CN103880962A - 融合蛋白及其编码基因和制备方法以及一种药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列中含有如SEQ ID No：1所示的iRGD肽序列和SEQ ID No：2所示的分子伴侣GroEL序列；一种融合蛋白的编码基因，所述编码基因的序列为能够编码本发明所述的融合蛋白的核苷酸序列；一种融合蛋白的制备方法，该方法包括将本发明所述的编码基因在菌株内表达，得到融合蛋白；一种制备药物组合物的方法，该方法包括在溶剂存在下，将药物化合物与本发明所述的融合蛋白接触，得到接触后的物料；以及由上述制备药物组合物的方法制备得到的药物组合物。本发明提供的融合蛋白能够稳定负载疏水性药物、载药效率高、释药效果好，利用本发明的融合蛋白制备得到的药物组合物具有生物相容性好、释药效果好的优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物材料领域，具体地，涉及一种融合蛋白、一种融合蛋白的编码基因、一种融合蛋白的制备方法和一种药物组合物及其制备方法。
背景技术
近年来，生物材料药物载体的开发研究受到了广泛的关注。生物材料药物载体具有很多优势，例如：生物安全性好、可以用基因工程进行生物修饰等。
由于蛋白类生物材料是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，具有良好的生物相容性和可控的生物降解性，降解后的短肽和氨基酸还能被人体吸收，因此，相对于其他药物载体体系，蛋白类生物材料有着更为广阔的应用前景。
但是，现有的生物材料载体均难以实现运载疏水性药物，而即使能够负载疏水性药物也难以控制其所运载的疏水性药物在靶点部位释放，甚至出现载药稳定性不好、释药速率不稳定等缺陷。
因此，为了满足市场需求，亟需提供一种能够稳定负载疏水性药物、载药效率高、释药效果好的靶向性生物材料载体。
发明内容
本发明的目的是满足市场需求以提供一种能够稳定负载疏水性药物、载药效率高、释药效果好的靶向性生物材料载体。
为了实现上述目的，本发明提供一种融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列中含有如SEQ ID No：1所示的iRGD肽序列和SEQ ID No：2所示的分子伴侣GroEL序列。
本发明还提供了一种融合蛋白的编码基因，所述编码基因的序列为能够编码本发明所述的融合蛋白的核苷酸序列。
本发明还提供了一种融合蛋白的制备方法，该方法包括将本发明所述的编码基因在菌株内表达，得到融合蛋白。
本发明还提供了一种制备药物组合物的方法，该方法包括在溶剂存在下，将药物化合物与本发明所述的融合蛋白接触，得到接触后的物料。
本发明进一步提供了一种根据本发明上述提供的方法制备得到的药物组合物。
本发明提供的融合蛋白是一种能够稳定负载疏水性药物、载药效率高、释药效果好的靶向性生物材料载体，利用本发明的融合蛋白制备得到的药物组合物具有生物相容性好、释药效果好的优点。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1表示通过冷冻电镜观察本发明实施例1中药物组合物的形貌图。
图2表示通过紫外分光光度计检测本发明实施例1中药物组合物的药物包载结果的紫外吸收图。
图3表示通过紫外分光光度计检测本发明实施例1中药物组合物中药物化合物和融合蛋白的重量比的图。
图4表示在加入SDS前后比较本发明的药物组合物中药物化合物的释放量。
图5表示在加入ATP之后，本发明实施例1的药物组合物中药物化合物在不同时间点的释放量。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，使用的术语“溶液”的范围并不限于分散质的粒子直径小于1nm的分散系（真溶液），而是泛指均一的液态混合物，可以包括胶状分散体（胶体溶液）。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，液体的体积数值均为标准状态下的数值。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，所述的接触或混合可以在搅拌的条件下进行。搅拌的速度可以为常规的选择。
在本发明中，所述iRGD肽是一个基于二硫键循环的RGD肽，即C（CRGDKGPDC），即为环（半胱氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬氨酸-半胱氨酸）。
本发明提供了一种融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列中含有如SEQID No：1所示的iRGD肽序列和SEQ ID No：2所示的分子伴侣GroEL序列。
在本发明中，定义上述融合蛋白为iGroEL融合蛋白。
在本发明的所述融合蛋白中，优选连接所述iRGD肽序列和分子伴侣GroEL序列的桥梁连接的氨基酸序列为GGG。优选本发明所述的融合蛋白如SEQ ID No：3所示。
