CN103823059B - 一种唾液直接检测装置 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种唾液直接检测装置，包括检测盒、唾液过滤层和免疫层析检测条，所述唾液过滤层采用多孔性材料并经过化学处理，唾液过滤层与免疫层析检测条相叠连接，并置于检测盒内；检测盒由底盖和顶盖组成，检测盒位于唾液过滤层一端的顶盖上设置多个小孔。与现有技术相比，本发明的唾液直接检测装置解决了唾液因粘稠取样困难的问题，唾液无须取出后再加缓冲液处理后检测，操作简便、快捷；检测盒顶盖的多孔结构，便于辗转于口腔，刺激口中唾液腺，促进唾液的分泌与收集，可用来检测艾滋病毒和毒品。

Description

一种唾液直接检测装置
技术领域
本发明涉及一种唾液检测装置，特别是一种自口腔中直接检测艾滋病毒或毒品的直检装置，属于生物领域。
背景技术
毒品对社会以及人的身心都有很大危害，而毒品犯罪也是当今国际社会的一大公害。其包括母体大麻，大麻（THC），安非他命（AMP），甲醛安非他命（M-AMP），可卡因（COC），吗啡因（MOR），苯双氮嗪（BENZ），天使粉（PCP），巴比妥（Barb），二甲基亚硝胺NDMA，尼古丁Cotinin（Nicotine），羟考酮Oxycodone（OXY），美沙酮Methadone（MTD），三醋酸纤维素TCA等。
目前市场以检测尿液和血液为主，但存在着取样复杂、样品肮脏、侵犯隐私、样品保真性的怀疑等问题，因此一种直接检测唾液中毒品便显得十分重要。唾液检测毒品的优点包括：1.取样方便、干净、卫生，样品不具传染性，检测快速，样品真实性高；2.检测装置简便，相比组织、毛发样本检测需要用到ELISA、GC-MS、HPLC等大型仪器成本较低，且适合现场检测；3.根据药代动力学原理，唾液检测到的大部分是药物本身，相比尿液检测的是药物的代谢产物更为优越；4.可节省大量人力和物力。因此，这种快速的、非侵入性的检测手段将受到广泛应用。
直接从唾液中检测微量毒品和传染性病毒一直是国际上难题之一，毒品检测主要对象大麻（THC）有两种化学结构：一为口服后滞留在口腔中的原型（或称母体）大麻△-9-THC（分子式为C21H30O2，半衰期25-36小时）。食服大麻后，20-30分钟含量在口腔中迅速下降，并降至20ng/ml并维持4-8小时，此时服用者反应会相对迟钝。国际上将20ng/ml△-9-THC作为检查的临界值。△-9-THC经人体内代谢便改变化学结构为代谢型11-nor-9-Carboxy-THC（分子式为C21H28O4，半衰期5.2-6.2天），而尿液检测是检测后者。
同样的，艾滋病毒的检测一般的需采集血样。具有血样检测灵敏度的非人体侵入型唾液检测，为市场青睐。美国已有获专利的艾滋病毒的唾液检测产品。这种测试需要收集从嘴里的唾液测试设备,然后插入设备到特定的化学缓冲让唾液解散并执行测试。测试套件包含一个小瓶的化学缓冲。测试程序实际上是两个步骤。
其次，相关的唾液检测装置，相当大部分的唾液根本不能从免疫层析条上流过。
发明内容
本发明的目的在于提供一种唾液直接检测装置。
本发明的一种唾液直接检测装置，包括检测盒、唾液过滤层和免疫层析检测条，所述唾液过滤层采用多孔性材料并经过化学处理，唾液过滤层与免疫层析检测条相叠连接，并置于检测盒内；检测盒由底盖和顶盖组成，检测盒位于唾液过滤层一端的顶盖上设置多个小孔。
所述免疫层析检测条依次由样品吸收区、固相标记抗体区、检测区T、对照区C和吸水区组成，唾液经过滤后进入免疫层析检测条的样品吸收区。
所述的化学处理可以采用0.1wt%的吐温-20和pH值为7.2磷酸缓冲液配成的溶液，或洗涤剂配制成的溶液处理、干燥。
所述的唾液过滤层优先采用玻璃纤维、聚乙酯、尼龙或塑料泡沫。
所述的检测盒的底座采用塑料或其它材料。
与现有技术相比，本发明的唾液直接检测装置解决了唾液因粘稠取样困难的问题，唾液无须取出后再加缓冲液处理后检测，操作简便、快捷；检测盒顶盖的多孔结构，便于辗转于口腔，刺激口中唾液腺，促进唾液的分泌与收集，可用来检测艾滋病毒和毒品。
附图说明
图1是本发明免疫层析检测条图。
图2是本发明唾液直检装置图。
具体实施方式
材料来源及其层析条成份组成 ：
1.美国司泰普公司（STAPLES,SAN DIEGO, CA)生产的10mil PVC塑料壳，涂以双面粘胶；
2.美国渥特明公司(WHATMAN,FAIRFIELD,NJ)生产的硝基纤维膜；
3.美国渥特明公司（WHATMAN,FAIRFIELD,NJ）生产的吸水纸片；
4.美国泊乐-吉乐明公司（PALL-GELMAN,ANN ARBOR,MI）生产的玻璃纤维纸；
5.HIV基因蛋白gp-41-120，gp-36，p-24，（JAJ International,San Diego,CA.)
