CN103868898B

CN103868898B - 一种检测水相中苏丹红i号的方法、荧光试纸及制备方法和应用

Info

Publication number: CN103868898B
Application number: CN201410067951.0A
Authority: CN
Inventors: 王小慧; 陈惠�; 孙润仓; 黄飞
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2014-02-26
Filing date: 2014-02-26
Publication date: 2016-06-22
Anticipated expiration: 2034-02-26
Also published as: CN103868898A

Abstract

本发明公开了一种检测水相中苏丹红I号的方法、荧光试纸及制备方法和应用，检测方法包括以下步骤：（1）制备荧光探针溶液，所述荧光探针溶液为两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液，其中胶束浓度为0.5～2mg/mL；（2）将荧光探针溶液加入比色皿中，置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱；（3）将待测样品溶液加入步骤（2）中含荧光探针溶液的比色皿中，置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱，然后根据荧光猝灭程度识别苏丹红I号色素，若荧光光谱猝灭明显，则样品中含有苏丹红I号色素，若荧光光谱无明显变化，则不含有苏丹红I号色素。进一步，制备出了功能化荧光试纸，对苏丹红I号有较好的检测效果。

Description

一种检测水相中苏丹红I号的方法、荧光试纸及制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种用于检测苏丹红I号的光学材料羧甲基壳聚糖接枝对二氧环己酮/荧光染料复合纳米胶束及其功能化试纸的制备方法和应用，属光学和高分子化学领域，有望应用于检测食品添加剂的安全问题。

背景技术

近年来，对致癌色素添加剂苏丹红I号的快速、高效、灵敏检测成为全球食品安全领域关注的重点。目前，对苏丹红I号的检测还主要依赖于较昂贵的检测仪器，而且检测费时，如质谱色谱联用仪等。但很多情况下，尤其是危急情况下往往需要在现场对苏丹红I号的含量迅速做出判断，而在众多可用于检测苏丹红I号的方法中能现场快速检测的却很少，因而对其含量的现场快速检测目前还缺乏有效的检测手段。

具有特殊荧光信号放大功能的共轭聚合物是优良的传感活性材料，对缺电子的苏丹红I号具有灵敏的识别能力，然而这些共轭聚合物自身的疏水性却限制了其在水相体系中检测苏丹红I号的应用。因此对这些共轭聚合物进行改性使其具有亲水性，可扩大其应用范围，然而制备水溶性的共轭聚合物却涉及到非常复杂的合成过程，大大增加了检测的成本。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的不足，本发明的首要目的在于提供一种基于荧光传感快速检测水相中苏丹红I号的方法。该方法是用自组装纳米胶束对疏水性荧光共轭聚合物进行包埋，利用微相萃取作用，将水相中的痕量苏丹红I号富集于胶束内核，与储存在内核里的共轭聚合物发生作用，使共轭聚合物的荧光信号出现明显的变化，从而借助荧光传感快速、超灵敏检测水相中的微量苏丹红I号。

进一步，本发明通过这种荧光聚合物纳米胶束对原纸进行表面涂布，制备出一种具有荧光识别苏丹红I号的功能特种试纸。

本发明的另一个目的在于提供基于所述的荧光纳米胶束及其功能化试纸快速检测水相中苏丹红I号的方法的应用。

本发明的目的通过以下技术方案得以实现：

一种检测水相中苏丹红I号的方法，包括以下步骤：

（1）制备荧光探针溶液，所述荧光探针溶液为两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液，其中胶束浓度为0.5～2mg/mL；

（2）将荧光探针溶液加入比色皿中，置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱；

（3）将待测样品溶液加入步骤（2）中含荧光探针溶液的比色皿中，置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱，然后根据荧光猝灭程度识别苏丹红I号色素，若荧光光谱猝灭明显，则样品中含有苏丹红I号色素，若荧光光谱无明显变化，则不含有苏丹红I号色素。