本发明还提供一种融合蛋白的编码基因，所述编码基因的序列为能够编码本发明所述的融合蛋白的核苷酸序列。
本领域技术人员公知，遗传密码子具有简并性，因此，在了解如上融合蛋白的氨基酸序列的情况下，本领域技术人员根据常规的技术手段能够获得核苷酸序列不同的、且能够编码如上融合蛋白的编码基因。
本发明还提供一种融合蛋白的制备方法，该方法包括将本发明所述的编码基因在菌株内表达，得到融合蛋白。
在本发明中，所述编码基因在菌株内表达的方法有多种，可以为本领域内常规使用的各种方法，例如，可以采用文献（Setting the chaperonin timer:Atwo-stroke,two-speed,protein machine.Grason J P,Gresham J S,Lorimer G H等，Proceedings of the National Academy of Sciences，2008，105(45):17339-17344）中提供的方法。
在本发明所述的融合蛋白的制备方法中，能够编码iRGD肽的基因的核苷酸序列和能够编码分子伴侣GroEL的基因的核苷酸序列导入菌株内的方法可以为本领域内常规使用的各种方法，本发明的发明点并不在于此，本领域技术人员通过本发明公开的内容知道将编码iRGD肽的基因的核苷酸序列和编码分子伴侣GroEL的基因的核苷酸序列导入菌株内，并进行表达以得到上述iGroEL融合蛋白。
在本发明所述的融合蛋白的制备方法中，对所述菌株的种类没有特别的限定，例如所述菌株可以为大肠杆菌等。
在本发明所述的融合蛋白的制备方法中，还可以将上述得到的融合蛋白采用本领域内常规使用的各种方法进行纯化。
由本发明提供的上述融合蛋白是一种能够稳定负载疏水性药物、载药效率高、释药效果好的靶向性生物材料载体。
本发明还提供了一种制备药物组合物的方法，该方法包括在溶剂存在下，将药物化合物与本发明所述的融合蛋白接触，得到接触后的物料。
本发明的发明点主要在于由上述能够编码iRGD肽的基因的核苷酸序列和能够编码分子伴侣GroEL的基因的核苷酸序列导入菌株内并表达，获得上述融合蛋白及其制备方法以及含有该融合蛋白的药物组合物及其制备方法，本发明仅需要在溶剂存在下，将融合蛋白与药物化合物接触和/或混合即可得到能够稳定负载疏水性药物、载药效率高、释药效果好的靶向性生物材料载体，由此可见，本发明提供的含有融合蛋白的药物组合物的制备方法操作非常简单。
在本发明中，对所述溶剂的种类没有特别的限定，只要能够用于溶解所述药物化合物即可，即其可以根据药物化合物的种类进行选择。例如当所述药物化合物为阿霉素时，本领域技术人员可以选择二甲基亚砜作为溶剂（由于阿霉素通常以盐酸阿霉素的形式存在，本领域技术人员可以采用向盐酸阿霉素的二甲亚砜溶液中加入少量三乙胺等弱碱性溶剂以调节pH值）。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，相对每重量份的融合蛋白，优选所述药物化合物的用量为0.005-0.1重量份。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，相对每重量份的融合蛋白，进一步优选所述药物化合物的用量为0.02-0.04重量份。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，优选所述接触的pH值为6-8。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，优选所述接触的温度为4-50℃，进一步优选温度为15-37℃。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，优选所述接触的时间为12-48小时，进一步优选时间为18-32小时。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，优选将药物化合物溶解在所述溶剂中，然后与所述融合蛋白接触，溶解后的药物化合物溶液的浓度优选为5-30μg/mL。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，进一步优选溶解后的所述药物化合物溶液的浓度为15-25μg/mL。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，优选所述药物化合物为阿霉素、紫杉醇和喜树碱中的至少一种，进一步优选为阿霉素。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，优选溶解上述药物化合物的溶剂为非极性溶剂，例如可以为二甲亚砜等。
在本发明所述的制备药物组合物的方法中，还可以对上述接触后得到的物料依次进行离心、超滤和清洗。本发明对上述离心、超滤和清洗的方法和条件没有特别的限定，可以采用本领域内常规使用的各种方法。例如，可以采用离心机在5000-15000转/分钟的转速下进行离心，然后将离心后所得到的上清液依次进行超滤和清洗。在本发明中，所述超滤的方法有多种，本发明优选采用将离心后所得到的上清液通过超滤管和/或超滤膜进行超滤。本发明优选采用取适量的去离子水将超滤后所得到的滤液进行清洗。
