CN104663431A - 利川黄连地方良种选育方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利川黄连地方良种选育方法。本发明解决杂交育种技术和诱导育种技术或基因育种技术都有改变道地中药材品质可能的风险的问题，其技术方案要点是：步骤一，建立材料圃，步骤二，建立株行圃，步骤三，建立株系圃，步骤四，进行株系对比试验，株系圃定植足四年时，套袋繁种开展品系对比试验，在株系圃内选择生长势旺盛，无病无虫的单株套袋繁种，夏至进行分株系采收，脱粒晒干后分别按沙种3:1比例混合存放于阴凉出越夏，10月分株系圃播种育苗，步骤五，进行株系大区高产试验，供试材料为四份，分别为选定的第一株系有性繁殖种苗和选定的第一株系无性扦插苗；选定的第二株系有性繁殖种苗和选定的第二株系无性扦插苗；进行推广。

Description

利川黄连地方良种选育方法

技术领域

本发明属于一种黄连种植方法，涉及一种利川黄连地方良种选育方法。

背景技术

黄连有味连、雅连、云连之分。本技术研究对象为味连。

黄连(Coptis chinensis Franch.)别名：味连、川连、鸡爪连，属毛茛科、黄连属多年生草本植物，叶卵状三角形，三全裂，中央裂片卵状菱形，羽状深裂，边缘有锐锯齿，侧生裂片不等，2深裂；叶柄长5-12cm。黄连清热燥湿，泻火解毒。用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。酒黄连善清上焦火热。时珍曰︰黄连，汉末李当之本草，惟取蜀郡黄肥而坚者为善。蜀郡之黄连泛指今渝东的石柱县、武隆县和湖北的利川市、恩施市和宣恩县，上述产地统称为中国南岸味连产区。在主产区内尤以七岳山系东西两侧的湖北的利川市和重庆的石柱县为核心产区。黄连是利川道地中药材品种中栽培面积最大，土地生产率最高，与农民致富关联性最大的品种。常年种植面积10万亩，占全国黄连种植总面积的60％左右。先后获得中国“黄连之乡”，“中国生态黄连之乡”称号，其建南镇被命名为“中国黄连第一镇”。利川黄连2008年获得地理标志商标，2009年中国“农产品区域公用品牌评比进入100强”，价值5.99亿元。利川黄连道地品质是因为品种的遗传稳定、特定的生态环境，较高的疗效、悠久的传统的栽培、加工、炮制工艺及医患口碑成为驰名中外的中药材。黄连在利川栽培历史悠久，【利川黄连志】载：“始于唐，盛于明清......”。

利川黄连栽培种，从叶片表面的蜡质厚薄及均匀程度可以分为三大类型。分别为大花叶类型、小花叶类型和无光叶类型。大花叶和小花叶的区分在于黄连叶表缘叶脉展布有淡黄晕斑构成的状似花叶的斑块的大小、多少和明亮程度；无光叶则无大、小花叶叶表面显现的斑块。多年栽培经验表明：大花叶生长势强，分支较少但粗长肥壮；无光叶表现为生长势较弱，分支较多但枝条瘦弱，小花叶介于二者之间。利川黄连经过多年的栽培，已经形成基因频率和基因型频率相对稳定的群体。而且在系统群体中，有差异的群体出现的频率世代之间比较稳定。特别是无光叶种群，在劳动力成本不断攀升的时下，明显制约种植规模的扩大和投资效益的提高。

发明内容

本发明避免道地中药材可能因杂交育种技术、诱导育种技术或基因育种技术都有可能改变道地中药材品质的问题，提供一种利川黄连地方良种选育方法。

1.本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利川黄连地方良种选育方法，其特征在于：包括以下步骤，

步骤一，建立育种材筛选料圃,从黄连定植足四年的种植大田，采得黄连种子充分混匀后称取3.0kg沙培越夏，于10月播种，次年4月移栽，建圃4亩，亩定植50000株，底肥追肥和管理与种植大田相同，定植第二年在大田中选择大花叶、小花叶和无光叶特征明显且生长势好的各30个典型单株,每个类型确定的30个典型单株于第四年早春初苔期进行套袋，夏至前后分单株采收获得株行圃繁殖材，采收的单株黄连种子，按单株编号与三倍河沙混合装入牛皮纸袋，堆存于室内阴凉处越夏，同时建立单株档案；