6.毒品单克隆抗体和毒品蛋白载体（ARISTA BIOLOGY Inc.，Allentown,PA)
7.吐温-20，牛血清白蛋白。
唾液过滤层12的制备：在多孔性材料上（玻璃纤维、聚乙酯、尼龙或塑料泡沫）采用化学（如采用0.1wt%的吐温-20和pH值为7.2磷酸缓冲液配成的溶液，或洗涤剂配制成的溶液）处理、干燥后使用。
免疫层析检测条13的制备方法（见ZL 00118669.8, ZL98122892.5, ZL03142460.0）：
1.标记抗原的制备：将所需抗原加入所需量胶体金溶液，搅拌十分钟后，加入1/10体积的1-2wt%牛血清白蛋白液作稳定剂,高速离心,取得红色沉淀物,即标记抗体；
2.将上述沉淀物溶解于缓冲剂中,铺于玻璃纸上,真空抽干；
3.包被抗原制备:将与标记抗原相对应的另一抗原溶液用喷雾方法划线于硝基纤维膜上,于37摄氏度烘干20分钟；
4.装配:将上述各组分贴在有胶面的塑料薄板上,上下两端再贴上吸水纸，切割成条,将制作好的唾液过滤层12与免疫层析检测条13相叠后，再装入塑料制成的检测盒11之中，检测盒11位于唾液过滤层12一端的顶盖上设置多个小孔，可方便唾液从检测盒11顶盖进入唾液过滤层12中。
工作原理
艾滋病毒免疫层析检测条13工作原理：待测唾液经过唾液过滤层加入免疫层析检测条第1区，液体基于毛细管现象上升。溶介第2区的标记抗原体。如待测唾液中有HIV抗体成分，形成标记抗原抗体复合物, 标记抗原抗体复合物随液体上升至试验区（T)，形成“标记抗原-HIV抗体-抗原”复合物而形成一条沉淀线，如使用金标抗原则形成一条玫瑰色带，液体继续上升至对照区（C)，又形成一条沉淀线。两条沉淀线即显示唾液中有HIV抗体的存在。检测结果艾滋病毒感染为阳性。如唾液中无HIV抗体的存在，则试验区（T）没有沉淀线出现。检测结果为阴性。
毒品免疫层析检测条13工作原理：待测唾液经过滤后进入免疫层析检测条13的第1区，液体基于毛细管现象上升，并溶解第2区的标记抗毒品抗体。如待测唾液中无毒品成分，标记抗体随液体上升至第3区，形成“标记抗体-毒品载体蛋白”复合物而形成一条沉淀线，如使用金标记物则形成一条玫瑰色带，液体继续上升至第4区，又形成“标记抗体-抗抗体复合沉淀线”显示两条沉淀线结果即显示唾液中无毒品的存在。如唾液中有毒品存在并其浓度在检测临界值以上，则毒品本身会竞争中和掉标记抗体，从而予特定时间，如5-10分钟在第3区不出现任何沉淀线，而显示唾液中毒品浓度在临界值以上，检测结果为阳性。
唾液过滤层12的工作原理为：唾液经过滤其中液体活性成分进入艾滋病毒或毒品免疫层析检测条13，而唾液中粘稠物和细粒则滞留在唾液过滤层12中。
实例一艾滋病毒唾液直接检测装置
本实例使用同类型血清用免疫层析检测条，加上唾液过滤层或不加唾液过滤层对血清样品和唾液样品分别进行检测。
应用免疫层析检测条：HIV-Ⅰ抗体，HIV-II抗体，P-24抗体，检测结果如表1所示。
表1 加上唾液过滤层或不加唾液过滤层对血清样品和唾液样品的检测结果
这里，样本成功迁涉数，指加入样品后，于读数时间20分钟样品成功上行完免疫层析条，且层析条上对照线（C）出现沉淀线。如样本上行至半途中止或根本不上行则为不成功迁涉。如在层析条第1区不加唾液过滤层则部分样本不能成功迁涉。如在层析条第1区加上唾液过滤层则100%样本成功完成检测。
传染性病毒艾滋病毒检测：