所述荧光探针溶液是通过如下步骤制备的：

①聚合物纳米胶束水溶液的制备：将两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO溶于超纯水中，磁力搅拌，配置成浓度为0.5～2mg/mL的聚合物纳米胶束水溶液；

②荧光共轭聚合物溶液的制备：将荧光共轭聚合物9,9-二辛基聚芴（PFO）溶解在四氢呋喃（THF）中，配置成浓度为0.1～1mg/mL的荧光共轭聚合物溶液；

③聚合物胶束/共轭聚合物的纳米复合物荧光探针溶液的制备：将步骤②中配置的荧光共轭聚合物溶液搅拌条件下缓慢滴加至步骤①中制备的聚合物纳米胶束水溶液中，超声混合均匀，旋转蒸发除去THF，补水定容至蒸发前的体积，将定容后的溶液过滤即得到所述的荧光探针溶液。

所述两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO的制备：

（a）羧甲基壳聚糖（CMCs）的制备：将纯化后的壳聚糖加入到NaOH溶液中，壳聚糖在其中的浓度为0.04～0.1g/mL，搅拌均匀后置于冰箱中冷冻过夜；将溶胀后的样品转移到烧杯中，加入异丙醇搅拌分散样品；将与壳聚糖等质量的氯乙酸分批次加入烧杯中，机械搅拌反应3～12h；滤出异丙醇，加水使样品溶解；调溶液pH至中性，去离子水中透析3～5d；收集透析袋内溶液，冷冻干燥即得到CMCs；所述NaOH溶液为质量分数50%的饱和NaOH溶液，透析袋截留分子量MWCO=3500；

（b）羧甲基壳聚糖接枝对二氧环己酮CMCs-g-PPDO的制备：离子液体[Bmim]Cl加热至完全融化后加入干燥的CMCs，N₂保护下磁力搅拌使CMCs完全溶解；N₂保护下向溶液中加入对二氧环己酮（PDO）及4-二甲氨基吡啶（DMAP），N₂保护下100℃反应12h，冷却至室温，无水乙醇中沉淀，并用无水乙醇重复洗涤，沉淀经抽提后减压干燥即得到CMCs-g-PPDO；所述CMCs中糖单元与PDO摩尔比为1:4～1:15，DMAP与CMCs中OH摩尔比为0.1～1。

所述减压干燥的条件为60℃干燥48h。

步骤③所述的过滤是0.45μm微孔滤膜过滤。所述聚合物胶束/共轭聚合物的纳米复合物荧光探针的粒径为77.97～151.4nm；所述的探针中荧光共轭聚合物PFO的包载率为11.36～41.94%。

步骤（2）、（3）中所述的扫描荧光光谱是在激发光波长为340nm，狭缝宽度为2.5nm条件下进行荧光扫描的。

所述样品溶液指直接粉碎、分散、浓缩的食品基质水溶液或醇溶液，不需经过抽提、分离、提取等工艺；红色色素包括工业色素苏丹红I号和β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素等食品中常见天然红色色素。本发明可根据苏丹红I号、β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素的标准曲线计算色素浓度，即根据荧光随苏丹红I号、β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素等加入量的增多逐步淬灭的信号，用Stern-Volmer方程计算。

一种检测水相中苏丹红I号的荧光试纸的制备方法，将所述荧光探针溶液（1～2mL）涂布在原纸表面，室温干燥即制得所述荧光试纸。该荧光试纸在检测水相中苏丹红I号中的应用，具体地，取待测样品溶液滴加到试纸表面，用紫外灯或验钞机照射试纸，观察试纸表面荧光变化，根据荧光信号猝灭程度识别鉴定苏丹红I号色素。

