CN103889445A - 硫酸化糖胺聚糖用于改善因子viii的生物利用度的用途 - Google Patents

硫酸化糖胺聚糖用于改善因子viii的生物利用度的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN103889445A
CN103889445A CN201280051236.7A CN201280051236A CN103889445A CN 103889445 A CN103889445 A CN 103889445A CN 201280051236 A CN201280051236 A CN 201280051236A CN 103889445 A CN103889445 A CN 103889445A
Authority
CN
China
Prior art keywords
factor
sulfated glycosaminoglycans
body weight
fviii
treatment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201280051236.7A
Other languages
English (en)
Inventor
H·梅茨纳
S·措尔纳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CSL Behring GmbH Deutschland
Original Assignee
CSL Behring GmbH Deutschland
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CSL Behring GmbH Deutschland filed Critical CSL Behring GmbH Deutschland
Publication of CN103889445A publication Critical patent/CN103889445A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及包含一种或多种因子VIII和硫酸化糖胺聚糖、用于在非静脉内施用后增加因子VIII的生物利用度的的药物组合物。本发明还涉及因子VIII和硫酸化糖胺聚糖组合用于治疗或预防出血障碍，由此因子VIII的生物利用度得到增加，以及涉及通过硫酸化糖胺聚糖的共施用增加因子VIII的非静脉内施用后生物利用度的方法。

