CN103804443B - 黄酮苷类化合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从植物中获得的新黄酮苷类化合物及分离制备该化合物的方法。本发明的重要黄酮苷类化合物化学名为鼠李秦素-3-O-β-D-(6″-β-羟基-β-甲基-戊二酸半酯)-β-D-葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷(Rhamnazin-3-Ο-β-D-(6″-β-hydroxy-β-methyglutaryl)-β-D-glucoside-4′-Ο-β-D-glucoside)，其结构式如下。该类化合物主要从高等植物中分离获得，其中主要是种子植物、尤其是桑寄生科槲寄生属植物。通过溶剂提取、萃取、柱层析等方法，即可从高等植物中分离获得本发明的新黄酮苷类化合物。药理实验表明该化合物具有良好的抗氧化、抗肿瘤作用。

Description

黄酮苷类化合物及其制备方法

技术领域

本发明属医药及天然产物化学领域，具体涉及一种新的黄酮苷类化合物及其制备方法。

背景技术

槲寄生为桑寄生科植物槲寄生Viscumcoloratum(Komar.)Nakai的干燥带叶茎枝。异名冬青、北寄生、柳寄生、黄寄生、槲寄、寄生、冻青。生于海拔300～2000m的阔叶林中，寄生于榆树、柳树、杨树、栎树、梨树、李树、苹果、枫杨、赤杨、椴树等乔木上。冬季至次春采收，除去粗茎，切断，干燥，或蒸后干燥。槲寄生味苦、性平，归肝、肾经，有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎元作用。用于风湿痹痛，腰膝酸软，腰膝酸软、筋骨无力、崩漏经多、妊娠漏血、胎动不安、头晕目眩等。近年来不断发现其在心血管系统、抗肿瘤、治疗肝炎等方面的新疗效。槲寄生的主要化学成分有黄酮类、三萜类、有机酸、木质素类、苷类及少量甾醇、氨基酸、挥发油和无机成分等。

黄酮及黄酮苷类是一大类天然化学产物，在植物界分布广泛，从植物中提取的该类化学产物具有保护心脑血管、抗炎、抗氧化、雄性或雌性激素样作用等多种生理活性，它是许多中草药的主要活性成分，其中有许多被开发成新型植物药，如银杏总黄酮、大豆异黄酮等，获得良好效果，但是研究人员仍在不断探索，以求获得更多的该类化合物的活性成份，满足人们对中草药日益增多的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的黄酮苷类化合物。

本发明的另一个目的在于提供上述黄酮苷类化合物的分离制备方法。

本发明的再一个目的在于提供该化合物的医疗用途。

本发明所提供的黄酮苷类化合物，具有以下结构通式：

R₁、R₂、R₃=H;(CH₂)nCH₃;OH;OCH₂Ph;OR′（R′=(CH₂)nCH₃;(CH₂)nCH=CH₂;1-5个糖基）

R₄=(CH₂)nCH₃;OCH₂Ph;OR′（R′=(CH₂)nCH₃;(CH₂)nCH=CH₂;1-5个糖基）

所述糖基为葡萄糖基或芹菜糖基；

n=0-3（0，1，2，3）

优选地，R₁、R₃=OR′，R′=(CH₂)nCH₃，n=0-3；优选n=0

R₂=OR′，R′为葡萄糖；

R₂=OR′,R′为被酯化的葡萄糖，尤其是被β-羟基-β-甲基戊二酸酯化的葡萄糖。

本发明提供其中一个黄酮苷类化合物的化学结构和名称，即鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷，英文名为Rhamnazin-3-Ο-β-D-(6′′-β-hydroxy-β-methyglutaryl)-β-D-glucoside-4′-Ο-β-D-glucoside，其具体结构式如下：

该化合物具有如下光谱学特征：¹HNMR及¹³CNMR及HMBC谱如表1所示。

表1

MS数据：对于该化合物来说，其高分辨质谱给出分子离子峰ESI-MS(positiveionmode):m/z=799.2294[M+H]⁺,821.2110[M+Na]⁺;分子式：C₃₅H₄₂O₂₁。

该化合物质谱碎片特征来源于如下所示的裂解方式(质谱图见图1）。

①m/z=637.1772[M-C₆H₁₁O₅+H]⁺②m/z=493.1346[M-C₆H₁₁O₅-C₆H₉O₄+3H]⁺

③m/z=331.0822[M-C₆H₁₁O₅-C₁₂H₁₉O₉+3H]⁺

上述新黄酮苷类化合物主要从高等植物中分离制备，其中优选的是桑寄生科（Loranthaceae）槲寄生属（ViscumL.）植物。用于制备新黄酮苷类化合物的植物材料一般为这些植物的茎枝和叶。

