CN111657305B - 小茴香提取物制备抗植物病毒剂的应用及抗植物病毒剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了小茴香提取物制备抗植物病毒剂的应用及抗植物病毒剂。小茴香提取物用于制备抗植物病毒剂的应用；所述的小茴香提取物为：小茴香经有机溶剂浸提后得到的浓缩浸膏。用于烟草、黄瓜、马铃薯等作物上防治烟草花叶病毒病(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus,CMV)及马铃薯病毒病(Potato Virus X，PVX；Potato Virus Y，PVY)等多种植物病毒病。本发明的抗病毒剂抗病毒效果好，制作方式简单，成本低廉，具有开发为植物源抗病毒剂的潜力。

Description

小茴香提取物制备抗植物病毒剂的应用及抗植物病毒剂
技术领域
本发明属于植物及其应用领域，具体涉及小茴香提取物制备抗植物病毒剂的应用及抗植物病毒剂。
背景技术
植物病毒病是农作物生产中的重要病害，在全球范围内，每年因病毒病害造成的经济损失约四百亿美元。几种常见的植物病毒如烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯病毒(PVX，PVY)等可以侵染超过800种作物，造成巨大的损失。由于病毒在植物体内依靠寄主的营养底物进行复制、扩增，目前常用的防治病毒的药剂很难直接作用于病毒粒子而达到理想的防治效果。
化学农药在病害防治中仍发挥着无可替代的作用，但是面临着安全、环境和生态等方面的压力。目前除了抗病毒育种、弱毒株系交叉保护、改进栽培技术、杀虫剂控制传毒介体和转基因等方法外，利用天然产物防治病毒病是近年来的研究热点。植物提取物中包含多种具有生物活性的天然产物，通常具有多样、新颖的化学结构，独特的生物活性机制和提高作物抗性的能力；并且具有环境相容性好，延缓抗药性产生和促进作物健康生长等特点，是医药和农药开发的重要资源。
小茴香(Foeniculum vulgare)为伞形科多年生草本植物，在全国大部分地区均有分布，其果实、茎、叶部位都可入药。小茴香中主要代谢物有脂肪油、挥发油、甾醇、糖苷、氨基酸、三萜、鞣质、黄酮、强心苷、生物碱、皂苷、香豆素、挥发性碱、蒽醌等多种类型的化合物。药理学研究表明，小茴香具有散寒止痛、健胃祛风、清热化痰等功效。文献报道称，小茴香中的挥发油类具有良好的抗菌活性，而黄酮类、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类和多糖类化合物具有抗氧化能力。此外，小茴香粗提液对松材线虫具有杀灭作用，对松材线虫携带细菌也有抑制作用。而小茴香在抗植物病毒方面的研究还未见相关报道，在农业病虫害防治上的应用有待进一步开发。
高效的植物源天然产物具有安全、持效、抗性发展缓慢等特征。一些天然产物可以通过激发植物体的防御机制，加强植物对病虫害的抵抗能力，减少经济损失。可见，天然产物的应用可有效减少化学农药的应用从而降低农药导致的一系列负面影响，具有良好的生态意义。因此，植物源天然产物抗病毒剂的应用是一种于植物本身、于生态环境相容性好的植物保护方法。天然产物抗病性的研究在农业可持续发展、生态环境保护、粮食和食品安全等方面具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的第一个目的在于以小茴香提取物为原材料，用于制备抗植物病毒剂的应用；
本发明的第二个目的是以小茴香提取物为原材料研究出具有抗病毒活性的抗植物病毒剂。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括：
遵从本发明的第一个目的，小茴香提取物用于制备抗植物病毒剂的应用；
所述的小茴香提取物为：小茴香经有机溶剂浸提后得到的浓缩浸膏。
小茴香提取物在所述抗植物病毒剂中的质量百分比含量10％～60％。
可选的，所述的小茴香提取物为：粒径为1～5mm的小茴香粉末以1:10(w/v)的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的任意一种或两种以上的混合物，室温静置24小时；
再在温度为40℃和频率为100Hz下超声提取60min，过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液，滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏即得。
可选的，所述的抗植物病毒剂为可溶性粉剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，填料：10％～60％，分散剂：0～10％，稳定剂：0～5％，表面活性剂：5％～20％，原料的重量百分比之和为100％。