Description

硫酸化糖胺聚糖用于改善因子VIII的生物利用度的用途
本发明涉及包含至少一种因子VIII和硫酸化糖胺聚糖、用于在非静脉内施用后增加因子VIII的生物利用度的药物制剂。本发明还涉及因子VIII和硫酸化糖胺聚糖组合用于治疗和预防出血障碍的用途，其中因子VIII的生物利用度得到增加，以及涉及通过共施用硫酸化糖胺聚糖化增加因子VIII的非静脉内施用后生物利用度的方法。
发明背景
因子VIII(FVIII)
FVIII是哺乳动物肝脏中产生的分子量约280kDa的血浆糖蛋白。其为导致血液凝固的凝血反应级联的至关重要的组分。该级联中有一个其中因子IXa(FIXa)与活化的因子VIII(FVIIIa)一起将因子X(FX)转化成活化形式FXa的步骤。FVIIIa在该步骤中充当辅因子，其与钙离子和磷脂一起是使FIXa的活性最大化所需要的。最常见的血友病障碍是由被称为血友病A的功能性FVIII缺乏而引起的。
血友病A的治疗中的一项重要进展是分离到编码人FVIII的完整2,351个氨基酸的序列的cDNA克隆(美国专利No.4,757,006)以及提供了人FVIII基因DNA序列和其重组生产方法。
从克隆的cDNA确定的人FVIII的推导一级氨基酸序列的分析表明，其为从更大的前体多肽加工而成的异二聚体。该异二聚体由约80kDa的C末端轻链与以金属离子依赖性方式相缔合的约200kDa N末端重链组成。(参见Kaufman,Transfusion Med.Revs.6:235(1992)的综述)。该异二聚体的生理活化通过凝血酶对其蛋白质链的蛋白水解切割发生。凝血酶将重链切割成90kDa的蛋白质，随后将其切割成54kDa和44kDa的片段。凝血酶还将80kDa的轻链切割成72kDa的蛋白质。正是后一种蛋白质和通过钙离子保持在一起的两个重链片段(上述54kDa和44kDa)构成了活性FVIII。当44kDa A2重链片段从该分子上解离下来时或当72kDa和54kDa结构域被凝血酶、活化的蛋白C或FXa进一步切割时，发生失活。在血浆中，FVIII通过与50倍摩尔浓度过量的Von Willebrand因子蛋白("VWF")缔合而得以稳定，所述因子蛋白似乎抑制上述FVIII的蛋白水解破坏。
FVIII的氨基酸序列被组织成3个结构性结构域：三重330个氨基酸的A结构域、单个980个氨基酸的B结构域和二重150个氨基酸的C结构域。B结构域与其它蛋白质不具有同源性，并且提供该蛋白质的25个潜在天冬酰胺(N)-连接糖基化位点中的18个。B结构域似乎在凝血中不具有功能，并且可被缺失，该B结构域被缺失的FVIII分子仍然具有促凝血活性。
Von Willebrand因子(VWF)
VWF是存在于哺乳动物血浆中的多聚粘着糖蛋白，其具有多个生理功能。在主要的止血过程中，VWF充当血小板表面上的特异性受体与细胞外基质的组分例如胶原之间的介质。此外，VWF还充当促凝血因子FVIII的载体和稳定化蛋白。VWF在内皮细胞和巨核细胞中被合成为2813个氨基酸的前体分子。前体多肽（前VWF原）由22个残基的信号肽、741个残基的前肽和在成熟血浆VWF中发现的2050个残基的多肽组成(Fischer等人,FEBS Lett.351:345-348,1994)。在分泌进入血浆后，VWF以具有不同分子大小的不同种类的形式循环。这些VWF分子由具有2050个氨基酸残基的成熟亚基的寡聚体和多聚体组成。VWF通常可作为一个二聚体至由50–100个二聚体组成的多聚体形式发现于血浆中(Ruggeri等人，Thromb.Haemost.82:576-584,1999)。在人循环中人VWF的体内半衰期约为12小时。
人中最常见的遗传性出血障碍是维勒布兰德病(VWD)。取决于出血症状的严重度，VWD可通过利用含VWF（通常地来源于人血浆，但重组VWF也在开发中）的浓缩物的替代疗法来治疗。可从人血浆制备VWF，如例如EP0503991中描述的。在专利EP0784632中描述了分离重组VWF的方法。
已知VWF体内稳定FVIII，从而起着调节FVIII的血浆水平的关键作用，因此是控制原发性和继发性止血的中心因子。还已知在于VWD患者中静脉内施用含VWF的药物制剂后，可观察到在24小时内内源性FVIII:C达到1至3个单位/ml的增加，这表明VWF对FVIII的体内稳定作用。
患者总的来说受益于活性成分的特定作用模式，但目前所有商购可得的因子VIII制剂是通过静脉内施用来给药的，这牵涉注射部位感染的风险并且通常是患者希望避免的过程，尤其是在治疗凝血系统中具有缺陷的儿童中。
直至今天，血友病A和VWD的标准治疗包括频繁静脉内输注FVIII和VWF浓缩物的制剂。血友病B的治疗需要每周2次的因子IX施用，在利用FVIIa作为抑制剂的患者的治疗中，使用每周多次施用FVIIa来避免出血。
这些替代疗法通常是有效的，然而，例如在经历预防性治疗的严重血友病A患者中，因因子VIII约12小时的短暂血浆半衰期的原因，必须每周约3次地静脉内(i.v.)施用因子VIII。通过使FVIII水平高于正常人血浆1%（对应于FVIII水平升高0.01U/ml），已经将严重的血友病A转变成中度血友病A。在预防性治疗中，给药方案被设计成使FVIII活性的谷底水平不降至非血友病患者中FVIII活性的2-3%以下的水平。
通过静脉内施用进行的因子VIII给药是非常麻烦的，其伴随着疼痛并且具有造成感染的风险，特别是这主要是患者自己或由诊断为血友病A的儿童的父母在家治疗中进行这一操作。此外，频繁的静脉内注射不可避免地导致瘢痕形成，干扰将来的输注。由于严重血友病的预防性治疗始于生命的早期，儿童通常在2岁以前开始，因此甚至难以将FVIII每周3次地注射进入这样小的患者的静脉。在有限的时期内，端口系统的植入可提供另一选择。然而，在这些情况下，重复感染可能会发生，并且端口可在体育运动中引起不便。
因此，存在对避免静脉内输注因子VIII的巨大医学需要。
皮下施用在例如WO95/01804A1和WO95/026750中已被建议用于因子VIII。然而，必须施用极高剂量的因子VIII才能获得可接受的生物利用度。
改善非静脉内施用后生物利用度的另一个方法是使用白蛋白融合的因子VIII(WO2011/020866A2)。
高度期望改善非静脉内施用后因子VIII的生物利用度。本申请的发明人令人惊讶地发现，如果将因子VIII与硫酸化糖胺聚糖一起施用，因子VIII的生物利用度可得到显著增加。
发明概述
在第一方面，本发明因此涉及用于治疗或预防出血障碍的因子VIII，所述治疗或预防包括非静脉内注射所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