根据本发明的一种优选实施方式，所述药物组合物的制备方法包括在溶剂存在下，将药物化合物与本发明所述的融合蛋白接触，相对每重量份的融合蛋白，所述药物化合物的用量为0.005-0.1重量份，所述接触的条件包括pH值为6-8，温度为4-50℃，时间为12-48小时。然后将接触后所得到的物料依次进行离心、超滤和清洗。
本发明还提供了一种由本发明的上述方法制备得到的药物组合物。
以下，通过实施例进一步详细说明本发明。其中，在没有特别说明的情况下，所用的试剂均为市售品。
在本发明的以下实施例中，所使用的盐酸阿霉素CAS号：25316-40-9，购自sigma公司；
所使用的去离子水为国家纳米中心生物安全与效应实验室自制的去离子水；
所使用的离心机牌号为XIR，购自Thermo公司；
所使用的50KD超滤管货号为UFC801096，购自MIlipore公司；
所使用的冷冻电镜牌号为FEI Titan Krios，购自FEI公司；
所使用的紫外分光光度计型号为UV-5300，购自METASH公司。
制备例1
本制备例用于获得本发明所提供的iGroEL融合蛋白。
将iRGD肽的氨基酸序列和桥梁连接的氨基酸序列GGG按照遗传密码子反推成基因序列，得到含有iRGD肽的cDNA序列和GGG的cDNA序列的核苷酸序列，并将该核苷酸序列与GroEL的引物对（如SEQ ID No：4所示的正向引物HS43和SEQ ID No：5所示的反向引物HS45）相连，得到扩增引物，并按照分子克隆上的方法使用该扩增引物对GroEL的cDNA序列进行扩增，得到iGroEL融合蛋白的重组DNA序列。其中，随PCR扩增将包含iRGD肽的基因和桥梁连接的基因与分子伴侣GroEL序列的基因的3’-端连接。并使用所述重组DNA序列构建出融合蛋白iGroEL的过表达质粒。通过IPTG的诱导导入有所述过表达质粒的菌种以表达得到融合蛋白，其桥梁连接的氨基酸序列两端分别连接iRGD肽的氨基酸序列和分子伴侣GroEL序列，所述连接的方法采用文献（Setting the chaperonin timer:A two-stroke,two-speed,protein machine.Grason J P,Gresham J S,Lorimer G H等，Proceedings of the National Academy of Sciences，2008，105(45):17339-17344）提供的方法，所不同的是，本制备例中是采用将含有iRGD肽的氨基酸序列和桥梁连接的氨基酸序列的cDNA序列与分子伴侣GroEL序列的cDNA序列连接，并在大肠杆菌体系BL21中表达，然后提纯融合蛋白iGroEL。
制备例2
本制备例用于获得本发明所述的药物化合物溶液。
按照文献（Eun Seong Lee等.可控释放杂志(J.Control.Release)2005,103,405）提供的方法，分别取3份2mg/份的盐酸阿霉素溶解在适量二甲基亚砜中，每份混合60μL三乙胺，室温条件下避光反应8h。得到3份浓度分别为20μg/mL、25μg/mL和5μg/mL的疏水性阿霉素二甲亚砜溶液。
实施例1
本实施例用于说明本发明所述的药物组合物及其制备方法。
取37.5mL制备例2所得的20μg/mL的疏水性阿霉素二甲亚砜，加入到5mL制备例1所得的5mg/mL的融合蛋白溶液中。用浓度为0.1摩尔/升的氢氧化钠溶液调节PH值到7，在37℃的恒温培养箱中振荡孵育24小时后，将所得到的溶液转入离心机中以7500转/分钟的速度离心10min，取上清液。然后将所得到的上清液通过50KD超滤管进行超滤，再用适量去离子水清洗超滤后所得到的溶液，重复该清洗步骤3次，以除去溶液中可能含有的阿霉素，得到纯度为99.5%的药物组合物iGroEL-Dox-1。
通过冷冻电镜可以看到上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-1中的阿霉素进入融合蛋白的空腔内后，形态并没有变化，结构完整，如图1所示。
通过紫外分光光度计检测上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-1可知，在509nm处，包载有阿霉素的融合蛋白相比单独的融合蛋白多了一个阿霉素的特征峰，证明阿霉素已经被包载进融合蛋白里，如图2所示。
实施例2
本实施例用于说明本发明所述的药物组合物及其制备方法。
取20mL制备例2所得的25μg/mL的疏水性阿霉素二甲亚砜，加入到5mL制备例1所得的5mg/mL的融合蛋白溶液中。用浓度为0.1摩尔/升的氢氧化钠溶液调节PH值到6，在10℃的恒温培养箱中振荡孵育15小时后，将所得到的溶液转入离心机中以8000转/分钟的速度离心10min，取上清液。然后将所得到的上清液通过50KD超滤管进行超滤，再用适量去离子水清洗超滤后所得到的溶液，重复该清洗步骤3次，以除去溶液中可能含有的阿霉素，得到纯度为99.1%的药物组合物iGroEL-Dox-2。