可选的，所述的抗植物病毒剂为水分散粒剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，填料：10％～60％，分散剂：0～10％，表面活性剂：7％～20％，原料的重量百分比之和为100％。
可选的，所述的抗植物病毒剂为可溶性液剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，有机溶剂：10％～40％，表面活性剂：10％～30％，防冻剂：4％～10％，抗微生物剂：0～1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。
可选的，所述的抗植物病毒剂为水乳剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，有机溶剂：10％～30％，表面活性剂：10％～30％，防冻剂：4％～10％，抗微生物剂：0～1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。
一种抗植物病毒剂，以小茴香提取物为药用成分，小茴香提取物的质量百分比含量10％～60％；
所述的小茴香提取物为：小茴香经有机溶剂浸提后得到的浓缩浸膏。
一种抗植物病毒剂，所述的抗植物病毒剂为可溶性粉剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，填料：10％～60％，分散剂：0～10％，稳定剂：0～5％，表面活性剂：5％～20％，原料的重量百分比之和为100％；
或者，所述的抗植物病毒剂为水分散粒剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，填料：10％～60％，分散剂：0～10％，表面活性剂：7％～20％，原料的重量百分比之和为100％。
一种抗植物病毒剂，所述的抗植物病毒剂为可溶性液剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，有机溶剂：10％～40％，表面活性剂：10％～30％，防冻剂：4％～10％，抗微生物剂：0～1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；
或者，所述的抗植物病毒剂为水乳剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10％～60％，有机溶剂：10％～30％，表面活性剂：10％～30％，防冻剂：4％～10％，抗微生物剂：0～1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。
可选的，所述的小茴香提取物为：粒径为1～5mm的小茴香粉末以1:10(w/v)的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的任意一种或两种以上的混合物，室温静置24小时；
再在温度为40℃和频率为100Hz下超声提取60min，过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液，滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏即得。
本发明所制成的小茴香提取物抗植物病毒剂具有以下优点：
抗病毒剂活性显著，可用于烟草、辣椒、番茄、马铃薯等作物上防治烟草花叶病毒病(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus,CMV)及马铃薯病毒病(Potato Virus X，PVX；Potato Virus Y，PVY)等多种植物病毒病；小茴香提取物抗植物病毒剂可以提高烟草体内防御酶活性，增强了植株的抗病性；小茴香提取物抗植物病毒剂制备方法简单，适宜推广使用。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1是烟草叶片喷施小茴香提取物抗植物病毒剂后SOD的活力变化；
图2是烟草叶片喷施小茴香提取物抗植物病毒剂后POD的活力变化。
具体实施方式
以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
本发明中提到的小茴香为伞形科植物茴香Foeniculum vulgare Mill.的干燥成熟果实。秋季果实初熟时采割植株，晒干，打下果实，除去杂质。本发明的小茴香提取物抗植物病毒剂，以小茴香提取物为活性物质，加入一定比例助剂进行剂型加工，可以制得环保型小茴香提取物抗植物病毒剂，剂型包括可溶性粉剂、水分散粒剂、可溶性液剂和水乳剂
