CN103820572A - 一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法 - Google Patents
一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103820572A CN103820572A CN201310737274.4A CN201310737274A CN103820572A CN 103820572 A CN103820572 A CN 103820572A CN 201310737274 A CN201310737274 A CN 201310737274A CN 103820572 A CN103820572 A CN 103820572A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- porcine circovirus
- porcine
- test kit
- pig parvoviral
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241001673669 Porcine circovirus 2 Species 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 title abstract description 6
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 title 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 18
- 241000202347 Porcine circovirus Species 0.000 claims description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 5
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241001135549 Porcine epidemic diarrhea virus Species 0.000 description 4
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 4
- 241000711484 Transmissible gastroenteritis virus Species 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N csfv Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 description 1
- 241000702665 Porcine rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000218636 Thuja Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明的一个目的是提供一种检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒的核苷酸引物，分别为PPVF、PPVR、PCV2F和PCV2R，其中序列PPVF和PPVR为检测猪细小病毒的正义引物和反义引物，序列PCV2F和PCV2R为检测猪圆环病毒2型的正义引物和反义引物。本发明提供的猪细小病毒和猪圆环病毒2型两重PCR检测方法，一次反应能同时检测出PPV和PCV2两种病毒，所用2对引物特异性较好，引物相互之间有较低的同源性及互补性，所述引物敏感性较好。该方法具有简便、快速、经济、高效等优势，利于临床的大量检测，在临床诊断上具有较好的应用前景。
Description
技术领域
本发明提供了一种检测猪细小病毒、猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法，属于生物技术领域。
技术背景
猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)、猪圆环病毒2型病毒(Porcine circocirus type2，PCV2)是目前常见的引起猪繁殖障碍病的DNA病毒。目前，
很多猪场都存在上述病毒引起的疾病，给养猪业造成巨大的经济损失。临床上常呈现混合感染，主要表现为受感染母猪产死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪，不容易区分。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒的核
苷酸引物，分别为PPVF、PPVR、PCV2F和PCV2R，其中序列PPVF和PPVR为检测猪细小病毒的正义引物和反义引物，序列PCV2F和PCV2R为检测猪圆环病毒2型的正义引物和反义引物。
本发明的第二个目的是提供一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病
毒的试剂盒，由以下组分组成：(1)DNA提取试剂为购自北京康为世纪生物技术有限公司的DNA提取试剂盒；(2)2×PCR Mix，包含终浓度为0.4mM的dNTP、4.0mM的MgSO4、80mM的KC1、20mM的Tris-C1和0.1U/μL的Taq DNA聚合酶；(3)引物混合液，含终浓度12μM的猪细小病毒正义引物和反义引物，同时含终浓度为10μM的猪圆环病毒2型正义引物和反义引物；(4)DNA阳性对照，包含35μg/mLPPV和30μg/mLPCV2；(5)阴性对照：DEPC水；(6)高压灭菌水；
本发明的第三个目的是提供一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的方法，包括如下步骤：
(1)提取样品总DNA；
(2)用权利要求1中所述引物对待测样本进行PCR扩增，PCR反应体系为：2×PCRMix12.5μL、引物混合液2μL、模板1μL、高压灭菌水9.5μL，总体积25μL；扩增条件为94℃预变性5min，94℃变性30S，57℃退火30S，72℃延伸45S，循环35cycles，最后72℃延伸8min。同时设阴性对照和阳性对照，阳性对照含
35μg/mLPPV和30μg/mLPCV2，阴性对照为DEPC水；
(3)电泳；
(4)结果分析。
本发明的实验证明，本发明提供的猪细小病毒和猪圆环病毒2型两重PCR检测方法，一次反应能同时检测出PPV和PCV2两种病毒，所用2对引物特异性较好，引物相互之间有较低的同源性及互补性，所述引物敏感性较好。该方法具有简便、快速、经济、高效等优势，利于临床的大量检测，在临床诊断上具有较好的应用前景。
附图说明
图1为PPV、PCV2两重PCR以及单项PCR电泳图结果
图2为PPV、PCV2两重PCR特异性电泳图结果
图3(3a、3b)为PPV、PCV2两重PCR敏感性电泳图结果
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型病毒(PCV2)、两重PCR检测方法 建立。
1引物设计：在GenBank中查找多个毒株，对其进行同源性分析，利用Primer5对上述保守区进行引物设计，对设计出来的两种病毒引物进行引物二聚体分析，以避免引物之间形成稳定的引物二聚体，并对每对引物的扩增序列进行同源性或互补性分析，避免它们之间有较高的同源性或互补性，从而确定2种病毒的引物序列，见表1。
表1
2、PCR反应条件优化
