CN103766414B - 一种含余甘子植物源抗烟草花叶病毒剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种以余甘子根皮（Phyllanthi Fructus L.）提取物为有效成分的植物源抗病毒剂及其制备方法。该制备方法是将余甘子根皮粉碎，经一定的加工过程，制备成余甘子根皮抗病毒可溶液剂、水剂及微乳剂，用于烟草、辣椒、番茄、西葫芦、马铃薯等作物上防治烟草花叶病毒病（Tobaccomosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒病（Cucumber mosaic virus，CMV）及马铃薯病毒病（Potato Virus X，PVX；Potato Virus Y，PVY）等多种植物病毒病。制剂中含有余甘子根皮提取物10％～30％，其余为助剂。本发明的抗植物病毒剂不仅抗病毒效果好，而且对环境、人、畜、害虫天敌及其它有益生物安全。该抗植物病毒剂制备工艺简单，成本低廉，适宜推广应用。

Description

一种含余甘子植物源抗烟草花叶病毒剂及其制备方法

技术领域

本发明属于植物及其应用领域，具体涉及余甘子抗烟草花叶病毒剂及其制备方法。

背景技术

植物病毒是一种由核酸和蛋白质组成的具有侵染活性的细胞内寄生病原物，据国际病毒分类委员会(ICTV)的第八次报告，目前全世界发现的植物病毒种类达1122个。植物病毒所引起的植物病素有“植物癌症”之称，其对农作物的危害程度仅次于真菌病原物，几乎每种农作物都受到2～3种病毒的危害。全世界每年由植物病毒造成的损失约4百亿美元，仅烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)造成的危害就超过1亿美元。

由于植物病毒对植物细胞具有绝对寄生性，病毒复制所需要的物质和能量场所完全由寄主植物提供，导致病毒和寄主的代谢融为一体；加之植物缺乏完整的免疫系统，病毒一旦侵染植物，就可在植物细胞内无限期存活，直至寄主死亡。因此，抑制植物病毒病的药物很难只选择性地攻击病毒而不伤害寄主细胞，导致目前筛选高效、专一、安全的抗病毒制剂研究面临极大的困难。

目前除了采取传统的抗病毒育种、弱毒株系交叉保护、改进栽培技术、杀虫剂控制传毒介体和转基因等方法外，科研人员还研究出了一些植物病毒病的化学防治方法。但到目前为止，只有一小部分抗植物病毒剂得到实际应用，这些制剂大多以预防为主，且药效多不理想。由于人们对医药或兽药中抗病毒剂研究较早，一些抗植物病毒剂(如农用病毒唑)就是从抗人或动物病毒剂中发展而来。因此，深入探讨抗植物病毒天然物质，有利于抗植物病毒剂的研究、开发及应用。

余甘子(Phyllanthi Fructus L.)为大戟科叶下珠属植物，中国野生广泛分布在云南、广西、福建、海南、台湾、海南、四川、贵州等省，江西、湖南、浙江等省部分地区也有，资源丰富。其果实余甘子为一种常用藏药，与诃子，毛诃子三者在藏药中常被称为“三大果”使用频率很高，在《藏药标准》所载的290种藏药成药中，含余甘子的有72种，占总数的25％，卫生部药品标准1995年版藏药标准所载200种成药中，有59种含余甘子，占29％，并被载入各版《中国药典》。

关于余甘子在医药的应用有大量报道。中医认为，清热凉血，消食健胃，生津止咳。用于血热血瘀，消化不良，腹胀，咳嗽，喉痛，口干功效。余甘子果实富含鞣质，含量高达45％，主要包括没食子酸(gallic acid)，鞣花酸(ellagic acid)，诃子酸(chebulinic acid)，原诃子酸(terchebin)，诃黎勒酸(chebulagic acid)，鞣云实素(corilagin)，余甘子酸(phyllemblic acid)等；此外，余甘子果实中还含有黄酮类化合物，生物碱等。有关余甘子根皮化学成分的研究较少，有报道称从余甘子根皮中分离出二萜、没药烷型倍半萜类成分及苷类。而余甘子在抗植物病毒作用方面的研究至今未见报道，在农业上的应用也有待于进一步开发。

