目的，本发明通过下述技术方案予以实现：
一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法，包括诱导培养基的配制、果实或茎芽的消毒、原球茎的冷冻诱导三个步骤，取消毒后的铁皮石斛成熟果实中的种子或成年植株的茎芽接种在诱导培养基上，置于-7~-10oC环境中，暗培养4~6小时，再转移至20~25oC环境中，光照强度2000~3000Lx下培养3~4个月，原球茎的诱导发生比一般培养提高15~20%以上，并且成苗一致整齐。
所诉的诱导培养基的配制步骤为，按照每升水加入NH4NO31~3g、CaHPO40.1~0.2g、KH2PO40.2~0.3g、FeSO4.7H2O0.01~0.03g、蔗糖20~30g、土豆100~150g、琼脂5~7g的配比配制培养基，调PH值到6.8，然后分装在组培瓶内高温消毒，冷却备用。
所述的种子或茎芽的消毒步骤为，取铁皮石斛成熟果实或成年植株的茎芽放置于烘箱红外干燥后的烧杯中使用洗洁精的水溶液浸泡20分钟，再用纯净水冲洗到没有泡沫为止，然后采用75%酒精灭菌3分钟，无菌水漂洗3遍后使用0.1%升汞消毒5分钟，无菌水漂洗3遍，升汞消毒流程重复3次，或者使用0.1%升汞消毒15分钟漂洗5~7次。消毒后，取铁皮石斛成熟果实中的种子或成年植株的茎芽接种到诱导培养基上。
本发明的有益效果为：本发明使原球茎的诱导发生比一般培养提高15~20%以上，并且成苗一致整齐，另外，摆脱了传统生产中添加激素成分等繁琐步骤，不存在诱变、污染等食品安全问题，操作简单，成本较低，可工厂化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细地描述。
实施例1：
以铁皮石斛成熟果实为外植体，放置于烘箱红外干燥后的烧杯中使用洗洁精的水溶液浸泡20分钟，再用纯净水冲洗到没有泡沫为止，放入超净工作台，然后采用75%酒精灭菌3分钟，无菌水漂洗3遍后使用0.1%升汞消毒5分钟，无菌水漂洗3遍，升汞消毒流程重复3次。在超净工作台内取成熟果实置于无菌滤纸上，切去两端后纵切，然后将果实内的种子撒播于分装在组培瓶内高温消毒、冷却备用的诱导培养基上，盖上组培瓶盖子并拧紧封上保鲜膜。将组培瓶放入冷冻恒温培养箱内，温度设为-7~-10oC，暗培养4~6小时，而后转入人工培养室，温度控制在20~25oC，光照强度控制在2000~3000Lx，培养3~4个月，成苗整齐一致即可进行下一步工序。
本实施例中所述的诱导培养基配制方法为，按照每升水加入NH4NO31~3g、CaHPO40.1~0.2g、KH2PO40.2~0.3g、FeSO4.7H2O0.01~0.03g、蔗糖20~30g的配比加入搅拌容器中，然后加入所述配比的纯净水搅拌溶解，再加入捣成泥状的土豆100~150g/L、琼脂5~7g/L，使用NaOH稀溶液调PH值到6.8，然后分装在组培瓶内并将组培瓶放入高压消毒锅高温消毒，高压消毒锅压力设为0.2MPa、消毒温度设为121℃、消毒时间设为20分钟，消毒结束后培养基冷却备用。
实施例2：
以铁皮石斛成年植株茎芽为外植体，放置于烘箱红外干燥后的烧杯中使用洗洁精的水溶液浸泡20分钟，再用纯净水冲洗到没有泡沫为止，放入超净工作台，然后采用75%酒精灭菌3分钟，无菌水漂洗3遍后使用0.1%升汞消毒5分钟，无菌水漂洗3遍，升汞消毒流程重复3次。在超净工作台内将茎芽置于无菌滤纸上，剪取茎芽顶部0.5~1.5cm，然后使用镊子夹取茎芽将受创面向下斜插入于分装在组培瓶内高温消毒、冷却备用的诱导培养基内，盖上组培瓶盖子并拧紧封上保鲜膜。将组培瓶放入冷冻恒温培养箱内，温度设为-7~-10oC，暗培养4~6小时，而后转入人工培养室，温度控制在20~25oC，光照强度控制在2000~3000Lx，培养3~4个月，成苗整齐一致即可进行下一步工序。
上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理和最佳实施例，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (2)

1.一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法，包括诱导培养基的配制、果实或茎芽的消毒、原球茎的冷冻诱导三个步骤，所述诱导培养基的配制步骤为，按照每升水加入NH4NO31~3g、CaHPO40.1~0.2g、KH2PO40.2~0.3g、FeSO4.7H2O0.01~0.03g、蔗糖20~30g、土豆100~150g、琼脂5~7g的配比配制培养基，调PH值到6.8，然后分装在组培瓶内高温消毒，冷却备用；取消毒后的铁皮石斛成熟果实中的种子或成年植株的茎芽接种在诱导培养基上，置于-7~-10℃环境中，暗培养4~6小时，再转移至20~25℃环境中，光照强度2000~3000Lx下培养3~4个月。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的冷冻诱导方法，其特征在于：所述的种子或茎芽的消毒步骤为，取铁皮石斛成熟果实或成年植株的茎芽放置于烘箱红外干燥后的烧杯中使用洗洁精的水溶液浸泡20分钟，再用纯净水冲洗到没有泡沫为止，然后采用75%酒精灭菌3分钟，无菌水漂洗3遍后使用0.1%升汞消毒5分钟，无菌水漂洗3遍，升汞消毒流程重复3次，或者使用0.1%升汞消毒15分钟漂洗5~7次，消毒后，取铁皮石斛成熟果实中的种子或成年植株的茎芽接种到诱导培养基上。
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