利用本试剂盒的DNA提取试剂分别提取猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)基因组DNA，提取方法参照DNA提取试剂盒操作说明进行。分别以PPV基因组DNA和PCV2基因组DNA和PPV+PCV2混合基因组DNA(体积比为1∶1)为模板，利用本试剂盒进行PCR扩增。所述试剂盒2xPCR Mix，包含终浓度为0.4mM的dNTP、4.0mM的MgSO4、80mM的KC1、20mM的Tris-C1和0.1U/μL的Taq DNA聚合酶；引物混合液，含终浓度12μM的猪细小病毒正义引物和反义引物，同时含终浓度为10μM的猪圆环病毒2型正义引物和反义引物；DNA阳性对照，包含35μg/mLPPV和30μg/mLPCV2；阴性对照为DEPC水；反应总体系为25μL，各试剂的用量如表2所示：
表2
| 编号 | 2xPCR Mix | 引物混合液 | 模板 | 灭菌水 |
| 1 | 12.5μL | 4μL | 阳性对照试样2μL | 6.5 |
| 2 | 12.5μL | 4μL | PPV DNA 2μL | 6.5 |
| 3 | 12.5μL | 4μL | PCV2 DNA 2μL | 6.5 |
| 4 | 12.5μL | 4μL | 灭菌水2μL | 6.5 |
优化后的程序为：94℃预变性2min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸8min，4℃保存。
结果如图1所示，其中1为PPV+PCV2基因组DNA，2为PPV基因组DNA，3为PCV2基因组DNA，4为灭菌水作为空白对照。可以看出，1得到358bp和752bp产物，2得到358bp产物，3得到752bp产物，空白对照无扩增条带。
分别将上述PCR产物送去测序，结果为：358bp的PCR产物的核苷酸序列为PPVGenbank号的KC969643.1的第248-605位核苷酸；752bp的PCR产物的核苷酸序列为PCV2的Genbank号的FJ667593.1的第177-928位核苷酸；因此扩增产物通过测序，其序列与GenBank中查出PCVII、PPV的已知序列比较，证实是目的基因。’
3、特异性检测
分别检测上述涉及的PCR反应的引物PPVF、PPVR、PCV2F和PCV2R的特异性，方法如下：
分别提取PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒)、CSFV(猪瘟病毒)、BVDV(牛病毒性腹泻病毒)、RV(猪轮状病毒)、TEGV(猪传染性胃肠炎病毒)、PEDV(猪流行性腹泻病毒)的RNA，反转录得到PRRSV的eDNA、CSFV的cDNA、BVDV的eDNA、RV的cDNA、TEGV的的cDNA、PEDV的cDNA；提取PCV2(猪圆环病毒2型)、PPV(猪细小病毒)、PRV(猪伪狂犬病毒)的DNA，得到PPVDNA、PCV2DNA和PRV DNA；分别以得到的eDNA和DNA为模板，本试剂盒的引物混合液为引物，按照步骤2中的PCR体系和程序进行扩增，结果如图2的1—9所示，其中1为PPV，2为PRRSV，3为CSFV，4为BVDV，5为RV，6为TEGV，7为PEDV，8为PRV，9为PCV2，可以看出，只有PPV和PCV2有目的条带，分别为358bp和785bp，其他均未见非特异性带，说明两套引物特异性高。
4、敏感性检测
通过分光光度计检测步骤2中得到的PPV基因DNA和PCV2基因DNA浓度，分别为1200μg/μL和1000μg/μL。将PPV基因DNA、PCV2基因DNA、PPV基因DNA和PCV2基因DNA混合液(体积比为1：1)进行10倍系列稀释后分别作为模板，以本试剂盒的引物混合液为引物，按照步骤2的体系和程序进行扩增。
结果见图3a所示，1-6分别为PPV基因DNA的101-106倍稀释的模板；7-12分别为PCV2基因DNA的101-106倍稀释的模板；图3B所示1-6为PPV、PCV DNA混合液的101-106倍稀释的模板；可以看出，无论哪种模板，103倍稀释的模板有比较清晰地目的条带，104倍稀释的模板有比较弱的目的条带，稀释105倍及以上的模板已完全看不到目的条带。
实验证明本发明的两重PCR可以检测到PPV基因DNA的最小浓度为
1.2ng/μL，PCV2基因DNA的最小浓度为1.0ng/μL。
5、重复性
对PPV、PCV2两重PCR方法进行多次重复试验实验结果稳定。
6临床样本检测
利用本实验建立猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒PCR检测试剂盒，对从吉林和河北12个县市采集到的110份猪血清样品进行猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒的检测，同时设阴阳性对照。检测结果为：PPV阳性17份，阳性率为15.45％；PCV2阳性59份，阳性率为53.64％。
序列如下：
PPVF：CAGCAGCACCTAGAAGTGAA
PPVR：GTTCCTGGGTGTTGGTCTCC
PCV2F：TTTATTGTTGGCGAGGAGGGTA
PCV2R：TCCGTGGATTGTTCTGTAGCAT 。
Claims (7)
1.一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法，其特征在于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型的核苷酸引物为PPVF、PPVR、PCV2F和PCV2R，其中序列PPVF和PPVR分别为检测猪细小病毒的正义引物和反义引物，序列PCV2F和PCV2R分别为检测猪圆环病毒2型的正义引物和反义引物。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法，其特征在于，所述的试剂盒由以下组分组成：
(1)DNA提取试剂；
(2)2×PCR Mix：由dNTP、MgSO4、KCl、Tris-Cl缓冲液和Taq DNA聚合酶等组成；
(3)引物混合液：内含终浓度为12μM的猪细小病毒正义引物和反义引物，同时含终浓度为10μM的猪圆环病毒2型正义引物和反义引物。
(4)DNA阳性对照；
(5)阴性对照：DEPC水；
(6)高压灭菌水；
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA提取试剂为DNA提取试剂盒。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，其中所述2×PCR Mix包含终浓度为0.4mM的dNTP、4.0mM的MgSO4、80mM的KCl、20mM的Tris-Cl和0.1U／μL的Taq DNA聚合酶，所述的检测猪细小病毒正义引物和反义引物终浓度均为12μM，所述的检测猪圆环病毒2型的正义引物和反义引物终浓度均为10μM。
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，其中所述阳性对照包含30μg／mLPPV和30μg／mLPCV2。
6.一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的方法，其特征在于所述的方法包括如下步骤：
(1)提取样品总DNA；
(2)用权利要求1中所述引物对待测样本进行PCR扩增；
(3)电泳；