本发明所提供的黄酮苷类化合物的制备方法具体步骤如下：

（1）取槲寄生的干燥茎枝，与水互溶的醇类回流提取，过滤，合并滤液，得醇提液，将醇提液减压回收至无醇味，得浓缩液；

（2）所获得的浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇有机溶剂萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收，得槲寄生提取物；

（3）将所得的槲寄生提取物用适量溶液分散，装入预处理好的聚酰胺柱中，待聚酰胺吸附完全后，依次用不同比例的含水乙醇洗脱，并收集75%乙醇洗脱液浓缩至浸膏。上述浸膏用适量溶液分散，并采用硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇（100：0～0:100）或氯仿-甲醇（100：0～0:100）为洗脱液进行梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇（100：30）或氯仿-甲醇（100：30）洗脱液，浓缩至浓稠状加适量甲醇溶解分散，采用硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇（100：0～0:100）或氯仿-甲醇（100：0～0:100）为洗脱液进行梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇（100：15～100:30）或氯仿-甲醇（100：15～100:30）洗脱液经浓缩后采用葡聚糖凝胶柱层析纯化，用纯甲醇进行洗脱，即得黄色结晶，再经甲醇进行重结晶纯化，即得到新化合物鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷。

本发明中，植物原料的高等植物是种子植物。

本发明中，植物原料的种子植物是桑寄生科植物。

本发明中，桑寄生科植物是槲寄生属植物。

本发明中，提取液是含水乙醇（30-100%乙醇水溶液）。

本发明中，提取溶剂用量为提取药材的6-10倍量。

本发明中，提取时加热30-95℃回流1-3小时，提取l-3次，合并提取液。

本发明中，药材提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶剂萃取。

本发明中，采用聚酰胺柱层析时，采用湿法上样。

本发明中，聚酰胺柱层析的洗脱液采用含水乙醇溶液，进行梯度洗脱。

本发明中，采用聚酰胺吸附后，依次用水、25％、50％、75％、95％的含水乙醇洗脱，收集75％洗脱液。

本发明中，聚酰胺洗脱液采用硅胶柱层析进行纯化，采用二氯甲烷-甲醇或氯仿-甲醇梯度洗脱。

本发明中，采用葡聚糖凝胶层析进行纯化，采用甲醇或含水甲醇溶液（50%-100甲醇水溶液）进行洗脱。

本发明中，采用甲醇或丙酮对化合物重结晶处理。

本发明中，所得到的新的黄酮苷类化合物具有良好的抗炎、抗氧化、激素样作用。从高等植物中分离提取方法简便，原料来源广泛，成本不高。本发明产物与中药、西药等药物制成组合药物，具有诱人的应用前景。

附图说明

图1为鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的高分辨质谱图。

图2为鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的氢谱（¹HNMR）图。

图3为鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的碳谱（¹³CNMR）图。

图4为鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的HSQC图。

图5为鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的HMBC图。

图6为本发明实施例鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的提取分离流程图。

具体实施方式

以下以具体实施例更具体地说明发明内容。

实施例1.鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷的分离制备与纯化

1.植物材料：桑寄生科槲寄生属植物槲寄生（Viscumcoloratum(Komar.)Nakai）的干燥茎枝。

2.分离制备方法：槲寄生干燥茎枝10.0kg，用8、6、6倍量的95%乙醇回流提取2、1.5和1.5h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液约4000ml。分别用石油醚4000ml、乙酸乙酯4000ml、正丁醇4000ml各萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收，得槲寄生提取物。将槲寄生提取物，用适量水溶解后，装入预处理好的聚酰胺柱中，待聚酰胺吸附完全后，依次用水、25％、50％、75％、95％的含水乙醇洗脱，收集75％的含水乙醇洗脱液浓缩至浸膏。上述浸膏用甲醇分散，采用干法上样，进行硅胶柱层析。用二氯甲烷：甲醇（100:0-100:30）进行梯度洗脱，收集洗脱液，其中二氯甲烷：甲醇（100：10～100:15）洗脱液经浓缩后采用葡聚糖凝胶柱层析分离，浓缩即得新化合物（纯度≥80%，收率20%）。