步骤二，建立株行圃，收获种子当年10月整地搭棚600平方米播种,播种时划分大花叶、小花叶和无光叶三个大区，每个大区划分30个小区，每个小区净播种面积2平方米，区间走道50cm，按类型分单株播种，合计建立株行谱苗圃90个，在建立株行苗圃的次年四月，选地力均衡连片的水田15亩开厢搭棚，以其居中方正的四亩作为株行圃用地，对其四亩地先等宽划分三个大区，大区之间留观察走道1.0m，株行圃面积以单株苗圃最小出苗量250株确定，按行距40cm和株距20cm计算，每个株行圃定植面积20平方米，起厢搭棚时每个大区搭棚15个，每个棚长41m，每厢定植两个株行，株行间间隔0.5m，株行圃周边留置观察走道1.0m，走道外连片种植黄连；在株行圃定植足4年时在11月初对株行圃进行反复次测产，按照生长势、抗逆性、单株生物学产量、经济产量、根状茎分支数、分支长度和断面直径指标进行分类调查，次年早春，对入选的株行圃中选优势单株实行套袋繁种，夏至前后分株行采收种子，脱粒晒干后分别按3：1的沙种比混合存放于阴凉出越夏，10月进行分株行圃播种育苗；

步骤三，建立株系圃，对入选的株行圃的黄连种子10月进行分株行圃播种育苗，次年根据种苗量定植，定植面积0.5亩；采用与步骤二相同的方式进行观察和测产，对入选的株系进入株系对比试验；

步骤四，进行株系对比试验，株系圃定植足四年时，在入选的株系圃内，选择生长势旺盛，无病无虫的单株套袋繁种，夏至前后进行分株系圃采收，脱粒晒干后分别按沙种3:1比例混合存放于阴凉出越夏，10月分株系圃播种育苗，

步骤五，进行株系大区高产试验，供试材料为四份，分别为选定的第一株系有性繁殖种苗和选定的第一株系无性扦插苗；选定的第二株系有性繁殖种苗和选定的第二株系无性扦插苗；

步骤六，结合株系对比试验结果和株系大区高产试验结果选择出黄连单株干品黄连重量14-16克左右，亩产600kg以上，单株分支4至5个，小檗碱含量高于7％，生物碱总量高于10％，感官指标符合2010版药典描述特征的黄连为育种目标进行推广。

作为优选，步骤三中的取样方法为，每个株行圃对角五点取样10株，室内考测绿叶数和绿叶面积，再经烤箱烘烤至含水量为12％时用电子天平测算生物学产量。

作为优选，株系对比试验中，对比试验方案为小区面积0.1亩，每小区定植5000株，株行距为20cm*30cm，设3次重复，随机布置，每小区施用N:P:K为0.15:0.15:0.15复合肥15kg加沃土特生物活性菌肥1000g两者充分拌匀后撒施并盖1-2cm薄土，追肥与管理与大田同，定植后每小区标定10株进行观察记载，定植足四年之早春每小区优选300株左右套袋繁种，同年起挖测产，起挖时间为公历9月中旬，对入选进入大区对比试验的株系套袋单株在起挖时采用无性繁殖方法育苗，以无性繁殖方法育苗考察遗传稳定性。有性繁殖采种育苗同株系圃，无性繁殖方法为：1用1000倍多菌灵对套袋株消毒；2消毒7天后，先挖出套袋株，缘分枝顶端向下0.15cm出连叶剪下即为插穗，随剪随插；扦插时先用浓度为每kg含ABT500-2000mg的水溶液速沾5-10秒，扦插要求土壤压实，扦插当天下午6-7点时，浇透生根水，以苗圃表面有局部积水为度。

作为优选，在所述株系大区高产试验中，有性繁殖大区试验面积每个株系为3亩，无性繁殖大区试验每个株系面积为0.15亩，施肥水平位每亩N:P:K为0.15:0.15:0.15复合肥150kg加沃土特生物活性菌肥5000g，起厢和搭棚同株系圃。追肥与管理与大田同，大区高产试验供试品系采用隔离封闭方式进行，试验株系之间和与大田黄连生产地之间间隔不低于500m，从定植足四年开始，用纱网屏蔽繁种，通过高产试验获取单株干品黄连的重量、枝长和发病率，从株行圃开始到大区对比及至推广育种，每年进行不定期、经常性的除杂去劣，不断地提纯复壮，得到遗传性状稳定、高产优质的利川黄连地方良种。