经发明人的试验证明，10％小茴香提取物可溶性粉剂、60％小茴香提取物可溶性粉剂、10％小茴香提取物水分散粒剂、60％小茴香提取物水分散粒剂、10％小茴香提取物可溶性液剂、60％小茴香提取物可溶性液剂、10％小茴香提取物水乳剂和60％小茴香提取物水乳剂对烟草花叶病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒病(CMV)及马铃薯病毒病(PVX，PVY)等多种植物病毒病具有良好的防治效果。
本发明的抗植物病毒剂以小茴香提取物为有效成分，小茴香提取物的提取方法为：
A：将小茴香粉碎为粒径为1～5mm的粉末；
B：在室温下以1:10(w/v)的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的一种或两种以上的混合物，室温静置24小时；
C：放入温度为40℃频率为100Hz的超声清洗仪中提取60min。过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液；
D：滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏，作为小茴香提取物抗植物病毒剂的有效成分。
浸膏通常是指用有机溶剂浸提不含有渗出物的香料植物组织(如花、叶枝、茎、树皮、根、果实等)中所得的香料制品，成品中不含原用的溶剂和水分；本发明中提到的植物提取物浸膏指的是小茴香粉末经有机溶剂浸提及减压浓缩处理后得到的不含原用有机溶剂和水分的物质，按照本领域通常的减压浓缩手段处理即可。
如无特殊说明，本发明中的助剂选自如下种类：
填料为硫酸钠、硫酸铵、凹凸棒土、高岭土、白炭土、陶土和轻质碳酸钙中的一种或两种以上的混合物；
分散剂为烷基磺酸盐、烷基酚或脂肪醇环氧乙烷加成物磺酸盐、烷基酚和脂肪醇环氧乙烷加成物的磷酸酯中的一种或两种以上的混合物；
稳定剂为有机酸、脂肪醇、磷酸二苯酯、烷基磺酸盐、二异丙基磷酸酯和异丙基磷酸酯中的一种或两种以上的混合物；
表面活性剂为烷基苯磺酸盐类、羧酸盐类、硫酸酯盐类、烷基聚氧乙烯醚类、烷基酚聚氧乙烯醚类、多芳核基聚氧乙烯醚类和吐温中一种或两种以上的混合物；
有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇和N,N～二甲基甲酰胺中的一种或两种以上的混合物；
防冻剂为乙二醇、丙三醇、尿素和甘油中的一种或两种以上的混合物；
抗微生物剂为2～羟基联苯、山梨酸和苯甲酸中的一种或两种以上的混合物。
可溶性粉剂的制备方法是：将小茴香提取物、稳定剂、填料、分散剂和表面活性剂按比例混合，室温下溶于0.01mol/L盐酸溶液中，搅拌至充分溶解。用箱式干燥机50～60℃下烘5～10天，得到固体物。将固体物粉碎，(非水溶性填料不参与前一步，直接与固体混合均匀)过320目筛得到小茴香提取物可溶性粉剂。
水分散粒剂的制备方法是：将小茴香提取物、填料、分散剂和表面活性剂按一定比例混合，经粉碎机粉碎。加水搅拌均匀后造粒。用烘干机50～60℃烘干后过筛，获得粒径大小为2～4mm的颗粒即为小茴香提取物水分散粒剂。
可溶性液剂的制备方法是：将小茴香提取物、有机溶剂、表面活性剂、防冻剂和抗微生物剂按比例混合于混配釜中，以转速60～80r/min充分搅拌30min，搅拌均匀后即得到小茴香提取物可溶性液剂。
水乳剂的制备方法是：将小茴香提取物、有机溶剂、表面活性剂和抗微生物剂按比例混合于混配釜中，搅拌至均匀溶解；将防冻剂和水按比例混合，搅拌溶解为水相；将水相缓慢加于混配釜中(混配釜温度为35～50℃)，搅拌时间为30min搅拌均匀后即得小茴香提取物水乳剂。
下述实施例中若无特殊说明，涉及“％”指的是质量百分数。
为了更好的理解发明的实质，下面用实施例来详细说明发明的技术内容，但发明并不局限于这些实施例。
实施例1 小茴香提取物的制备
将小茴香粉碎为粒径为1～5mm的粉末；在室温下以1:10(w/v)的比例加入70％乙醇，室温静置24小时；放入温度为40℃频率为100Hz的超声清洗仪中提取60min。过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液；滤液经减压浓缩至近干，得到小茴香提取物浸膏。
实施例2 60％小茴香提取物可溶性粉剂的配制
将小茴香提取物6kg，硫酸钠2kg，十二烷基苯磺酸钙1.9kg和苯乙烯酸聚氧乙烯醚0.1kg常温下混合均匀，在室温下溶于0.01mol/L的盐酸溶液中，搅拌至充分溶解。室温放置24小时后，在箱式干燥机内50～60℃下烘10天至干燥，得到固体物。将固体物用粉碎机粉碎，过320目筛制得60％小茴香提取物可溶性粉剂。制剂的颗粒粒径等外观符合商品制剂的要求。
实施例3 10％小茴香提取物可溶性粉剂的配制