通过冷冻电镜可以看到上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-2中的阿霉素进入融合蛋白的空腔内后，形态并没有变化，结构完整，与iGroEL-Dox-1类似。
通过紫外分光光度计检测上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-2可知，在509nm处，包载有阿霉素的融合蛋白相比单独的融合蛋白多了一个阿霉素的特征峰，证明阿霉素已经被包载进融合蛋白里，其检测结果与iGroEL-Dox-1类似。
实施例3
本实施例用于说明本发明所述的药物组合物及其制备方法。
取50mL制备例2所得的20μg/mL的疏水性阿霉素二甲亚砜，加入到5mL制备例1所得的5mg/mL的融合蛋白溶液中。用浓度为0.1摩尔/升的氢氧化钠溶液调节PH值到8，在25℃的恒温培养箱中振荡孵育38小时后，将所得到的溶液转入离心机中以5000转/分钟的速度离心10min，取上清液。然后将所得到的上清液通过50KD超滤管进行超滤，再用适量去离子水清洗超滤后所得到的溶液，重复该清洗步骤3次，以除去溶液中可能含有的阿霉素，得到纯度为99.2%的药物组合物iGroEL-Dox-3。
通过冷冻电镜可以看到上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-3中的阿霉素进入融合蛋白的空腔内后，形态并没有变化，结构完整，与iGroEL-Dox-1类似。
通过紫外分光光度计检测上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-3可知，在509nm处，包载有阿霉素的融合蛋白相比单独的融合蛋白多了一个阿霉素的特征峰，证明阿霉素已经被包载进融合蛋白里，其检测结果与iGroEL-Dox-1类似。
实施例4
本实施例用于说明本发明所述的药物组合物及其制备方法。
本实施例采用与实施例1相同的方法制备药物组合物iGroEL-Dox-4，所不同的是：本实施例中取25mL按照制备例2所述的方法制备得到的5μg/mL的疏水性阿霉素二甲亚砜，加入到5mL制备例1所得的5mg/mL的融合蛋白溶液中。
得到纯度为98.2%的药物组合物iGroEL-Dox-4。
通过冷冻电镜可以看到上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-4中的阿霉素进入融合蛋白的空腔内后，形态并没有变化，结构完整，与iGroEL-Dox-1类似。
通过紫外分光光度计检测上述制备得到的药物组合物iGroEL-Dox-4可知，在509nm处，包载有阿霉素的融合蛋白相比单独的融合蛋白多了一个阿霉素的特征峰，证明阿霉素已经被包载进融合蛋白里，其检测结果与iGroEL-Dox-1类似。
实施例5
本实施例用于说明本发明所述的药物组合物及其制备方法。
本实施例采用与实施例1相同的方法制备药物组合物iGroEL-Taxol-5，所不同的是：本实施例中取83mL按照制备例2所述的相同的方法制备得到的30μg/mL的紫杉醇（Taxol）二甲亚砜溶液，加入到5mL制备例1所得的5mg/mL的融合蛋白溶液中。
得到纯度为98.5%的药物组合物iGroEL-Taxol-5。
通过冷冻电镜可以看到上述制备得到的药物组合物iGroEL-Taxol-5中的紫杉醇进入融合蛋白的空腔内后，形态并没有变化，结构完整，与iGroEL-Dox-1类似。
通过紫外分光光度计检测上述制备得到的药物组合物iGroEL-Taxol-5可知，包载有紫杉醇的融合蛋白相比单独的融合蛋白多了一个紫杉醇的特征峰，证明紫杉醇已经被包载进融合蛋白里，其检测结果与iGroEL-Dox-1类似。
测试例1
本测试例用于测定本发明的药物组合物中药物化合物和融合蛋白的重量比。
采用与制备例2相同的方法配制浓度分别为6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL的阿霉素标准溶液，然后利用紫外分光光度计测定阿霉素的浓度（吸收峰设在509nm），并制定阿霉素的标准曲线。
取4mg/mL的本发明实施例1制备的药物组合物iGroEL-Dox-1，并测定其在509nm处的紫外吸收值，通过计算可以得知本发明实施例1制备的药物组合物iGroEL-Dox-1中的融合蛋白与疏水性阿霉素的最终比例约为1：30，如图3所示。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例2制备的药物组合物iGroEL-Dox-2中的融合蛋白与疏水性阿霉素的最终比例约为1：28。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例3制备的药物组合物iGroEL-Dox-3中的融合蛋白与疏水性阿霉素的最终比例约为1：28。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例4制备的药物组合物iGroEL-Dox-4中的融合蛋白与疏水性阿霉素的最终比例约为1：24。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例5制备的药物组合物iGroEL-Taxol-5中的融合蛋白与紫杉醇的最终比例约为1：23。