本发明的实质性效果是：防止了杂交育种技术和诱导育种技术或基因育种技术都有改变道地中药材品质可能的风险，确保了黄连药材的道地性，生产高产优质黄连，提高种植户的经济效益。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。

实施例1：

一种利川黄连地方良种选育方法，包括以下步骤，

步骤一，建立材料圃，从黄连定植足四年的种植大田，采得黄连种子10.5kg，充分混匀后称取3.0kg沙培越夏，于10月播种，次年4月移栽，建圃4亩，亩定植50000株，底肥追肥和管理与种植大田相同，定植第二年在大田中选择大花叶、小花叶和无光叶特征明显且生长势好的各30株黄连并做好标记，于第四年早春进行初苔期套袋，夏至前后分单株采收获得株行圃繁殖材，采收的单株黄连种子，按单株编号与三倍河沙混合装入牛皮纸袋，堆存于室内阴凉处，同时建立单株档案；

步骤二，建立株行圃，收获种子当年10月整地搭棚600平方米播种。播种时划分大花叶、小花叶和无光叶三个大区，每个大区划分30个小区，每个小区净播种面积2平方米左右，小区间走道50cm，按类型分单株播种，合计建立株行谱苗圃90个，在建立株行圃苗圃的次年四月，选地力均衡连片的水田15水亩开厢搭棚，以其居中方正的四亩作为株系圃用地，对其四亩地先等宽划分三个大区，大区之间留观察走道1.0m，株系圃面积以250株的单株苗圃最小出苗量确定，按行距40cm和株距20cm计算，每个株系圃厢面宽1.2m，厢长10m定植面积为20平方米，起厢搭棚时每个大区搭棚15个，每个棚长41m，株系圃每厢定植两个株系，株系间间隔0.5m，株系圃周边留置观察走道1.0m，走道外连片种植黄连；

步骤三，建立株系圃，在株行圃定植足4年时在11月初对株行圃进行若干次测产，按照叶片数、绿叶叶面积、单株生物学产量、根状茎分支数、分支长度和断面直径等指标进行分类统计后，计算得出遴选依据，次年早春，对入选的株行圃实行套袋繁种，夏至前后分株行圃采收种子，脱粒晒干后分别按3：1的沙种比混合存放于阴凉出越夏，10月进行分株行圃播种育苗，每个株系圃育苗面积约0.5亩进入株系对比试验；

步骤四，进行株系对比试验，对入选株系在株系在定植第四年时选择生长势旺盛，无病无虫的单株套袋繁种，夏至进行分株系采收，脱粒晒干后分别按沙种3:1比例混合存放于阴凉出越夏，10月分株系圃播种育苗进入大区对比试验；

步骤五，进行株系大区高产试验，供试材料为四份，分别为选定的第一株系有性繁殖种苗和选定的第一株系无性扦插苗；选定的第二株系有性繁殖种苗和选定的第二株系无性扦插苗；

步骤六，结合株系对比试验结果和株系大区高产试验结果，选择黄连单株干品黄连重量14-16克左右，亩产600kg以上，单株分支4至5个，小檗碱含量高于7％，生物碱总量高于10％，感官指标符合2010版药典描述特征的黄连品系进行推广。

步骤三中的取样方法为，每个株行圃对角五点取样10株，室内考测绿叶数和绿叶面积，再经烤箱烘烤至含水量为12％时用电子天平测算生物学产量。

株系对比试验中，对比试验方案为小区面积0.1亩，每小区定植5000株，株行距为20cm*30cm，设3次重复，随机布置，每小区施用N:P:K为0.15:0.15:0.15复合肥15kg加沃土特生物活性菌肥1000g两者充分拌匀后撒施并盖1-2cm薄土，追肥与管理与大田同，定植后每小区标定10株进行观察记载，定植足四年之早春每小区优选300株左右套袋繁种，同年起挖测产，起挖时间为公历9月中旬，对入选进入大区对比试验的株系套袋单株在起挖时采用无性繁殖方法育苗与有性繁殖方法育苗，观察遗传稳定性；有性繁殖采种育苗同株系圃，无性繁殖方法为：1用1000倍多菌灵对套袋株消毒；2消毒7天后，先挖出套袋株，缘分枝顶端向下0.15cm出连叶剪下扦插插穗，随剪随插；扦插时先用浓度为每kg含ABT500-2000mg的水溶液速沾5-10秒，扦插要求土壤压实，扦插当天下午6-7点时，浇透生根水，以苗圃表面有局部积水为度。