本发明的原理在于：本发明提出利用接枝型壳聚糖两亲性衍生物自组装纳米胶束作为包埋保护荧光共轭聚合物的载体，以这些具有优异水分散性的自组装纳米胶束/共轭聚合物复合物为荧光探针检测水相中苏丹红I号。该方法利用了荧光共轭聚合物对苏丹红I号的识别检测活性，并有效解决了共轭聚合物的水不溶性问题，而且利用纳米胶束的微相萃取作用使得待测物与检测物质在纳米胶束内富集，大大提高了传感效率和检测灵敏度。此外，这个方法提供了一种从常见的疏水性共轭聚合物中获得水溶性发光共轭聚合物纳米粒子的替代方法。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：

（1）以自组装聚合物纳米胶束作为包载保护疏水性荧光共轭聚合物的载体，使其在保持优良荧光性能的同时具有良好的水溶性，可方便地应用于水相检测。

（2）所使用的载体两亲性壳聚糖纳米聚合物资源丰富且具有生物相容性，为昂贵功能材料共轭聚合物的应用提供了优良的载体，可扩展和优化其应用。

（3）由于纳米胶束的微相萃取富集作用，与荧光共轭聚合物在有机溶剂中的传感性能相比，其纳米胶束体系在水相中检测苏丹红I号的灵敏度获得显著提高。

（4）整个检测过程不涉及复杂的样品预处理过程、食品基质不需经过抽提、分离、提纯，可直接检测，不依靠复杂昂贵的仪器设备，检测过程可在5分钟之内完成，极其适合实地、现场食品安全检测。

（5）功能试纸轻便可携带、制备工艺简单易行，适合大规模生产。

附图说明

图1为实施例1中制备的两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液对苏丹红I号（a）、β-胡萝卜素（b）、红曲红色素（c）以及番茄红素（d）的传感检测得到的不同荧光猝灭效果图。

图2为实施例2中制备的两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液对苏丹红I号（a）、β-胡萝卜素（b）、红曲红色素（c）以及番茄红素（d）的传感检测得到的不同荧光猝灭效果图。

图3为实施例3中制备的两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液对苏丹红I号（a）、β-胡萝卜素（b）、红曲红色素（c）以及番茄红素（d）的传感检测得到的不同荧光猝灭效果图。

图4为实施例3中制备的两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液对苏丹红I号（a）及实施例5中PFO在有机溶剂甲苯中对苏丹红I号（b）的传感检测得到的不同荧光猝灭效果图。

图5为实施例3中制备的两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针对苏丹红I号、β-胡萝卜素、红曲红色素以及番茄红素的传感效率（Ksv）及实施例5中共轭聚合物PFO在有机溶剂甲苯中对四种色素的传感效率（Ksv）。

图6为实施例4中制备的功能性荧光试纸检测苏丹红I号、β-胡萝卜素、红曲红色素以及番茄红素时荧光变化照片，其中a、d、g、j是空白试纸的荧光照片，b、e、h、k是荧光试纸的荧光照片，c、f、i、l分别是滴加上述4种色素样品后的荧光试纸照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例中苏丹红I号标准溶液为浓度为5～10μM的乙腈溶液；β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素等天然色素的标准溶液为浓度为0.01～0.05mM的乙醇或水溶液。