表2所列结果为检测HIV-Ⅰ型抗体，所用基因蛋白免疫为gp-41-120，抗原浓度为2mg/ml，金标抗原为相配对的gp-41-120。
以唾液直检装置插入口腔，辗转于口腔粘膜数次，取出后，自视窗孔可见色带出现的计数，20分钟记录检测结果。该检测结果与艾滋病毒抗体酶联试剂检测结果一致。
表2 艾滋病毒HIV-Ⅰ抗体中唾液直检法与酶联法比较
从表2可知，两种方法重复相关性100%。
表3所列结果为艾滋病毒HIV-Ⅱ型抗体。所用基因蛋白，免疫为gp-36，免疫抗原浓度为2mg/ml，金标抗原为配对的gp-36。
表3 艾滋病毒HIV-Ⅱ抗体中唾液直检法与酶联法比较
从表3可知，两种方法重复相关性100%。
表 4为检测HIV P-24抗体，所用基因蛋白为相配对的p-24，免疫抗原浓度为2mg/ml。
表4 艾滋病毒HIV P-24抗体中唾液直检法与酶联法比较
从表4可知，两种方法重复相关性100%。
从表1-4可知，结论与现有技术相比，本发明的艾滋病毒唾液直接检测装置解决了唾液因粘稠取样困难的问题，唾液无须取出后再加缓冲液处理后检测，操作简便、快捷，适用性强。
实例二毒品唾液直接检测装置
本实例使用同类型尿用免疫层析条，加上唾液过滤层或不加唾液过滤层对尿样品和唾液样品分别进行检测。
应用免疫层析条：原型大麻，吗啡因，天使粉，检测结果如表5所示：
表5 加上唾液过滤层或不加唾液过滤层对尿液样品和唾液样品的检测结果
这里样本成功迁涉数，指加入样品后，于读数时间5-8分钟样品成功上行完免疫层析条，且层析条上对照线（C）和检测线（T）出现沉淀线。如样本上行至半途中止或根本不上行则为不成功迁涉。如在层析条第1区不加唾液过滤层则50%样本不能成功迁涉。如在层析条第1区加上唾液过滤层则100%样本成功完成检测。
将唾液直检装置开孔的一端插入口腔，辗转于口腔粘膜数次，取出后，自视窗孔可见色带出现的计数，5-10分钟记录检测结果。本实用新型可应用于直接检测毒品。
单个项目毒品唾液检测灵敏度：
应用实例1的检测原理可将不同的毒品载体蛋白和标记抗体，制成不同毒品免疫层析条，对含不同毒品的唾液进行检测，检测的结果如表6所示。
制作为多项毒品项目在同一检测条上一次检测获得多项检测结果， 每条层析条可检测3项毒品项目，将多条检测条，放置在同一检查塑料盒。一次取样加样，获得多项检测结果。
表6各个毒品对应的毒品载体蛋白和毒品特异抗体以及检测结果

Claims (3)

1.一种唾液直接检测装置，该装置包括检测盒(11)、唾液过滤层(12)和免疫层析检测条(13)，其特征在于,所述唾液过滤层(12)采用多孔性材料并经过化学处理，所述唾液过滤层(12)与所述免疫层析检测条(13)相叠连接，并置于所述检测盒(11)内；所述检测盒(11)由底盖和顶盖组成，所述检测盒(11)位于所述唾液过滤层(12)一端的顶盖上设置多个小孔；所述的免疫层析检测条(13)依次由样品吸收区、固相标记抗体区、检测区T、对照区C和吸水区组成，唾液经过滤后进入免疫层析检测条(13)的样品吸收区；所述的化学处理是采用0.1wt％的吐温-20和pH值为7.2磷酸缓冲液配制成的溶液处理、干燥。
2.根据权利要求1所述的唾液直接检测装置，其特征在于所述的唾液过滤层(12)采用玻璃纤维、聚乙酯、尼龙或塑料泡沫。
3.根据权利要求1所述的唾液直接检测装置，其特征在于所述的检测盒(11)的底盖采用塑料。
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