发明内容

本发明的目的在于，以余甘子(Phyllanthi Fructus L.)为原料，研究出植物源抗病毒剂效果高、无公害、价格低廉的植物源抗植物病毒剂及其制备方法。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种余甘子植物源烟草花叶抗病毒剂，其特征在于，以余甘子根皮提取物为主成分并加入助剂加工而成，制剂形态是可溶液剂、水剂或微乳剂。其中：

所述的微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

余甘子根皮提取物10％～30％，有机溶剂：20～30％，乳化剂：5％～30％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；

所述的可溶液剂由以下原料按重量百分比配制：

余甘子根皮提取物10％～30％，表面活性剂：5％～30％，余量为有机溶剂，原料的重量百分比之和为100％；

水剂：余甘子根皮提取物10％～30％，有机溶剂：20～30％，表面活性剂：5％～30％，防冻剂：4％～10％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。

上述有机溶剂为乙酸乙酯，环己酮、油酸甲酯、乙醇，甲醇，丙酮，N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合物；

所述的乳化剂为烷基苯磺酸盐类、烷基酚聚氧乙烯醚类、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚类、斯潘系列、吐温、农用阴离子-磷酸酯中的一种或几种的混合物；

所述的表面活性剂为烷基苯磺酸盐类、烷基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚类、蓖麻油与环氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物中一种或几种的混合物；

所述的防冻剂为乙二醇或丙三醇。

上述余甘子植物源烟草花叶抗病毒剂的制备方法，其特征在于：

所述的微乳剂的制备方法是：

A、将余甘子根皮用植物组织粉碎机粉碎至1～5mm的粗粉碎物。

B、将步骤A所得的粗粉碎物用溶剂浸提，提取温度为50～80℃，提取时间为6～12小时，浸提物经真空浓缩至相当于1kg干粉/kg浓缩液。

C、将步骤B所得的浓缩液、溶剂和表面活性剂按比例于混配釜中(混配釜温度为35-60℃，搅拌速度800～1000转/分钟，搅拌时间为30分钟)搅拌均匀后即得余甘子抗植物病毒微乳剂。

所述的可溶液剂的制备方法是：

A、将余甘子根皮用粉碎机粉碎至1～5mm的粗粉碎物。

B、将步骤A所得的粗粉碎物用溶剂浸提，提取温度为50～80℃，提取时间为6～12小时，浸提物经真空浓缩至相当于1kg干粉/kg浓缩液。

C、将步骤B所得的浓缩液、溶剂和表面活性剂按比例于混配釜中(混配釜温度为35-60℃，搅拌速度800～1000转/分钟，时间为30分钟)搅拌均匀后即得余甘子抗植物病毒可溶液剂。

所述的水剂的制备方法是：

A、将余甘子根皮用粉碎机粉碎至1～5mm的粗粉碎物。

B、将步骤A所得的粗粉碎物用溶剂浸提，提取温度为50～80℃，提取时间为6～12小时，浸提物经真空浓缩至相当于1kg干粉/kg浓缩液。

C、将步骤B所得的浓缩液、溶剂、表面活性剂、防冻剂和水按比例于混配釜中(混配釜温度为35-60℃，搅拌速度800～1000转/分钟，搅拌时间为30分钟)搅拌均匀后即得余甘子抗植物病毒水剂。

本发明所制成的余甘子植物源烟草花叶抗病毒剂具有以下优点：

1、植物源抗病毒剂活性显著，可用于烟草、辣椒、番茄、西葫芦、马铃薯等作物上防治烟草花叶病毒病(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)及马铃薯病毒病(Potato Virus X，PVX；Potato Virus Y，PVY)等多种植物病毒病；