(4)结果分析。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，PCR扩增反应体系为：2×PCR Mix12.5μL、引物混合液2μL、模板1μL、高压灭菌水9.5μL，总体积25μL；扩增条件为94℃预变性5min，94℃变性30S，57℃退火30S，72℃延伸45S，循环35cycles；最后72℃延伸8min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310737274.4A CN103820572A (zh) | 2013-12-24 | 2013-12-24 | 一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310737274.4A CN103820572A (zh) | 2013-12-24 | 2013-12-24 | 一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103820572A true CN103820572A (zh) | 2014-05-28 |
Family
ID=50755858
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310737274.4A Pending CN103820572A (zh) | 2013-12-24 | 2013-12-24 | 一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103820572A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114480743A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-05-13 | 龙岩学院 | 同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的引物和方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101260442A (zh) * | 2007-03-09 | 2008-09-10 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 检测猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒的多重实时荧光定量pcr方法 |
| CN101565761A (zh) * | 2009-05-11 | 2009-10-28 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种用于检测猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒及其混合感染的试剂盒和方法 |
| CN102071259A (zh) * | 2009-11-25 | 2011-05-25 | 河南农业大学 | 猪伪狂犬病毒、猪细小病毒与猪圆环病毒2型多重实时荧光pcr检测引物及方法 |
-
2013
- 2013-12-24 CN CN201310737274.4A patent/CN103820572A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101260442A (zh) * | 2007-03-09 | 2008-09-10 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 检测猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒的多重实时荧光定量pcr方法 |
| CN101565761A (zh) * | 2009-05-11 | 2009-10-28 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种用于检测猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒及其混合感染的试剂盒和方法 |
| CN102071259A (zh) * | 2009-11-25 | 2011-05-25 | 河南农业大学 | 猪伪狂犬病毒、猪细小病毒与猪圆环病毒2型多重实时荧光pcr检测引物及方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 樊振华: "猪细小病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立与应用", 《山西农业科学》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114480743A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-05-13 | 龙岩学院 | 同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的引物和方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chang et al. | Visual detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus using CRISPR‐Cas13a | |
| Ambrosi et al. | SARS-CoV-2: Comparative analysis of different RNA extraction methods | |
| Aebischer et al. | Rapid genome detection of Schmallenberg virus and bovine viral diarrhea virus by use of isothermal amplification methods and high-speed real-time reverse transcriptase PCR | |
| Jiang et al. | Rapid detection of Candida albicans by polymerase spiral reaction assay in clinical blood samples | |
| Xu et al. | Development of multiplex PCR for simultaneous detection of six swine DNA and RNA viruses | |
| CN104561377A (zh) | 呼吸系统常见病原体的实时荧光多重pcr快速检测试剂盒 | |
| CN101643794B (zh) | Prrsv经典株与高致病性变异株双重实时荧光rt-pcr鉴别检测方法 | |
| Reuter et al. | Incidence, diversity, and molecular epidemiology of sapoviruses in swine across Europe | |
| Heinrichs et al. | Barcode identifiers as a practical tool for reliable species assignment of medically important black yeast species | |
| CN103602757B (zh) | 口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡病多重荧光rt-pcr检测方法的建立及其应用 | |