实施例1

5g纯化后的壳聚糖（Mw=50000）加入到50mL质量分数为50%的饱和NaOH溶液中，搅拌均匀后置于冰箱中冷冻过夜；将溶胀后的样品转移到1000mL烧杯中，加入300mL异丙醇搅拌均匀；5g氯乙酸分批次加入烧杯中，机械搅拌反应12h；滤出异丙醇，加水使样品溶解；稀醋酸调溶液pH至中性，去离子水中透析3-5d（MWCO=3500）；收集透析袋内溶液，冷冻干燥48h得到CMCs；10g离子液体[Bmim]Cl加热融化后加入0.2g干燥的CMCs，N₂保护下1500rmp磁力搅拌3h使CMCs完全溶解；N₂保护下向溶液中加入0.388g对二氧环己酮（PDO）及0.128g4-二甲氨基吡啶（DMAP），N₂保护下100℃反应12h，冷却至室温，250mL无水乙醇中沉淀，并用无水乙醇重复洗涤，沉淀于索氏抽提器中抽提24h，60℃减压干燥48h得到CMCs-g-PPDO；配制0.9mg/mL的CMCs-g-PPDO聚合物纳米胶束水溶液，动态光散射法（DLS）用Malvern粒度仪测定出其粒径为43.59nm；配制浓度为0.5mg/mL的荧光共轭聚合物9,9-二辛基聚芴PFO/THF溶液；将100μLPFO/THF溶液搅拌条件下缓慢滴加至10mL0.9mg/mL的CMCs-g-PPDO聚合物纳米胶束水溶液中，超声2h混合均匀后旋转蒸发除去THF，补水定容至10mL；用0.45μm微孔滤膜过滤除去未包埋的PFO即得到两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液。使用紫外光谱仪测定计算该探针溶液中共轭聚合物PFO的包载率为33.21%；量取稀释5倍后的该探针溶液2.5mL置于四面石英比色皿中，于激发波长340nm，狭缝宽度2.5nm条件下扫描荧光光谱；向含荧光探针溶液的比色皿中滴加10μL待测样品溶液，扫描其荧光光谱,继续滴加10μL待测样品溶液,扫描对应的荧光光谱;重复此操作共20次到最后共滴加200μL待测样品溶液(待测样品溶液共4份，一份是含苏丹红的，其余3份分别含天然色素β-胡萝卜素、红曲红色素和番茄红素），分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭明显的待测样品溶液中即含有苏丹红I号色素，荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素，根据光谱荧光猝灭程度，结合苏丹红I号色素标准曲线可计算其中苏丹红I号的浓度。结果如图1所示，(a)是含苏丹红的，其荧光猝灭明显，而(b)、(c)、(d)分别是β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素，他们的荧光猝灭不明显。

实施例2

实施例1中制备的CMCs-g-PPDO配制成0.9mg/mL的聚合物纳米胶束水溶液，1mL0.5mg/mLPFO/THF溶液搅拌条件下缓慢滴加至10mL聚合物纳米胶束水溶液中，超声2h混合均匀后旋转蒸发除去THF，补水定容至10mL；用0.45μm微孔滤膜过滤除去未包埋的PFO即得到两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液。使用紫外光谱仪测定计算该探针溶液中共轭聚合物PFO的包载率为11.36%；量取稀释5倍后的该探针溶液2.5mL置于四面石英比色皿中，于激发波长340nm，狭缝宽度2.5nm条件下扫描荧光光谱；向含荧光探针溶液的比色皿中滴加10μL待测样品溶液，扫描其荧光光谱,继续滴加10μL待测样品溶液,扫描对应的荧光光谱;重复此操作共20次到最后共滴加200μL待测样品溶液(待测样品溶液共4份，一份是含苏丹红的，其余3份分别含天然色素β-胡萝卜素、红曲红色素和番茄红素），分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭明显的待测样品溶液中即含有苏丹红I号色素，荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素，根据光谱荧光猝灭程度，结合苏丹红I号色素标准曲线可计算其中苏丹红I号的浓度。结果如图2所示，(a)是含苏丹红的，其荧光猝灭明显，而(b)、(c)、(d)分别是β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素，他们的荧光猝灭不明显。