在另一方面，本发明从而涉及用于治疗或预防出血障碍的因子VIII，所述治疗或预防包括非静脉内注射所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖，其中，当以50至1000IU/kg体重的剂量皮下施用因子VIII时，在从注射后2小时至注射后48小时期间，被治疗受试者的因子VIII血浆水平持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%。
该方面的一个优选方案是用于治疗或预防人个体的血友病A的因子VIII，所述治疗或预防包括通过皮下、经皮肤或肌内注射施用所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖，其中，当以50至1000IU/kg体重的剂量皮下施用因子VIII时，在从注射后2小时至注射后48小时期间，该人个体中因子VIII的血浆水平持续地比健康人个体中因子VIII的正常血浆水平高2%。
本发明的另一个方面是用于治疗或预防人个体的出血障碍的因子VIII，所述治疗或预防包括通过皮下、经皮或肌内注射施用所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖，其中在所述人个体中因子VIII的相对生物利用度比以相同方式施用但无硫酸化糖胺聚糖的因子VIII的生物利用度高至少20%。
该方面的一个优选实施方案是用于治疗或预防人个体中血友病A的因子VIII，所述治疗或预防包括通过皮下、经皮或肌内注射施用所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖，其中所述人个体中因子VIII的相对生物利用度比以相同方式施用但无硫酸化糖胺聚糖的因子VIII的生物利用度高至少20%。
在第三方面，本发明涉及用于改善因子VIII的生物利用度的硫酸化糖胺聚糖。
在其它方面，本发明涉及用于改善因子VIII的生物利用度的硫酸化糖胺聚糖，其中所述硫酸化糖胺聚糖和所述因子VIII通过皮下、经皮或肌内注射来进行施用。
本发明的其它方面是用于治疗或预防出血障碍的药物试剂盒，其中包含因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
本发明的其它方面是治疗或预防出血障碍的方法，包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的因子VIII和硫酸化糖胺聚糖以增加因子VIII的生物利用度，其中所述施用包括皮下、经皮或肌内注射。
本发明的其它方面是用于增加因子VIII的生物利用度的方法，其中通过皮下、皮内或肌内注射将硫酸化糖胺聚糖与所述因子VIII共施用。
在本发明的所有方面，因子VIII优选为人因子VIII。优选硫酸化糖胺聚糖是肝素，最优选肝素是未分级分离的肝素。
附图概述
图1描述了实施例1的结果。如果共施用硫酸化糖胺聚糖，则FVIII的生物利用度增加。如可看到的，硫酸葡聚糖无积极效果。
详述
本发明涉及出血障碍的治疗和预防。
如本文中所用，术语“出血障碍”包括家族性和获得性血友病A。
根据本发明的第一方面，提供了因子VIII的治疗性非静脉内应用，其包括硫酸化糖胺聚糖的共施用。
因子VIII可以是野生型因子VIII多肽或可包含突变的因子VIII多肽。糖基化或其它翻译后修饰的程度和位置可取决于选择的宿主细胞和宿主细胞环境的性质而变化。当提及特定氨基酸序列时，这样的序列的翻译后修饰包括在本申请中。
术语"因子VIII"和FVIII"在本文中可互换使用。"因子VIII"包括野生型因子VIII以及具有野生型因子VIII的促凝活性的野生型因子VIII衍生物。衍生物相较于野生型因子VIII的氨基酸序列可具有缺失、插入和/或添加。术语因子VIII包括因子VIII的蛋白水解加工的形式，例如包含重链和轻链的激活之前的形式。
术语"因子VIII"包括具有野生型因子VIII的生物活性的至少10%，优选至少25%，更优选至少50%，最优选至少75%的任何因子VIII变体或突变体。测定因子VIII的生物活性的适当测试是一阶段或两阶段凝血测定(Rizza等人1982.Coagulation assay of FVIII:Cand FIXa in Bloom ed.The Hemophilias.NY Churchchill Livingston1992)或生色底物FVIII:活性测定(S.Rosen,1984.Scand J Haematol33:139-145,suppl.)。将这些参考资料的内容通过引用并入本文。
作为非限定性实例，因子VIII分子包括防止或减少APC切割的因子VIII突变体(Amano1998.Thromb.Haemost.79:557-563)、白蛋白融合的FVIII分子(WO2011/020866A2)、FVIII-Fc融合分子(WO04/101740A)、进一步稳定A2结构域的因子VIII突变体(WO97/40145)、导致表达增加的FVIII突变体(Swaroop等人1997.JBC272:24121-24124)、免疫原性降低的因子VIII突变体(Lollar1999.Thromb.Haemost.82:505-508)、从不同地表达的重链和轻链重建的FVIII(Oh等人1999.Exp.Mol.Med.31:95-100)、减少对受体的结合（从而导致FVIII样HSPG(硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)和/或LRP(低密度脂蛋白受体相关蛋白)的分解代谢）的FVIII突变体(Ananyeva等人2001.TCM,11:251-257)、二硫键稳定化的FVIII变体(Gale等人,2006.J.Thromb.Hemost.4:1315-1322)、具有改善的分泌性质的FVIII突变体(Miao等人,2004.Blood103:3412-3419)、辅因子比活性增加的FVIII突变体(Wakabayashi等人,2005.Biochemistry44:10298-304)、具有改善的生物合成和分泌、降低的ER伴侣蛋白相互作用、改善的ER-Golgi转运、活化增强或对失活的抗性增强和半衰期改善的FVIII突变体(由Pipe2004.Sem.Thromb.Hemost.30:227-237概述的)，以及具有B结构域全部或部分的缺失的FVIII突变体(参见例如WO2004/067566A1、WO02/102850A2、WO00/24759A1和美国专利No.4,868,112)。特别优选作为“单链”FVIII分子的FVIII分子。单链FVIII具有B结构域全部或部分的缺失以及酸性a3区域全部或部分的缺失，从而缺失了Arg1648处的切割位点(其通常在分泌过程中被切割)。单链FVIII分子公开于例如WO2004/067566A1；US2002/132306A1；Krishnan等人(1991)European Journal ofBiochemistry第195卷,no.3,第637-644页;Herlitschka等人(1998)Journal of Biotechnology,第61卷,no.3,第165-173页;Donath等人(1995)Biochem.J.,第312卷，第49-55卷中。