2、对人、畜、害虫天敌及其它有益生物安全，环境兼容性好；

3、生物源农药，使用后无残留毒害；

4、资源丰富、制备方法简单、成本低廉、适宜推广使用。

具体实施方式

本发明的植物源抗病毒剂，以余甘子根皮提取物为活性物质，加入一定比例助剂进行剂型加工，可以制得环保型制剂微乳剂、水剂或可溶液剂。经发明人的试验证明，30％余甘子微乳剂、10％余甘子微乳剂、30％余甘子可溶液剂、10％余甘子可溶液剂、30％余甘子水剂和10％余甘子水剂对烟草花叶病毒(TMV)具有良好的防治效果。为了更好的理解发明的实质，下面用实施例来详细说明发明的技术内容，但发明并不局限于这些实施例。

实施例1：30％余甘子微乳剂的配制

称取余甘子根皮浓缩物30kg，溶解于20kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸钙，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水25kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至50℃，搅拌1小时，制得30％余甘子微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例2：10％余甘子微乳剂的配制

称取余甘子根皮浓缩物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸钙，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水40kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至50℃，搅拌1小时，制得10％余甘子微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例3：30％余甘子根皮可溶液剂的配制

称取余甘子根皮浓缩物30kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg烷基多糖苷A，5kg乙二醇，乙醇补齐至100kg，混合均匀后，以搅拌速度800～1000转/分钟搅拌10～30分钟，即可制得30％余甘子可溶液剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例4：10％余甘子根皮可溶液剂的配制

称取余甘子根皮浓缩物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg烷基多糖苷A，5kg乙二醇，乙醇补齐至100kg，混合均匀后，以搅拌速度800～1000转/分钟搅拌10～30分钟，即可制得余甘子可溶液剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例5：30％余甘子根皮水剂的配制

称取余甘子根皮浓缩物30kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg烷基多糖苷A，5kg乙二醇，水补齐至100kg，混合均匀后，以搅拌速度800～1000转/分钟搅拌10～30分钟，即可制得余甘子根皮可溶液剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例6：10％余甘子根皮水剂的配制

称取余甘子根皮浓缩物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg烷基多糖苷A，5kg丙三醇，水补齐至100kg，混合均匀后，以搅拌速度800～1000转/分钟搅拌10～30分钟，即可制得余甘子根皮可溶液剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。

实施例7：6种余甘子抗病毒剂对TMV的室内生物测定

(1)对TMV体外钝化效果

采用半叶枯斑法测定，选取生长旺盛、长势一致的5～6叶期心叶烟(Nicotiana glutinosa)为枯斑寄主。以叶脉为界，左半叶接种药液与病毒等体积混合液，右半叶接种蒸馏水与病毒等体积混合液作对照，病毒接种浓度为10μg/mL，钝化时间为5min，接种后立即用清水冲洗接种叶片表面。每处理接种4片叶子，试验重复3次，3d后统计枯斑数，计算抑制率。

抑制率(％)＝(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数×100

测定结果见表1。

表1：6种余甘子抗病毒剂对TMV体外钝化作用

(2)对TMV初侵染的抑制效果

采用半叶枯斑法，选取长势一致、健康的5～6叶期心叶烟为枯斑寄主，在涂抹药液6h、12h、24h后接种病毒，空白对照为清水处理，每个处理接种4片叶子，重复3次，3d后统计枯斑数，计算抑制率。结果见表2。

表2：6种余甘子抗病毒剂对TMV初侵染的抑制效果

(3)对TMV增殖的抑制效果

采用半叶枯斑法，选取长势一致、健康的5～6叶期心叶烟为枯斑寄主，在接种病毒6h、12h、24h后涂抹药液，空白对照为清水处理，每个处理接种4片叶子，重复3次，3d后统计枯斑数，计算抑制率。结果见表3。

