CN103783032A

CN103783032A - 一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法

Info

Publication number: CN103783032A
Application number: CN201310588637.2A
Authority: CN
Inventors: 邹敬清; 荣美洁; 孙腾飞
Original assignee: QINGDAO GERMAN-SWISS AOLAN EQUESTRIAN Co Ltd; YILI DERUI JUNFA BIOTECHNOLOGY Co Ltd; Qingdao Deray Junfa Biologictechnology Co Ltd
Current assignee: QINGDAO GERMAN-SWISS AOLAN EQUESTRIAN Co Ltd; YILI DERUI JUNFA BIOTECHNOLOGY Co Ltd; Qingdao Deray Junfa Biologictechnology Co Ltd
Priority date: 2013-11-21
Filing date: 2013-11-21
Publication date: 2014-05-14

Abstract

本发明公开了一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法。该稀释液由葡萄糖、乳糖、蔗糖、柠檬酸钠、碳酸氢钠和EDTA等组成。其配制方法为：称取各种组分放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封即得。使用前加入青霉素、双氢链霉素、卵黄和甘油。该稀释液适用于马属动物精液的冷冻保存。本发明的有益效果是：配制简单，使用方便，马属动物精液冷冻保存效果好，适于规模化生产和应用。

Description

一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法

技术领域

本发明涉及动物精液冷冻保存的技术领域，特别涉及一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法。

背景技术

精液冷冻保存与人工授精技术的结合在现代养殖业生产中发挥着极其重要的作用，应用冷冻精液进行人工授精可以不受时间、地域、品种及个体体格的限制，并且大量减少公畜饲养量，降低生产成本，提高优良种公畜的利用率，为养殖业带来巨大的经济效益。同时，精液冷冻技术的发展和冷冻精液的使用在品种引进、杂交改良，以及提高繁殖性能、疾病控制及遗传多样性保护方面具有重要的意义。

稀释液在冷冻精液的制作过程中是必不可少的，可以补充精子的营养，减少精液粘稠度，降低异物对精子的影响，同时缓和代谢产物的危害作用；另外还能够保护精子，增强其抵抗低温打击和抗氧化的能力，减少冷冻所造成的损伤。

近年来，家畜精液稀释液的研究不断取得可喜的成果，尤其是在牛、羊等反刍动物方面。马属动物精液稀释液的研究也日渐成效，但是仍然存在诸多弊端，主要表现在精液冷冻效果不稳定，受胎率低；因此开发出保存效果好，成本低，受胎效果好的冷冻精液稀释液对人工授精而言有重要的经济效益。

发明内容

为了解决传统的冷冻精液稀释液对精子活力的保存效果差、受胎率低等问题，本发明提供了一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法。所述稀释液包括葡萄糖、乳糖、柠檬酸钠、碳酸氢钠和EDTA。

每500ml的所述稀释液中，各组分的含量为：葡萄糖20~25g、乳糖1.2~2.0g、柠檬酸钠0.2~0.25g、碳酸氢钠0.35~0.45g和EDTA 0.45~0.55g。

所述葡萄糖为无水葡萄糖，其分子式为C₆H₁₂O₆；所述乳糖的分子式为C₁₂H₂₂O₁₁；所述柠檬酸钠的分子式为Na₃C₆H₅O₇·2H₂O。

本发明还提供了上述马属动物精液稀释液的配制方法，所述配制方法包括：

（1）称取所需要量的葡萄糖、乳糖、柠檬酸钠、碳酸氢钠和EDTA，放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封即得；

（2）将经过严格灭菌、密封的稀释液标记配制时间，置于0~5℃保存；

（3）使用前向所述稀释液中分别按1000单位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加双氢链霉素，分别按2%和2.5%的量添加卵黄和甘油，混匀即可。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：使用本发明马属动物冷冻精液稀释液进行精液的冷冻保存，效果明显优于传统的稀释液，马属动物精液的保存效果好，保证精子的活率和精子顶体完整率，增强受精能力，充分提高了精液的利用率和优良公畜配种的效率；本发明的基础液配制简单，使用方便，适于规模化生产和应用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步描述。

