CN103848919A - 一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，将板蓝根单味制剂(板蓝根茶、板蓝根颗粒)生产中得到的醇沉物复溶，离心去除不溶物，收集上清液，酶法去除蛋白，透析去除小分子，再加乙醇二次沉淀，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮洗涤后真空干燥，得到具有抗氧化活性的板蓝根多糖。与现有技术相比，本发明提高了板蓝根药材的综合利用率，制备得到的板蓝根多糖具有较好的清除DPPH自由基的活性，因此抗氧化活性较高，有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种板蓝根多糖的制备方法，尤其是涉及一种以板蓝根单味制剂(板蓝根茶、板蓝根颗粒)生产过程中醇沉产物为原料制备具有抗氧化活性的板蓝根多糖的方法，可有效利用现行生产工艺中直接弃去的醇沉滤渣，提高板蓝根药材的综合利用率。
背景技术
板蓝根(Isatidis Radix)，别名靛青根、蓝靛根、靛根，是十字花科植物菘蓝(Isatisin digotica Fort.)的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效，在临床上用于温疫时毒、发热咽痛、温毒发斑、痄腮、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等。作为我国抗病毒中药的典型代表，板蓝根是首个获美国国立卫生研究院资助的中药研究项目。
多糖是由多个单糖分子通过苷键连接而成的一类结构复杂的生物大分子，在天然药物中分布非常广泛。多糖在生物合成以及细胞间的识别、受精、胚胎形成、神经细胞发育、激素激活、细胞增殖、病毒和细菌的感染、肿瘤细胞转移等许多基本生命过程中发挥着重要作用，因此已成为医学、营养学和食品科学领域的研究热点。据报道，板蓝根多糖对特异性免疫和非特异性免疫均具有一定的促进作用，是一种比较理想的天然免疫增强剂，作为保健食品和药品有广泛的开发前景。
现行药典(2010年版)中板蓝根的单味制剂主要有板蓝根茶和板蓝根颗粒两种，在目前的工业化生产中，醇沉产物均被作为副产物弃去，造成了板蓝根中具有免疫增强作用的主要活性物质——板蓝根多糖的大量损失。目前，尚未见有关利用板蓝根单味制剂生产中的副产物制备板蓝根多糖的专利。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种具有抗氧化活性的板蓝根多糖的制备方法，尤其是一种利用板蓝根单味制剂(板蓝根茶、板蓝根颗粒)现行生产工艺中普遍被舍弃的醇沉物为原料制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，提高了板蓝根药材的综合利用率。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，包括以下步骤：
(1)将板蓝根单味制剂生产中弃去的醇沉物用水溶解，离心去除不溶物，收集上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液减压浓缩至原体积的1/5～1/10，加入浓缩后体积1～5倍量无水乙醇，静置，离心去除母液，收集一次醇沉产物；
(3)在步骤(2)得到的一次醇沉产物中加入与步骤(2)母液相同浓度的乙醇洗涤并过滤，逐步提高乙醇浓度，最后用无水乙醇、丙酮洗涤，抽滤近干时复盖以防沉淀物表面溶剂蒸发带入水分；
(4)将步骤(3)得到的沉淀物迅速减压干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末。
所述的板蓝根单味制剂包括板蓝根茶或板蓝根颗粒。
所述的含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末可进一步复溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子，再以乙醇沉淀，得到抗氧化活性板蓝根多糖。
获取抗氧化活性板蓝根多糖包括以下步骤：
(1)将粗多糖粉末以30～100倍质量的蒸馏水溶解，控制转速为3500～4500rpm离心10～15min，取上清液；
(2)在上清液中按照1～5×103U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37℃下酶解4～6h，煮沸10min，控制转速为3500～4500rpm离心10～15min除去变性蛋白，收集上清液；
(3)将上清液转入12000～14000Da的透析袋，于蒸馏水中透析24～48h，取透析袋内溶液减压浓缩至原体积的1/5～1/10，加入浓缩后体积1～5倍量无水乙醇进行二次沉淀，静置，离心取沉淀物，减压干燥，得到抗氧化活性板蓝根多糖。
与现有技术相比，本发明制备抗氧化活性板蓝根多糖的原料为板蓝根单味制剂生产中被舍弃的醇沉物，可提高板蓝根药材的综合利用率，增加经济效益。制备得到的多糖粉末可直接应用于保健食品、药品和化妆品领域，也可按照常规方法进一步纯化后应用于上述领域。为提高板蓝根多糖的品质，含有抗氧化活性的板蓝根粗多糖的粉末可进一步复溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子杂质，再以乙醇沉淀，制备得到的板蓝根多糖具有较好的清除DPPH自由基的活性，因此抗氧化活性较高，有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
板蓝根单味制剂生产中醇沉物的获得
取板蓝根1400g，加水煎煮两次，第一次2h，第二次1h，煎液滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.20(50℃)，加乙醇使含醇量达到60％，静置使沉淀，离心取沉淀，50℃真空干燥，得褐色醇沉物197.8g。
实施例2
板蓝根多糖的制备
取按照实施例1方法得到的沉淀物10g，以50倍蒸馏水溶解，4500rpm离心15min去除不溶物，取上清液。将上清液减压浓缩至50mL，加入4倍量无水乙醇，静置24h，4500rpm/min离心15min，收集沉淀，将沉淀物依次用80％乙醇10mL，无水乙醇10mL，丙酮10mL洗涤，然后于50℃真空干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末7.8g；
取5.0g粗多糖粉末，加250mL蒸馏水溶解，4500rpm离心，取上清液，按照1000U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37℃下酶解4h，煮沸10min，4500rpm离心15min除去变性蛋白，上清液转入14000Da的透析袋，于蒸馏水中透析24h，取透析袋内溶液减压浓缩至原体积的1/10，加入4倍量无水乙醇，静置24h，4500rpm离心15min，收集沉淀，依次用80％乙醇10mL，无水乙醇10mL，丙酮10mL洗涤，然后于50℃真空干燥，得到浅黄色多糖1.63g。