| CN102586477B (zh) | 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和猪瘟病毒的rt-pcr检测及其专用引物 | |
| Zhao et al. | Simultaneous detection and identification of Aspergillus and mucorales species in tissues collected from patients with fungal rhinosinusitis | |
| CN103060474A (zh) | 猪流行性腹泻病毒变异株检测用引物及其检测试剂盒 | |
| Halm et al. | Novel real-time PCR assay for simultaneous detection and differentiation of Clostridium chauvoei and Clostridium septicum in clostridial myonecrosis | |
| CN103243179A (zh) | 猪流行性腹泻病毒的套式pcr扩增引物及其应用 | |
| CN102816857A (zh) | 一种梅毒螺旋体核酸检测试剂盒 | |
| Haramoto et al. | Occurrence of human cosavirus in wastewater and river water in Japan | |
| CN114032337A (zh) | 一种呼吸道病原体检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CN101629217A (zh) | 猪流感病毒rt-lamp检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN103820580A (zh) | 猪圆环病毒2型lamp诊断试剂盒 | |
| Bachofen et al. | Direct RT-PCR from serum enables fast and cost-effective phylogenetic analysis of bovine viral diarrhoea virus | |
| CN102329893B (zh) | 猪圆环病毒ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒的多重pcr检测及其专用引物 | |
| CN103205507A (zh) | 检测高致病性猪蓝耳病与经典猪蓝耳病的rt-pcr引物及试剂盒 | |
| CN103820572A (zh) | 一种用于检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病毒及其混合感染的试剂盒和方法 | |
| Chen et al. | Establishment and application of multiplex real-time PCR for simultaneous detection of four viruses associated with porcine reproductive failure |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE Free format text: FORMER OWNER: BEIJING VICAREN BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., LTD. Effective date: 20140522 Owner name: BEIJING VICAREN BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., LTD. Effective date: 20140522 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Zhang Yonghong Inventor after: Zhang Zhigang Inventor after: Dong Jianhui Inventor after: Zhang Wenli Inventor after: Zhang Xiaojie Inventor after: Li Shuang Inventor before: Zhang Zhigang Inventor before: Dong Jianhui Inventor before: Zhang Wenli Inventor before: Zhang Xiaojie Inventor before: Li Shuang |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: ZHANG ZHIGANG DONG JIANHUI ZHANG WENLI ZHANG XIAOJIE LI SHUANG TO: ZHANG YONGHONG ZHANG ZHIGANG DONG JIANHUI ZHANG WENLI ZHANG XIAOJIE LI SHUANG Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 100085 HAIDIAN, BEIJING TO: 102206 CHANGPING, BEIJING |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20140522 Address after: 102206 Beijing Changping District city Huilongguan Town Road No. 7 Applicant after: Beijing University Of Agriculture Applicant after: Beijing Vicaren Biological Technology Co., Ltd. Address before: 100085 Beijing city Haidian District Third Street D-803 Wah Building Applicant before: Beijing Vicaren Biological Technology Co., Ltd. |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 102206 Beijing Changping District city Huilongguan Town Road No. 7 Applicant after: Beijing University of Agriculture Applicant after: Beijing WIK biotechnology Limited by Share Ltd Address before: 102206 Beijing Changping District city Huilongguan Town Road No. 7 Applicant before: Beijing University of Agriculture Applicant before: Beijing Vica Group Co., Ltd. |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140528 |