测试例2
本测试例用于在加入SDS前后比较本发明的药物组合物中药物化合物的释放量。
取0.5mL本发明的实施例1中制备得到的0.02mg/mL的iGroEL-Dox、0.001mg的人乳腺癌细胞的全链DNA和0.5mL的1mg/mL的十六烷基磺酸钠（SDS）（购自sigma公司）混合得到iGroEL-Dox+DNA+SDS溶液。在37℃恒温培养箱中孵育，使iGroEL-Dox+DNA+SDS溶液完全解离，完全地释放出里面的阿霉素。用509nm的激发光激发，测定iGroEL-Dox和iGroEL-Dox+DNA+SDS的荧光发射峰，结果如图4所示。通过图4所示的结果可以看出，加入SDS后，iGroEL-Dox+DNA+SDS较iGroEL-Dox的荧光强度明显升高。
测试例3
本测试例用于说明在加入ATP之后，本发明的药物组合物中药物化合物在不同时间点的释放量。
取1mL本发明的实施例1中制备得到的0.01mg/mL的iGroEL-Dox-1，并向其中加入0.001mg的人乳腺癌细胞的全链DNA（采用DNA提取试剂盒提取获得人乳腺癌细胞里的全基因组DNA，下同），得到iGroEL-Dox+DNA溶液，向上述得到的iGroEL-Dox+DNA溶液中加入3.5μl的100毫摩尔/升的ATP（购自sigma公司），得到iGroEL-Dox+DNA+ATP溶液。在37℃恒温培养箱中孵育，并分别于0.5h、1h、2h取样分析。测试并得到各样品的荧光光谱，如图5所示。可以看出，在体外实验中，iGroEL-Dox的药物释放量在0.5小时可以达到27%，而在2小时左右释放量达到最高值约为30%。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例2制备的药物组合物iGroEL-Dox-2中的药物释放量在0.5小时可以达到25%，而在2.2小时左右释放量达到最高值约为29%。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例3制备的药物组合物iGroEL-Dox-3中的药物释放量在0.5小时可以达到22%，而在1.8小时左右释放量达到最高值约为29%。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例4制备的药物组合物iGroEL-Dox-4中的药物释放量在0.5小时可以达到23%，而在3.2小时左右释放量达到最高值约为25%。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测得本发明实施例5制备的药物组合物iGroEL-Taxol-5中的药物释放量在0.5小时可以达到20%，而在2.8小时左右释放量达到最高值约为23%。
采用与测试实施例1中的药物组合物iGroEL-Dox-1相同的方法测试本发明实施例2-5制备的药物组合物中的药物释放量，其结果与测试实施例1中的药物组合物的结果相似。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
Claims (10)
1.一种融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白的氨基酸序列中含有如SEQID No：1所示的iRGD肽序列和SEQ ID No：2所示的分子伴侣GroEL序列。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，连接所述iRGD肽序列和分子伴侣GroEL序列的桥梁连接的氨基酸序列为GGG。
3.一种融合蛋白的编码基因，其特征在于，所述编码基因的序列为能够编码权利要求1或权利要求2中所述的融合蛋白的核苷酸序列。
4.一种融合蛋白的制备方法，其特征在于，该方法包括将权利要求3所述的编码基因在菌株内表达，得到融合蛋白。
5.一种制备药物组合物的方法，其特征在于，该方法包括在溶剂存在下，将药物化合物与权利要求1或权利要求2中所述的融合蛋白接触，得到接触后的物料。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，相对每重量份的融合蛋白，所述药物化合物的用量为0.005-0.1重量份；优选所述药物化合物的用量为0.02-0.04重量份。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述接触的条件包括：pH值为6-8，温度为4-50℃，时间为12-48小时。
8.根据权利要求5所述的方法，其中，将药物化合物溶解在所述溶剂中，然后与所述融合蛋白接触，溶解后的药物化合物溶液的浓度为5-30μg/mL，优选为15-25μg/mL。
9.根据权利要求5所述的方法，其中，所述药物化合物为阿霉素、紫杉醇和喜树碱中的至少一种。
10.权利要求5-9中任意一项所述的方法制备得到的药物组合物。
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