实施例3

实施例1中制备的CMCs-g-PPDO配制成1.35mg/mL的聚合物纳米胶束水溶液，动态光散射法（DLS）用Malvern粒度仪测定出其粒径为23.18nm；100μL0.5mg/mLPFO/THF溶液搅拌条件下缓慢滴加至10mL聚合物纳米胶束水溶液中，超声2h混合均匀后旋转蒸发除去THF，补水定容至10mL；用0.45μm微孔滤膜过滤除去未包埋的PFO即得到两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液。使用紫外光谱仪测定计算该探针溶液中共轭聚合物PFO的包载率为41.94%；量取稀释5倍后的该探针溶液2.5mL置于四面石英比色皿中，于激发波长340nm，狭缝宽度2.5nm条件下扫描荧光光谱；向含荧光探针溶液的比色皿中滴加10μL待测样品溶液，扫描其荧光光谱,继续滴加10μL待测样品溶液,扫描对应的荧光光谱;重复此操作共20次到最后共滴加200μL待测样品溶液(待测样品溶液共4份，一份是含苏丹红的，其余3份分别含天然色素β-胡萝卜素、红曲红色素和番茄红素），分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭明显的待测样品溶液中即含有苏丹红I号色素，荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素，根据光谱荧光猝灭程度，结合苏丹红I号色素标准曲线可计算其中苏丹红I号的浓度。结果如图3所示，(a)是含苏丹红的，其荧光猝灭明显，而(b)、(c)、(d)分别是β-胡萝卜素、红曲红色素及番茄红素，他们的荧光猝灭不明显。

实施例4

实施例1中制备的CMCs-g-PPDO配制成1.35mg/mL的聚合物纳米胶束水溶液；500μL0.5mg/mLPFO/THF溶液搅拌条件下缓慢滴加至10mL聚合物纳米胶束水溶液中，超声2h混合均匀后旋转蒸发除去THF，补水定容至10mL；用0.45μm微孔滤膜过滤除去未包埋的PFO即得到两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液。使用紫外光谱仪测定计算该探针溶液中共轭聚合物PFO的包载率为25.70%；量取该探针溶液2ml涂布于原纸表面，室温干燥获得功能化荧光试纸。在功能化荧光试纸表面滴加200μL待测样品溶液，使用手持式紫外灯观察试纸表面荧光信号变化。试纸表面荧光猝灭明显的待测样品溶液中即含有苏丹红I号色素，试纸表面荧光信号无明显变化的待测样品溶液中则仅含有天然色素，结果如图6所示，c为含苏丹红I号的样品溶液，其荧光猝灭明显。可见，该方法可用于苏丹红I号的快速定性和半定量检测。

实施例5

配制0.004mg/mL的荧光共轭聚合物PFO甲苯溶液10mL,量取该溶液2.5mL置于四面石英比色皿中，于激发波长340nm，狭缝宽度2.5nm条件下扫描荧光光谱；向含荧光共轭聚合物PFO甲苯溶液的比色皿中滴加10μL待测样品溶液，扫描其荧光光谱，继续滴加10μL待测样品溶液,扫描对应的荧光光谱;重复此操作共20次到最后共滴加200μL待测样品溶液(待测样品溶液共4份，一份是含苏丹红的，其余3份分别含天然色素β-胡萝卜素、红曲红色素和番茄红素），分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭相对明显的待测样品溶液中即含有苏丹红I号色素，荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素，根据光谱荧光猝灭程度，结合苏丹红I号色素标准曲线可计算其中苏丹红I号的浓度。

从图1～3可以看出所制备的聚合物胶束/共轭聚合物的纳米复合物荧光探针溶液对不同色素的传感效果不同：对苏丹红I号的传感效果最好，其次是β-胡萝卜素、红曲红色素，番茄红素传感效果最差。从图4可以看出荧光共轭聚合物在所制备的两亲性纳米胶束溶液探针体系中对苏丹红I号的传感效果明显优于荧光共轭聚合物在有机溶剂甲苯（MB）中时对苏丹红I号的传感效果。从图6可以看出制备的功能性荧光试纸的荧光强弱受苏丹红I号影响变化较大，而随天然色素的加入荧光强弱基本不变。因此，使用这种技术，对苏丹红I号的检测可以达到很好的效果。