3.纯化：将制得的新化合物经甲醇、丙酮等有机试剂进行重结晶纯化，即得到新化合物鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷纯品（纯度≥95%，收率18%）

实施例2.鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷清除DPPH自由基活性的测定

1.仪器与材料

1.1仪器：多功能酶标仪L177（VarioskanFlash，ThermoScientific），BP110S型电子天平（sartorius)。

1.2试剂：1,1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH·），甲醇等试剂均为国产分析纯。

1.3药品：实验所用的化合物为发明人自制，其化学结构经氢谱、碳谱、紫外光谱和红外光谱确定无误，HPLC法测定纯度在95％以上；抗坏血酸（VC）购于天津市恒兴化学试剂制造有限公司。

2.实验方法

1,1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH·）法是一种广泛用于筛选抗氧化剂的方法，用该法测定了水解物清除二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）的能力。

2.1DPPH溶液的配制：称取0.0010gDPPH（分子量为394.32），用甲醇溶解并定容于10ml棕色容量瓶中，所得溶液浓度为0.1mg/ml，置于冰箱中4℃保存，可保存1-2天，所有测定均重复三次，求其平均值。

2.2供试溶液的配制：分别称取两个化合物0.0020g，用甲醇溶解并定容于2ml容量瓶中，浓度为1mg/ml，用时稀释至不同浓度。

2.3测定方法：化合物捕捉自由基能力以IC₅₀为评价指标。IC₅₀的定义为：使自由基数目减少50%时所需供试的浓度。在此指可使DPPH溶液在波长515nm下吸收值下降50%的供试浓度，浓度以μg/ml表示。分别将两个化合物配制成一系列浓度的供试溶液，然后在100μl供试溶液中加入0.1mg/ml的DPPH溶液100μl于1.5mlEP管中，混匀，避光反应30min后，用多功酶标仪于515nm处进行测定，测吸光度值A，同时测定DPPH空白溶液吸光度值A₀（以甲醇溶液为参比）。清除率计算公式：

S(%)＝(A₀-A)/A₀×100%

以清除率S对各供试溶液的浓度进行回归处理，得工作曲线S(%)=ax+b(R²=0.995-0.998)，式中x是各供试溶液的终浓度，计算出IC₅₀的数值。

3.实验结果：

表2.化合物对DPPH自由基活性的清除能力

4.结论：本发明中的化合物适用于制备治疗由于体内自由基产生过多或清除自由基能力下降引起的各种疾病的药物，比如心脏病、老年痴呆症、肿瘤和衰老等，尤其适用于治疗心血管系统疾病。

Claims (7)

1.黄酮苷类化合物，其特征在于，具有如下结构式：

鼠李秦素-3-O-β-D-(6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯)葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷。

2.一种如权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：

（1）取桑寄生科植物的干燥茎枝，与水互溶的醇类回流提取，过滤，合并滤液，得醇提液，将醇提液减压回收至无醇味，得浓缩液；

（2）所获得的浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇有机溶剂萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收，得槲寄生提取物；

（3）将所得的槲寄生提取物用适量溶液分散，装入预处理好的聚酰胺柱中，待聚酰胺吸附完全后，依次用不同比例的含水乙醇洗脱，并收集洗脱液浓缩至浸膏，上述浸膏用适量溶液分散，并采用硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇100：0～0:100或氯仿-甲醇100：0～0:100为洗脱液进行梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇100：30或氯仿-甲醇100：30洗脱液，浓缩至浓稠状加适量甲醇溶解分散，采用硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇100：0～0:100或氯仿-甲醇100：0～0:100为洗脱液进行梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇100：15～100:30或氯仿-甲醇100：15～100:30，洗脱液经浓缩后采用葡聚糖凝胶柱层析纯化，用纯甲醇进行洗脱，即得黄色结晶，再经甲醇进行重结晶纯化，即得到化合物鼠李秦素-3-O-β-D-（6′′-β-羟基-β-甲基戊二酸半酯）葡萄糖苷-4′-O-β-D-葡萄糖苷。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，桑寄生科植物是槲寄生属植物。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，提取液是与水互溶的醇类，与水互溶的醇类浓度为30-100%，提取方法采用回流提取。

5.一种药物组合物，包含权利要求1所述的黄酮苷类化合物。

6.权利要求1所述的黄酮苷类化合物或权利要求5所述的组合物在制备治疗由于体内自由基产生过多或清除自由基能力下降引起的疾病的药物和保健品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，所述的疾病为心血管系统疾病。