CN103881934A - 光合细菌液微生态制剂制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种光合细菌液微生态制剂制备方法,包括平板培养基培养,试管培养,三角瓶培养,二级种子的制备,成品的制备等步骤。本发明中培养基pH值不随着培养时间的延长而升高,始终保持在5.5-7.5之间,不会抑制光合细菌的生长;采用低浓度的有机培养基诸如蛋白胨、酵母膏及氮磷钾盐保证了培养出的光合细菌颜色纯正,亮丽,不会变淡、变绿、变黑等;采用低浓度的氮源和碳源保证了低成本,更能适于工业化大规模生产;本发明培养的光合细菌生长速度快,菌液浓度高;工艺简单并易于控制,不易染杂菌,菌株浓度高,加工成本低,生产环境友好。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及光合细菌液微生态制剂制备方法。
背景技术
光合细菌( Photosyntheti bacteria,PSB)是利用光能和二氧化碳维持自养生活的有色细菌。是地球上出现最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成体系的原核生物,厌氧条件下进行不放氧光合作用,没有形成芽孢能力,革兰氏阴性菌,是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。
光合细菌液态微生态的制剂方法通常为采用敞开粗放式的培养方式,这种培养方式会受到自然界中天气温度光照等的干扰,且易掺加进其他的细菌,在有些特殊条件下会影响到光合细菌的主导地位,从而影响光合细菌产品的质量稳定性。
发明内容
为了克服现有技术领域存在的上述缺陷,本发明的目的在于,提供一种光合细菌液微生态制剂制备方法,解决现有技术采用敞开粗放式方法培养光合细菌液态微生态制剂,易受天气温度光照的干扰,易掺杂其他细菌等,影响光合细菌产品的质量稳定性的问题。
本发明提供的光合细菌液微生态制剂制备方法,包括以下步骤:
(1) 平板培养基培养, 光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基,121℃灭菌30分钟,32℃培养24h;
(2) 试管接种,取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
(3) 三角瓶接种100ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
(4) 三角瓶接种1000ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
(5) 二级种子的制备,将光合细菌于30℃,通气量为0.24m3/h条件下培养24h,得二级菌种9L,检测菌种的性状、pH值及活菌量;
(6) 成品的制备,先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水,将称量好的蛋白胨90g,酵母膏90g,乙酸钠180g,碳酸氢钠180g,氯化铵180g,氯化镁180g,磷酸氢二钾180g,葡萄糖3.6kg投入到发酵灌,搅拌10分钟至全部溶解,然后停止搅拌,加饮用水至180L,定完液位后,开启搅拌,然后打开蒸汽阀升温至100℃,排冷空气,排掉冷空气后继续升温至121℃保持30分钟,灭菌结束,冷却,备用,当培养基冷却至30℃,将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式,接种到500L发酵罐中,30℃,通气量为9.6m3/h条件下发酵48h,得三级菌种。
所述步骤(1)或(2)或(3)或(4)所用培养基均是由0.5g蛋白胨,0.5g酵母膏,1.0g乙酸钠,1.0g碳酸氢钠,1.0g氯化铵,0.5g氯化镁,1.0g磷酸氢二钾,15g琼脂,1000ml蒸馏水配置而成。
本发明提供的光合细菌液微生态制剂制备方法,其有益效果在于,本发明中培养基pH值不随着培养时间的延长而升高,始终保持在5.5-7.5之间,不会抑制光合细菌的生长;采用低浓度的有机培养基诸如蛋白胨、酵母膏及氮磷钾盐保证了培养出的光合细菌颜色纯正,亮丽,不会变淡、变绿、变黑等;采用低浓度的氮源和碳源保证了低成本,更能适于工业化大规模生产;本发明培养的光合细菌生长速度快,菌液浓度高;工艺简单并易于控制,不易染杂菌,菌株浓度高,加工成本低,生产环境友好。
具体实施方式
下面结合一个实施例,对本发明提供的光合细菌液微生态制剂制备方法进行详细的说明。
实施例
本实施例的光合细菌液微生态制剂制备方法,包括以下方法:
(1) 平板培养基培养, 光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基,121℃灭菌30分钟,32℃培养24h;
(2) 试管接种,取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
(3) 三角瓶接种100ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
(4) 三角瓶接种1000ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
(5) 二级种子的制备,将光合细菌于30℃,通气量为0.24m3/h条件下培养24h,得二级菌种9L,检测菌种的性状、pH值及活菌量;
(6) 成品的制备,先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水,将称量好的蛋白胨90g,酵母膏90g,乙酸钠180g,碳酸氢钠180g,氯化铵180g,氯化镁180g,磷酸氢二钾180g,葡萄糖3.6kg投入到发酵灌,搅拌10分钟至全部溶解,然后停止搅拌,加饮用水至180L,定完液位后,开启搅拌,然后打开蒸汽阀升温至100℃,排冷空气,排掉冷空气后继续升温至121℃保持30分钟,灭菌结束,冷却,备用,当培养基冷却至30℃,将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式,接种到500L发酵罐中,30℃,通气量为9.6m3/h条件下发酵48h,得三级菌种约200L,总含菌量达到1.3×109cfu/mL。
Claims (2)
1.一种光合细菌液微生态制剂制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
一、平板培养基培养, 光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基,121℃灭菌30分钟,32℃培养24h;
二、试管接种,取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
三、三角瓶接种100ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
四、三角瓶接种1000ml,121℃灭菌,32℃培养24h;
五、二级种子的制备,将光合细菌于30℃,通气量为0.24m3/h条件下培养24h,得二级菌种9L,检测菌种的性状、pH值及活菌量;
六、成品的制备,先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水,将称量好的蛋白胨90g,酵母膏90g,乙酸钠180g,碳酸氢钠180g,氯化铵180g,氯化镁180g,磷酸氢二钾180g,葡萄糖3.6kg投入到发酵灌,搅拌10分钟至全部溶解,然后停止搅拌,加饮用水至180L,定完液位后,开启搅拌,然后打开蒸汽阀升温至100℃,排冷空气,排掉冷空气后继续升温至121℃保持30分钟,灭菌结束,冷却,备用,当培养基冷却至30℃,将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式,接种到500L发酵罐中,30℃,通气量为9.6m3/h条件下发酵48h,得三级菌种。
2.根据权利要求1所述的光合细菌液微生态制剂制备方法,其特征在于:所述步骤一或二或三或四所用培养基均是由0.5g蛋白胨,0.5g酵母膏,1.0g乙酸钠,1.0g碳酸氢钠,1.0g氯化铵,0.5g氯化镁,1.0g磷酸氢二钾,15g琼脂,1000ml蒸馏水配置而成。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104222022A (zh) * | 2014-08-20 | 2014-12-24 | 天津海友佳音生物科技股份有限公司 | 一种光合细菌一步食物链高密度养殖卤虫的方法 |
CN104450588A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-03-25 | 四川省星川生物科技有限公司 | 一种沼泽红假单胞菌的培养方法 |
CN111019867A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-17 | 沧州市方元生物工程有限公司 | 一种培育治理河道的细菌的培养基 |
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2012
- 2012-12-19 CN CN201210553898.6A patent/CN103881934A/zh active Pending
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PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140625 |