将所有这些因子VIII突变体和变体通过引用整体并入本文。
人因子VIII的成熟野生型形式的氨基酸序列示于SEQ ID NO:2中。提及特定序列的氨基酸位置时意指所述氨基酸在FVIII野生型蛋白中的位置，并且不排除在所提及的序列中其它位置处突变例如缺失、插入和/或取代的存在。例如，提及SEQ ID NO:2的"Glu2004"处的突变时，不排除在被修饰的同源物中，SEQ ID NO:2的位置1至2332处的一个或多个氨基酸不存在。编码SEQ ID NO:2的DNA序列示于SEQ ID NO:1中。
术语“糖胺聚糖”，如本文中所用，是指特别地包含氨基己糖单位的低聚糖或多糖。硫酸化糖胺聚糖包括但不限于硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、肝素和硫酸乙酰肝素。优选地，硫酸化糖胺聚糖是肝素，最优选硫酸化糖胺聚糖选自未分级分离的肝素。
术语“肝素”包括未分级分离的肝素和具有更低分子量的肝素。在一个实施方案中，按照本发明使用的肝素是“未分级分离的肝素”，其可具有约8kDa至约30kDa，优选约10kDa至约20kDa，最优选约12kDa至约16kDa，例如约15kDa的平均分子量。在另一个实施方案中，按照本发明使用的肝素是低分子量肝素(LMWH)。LMWH是平均分子量小于8000Da的肝素或肝素盐，对于所述肝素或肝素盐，所有链的至少60%具有小于8000Da的平均分子量。优选地，按照本发明使用的LMWH的分子量为约2kDa至约8kDa，更优选约3kDa至约6kDa，最优选约4kDa至约5kDa，例如约4.5kDa。LMWH可通过多聚肝素的分级分离或解聚合的各种方法来获得。LMWH的实例包括但不限于阿地肝素钠(Normiflo)、舍托肝素(Sandoparin)、依诺肝素(Lovenox和克赛)、帕肝素(Fluxum)、亭扎肝素(Innohep和洛集帕林)、达肝素(法安明)、瑞肝素(诺易平)和纳屈肝素(Fraxiparin)。
术语“肝素”还包括通过裂解和分离而衍生自天然肝素或通过合成途径产生的肝素分子的小分子量片段。已有例如合成地制造的并且其结构来源于肝素的商购可得的硫酸化戊糖。其可以磺达肝素钠获得。
硫酸软骨素包括例如硫酸软骨素A(软骨素-4-硫酸)、硫酸软骨素C(软骨素-6-硫酸)、硫酸软骨素D(软骨素-2,6-硫酸)和硫酸软骨素E(软骨素-4,6-硫酸)。
硫酸皮肤素(先前称为硫酸软骨素B)是商购可得的另一种硫酸化糖胺聚糖。
硫酸角质素是另一种硫酸化的糖胺聚糖。硫酸角质素的结构描述于例如Funderburgh(2000)Glycobiology第10卷no.10第951-958页。
硫酸乙酰肝素是与肝素不同的N-硫酸化多糖(参见，例如，Gallagher,J.T.,Lyon,M.(2000)."Molecular structure of HeparanSulfate and interactions with growth factors and morphogens".InIozzo,M,V..Proteoglycans:structure,biology and molecularinteractions.Marcel Dekker Inc.New York,New York.第27–59页;和Gallagher,J.T.Walker,A.(1985)."Molecular distinctions betweenHeparan Sulphate and Heparin:Analysis of sulphation patternsindicates Heparan Sulphate and肝素are separate families ofN-sulphated polysaccharides".Biochem.J.230(3):665–74)。
在本发明的一个实施方案中，被治疗的受试者中因子VIII的血浆水平在从注射后5小时至注射后8小时的期间持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%，优选高5%，更优选高8%，最优选高10%。将如下文实施例1中所示测定血浆水平。
在本发明的一个实施方案中，被治疗的受试者中因子VIII的血浆水平在从注射后4小时至注射后16小时的期间持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%，优选高5%，更优选高8%，最优选高10%。
在本发明的另一个实施方案中，被治疗的受试者中因子VIII的血浆水平在从注射后3小时至注射后24小时的期间持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%，优选高4%，更优选高6%，最优选高8%。
在本发明的另一个实施方案中，被治疗的受试者中因子VIII的血浆水平在从注射后2小时至注射后32小时的期间持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%，优选高3%，更优选高4%，最优选高5%。
在本发明的另一个实施方案中，被治疗的受试者中因子VIII的血浆水平在从注射后1小时至注射后48小时的期间持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%，优选高3%，更优选高4%，最优选高5%。