实施例1

称取葡萄糖24g、乳糖1.2g、柠檬酸钠0.25g、碳酸氢钠0.45g和EDTA 0. 5g，放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封即得；将经过严格灭菌、密封的稀释液标记配制时间，置于0~5℃保存，随用随取。使用前向稀释液中分别按1000单位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加双氢链霉素，分别按2%和2.5%的量添加卵黄和甘油，并混合均匀。

对比试验1

将传统的稀释液葡萄糖-卵黄稀释液（对照组1）和牛奶稀释液（对照组2），与实施例1的稀释液（实施例组1）分别稀释马的精液并制作冻精。24小时后测定精子的活率，结果如表1所示。

表1：不同冷冻稀释液制作冻精的活率比较

组别	冻前活率	24h后活率
			对照组1	0.80±0.02	0.25±0.04
对照组2	0.80±0.03	0.30±0.02
			实施例组1	0.80±0.02	0.45±0.03

由表1的数据可知，与传统精液稀释液相比，利用本发明的马属动物冷冻精液稀释液冷冻的精子活率明显较高。

实施例2

称取葡萄糖22g、乳糖1.7g、柠檬酸钠0.25g、碳酸氢钠0.45g和EDTA 0. 55g，放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封即得；将经过严格灭菌、密封的稀释液标记配制时间，置于0~5℃保存，随用随取。使用前向稀释液中分别按1000单位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加双氢链霉素，分别按2%和2.5%的量添加卵黄和甘油，并混合均匀。

对比试验2

将传统的稀释液葡萄糖-卵黄稀释液（对照组3）和葡萄糖-酒石酸甲钠-卵黄稀释液（对照组4），与实施例2的稀释液（实施例组2）分别稀释并制作马的冷冻精液。24个小时后测定精子的活率，结果如表2所示。

表2：不同冷冻稀释液制作冻精的活率比较

组别	冻前活率	24 h后活率
			对照组3	0.80±0.03	0.20±0.02
对照组4	0.80±0.02	0.30±0.03
			实施例组2	0.80±0.02	0.45±0.02

由表2的数据可知，与传统精液稀释液相比，利用本发明的马属动物冷冻精液稀释液保存的精子活率明显较高。

综上，使用本发明马属动物冷冻精液稀释液进行精液的冷冻保存，效果明显优于传统的稀释液。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法，其特征在于，所述稀释液包括葡萄糖、乳糖、柠檬酸钠、碳酸氢钠和EDTA。

2.根据权利要求1所述的马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法，其特征在于，每500ml的稀释液中，各组分的含量为：葡萄糖20~25g、乳糖1.2~2.0g、柠檬酸钠0.2~0.25g、碳酸氢钠0.35~0.45g和EDTA 0.45~0.55g。

3.根据权利要求1-2所述的马属动物冷冻精液稀释液及其配制方法，其特征在于，所述葡萄糖为无水葡萄糖，其分子式为C₆H₁₂O₆；所述乳糖的分子式为C₁₂H₂₂O₁₁；所述柠檬酸钠的分子式为Na₃C₆H₅O₇·2H₂O。

4.一种如权利要求1-3任意一项所述的马属动物冷冻精液稀释液的配制方法，其特征在于，所述配制方法包括：（1）称取所需要量的葡萄糖、乳糖、柠檬酸钠、碳酸氢钠和EDTA，放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封即得；（2）将经过严格灭菌、密封的稀释液标记配制时间，置于0~5℃保存；

一种如权利要求1-4任意一项所述的马属动物冷冻精液稀释液的使用方法，其特征在于：向所述稀释液中分别按1000单位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加双氢链霉素，分别按2%和2.5%的量添加卵黄和甘油，混合均匀后置于20℃恒温水浴锅中，1小时后对马属动物新鲜精液进行稀释，并制作冻精。