在所述株系大区高产试验中，有性繁殖大区试验面积每个株系为3亩，无性繁殖大区试验每个株系面积为0.15亩，施肥水平位每亩N:P:K为0.15:0.15:0.15复合肥150kg加沃土特生物活性菌肥5000g，起厢和搭棚同株系圃。追肥与管理与大田同，大区高产试验供试品系采用隔离封闭方式进行，试验株系之间和与大田黄连生产地之间间隔不低于500m，定植足四年时，用纱网屏蔽繁种，通过高产试验获取单株干品黄连的重量、枝长和发病率。

从株行圃开始到大区对比试验及进入推广后的繁种田，都必须每年不定期、经常地进行除杂去劣，通过多代不断地提纯复壮，得到遗传稳定、高产优质的地方黄连良种。

以申请人实验数据为例，

在建立株系圃时，在株行圃定植足4年时(黄连繁种以定植四足年最好)，11月初对株行圃反复进行测产，按照叶片数，绿叶叶面积，单株生物学产量，根状茎分支数、分支长度和断面直径等指标进行分类统计后，得出平均数据，经测试，无光叶与小花叶均不符合品种选育方向，只保留种质资源，确立以大花叶建立株系圃。而在大花叶株行圃中，优选株号003,株号013，株号019，株号023，株号027五个不仅在生物学产量分居150个株行圃前5名，而且分支数处5.5-5,8之间，分支长度达8,5cm，分支断面直径0.8cm以上进入株系圃试验，其余的放在种植资源圃内备用。株系对比试验后得出结果如表1所示：

表1：株系对比试验结果表

高产试验结果如表2所述：

项目/株系	003	019
			白绢病	0.2％	0.1％
白粉病	0.1％	0.1％
			试验总产量	1858.2	1869.5
平均亩产	619.7	623.2
			平均分枝数	5.9	5.7
平均分枝长	7.6	7.9
			分枝断面直径	0.76	0.80
小檗碱含量	7.80％	7.81％
			生物碱总量	11.0％	11.3％
纯度	93％	98.5％

表2：高产试验结果表

同期开展的扦插育苗对比试验结果如表3所述：

项目/株系	003-B	019-B
			白绢病	0.0％	0.0％
白粉病	0.1％	0.06％
			炭疽病	0.2％	0.1％
试验总产量	186.3	189.6
			平均亩产	621	632
平均分枝数	5.7	5.3
			平均分枝长	8.1	8.3
分枝断面直径	0.79	0.82
			小檗碱含量	7.77％	7.80％
生物碱总量	11.2％	11.4％
			纯度	98％	99.5％

表3：扦插育苗对比试验结果表

经过分析得出，株系019基本符合育种目标。进入扩繁推广。株系003不太理想，进一步提纯复壮；株系003和株系019无性繁殖相对有性繁殖抗病性显著增强，丰产性更突出，这为黄连良种选育提供一种新的方法，但缺陷是繁殖系数较低。如果以其方法纯化，再采用有性繁殖育种，可能效果更好。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (4)

1.一种利川黄连地方良种选育方法，其特征在于：包括以下步骤，

步骤一，建立育种材筛选料圃,从黄连定植足四年的种植大田，采得黄连种子充分混匀后称取3.0kg沙培越夏，于10月播种，次年4月移栽，建圃4亩，亩定植50000株，底肥追肥和管理与种植大田相同，定植第二年在大田中选择大花叶、小花叶和无光叶特征明显且生长势好的各30个典型单株,每个类型确定的30个典型单株于第四年早春初苔期进行套袋，夏至前后分单株采收获得株行圃繁殖材，采收的单株黄连种子，按单株编号与三倍河沙混合装入牛皮纸袋，堆存于室内阴凉处越夏，同时建立单株档案；