优选地，当以如下剂量通过皮下注射施用因子VIII（例如FVIII）时获得上述血浆水平：少于1,000IU/kg体重，或少于800IU/kg体重，或少于600IU/kg体重，或少于400IU/kg体重，例如约10IU/kg体重至约1,000IU/kg体重，或约20IU/kg体重至约800IU/kg体重，或约30IU/kg体重至约700IU/kg体重，或约40IU/kg体重至约600IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约500IU/kg体重，或约75IU/kg体重至约400IU/kg体重，或约100IU/kg体重至约300IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约1,000IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约800IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约700IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约600IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约500IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约400IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约300IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约200IU/kg体重。
在一个实施方案中，因子VIII和硫酸化糖胺聚糖包含在相同组合物中。可通过单次注射等给患者施用所述包含这两种组分的组合物。
在另一个实施方案中，因子VIII和硫酸化糖胺聚糖不存在于相同组合物中。例如，可以以分开的剂型在所述药物制剂中提供这两种组分中的每一种。
如果两种组分不存在于相同组合物中，则可分开地施用分开的组合物，或在即将施用之前将它们混合，以便因子VIII和硫酸化糖胺聚糖被同时施用。如果存在分开的施用，则可以以例如时间错开的方式相继进行施用。一般而言，优选通过单次施用（例如注射）同时施用这两种组分。下面论述不同的施用途径。它们在作适当变动的情形下适用于上述情况。
可将药物制剂的组分溶解在常规生理相容性缓冲水溶液中，可任选地向所述缓冲液中添加药物赋形剂来提供药物制剂。药物制剂的组分可以已包含所有必需药物、生理上相容的赋形剂，并且可被溶解在注射用水中来提供药物制剂。
这样的药物载体和赋形剂以及适当的药物制剂的制备在本领域是公知的(参见例如“Pharmaceutical Formulation Development ofPeptides and Proteins”,Frokjaer等人,Taylor&Francis(2000)或“Handbook of Pharmaceutical Excipients”,第3版,Kibbe等人,Pharmaceutical Press(2000))。在某些实施方案中，药物组合物包含至少一种添加剂，例如填料、填充剂、缓冲剂、稳定剂或赋形剂。标准药物配制技术对于本领域技术人员来说是公知的(参见，例如，2005Physicians’Desk
Figure BDA0000492825050000111
Thomson Healthcare:Montvale,NJ,2004;Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Gennaro等人,Eds.Lippincott Williams&Wilkins:Philadelphia,PA,2000)。适当的药物添加剂包括例如糖，如甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、海藻糖或其它糖类，氨基酸如组氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、苯丙氨酸或其它氨基酸，实现等渗条件的添加剂如氯化钠或其它盐，稳定剂如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、聚乙二醇、丙二醇、氯化钙等，生理pH缓冲剂例如Tris(羟甲基)氨基甲烷等。在某些实施方案中，药物组合物可包含pH缓冲剂和湿润剂或乳化剂。在其它实施方案中，药物组合物可包含防腐剂或稳定剂。具体地，可以以冻干或稳定的可溶性形式配制包含因子VIII的药物制剂。可通过本领域已知的多种方法对因子VIII进行冷冻干燥。此外，如果硫酸化糖胺聚糖和因子VIII包含在相同的组合物中，则还可以以冻干的形式或以稳定的可溶性形式提供这样的组合物。冻干的制剂可在使用前通过添加一种或多种药学上可接受的稀释剂例如无菌注射用水或无菌生理盐水溶液或适当的缓冲液进行重建。
本发明的药物制剂中包含的组合物可通过任何药学上适当的装置递送至个体。各种递送系统是已知的，并且可用于通过任何方便的途径施用组合物。优选地，通过非静脉内注射向个体递送本发明的药物制剂中包含的组合物。更优选，本发明的组合物被配制来用于皮下、肌内、腹膜内、脑内、肺内、鼻内、皮内或经皮肤施用，最优选用于根据常规方法进行皮下、肌内或经皮肤施用。制剂可通过输注或通过单次快速推注来连续施用。一些制剂包括缓慢释放系统。
以治疗上有效的剂量（意指足以产生期望的效果，防止或减轻待治疗的病况或适应症的严重度或扩散，而未达到将产生不可耐受的有害副作用的剂量）给患者施用本发明的药物制剂的组合物。确切剂量取决于许多因素，例如适应症、配方、施用模式，并且必须针对每一个相应适应征在临床前和临床试验中进行测定。
在因子VIII的情形下，一次施用的剂量可以选择成：注射后2小时至注射后48小时期间，被治疗的受试者中因子VIII血浆水平持续高于健康受试者中因子VIII的正常血浆水平2%，优选高于3%，更优选高于4%，最优选高于5%。
优选地，一次施用的因子VIII的剂量低于1,000IU/kg体重，或低于800IU/kg体重，或低于600IU/kg体重，或低于400IU/kg体重，例如为约10IU/kg体重至约1,000IU/kg体重、或约20IU/kg体重至约800IU/kg体重、或约30IU/kg体重至约700IU/kg体重、或约40IU/kg体重至约600IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约500IU/kg体重、或约75IU/kg体重至约400IU/kg体重、或约100IU/kg体重至约300IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约1,000IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约800IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约700IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约600IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约500IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约400IU/kg体重、或约50IU/kg体重至约300IU/kg体重或约50IU/kg体重至约200IU/kg体重的剂量。
