CN103816204A - 中药菟丝子提取物化学修饰的制备方法和临床应用 - Google Patents
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Abstract
取菟丝子粉末乙醇用浸泡,加热回流提取得到含菟丝子黄酮提取物。菟丝子黄酮再与一氯乙酸、氢氧化钠的混合物,在70-80℃条件下搅拌反应3h,反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,得到羧甲基菟丝子提取物衍生物,生成物干燥。该制剂,制备方法简单,易溶于水,原料来源广,成本低廉,治疗效果好。
Description
技术领域
本发明属于医学临床用药,具体说是涉及一种适用于骨折、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的治疗与预防的药物。
背景技术
骨折愈合是一个极其复杂的生物学修复过程,可以重新形成与原骨外形、内部结构和功能都一样的新骨。祖国医学运用中药治疗骨折有着悠久的历史…,并积累了丰富的经验,总结出了很多有效的方药。中药能加速骨折愈合,已被临床证实,人们通过各种手段。从不同角度对中药促进骨折愈合机理进行了深入的研究,并已取得了一定的成果,显示出中药促进骨折愈舍的优势。
菟丝子是旋花科植物菟丝子Cuscuta chinensisLain的干燥成熟种子,是温补肾阳的要药。其主要成分为多糖类,黄酮类,挥发油成分和生物碱类化合物等。其中黄酮类化合物主要包含山奈酚、槲皮素及糖苷类…。现代研究显示,多种黄酮类化合物对对大鼠成骨细胞增殖分化有促进作用。[宋敏,罗晓,李宁,等.淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响[J].中国中医骨伤科杂志,2010.18(2):3.]
本发明的目的本发明的目的在于提供一种菟丝子提取物衍生物的制备方法。
本发明的优点是制备方法简单,易溶于水,原料来源广,成本低廉,无副作用。
本发明的目的可通过下述技术措施来实现:菟丝子一干燥一粉碎一乙醇提取一提取液离心过滤-减压蒸馏挥去乙醇-浓缩一干燥
菟丝子黄酮的提取:菟丝子80℃干燥5h,取出粉碎成细粉,过80目筛,精密称取菟丝子粉末30g,加人300mL95%乙醇,水浴回流,提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压蒸馏回收溶剂至少量,提取物经过减压浓缩,真空干燥后得到黄色固体,即为粗黄酮提取物。
菟丝子提取物衍生物制备:
1.按每100g菟丝子提取物加入200-250ml(2mol/L)的氢氧化钠液体和15g一氯乙酸混合均匀,35℃下搅拌0.5h;然后按每100g菟丝子提取物再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物,在70-80℃条件下搅拌反应3h,反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,得到羧甲基菟丝子提取物衍生物,生成物干燥。
2.一锅炒方法:按质量:质量:体积=1:0.35:0.30取菟丝子提取物、氢氧化钠、一氯乙酸,放入2倍体积的体积分数为95%的乙醇溶液中,在醚化温度50℃,醚化时间3h条件下进行反应。反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,生成物干燥,得到羧甲基菟丝子提取物衍生物。
所述的药物组合物,在制备促进人或动物骨折愈合的治疗中的应用。
为了进一步的验证本发明成品制剂的疗效,我们将上述具体制备方法1-3中制备的药物进行了相应的动物试验,现将结果报告如下。
目的:探讨羧甲基菟丝子提取物衍生物对动物骨折愈合的治疗的影响,有效地开发中药菟丝子提供实验依据.
