CN103843561A - 一种抗旱性种质的筛选方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种抗旱性种质的筛选方法，采用琼脂床进行筛选。采用上述方法种子发芽的介质非常均一，而且重复间的差异非常小，可忽略不计，可从大量的上千份的品种中帅选出抗旱性材料，效率高，可重复性好、准确性高，操作简单，水分散均匀，筛选过程中无需补水操作。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗旱性种质的筛选方法。
背景技术
干旱是影响植物生长发育的主要环境因子之一，烟草在生长过程中，特别是从团棵期进入旺长期常常遭遇干旱，干旱已经成为影响营养生长的重要因素。筛选抗旱种子的筛选成为解决上述问题的有效途径之一。
传统上鉴定抗旱的方法主要是采用田间鉴定，但田间鉴定周期长，可重复性差，另外受栽培环境影响较大。所以选择在种子萌发到幼苗生长前期鉴定是比较方便快键的。种子的发芽床主要包括纸床、沙床和土床，在烟草种子上主要选用纸床，因为烟草种子很小，而沙床和土床的颗粒相对又比较大，如果用沙床或土床则烟草种子容易丢失，但纸床存在操作繁琐、难控制、准确性不高等缺点，如果在试验过程中不淋水，则容易造成过渡干旱，导致所有样本均死亡，难以区分抗旱性，如果中间淋水又无法控制量，过少作用不明显，过量又可能就达不到干旱试验的目的。另外，无论是纸床还是沙床和土床，均存在水分分布不均匀，可重复性差，筛选准确性不高的缺陷。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗旱性种质的筛选方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种抗旱性种质的筛选方法，采用琼脂床进行筛选。
筛选时，最好挑选健康有生活力的种子，这样可提高筛选效率。采用上述方法种子发芽的介质非常均一，而且重复间的差异非常小，可忽略不计，可从大量的上千份的品种中帅选出抗旱性材料，效率高，可重复性好、准确性高，操作简单，水分散均匀，筛选过程中无需补水操作。
为了保证所筛选出种质的抗旱性能，琼脂床的浓度为不小于16g/L。
为了提高筛选的准确性，琼脂床的浓度为16-28g/L。
为了进一步保证筛选的准确性，琼脂床的浓度为17g/L。
抗旱性种质的筛选方法优选，在琼脂床上均匀点播种子，然后将琼脂床放置在20-30℃，RH>90%，光照和黑暗12h交替的人工气候培养箱中培养，筛选抗旱性种质。
采用上述方法，可根据不同种子的类型，确定发芽时间，期限到时，不出现萎蔫或萎蔫率很少的为抗旱性种质。上述筛选方法准确性高、可重复性强。
种子的行距与株距均为种子长度的3倍以上。这样可进一步提高筛选的准确性，尽可能低避免种子相互之间的影响。
上述方法中所述种子优选为烟草种子。
当为烟草种子时，上述方法，10天时，种子萎蔫率≤5%的为抗旱性种质，而5%≤种子萎蔫率≤50%为中等型种质，种子萎蔫率≥50%为干旱敏感性种质。申请人经研究发现：当时间为10天时，可准确地筛选出是否是抗旱性种质。
上述萎蔫率=萎蔫幼苗的个数/试验总苗数（萎蔫：指在琼脂床已经发芽的幼苗由于缺水幼苗长势出现问题）。
采用上述方法可准确筛选出抗旱性种质。
本发明抗旱性种质的筛选方法，操作简单，在发芽过程中无需补水，种子发芽的介质非常均一，可重复性高，可从大量的上千份的品种中筛选抗旱性材料，且筛选准确性高。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
实施例中南江3号、红花大金元和云烟87的种子均由贵州省烟草科学研究所良种繁育推广中心保存和提供。
琼脂粉由上海稼丰公司生产，凝胶强度为900g/cm2,总灰分≤6.5%,重金属<40ppm,铅<10ppm。
种子培育温度为26℃，相对湿度大于90%，并在关照和黑暗12h交替的人工气候培养箱（RZH-850A)中培养，10天时，种子萎蔫率≤5%的为抗旱性种质，而5%≤种子萎蔫率≤50%为中等型种质，种子萎蔫率≥50%为干旱敏感性种质。
培养皿的规格为皿底直径90mm，皿高为15mm，皿底厚为2mm。
实施例1
1、打孔器的制备：在边长为70mm的正方形木板上，固定10行直径为1mm,长为1cm的棍状物，每行固定10个，相邻两行行距和相邻两列列距均为4mm。
2、将上述打孔器棍状物向下插入到培养皿中。
3、采用SX-500高压灭菌锅将琼脂粉溶解,得所需浓度的琼脂溶液，将所得琼脂溶液注入步骤2中的培养皿中，使液态琼脂厚为6mm，冷却后，垂直轻轻拔出打孔器，在琼脂床上留下了播种孔100个。
根据上述方法分别制备浓度为17%、22%的琼脂床，然后在上述琼脂床上的孔中点种南江3号、红花大金元和云烟87。
在培养皿中平铺2张滤纸，用蒸馏水淋湿滤纸（1-1.5ml/100cm2），得纸床作为对照，其点种的种子数量和间距同琼脂床(实验过程中需要控制纸床上蒸馏水的量，在第5天和第10天分别补充少量的水(1-1.5ml/100cm2)，避免过渡干旱导致种子死亡。而琼脂床在实验过程中无需补充任何水分。
表1抗旱性种质琼脂床筛选方法
注：每个处理均采用平均值±标准偏差表示P<0.05
上述一次、二次分别指一次操作的结果和重复操作的结果。从实验结果可明显看出，种子在琼脂床上的生长均匀性明面比纸床的要好很多，且在琼脂床点种后，无需补水等操作。且纸床的结果准确性不高，影响判断。
由琼脂床实验准确地得出了中南江3号、红花大金元和云烟87分别为公知的抗旱型种质、中等型种质和敏感型种质，进而验证了琼脂床的准确性。
Claims (9)
1.一种抗旱性种质的筛选方法，其特征在于：采用琼脂床进行筛选。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：琼脂床的浓度为不小于16g/L。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：琼脂床的浓度为16-28g/L。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：琼脂床的浓度为17g/L。
5.如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于：琼脂的深度不小于0.5cm。
6.如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于：在琼脂床上点播种子，然后将琼脂床放置在20-30℃，RH>90%,光照和黑暗12h交替的人工气候培养箱中培养，筛选抗旱性种质。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：种子的行距与株距均为种子长度的3倍以上。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述种子为烟草种子。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于：10天时，种子萎蔫率≤5%的为抗旱性种质，而5%≤种子萎蔫率≤50%为中等型种质，种子萎蔫率≥50%为干旱敏感性种质。
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