因子VIII可以本身与硫酸化糖胺聚糖一起施用。或者，因子FVIII可以结合vWF（即称为FVIII/vWF复合物）与硫酸化糖胺聚糖一起施用。
施用的硫酸化糖胺聚糖的量通常在约0.001至100mg/mL所施用产品，约0.01至约10mg/mL所施用产品，约0.05至约1mg/mL所施用产品的范围内。
如本文中所用，术语“生物利用度”是指可在皮下、静脉内或皮内施用后，在预定的时间直至终时间点在血浆中被检测到的因子VIII(例如因子VIII或FVIII相关制剂)的施用剂量的比例。通常地，通过如下过程在测试动物内测量生物利用度：施用10IU/kg至1000IU/kg(例如，以400IU/kg体重)的制剂剂量；在施用后预定的时间点获得血浆样品；和使用生色测定或凝固测定(或任何生物测定)、免疫测定或其等同测定中的一种或多种测定来测量样品中因子VIII（例如因子VIII或因子VIII相关多肽）的含量。生物利用度表示为施用后的时间（x轴）下血浆中因子VIII的浓度或活性（y轴）的曲线下面积(AUC)，直至施用后预定的终时间点。优选地，该预定的时间点为施用后48小时。最优选地，如下文实施例1中所示测定生物利用度。测试制剂的相对生物利用度是指测试制剂的AUC与按照和所述测试制剂相同的剂量和方式（例如静脉内、皮下或皮内）施用的参照制剂的AUC之间的比率。
根据本发明，因子VIII的生物利用度(当与硫酸化糖胺聚糖共施用时)高于当单独施用时因子VIII的生物利用度。优选地，生物利用度增加至少20%，更优选至少50%，更优选至少75%，最优选至少100%。优选地，当以如下剂量通过皮下注射施用因子VIII时获得生物利用度的增加：少于1,000IU/kg体重，或少于800IU/kg体重，或少于600IU/kg体重，或少于400IU/kg体重，例如约10IU/kg体重至约1,000IU/kg体重，或约20IU/kg体重至约800IU/kg体重，或约30IU/kg体重至约700IU/kg体重，或约40IU/kg体重至约600IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约500IU/kg体重，或约75IU/kg体重至约400IU/kg体重，或约100IU/kg体重至约300IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约1,000IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约800IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约700IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约600IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约500IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约400IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约300IU/kg体重，或约50IU/kg体重至约200IU/kg体重。
可单独施用本发明的药物组合物，或可将其与其它治疗剂结合施用。可掺入这些试剂作为相同药物的部分。
实施例
实施例1:在血友病A模型中评估s.c.施用的FVIII和各种添加剂的生物利用度
材料和动物模型
实验中使用的因子VIII是B结构截短的单链重组因子VIII(在下文中称为“rFVIII”)。因子VIII通过直接将Asn764与Thr1653融合获得。其已在细胞培养细胞中表达并且从细胞培养基中纯化。
使用的其它试剂概述于表1中。
表1
Figure BDA0000492825050000141
将因子VIII敲除小鼠用作血友病A的动物模型。这些小鼠缺乏外显子16和17，从而不表达FVIII(Bi L.等人,Nature genetics,1995,第10卷(1),119-121;Bi L.等人，Blood,1996,Vol88(9),3446-3450)。这样可以通过定量ko小鼠血浆中的FVIII活性来分析处理后的FVIII水平。
方法
为了评估血管外注射是否可能是rFVIII(人)改善疗法的一个选择，选用血管外疗法的一个典型代表-皮下注射。进行的非临床药代动力学研究的设计描述于下面的表2和3中。在血友病A模型中，在单次静脉内或皮下注射rFVIII与各种添加剂(表2中详细描述的处理组)后测定因子VIII活性的血浆水平。
在各种不同添加剂存在的情况下用相同剂量的FVIII(生色底物(CS)活性测定)处理对应组。对于单次施用，在给重量约25g的FVIII敲除(ko)小鼠皮下施用前，将针对每一个处理组的各种不同组分于200μL的体积(对于所有组使用相同体积)中混合在一起。处理组概述于表2中。
在短期麻醉下，抽取血液样品，使用柠檬酸钠抗凝达到10%的柠檬酸盐血，加工成血浆，于-70℃贮存以用于测定FVIII活性。取样时间点详述于表3中。通过标准的基于aPTT的方法(BehringCoagulation Timer)进行血浆内FVIII活性的定量。将动物保持在标准居住条件。
表2:处理组
Figure BDA0000492825050000151
结果
结果概述于表3和图1中。在各种硫酸化糖胺聚糖存在的情况下将400IU/kg rFVIII皮下注射进入FVIII ko小鼠内导致了FVIII活性的血浆水平相较于单独施用FVIII或施用FVIII+硫酸葡聚糖时有显著升高。对于肝素共施用的增加特别强。
表3.以正常人血浆中FVIII活性的百分比表示的FVIII活性
峰值加以灰色阴影。
Figure BDA0000492825050000162
峰值加以灰色阴影。
Figure IDA0000492825100000021
Figure IDA0000492825100000031
Figure IDA0000492825100000041
Figure IDA0000492825100000061
Figure IDA0000492825100000071
Figure IDA0000492825100000081
Figure IDA0000492825100000091
Figure IDA0000492825100000101
Figure IDA0000492825100000121
Figure IDA0000492825100000131
Figure IDA0000492825100000141
Figure IDA0000492825100000171