上述实施例为本发明的一些实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种检测水相中苏丹红I号的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备荧光探针溶液，所述荧光探针溶液为两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO/PFO纳米复合物荧光探针溶液，其中胶束浓度为0.5～2mg/mL，所述CMCs-g-PPDO/PFO为CMCs接枝PPDO的聚合物胶束包埋PFO；其中CMCs为羧甲基壳聚糖，PPDO为聚对二氧环己酮，PFO为荧光共轭聚合物9,9-二辛基聚芴；

(2)将荧光探针溶液加入比色皿中，置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱；

(3)将待测样品溶液加入步骤(2)中含荧光探针溶液的比色皿中，置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱，然后根据荧光猝灭程度识别苏丹红I号色素，若荧光光谱猝灭明显，则样品中含有苏丹红I号色素，若荧光光谱无明显变化，则不含有苏丹红I号色素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光探针溶液是通过如下步骤制备的：

(1)聚合物纳米胶束水溶液的制备：将两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO溶于超纯水中，磁力搅拌，配置成浓度为0.5mg/mL～2mg/mL的聚合物纳米胶束水溶液；

(2)荧光共轭聚合物溶液的制备：将荧光共轭聚合物9,9-二辛基聚芴溶解在四氢呋喃中，配置成浓度为0.1mg/mL～1mg/mL的荧光共轭聚合物溶液；

(3)聚合物胶束/共轭聚合物的纳米复合物荧光探针溶液的制备：将步骤(2)中配置的荧光共轭聚合物溶液搅拌条件下缓慢滴加至步骤(1)中制备的聚合物纳米胶束水溶液中，超声混合均匀，旋转蒸发除去四氢呋喃，补水定容至蒸发前的体积，将定容后的溶液过滤即得到所述的荧光探针溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO的制备：

(1)羧甲基壳聚糖的制备：将纯化后的壳聚糖加入到NaOH溶液中，壳聚糖在其中的浓度为0.04g/mL～0.1g/mL，搅拌均匀后置于冰箱中冷冻过夜；将溶胀后的样品转移到烧杯中，加入异丙醇搅拌分散样品；将与壳聚糖等质量的氯乙酸分批次加入烧杯中，机械搅拌反应3h～12h；滤出异丙醇，加水使样品溶解；调溶液pH至中性，去离子水中透析3d～5d；收集透析袋内溶液，冷冻干燥即得到CMCs；所述NaOH溶液为质量分数50％的饱和NaOH溶液，透析袋截留分子量MWCO＝3500；

(2)羧甲基壳聚糖接枝对二氧环己酮的制备：离子液体[Bmim]Cl加热至完全融化后加入干燥的CMCs，N₂保护下磁力搅拌使CMCs完全溶解；N₂保护下向溶液中加入对二氧环己酮及4-二甲氨基吡啶，N₂保护下100℃反应12h，冷却至室温，无水乙醇中沉淀，并用无水乙醇重复洗涤，沉淀经抽提后减压干燥即得到CMCs-g-PPDO；所述CMCs中糖单元与二氧环己酮摩尔比为1:4～1:15，4-二甲氨基吡啶与CMCs中OH摩尔比为0.1～1。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述减压干燥的条件为60℃干燥48h。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的过滤是0.45μm微孔滤膜过滤。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)中所述的扫描荧光光谱是在激发光波长为340nm，狭缝宽度为2.5nm条件下进行荧光扫描的。

7.一种检测水相中苏丹红I号的荧光试纸的制备方法，其特征在于，将权利要求1或2所述荧光探针溶液涂布在原纸表面，室温干燥即制得所述荧光试纸。

8.权利要求7所述方法制备的荧光试纸。

9.权利要求8所述荧光试纸在检测水相中苏丹红I号中的应用。

10.权利要求9所述的应用，其特征在于，取待测样品溶液滴加到试纸表面，用紫外灯或验钞机照射试纸，观察试纸表面荧光变化，根据荧光信号猝灭程度识别鉴定苏丹红I号色素。