方法:
动物分组模型制备:取6月龄清洁级雎性SD大鼠30只。体重约261±12g。随机分为两组:空白对照组和菟丝子治疗组,每组15只。治疗组、空白对照大鼠以20%氨基甲酸乙酯5mg/kg腹腔注射麻醉,暴露大鼠股骨,用钢锯将股骨锯开,以达到骨髓渗出为度,将创口缝合。
试剂骨形态发生蛋白-2(BMP-2)抗体购于北京博奥森生物技术有限公司
然后实施灌胃给药,空白对照组大鼠予5%葡萄糖5-10mg/kg/d,治疗组大鼠予菟丝子提取物衍生物5-10mg/kg/d,并连续3d肌内注射青霉素以抗感染。每组大鼠分别于7\14\28d各处死5只。
标本采集与组织学处理:取大鼠股骨做组织学制备。每组标本随机抽取5个骨折断端进行脱钙石蜡切片。股骨用4%PFA加0.1M磷酸缓冲液调整PH值为7.2,室温固定3d。然后用20%EDTA加0.1M磷酸缓冲液调整PH值为7.2,浸泡8~10d脱钙。再经系列乙醇脱水,石蜡包埋,沿股骨干长轴方向行厚度切成5μm厚片,行HE染色。随机取5张股骨片,分别在×400奥林巴斯FV1000放大激光扫描共聚焦显微镜下观察。
结果与结论:
骨折术后2周,治疗组大鼠骨折处出现大量细胞聚集,间充质细胞、成纤维细胞、单核巨噬细胞等开始形成纤维骨痂,大量骨小梁开始形成,骨小梁间隙可见丰富的毛细血管,骨折断端处可见板层骨部分取代纤维骨痂;模型组大鼠骨小梁较细,间隙较大,排列方向紊乱。治疗组BMP-2蛋白表达高于空白组(p<0.01)。结果具有统计学意义
具体实施方式
以下是本发明内容的具体实施例,用于阐述本申请文件中所要解决技术问题的技术方案。
附图说明
图1为术后7d治疗组大鼠和空白对照组大鼠骨组织形态比较。术后7d治疗骨折断端的髓腔内可见少量红细胞,明显纤维组织增生和骨小梁形成;空白组骨折断端的髓腔内可见较多红细胞,和少量坏死的骨组织,偶见增生的显微组织。
图2为术后14d治疗组大鼠和空白对照组大鼠骨组织形态比较。术后14d,2组小鼠组织形态比较:治疗组骨折断端处可见板层骨部分取代纤维骨痂,尚不具备骨的结构层次;空白对照组骨折断端处可见大片小梁的边缘有成片的骨基质形成。
实施例1
菟丝子黄酮的提取:菟丝子80℃干燥5h,取出粉碎成细粉,过80目筛,精密称取菟丝子粉末30g,加人300mL95%乙醇,水浴回流,提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压回收溶剂至少量,提取物经过减压浓缩,真空干燥后得到黄色固体,即为粗黄酮提取物。
菟丝子提取物衍生物制备:按每100g菟丝子提取物加入200-250ml(2mol/L)的氢氧化钠液体和15g一氯乙酸混合均匀,35℃下搅拌0.5h;然后按每100g菟丝子提取物再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物,在70-80℃条件下搅拌反应3h,反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,得到羧甲基菟丝子提取物衍生物,生成物干燥。
实施例2
菟丝子黄酮的提取:菟丝子80℃干燥5h,取出粉碎成细粉,过80目筛,精密称取菟丝子粉末30g,加人300mL95%乙醇,水浴回流,提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压回收溶剂至少量,提取物经过减压浓缩,真空干燥后得到黄色固体,即为粗黄酮提取物。
一锅炒方法:按质量:质量:体积=1:0.35:0.30取菟丝子提取物、氢氧化钠、一氯乙酸,放入2倍体积的体积分数为95%的乙醇溶液中,在醚化温度50℃,醚化时间3h条件下进行反应。反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,生成物干燥,得到羧甲基菟丝子提取物衍生物。
Claims (2)
1.中药菟丝子提取物化学修饰的制备方法,其特征是通过以下步骤实现:
(1):菟丝子粉碎成细粉,过80目筛,加十倍量95%乙醇,水浴回流,提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压回收溶剂至少量,提取物经过减压浓缩,真空干燥后得到粗黄酮提取物。
(2)菟丝子提取物化学修饰制备方法:菟丝子粗黄酮提取物加入氢氧化钠液体和一氯乙酸混合均匀,35℃下搅拌0.5h;然后在70-80℃条件下搅拌反应3h,反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,得到羧甲基菟丝子提取物衍生物,生成物干燥。
2.权利1所获得的菟丝子提取物衍生物在制备促进人或动物骨折愈合、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的的治疗中的应用。
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- 2013-11-19 CN CN201310576174.8A patent/CN103816204A/zh active Pending
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