Claims (15)

1.一种用于治疗或预防出血障碍的因子VIII，所述治疗或预防包括非静脉内注射所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
2.一种用于治疗或预防出血障碍的因子VIII，所述治疗或预防包括非静脉内注射所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖，其中，当以50IU/kg体重至约1,000IU/kg体重的剂量皮下施用因子VIII时，在从注射后2小时至注射后48小时的期间，被治疗的受试者中因子VIII的血浆水平持续地比健康受试者的因子VIII正常血浆水平高2%。
3.根据权利要求1或2中使用的因子VIII，其中同时施用所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
4.根据权利要求1或2中使用的因子VIII，其中分开地施用所述因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
5.根据前述权利要求中任一项使用的因子VIII，其中所述硫酸化糖胺聚糖是肝素。
6.根据权利要求1至5中任一项使用的因子VIII，其中所述因子VIII与vonWillebrand因子缔合，并且所述硫酸化糖胺聚糖是肝素。
7.根据前述权利要求中任一项使用的因子VIII，其中所述被治疗的受试者是人个体，并且一次施用的剂量少于500IU/kg体重。
8.根据前述权利要求中任一项使用的因子VIII，其中所述非静脉内注射是皮下、经皮肤或肌内注射。
9.一种硫酸化糖胺聚糖，其用于在出血障碍的治疗或预防中改善因子VIII的生物利用度，其中通过皮下、经皮肤或肌内注射施用所述硫酸化糖胺聚糖和所述因子VIII。
10.根据权利要求9中使用的硫酸化糖胺聚糖，其中所述硫酸化糖胺聚糖是肝素。
11.根据权利要求9或10中使用的硫酸化糖胺聚糖，其中所述出血障碍是血友病A。
12.根据权利要求9至11中的任一项使用的硫酸化糖胺聚糖，其中同时施用因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
13.根据权利要求9至12中任一项使用的硫酸化糖胺聚糖，其中分开地施用因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
14.一种用于治疗或预防出血障碍的药物试剂盒，其包含因子VIII和硫酸化糖胺聚糖。
15.权利要求14的药物试剂盒，其中所述硫酸化糖胺聚糖是肝素。
CN201280051236.7A 2011-10-18 2012-10-18 硫酸化糖胺聚糖用于改善因子viii的生物利用度的用途 Pending CN103889445A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161548606P 2011-10-18 2011-10-18
US61/548,606 2011-10-18
EP11185648.0 2011-10-18
EP11185648 2011-10-18
PCT/EP2012/070615 WO2013057167A1 (en) 2011-10-18 2012-10-18 Use of sulfated glycosaminoglycans for improving the bioavailability of factor viii