步骤二，建立株行圃，收获种子当年10月整地搭棚600平方米播种,播种时划分大花叶、小花叶和无光叶三个大区，每个大区划分30个小区，每个小区净播种面积2平方米，区间走道50cm，按类型分单株播种，合计建立株行谱苗圃90个，在建立株行苗圃的次年四月，选地力均衡连片的水田15亩开厢搭棚，以其居中方正的四亩作为株行圃用地，对其四亩地先等宽划分三个大区，大区之间留观察走道1.0m，株行圃面积以单株苗圃最小出苗量250株确定，按行距40cm和株距20cm计算，每个株行圃定植面积20平方米，起厢搭棚时每个大区搭棚15个，每个棚长41m，每厢定植两个株行，株行间间隔0.5m，株行圃周边留置观察走道1.0m，走道外连片种植黄连；在株行圃定植足4年时在11月初对株行圃进行反复次测产，按照生长势、抗逆性、单株生物学产量、经济产量、根状茎分支数、分支长度和断面直径指标进行分类调查，次年早春，对入选的株行圃中选优势单株实行套袋繁种，夏至前后分株行采收种子，脱粒晒干后分别按3：1的沙种比混合存放于阴凉出越夏，10月进行分株行圃播种育苗；

步骤三，建立株系圃，对入选的株行圃的黄连种子10月进行分株行圃播种育苗，次年根据种苗量定植，定植面积0.5亩；采用与步骤二相同的方式进行观察和测产，对入选的株系进入株系对比试验；

步骤四，进行株系对比试验，株系圃定植足四年时，在入选的株系圃内，选择生长势旺盛，无病无虫的单株套袋繁种，夏至前后进行分株系圃采收，脱粒晒干后分别按沙种3:1比例混合存放于阴凉出越夏，10月分株系圃播种育苗，

步骤五，进行株系大区高产试验，供试材料为四份，分别为选定的第一株系有性繁殖种苗和选定的第一株系无性扦插苗；选定的第二株系有性繁殖种苗和选定的第二株系无性扦插苗；

步骤六，结合株系对比试验结果和株系大区高产试验结果选择出黄连单株干品黄连重量14-16克左右，亩产600kg以上，单株分支4至5个，小檗碱含量高于7％，生物碱总量高于10％，感官指标符合2010版药典描述特征的黄连为育种目标进行推广。

2.根据权利要求1所述的利川黄连地方良种选育方法，其特征在于：步骤三中的取样方法为，每个株行圃对角五点取样10株，室内考测绿叶数和绿叶面积，再经烤箱烘烤至含水量为12％时用电子天平测算生物学产量。

3.根据权利要求1所述的利川黄连地方良种选育方法，其特征在于：株系对比试验中，对比试验方案为小区面积0.1亩，每小区定植5000株，株行距为20cm*30cm，设3次重复，随机布置，每小区施用N:P:K为0.15:0.15:0.15复合肥15kg加沃土特生物活性菌肥1000g两者充分拌匀后撒施并盖1-2cm薄土，追肥与管理与大田同，定植后每小区标定10株进行观察记载，定植足四年之早春每小区优选300株左右套袋繁种，同年起挖测产，起挖时间为公历9月中旬，对入选进入大区对比试验的株系套袋单株在起挖时采用无性繁殖方法育苗，以无性繁殖方法育苗考察遗传稳定性。有性繁殖采种育苗同株系圃，无性繁殖方法为：1用1000倍多菌灵对套袋株消毒；2消毒7天后，先挖出套袋株，缘分枝顶端向下0.15cm出连叶剪下即为插穗，随剪随插；扦插时先用浓度为每kg含ABT500-2000mg的水溶液速沾5-10秒，扦插要求土壤压实，扦插当天下午6-7点时，浇透生根水，以苗圃表面有局部积水为度。

4.根据权利要求1所述的利川黄连地方良种选育方法，其特征在于：在所述株系大区高产试验中，有性繁殖大区试验面积每个株系为3亩，无性繁殖大区试验每个株系面积为0.15亩，施肥水平位每亩N:P:K为0.15:0.15:0.15复合肥150kg加沃土特生物活性菌肥5000g，起厢和搭棚同株系圃。追肥与管理与大田同，大区高产试验供试品系采用隔离封闭方式进行，试验株系之间和与大田黄连生产地之间间隔不低于500m，从定植足四年开始，用纱网屏蔽繁种，通过高产试验获取单株干品黄连的重量、枝长和发病率，从株行圃开始到大区对比及至推广育种，每年进行不定期、经常性的除杂去劣，不断地提纯复壮，得到遗传性状稳定、高产优质的利川黄连地方良种。