实施例3-6
板蓝根多糖的体外抗氧化活性实验
用实施例1和实施例2得到的板蓝根多糖进行DPPH自由基清除效果实验。
准确称取一定量板蓝根多糖溶于蒸馏水中，得到0.05、0.25、1.25和2.5mg/mL的样品溶液。取上述溶液各2mL，分别加入0.1mmol/L的DPPH溶液2mL，摇匀后室温静置30min，于517nm波长下测定吸光度。根据公式计算对DPPH自由基的清除率，结果见表2。
Ax为2mL DPPH·溶液+2mL样品液的吸光度；Ax0为2mL无水乙醇+2mL样品液的吸光度；A0为2mL DPPH·溶液+2mL蒸馏水的吸光度。
表2板蓝根多糖对DPPH自由基的清除率(单位：％)
实施例7
一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，包括以下步骤：
(1)将生产板蓝根茶中弃去的醇沉物用水溶解，离心去除不溶物，收集上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液减压浓缩至原体积的1/5，加入等体积的无水乙醇，静置，离心去除母液，收集一次醇沉产物；
(3)在步骤(2)得到的一次醇沉产物中加入与步骤(2)母液相同浓度的乙醇洗涤并过滤，逐步提高乙醇浓度，最后用无水乙醇、丙酮洗涤，抽滤近干时复盖以防沉淀物表面溶剂蒸发带入水分；
(4)将步骤(3)得到的沉淀物迅速减压干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末。
实施例8
一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，包括以下步骤：
(1)将生产板蓝根颗粒中弃去的醇沉物用水溶解，离心去除不溶物，收集上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液减压浓缩至原体积的1/10，加入5倍体积的无水乙醇，静置，离心去除母液，收集一次醇沉产物；
(3)在步骤(2)得到的一次醇沉产物中加入与步骤(2)母液相同浓度的乙醇洗涤并过滤，逐步提高乙醇浓度，最后用无水乙醇、丙酮洗涤，抽滤近干时复盖以防沉淀物表面溶剂蒸发带入水分；
(4)将步骤(3)得到的沉淀物迅速减压干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末。
实施例9
得到的含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末可进一步复溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子，再以乙醇沉淀，得到抗氧化活性板蓝根多糖，具体包括以下步骤：
(1)将粗多糖粉末以30倍质量的蒸馏水溶解，控制转速为3500rpm离心15min，取上清液；
(2)在上清液中按照1×103U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37℃下酶解4h，煮沸10min，控制转速为3500rpm离心15min除去变性蛋白，收集上清液；
(3)将上清液转入12000Da的透析袋，于蒸馏水中透析24h，取透析袋内溶液减压浓缩至原体积的1/5，加入与浓缩后体积等量的无水乙醇进行二次沉淀，静置，离心取沉淀物，减压干燥，得到抗氧化活性板蓝根多糖。
实施例10
得到的含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末可进一步复溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子，再以乙醇沉淀，得到抗氧化活性板蓝根多糖，具体包括以下步骤：
(1)将粗多糖粉末以100倍质量的蒸馏水溶解，控制转速为4500rpm离心10min，取上清液；
(2)在上清液中按照5×103U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37℃下酶解6h，煮沸10min，控制转速为4500rpm离心10min除去变性蛋白，收集上清液；
(3)将上清液转入14000Da的透析袋，于蒸馏水中透析48h，取透析袋内溶液减压浓缩至原体积的1/10，加入浓缩后体积5倍量无水乙醇进行二次沉淀，静置，离心取沉淀物，减压干燥，得到抗氧化活性板蓝根多糖。
Claims (4)
1.一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将板蓝根单味制剂生产中弃去的醇沉物用水溶解，离心去除不溶物，收集上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液减压浓缩至原体积的1/5～1/10，加入浓缩后体积1～5倍量无水乙醇，静置，离心去除母液，收集一次醇沉产物；
(3)在步骤(2)得到的一次醇沉产物中加入与步骤(2)母液相同浓度的乙醇洗涤并过滤，逐步提高乙醇浓度，最后用无水乙醇、丙酮洗涤，抽滤近干时复盖以防沉淀物表面溶剂蒸发带入水分；
(4)将步骤(3)得到的沉淀物迅速减压干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末。
2.根据权利要求1所述的一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，其特征在于，所述的板蓝根单味制剂包括板蓝根茶或板蓝根颗粒。
3.根据权利要求1所述的一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，其特征在于，所述的含有抗氧化活性板蓝根多糖的粗多糖粉末可进一步复溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子，再以乙醇沉淀，得到抗氧化活性板蓝根多糖。
4.根据权利要求3所述的一种制备抗氧化活性板蓝根多糖的方法，其特征在于，获取抗氧化活性板蓝根多糖包括以下步骤：
(1)将粗多糖粉末以30～100倍质量的蒸馏水溶解，控制转速为3500～4500rpm离心10～15min，取上清液；
(2)在上清液中按照1～5×103U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37℃下酶解4～6h，煮沸10min，控制转速为3500～4500rpm离心10～15min除去变性蛋白，收集上清液；
(3)将上清液转入12000～14000Da的透析袋，于蒸馏水中透析24～48h，取透析袋内溶液减压浓缩至原体积的1/5～1/10，加入浓缩后体积1～5倍量无水乙醇进行二次沉淀，静置，离心取沉淀物，减压干燥，得到抗氧化活性板蓝根多糖。
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