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103889445A true CN103889445A (zh) 2014-06-25

Family

ID=48140372

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280051236.7A Pending CN103889445A (zh) 2011-10-18 2012-10-18 硫酸化糖胺聚糖用于改善因子viii的生物利用度的用途

Country Status (10)

Country Link
US (1) US9393289B2 (zh)
EP (1) EP2768522B1 (zh)
JP (1) JP6072810B2 (zh)
KR (1) KR20140083036A (zh)
CN (1) CN103889445A (zh)
AU (1) AU2012318279B2 (zh)
CA (1) CA2852397A1 (zh)
DK (1) DK2768522T3 (zh)
ES (1) ES2600081T3 (zh)
WO (1) WO2013057167A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114712385A (zh) * 2015-07-30 2022-07-08 Tx医生公司 硫酸葡聚糖的新用途

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6029674B2 (ja) 2011-10-18 2016-11-24 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー 第ｖｉｉｉ因子のバイオアベイラビリティを改善するための、硫酸化グリコサミノグリカン及びヒアルロニダーゼの組み合わせ使用
KR20170010895A (ko) 2014-06-06 2017-02-01 옥타파마 아게 인자 ⅷ 및 폰 빌레브란트 인자 펩티드를 포함하는 조제
EP3191524A4 (en) * 2014-09-12 2018-05-30 The Regents of The University of California Macropinocytosing human anti-cd46 antibodies and targeted cancer therapeutics
AU2016215124B2 (en) * 2015-02-06 2020-08-06 The University Of North Carolina At Chapel Hill Optimized human clotting Factor VIII gene expression cassettes and their use

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011020866A2 (en) * 2009-08-20 2011-02-24 Csl Behring Gmbh Albumin fused coagulation factors for non-intravenous administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders
WO2011095604A1 (en) * 2010-02-04 2011-08-11 Octapharma Biopharmaceuticals Gmbh Half-life prolongation of proteins

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
EP0218712B1 (en) 1985-04-12 1992-02-26 Genetics Institute, Inc. Novel procoagulant proteins
FR2673632A1 (fr) 1991-03-08 1992-09-11 Lille Transfusion Sanguine Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique.
SE504074C2 (sv) 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
IL113010A (en) * 1994-03-31 1999-10-28 Pharmacia & Upjohn Ab Pharmaceutical formulation comprising factor viii with an activity of at least 500iu/ml and an enhancer for improved subcutaneous intramuscular or intradermal administration
DE4435485C1 (de) 1994-10-04 1996-03-21 Immuno Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor
DE69735421T2 (de) 1996-04-24 2006-10-19 The Regents Of The University Of Michigan, Ann Arbor Gegen inaktivierung resistenter faktor viii
AU1598200A (en) 1998-10-23 2000-05-15 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Systemic delivery of gene products via skin
CA2450125A1 (en) 2001-06-15 2002-12-27 Andre C. Schuh Gene therapy for hemophilia a
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
ES2558102T3 (es) 2003-05-06 2016-02-02 Biogen Hemophilia Inc. Proteínas quiméricas del factor de coagulación para el tratamiento de un trastorno hemostático
CA2704234A1 (en) * 2007-11-09 2009-05-14 Baxter International Inc. Modified recombinant factor viii and von willebrand factor and methods of use
CN103497247A (zh) 2008-02-27 2014-01-08 诺沃—诺迪斯克有限公司 缀合的因子viii分子

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011020866A2 (en) * 2009-08-20 2011-02-24 Csl Behring Gmbh Albumin fused coagulation factors for non-intravenous administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders
WO2011095604A1 (en) * 2010-02-04 2011-08-11 Octapharma Biopharmaceuticals Gmbh Half-life prolongation of proteins

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114712385A (zh) * 2015-07-30 2022-07-08 Tx医生公司 硫酸葡聚糖的新用途

Also Published As

Publication number Publication date
ES2600081T3 (es) 2017-02-07
JP2014530246A (ja) 2014-11-17
KR20140083036A (ko) 2014-07-03
JP6072810B2 (ja) 2017-02-01
EP2768522B1 (en) 2016-07-27
AU2012318279A1 (en) 2013-05-02
CA2852397A1 (en) 2013-04-25
WO2013057167A1 (en) 2013-04-25
DK2768522T3 (en) 2016-11-14
US20140315815A1 (en) 2014-10-23
EP2768522A1 (en) 2014-08-27
AU2012318279B2 (en) 2015-06-04
US9393289B2 (en) 2016-07-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10881717B2 (en) Method for improving the stability of purified Factor VIII after reconstitution
JP6250282B2 (ja) 出血性障害の治療および予防的治療における非静脈内投与のためのアルブミン融合凝固因子
EP2167117B1 (en) Use of vwf stabilized fviii preparations for extravascular administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders
CN103889445A (zh) 硫酸化糖胺聚糖用于改善因子viii的生物利用度的用途
CN103889446A (zh) 硫酸化糖胺聚糖与透明质酸酶组合用于改善因子viii的生物利用度
AU2015258240A1 (en) Method of improving the stability of purified factor viii after reconstitution

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20140625

RJ01 Rejection of invention patent application after publication