表3：6种余甘子抗病毒剂对TMV增殖的抑制效果

由表1、2、3可知，6种余甘子抗病毒剂对TMV的钝化，初侵染、增殖抑制效果良好，明显高于对照药剂吗啉胍.乙铜。

实施例8：6种余甘子抗病毒剂对TMV的盆栽试验

(1)对普通烟的保护作用

选择5-6叶期，长势一致、健壮的普通烟(Nicotiana tabacum)供试。试验设预防组(施药3次后接种TMV)和对照组(只接种不施药)2组。用6种余甘子抗病毒剂200倍液喷雾，对照药剂吗啉胍.乙铜500倍液喷雾处理普通烟，每5d施药一次，共施药三次。最后一次施药24h后接种TMV，接种浓度为1：20(W/V)。接种后14d、21d检查发病情况，统计病情指数及防治效果。每处理60株烟苗，试验重复3次。计算防效。

发病率＝(各处理发病株数/处理总株数)×100％

病情指数＝∑(病级数×病株数)/(最高病级×各处理总株数)×100

病情指数增长率＝(喷药后病指—喷药前病指)/喷药前病指×100％

防治效果＝(对照病指—处理病指)/对照病指×100％

保护作用测定结果如表4所示。

表4：6种余甘子抗病毒剂对普通烟的保护作用测定结果

(2)对普通烟的治疗作用

选择5-6叶期，长势一致、健壮的普通烟(Nicotiana tabacum)供试。试验设治疗组(接种TMV后施药3次)和对照组(只接种不施药)2组。接种毒源TMV，接种浓度为1：20(W/V)，接种后每5d施药一次，共施药三次。药剂为6种余甘子抗病毒剂200倍液喷雾，对照药剂吗啉胍.乙铜500倍液喷雾。分别于最后一次施药的14d、21d时检查发病情况，统计病情指数及防治效果。每处理60株烟苗，试验重复3次。计算防效。治疗作用测定结果如表5所示。

表5：6种余甘子抗病毒剂对普通烟的治疗作用测定结果

盆栽试验结果表明(表4、表5)，6种余甘子抗病毒剂对烟草花叶病毒病表现出良好的预防和治疗效果，其保护和治疗效果均好于对照药剂，其中，30％余甘子微乳剂相对防效高于对照药剂10％。

实施例9：6种余甘子抗病毒剂对TMV的田间小区药效试验

小区试验为随机排列，重复3次，小区面积视实际情况而定，但是面积不能小于30㎡，试验地选择要求肥力均匀、作物种植和管理水平一致，病情发生及危害程度比较均匀；各处理间及试验区周围要设保护行。用6种余甘子抗病毒剂100、200、400倍液进行叶面常量喷雾，以20％的吗啉胍.乙铜可湿性粉剂500倍液为对照药剂进行叶面常量喷雾，并设清水对照；所有供试药剂必须进行二次稀释。自发病初期开始喷药，后每隔7d喷1次，共3次。第一次喷药前及最后一次喷药后的10d调查发病率和统计病情指数，计算防效，结果见表6.

表6：6种余甘子抗病毒剂防治烟草病毒病田间小区药效试验

从上表可知，6种余甘子抗病毒剂对烟草花叶病毒具有良好的防治效果，在稀释100、200、400倍的情况下明显优于药剂对照病毒A，防效差异显著。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (1)

1.一种余甘子植物源抗烟草花叶病毒剂，其特征在于，以余甘子根皮提取物为主成分并加入助剂加工而成，制剂形态是微乳剂、可溶液剂和水剂；其中：

所述的微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

称取余甘子根皮浓缩物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸钙，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水40kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至50℃，搅拌1小时，制得10％余甘子微乳剂100kg；

所述的可溶液剂由以下原料按重量百分比配制：

称取余甘子根皮浓缩物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg烷基多糖苷，5kg乙二醇，乙醇补齐至100kg，混合均匀后，以搅拌速度800～1000转/分钟搅拌10～30分钟，即可制得余甘子可溶液剂100kg；

所述的水剂由以下原料按重量百分比配制：

称取余甘子根皮浓缩物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，1kg烷基多糖苷，5kg丙三醇，水补齐至100kg，混合均匀后，以搅拌速度800～1000转/分钟搅拌10～30分钟，即可制得余甘子根皮水剂100kg。