将小茴香提取物1kg，硫酸钠6kg，十二烷基苯磺酸钙2.9kg和苯乙烯酸聚氧乙烯醚0.1kg常温下混合均匀，在室温下溶于0.01mol/L的盐酸溶液中，搅拌至充分溶解。室温放置24小时后，在箱式干燥机内50～60℃下烘10天至干燥，得到固体物。将固体物用粉碎机粉碎，过320目筛制得10％小茴香提取物可溶性粉剂。制剂的颗粒粒径等外观符合商品制剂的要求。
实施例4 60％小茴香提取物水分散粒剂的配制
将小茴香提取物6kg，硫酸钠2kg，十二烷基苯磺酸钙1.9kg和苯乙烯酸聚氧乙烯醚0.1kg常温下混合均匀，经粉碎机粉碎。加水至搅拌均匀后造粒，粒径大小为2～4mm。在箱式烘干机内50～60℃下烘5天至干燥后过4mm粒径筛。得到的颗粒即为60％小茴香提取物水分散粒剂。制剂的颗粒粒径等外观符合商品制剂的要求。
实施例5 10％小茴香提取物水分散粒剂的配制
将小茴香提取物1kg，硫酸钠6kg，十二烷基苯磺酸钙2.9kg和苯乙烯酸聚氧乙烯醚0.1kg常温下混合均匀，经粉碎机粉碎。加水至搅拌均匀后造粒，粒径大小为2～4mm。在箱式烘干机内50～60℃下烘5天至干燥后过4mm粒径筛。得到的颗粒即为10％小茴香提取物水分散粒剂。制剂的颗粒粒径等外观符合商品制剂的要求。
实施例6 60％小茴香提取物可溶性液剂的配制
将小茴香提取物6kg溶于2.5kg乙酸乙酯中，再加入十二烷基苯磺酸钙1kg，尿素0.2kg，2-羟基联苯0.1kg，40℃在混配釜中60～80r/min充分搅拌30min至混合均匀。升温至50℃，继续搅拌，在30min内中缓慢多次加入去离子水0.2kg，水滴加完毕后搅拌30min，制得60％小茴香提取物可溶性液剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例7 10％小茴香提取物可溶性液剂的配制
将小茴香提取物1kg溶于1kg乙酸乙酯中，再加入十二烷基苯磺酸钙1kg，尿素0.2kg，2-羟基联苯0.1kg，40℃在混配釜中60～80r/min充分搅拌30min至混合均匀。升温至50℃，继续搅拌，在30min内中缓慢多次加入去离子水6.7kg，水滴加完毕后搅拌30min，制得10％小茴香提取物可溶性液剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例8 60％小茴香提取物水乳剂的配制
将小茴香提取物6kg溶解于2.3kg乙酸乙酯中，再加入烷基酚聚氧乙烯醚1kg和苯甲酸0.1kg在混配釜(40℃)中60～80r/min充分搅拌30min至混合均匀；将乙二醇0.2kg溶解于0.4kg去离子水中获得水相；将水相在30min内缓慢多次加入混配釜中，水滴加完毕后搅拌30min，冷却后制得60％小茴香提取物水乳剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例9 10％小茴香提取物水乳剂的配制
将小茴香提取物1kg溶解于1kg乙酸乙酯中，再加入烷基酚聚氧乙烯醚2kg和苯甲酸0.1kg在混配釜(40℃)中60～80r/min充分搅拌30min至混合均匀；将乙二醇0.4kg溶解于5.5kg去离子水中获得水相；将水相在30min内缓慢多次加入混配釜中，水滴加完毕后搅拌30min，冷却后制得10％小茴香提取物水乳剂10kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例10 小茴香提取物对TMV的室内活性测定
(1)对普通烟的保护作用
选取普通烟(K326)进行抗TMV活性验证。选取长势一致的4～5叶期的普通烟，用小茴香提取物抗病毒剂稀释液(稀释倍数如表1)分别进行全株喷雾，在24小时后接种TMV至每株烟草的上部叶片。空白对照为清水处理，阳性对照为8％宁南霉素水剂1000倍液。每株接种1个叶片，每个处理包括10株烟草，整个试验重复3次。15天后统计普通烟的病情指数，病害分级标准如下：
病害分级标准按照中华人民共和国烟草行业标准一烟草普通花叶病严重度分级调查方法(YC/T 39—1996)：
0级：全株无病；
1级：心叶脉明或轻微花叶，或者上部1/3叶片花叶但不变形，植株无明显矮化；
2级：1/3至1/2叶片花叶，或者少数叶片变形；或者主脉变黑，植株矮化正常株高的2/3以上；
3级：1/2至2/3花时，或者变形或主侧脉变黑，植株矮化为正常株高1/2至2/3；
4级：全株叶片花叶，严重畸形或坏死，病株矮化为正常植株高度l/3至1/2。为细化调查结果，在以上严重度的分级基础上，对分级标准进行细化，在1、2级之间增加l+级，在2、3级之间加2+级，在3、4加之间增加3+级，级别记为1.5、2.5、3.5：
1+级：心叶脉明或轻微花叶，或上部1/3叶片花叶至轻微皱缩，植株无明显矮缩化；
2+级：l/3至1/2叶片花叶、叶片变形，或主脉变黑，植株矮化为正常植株的2/3以上；
3+级：1/2至2/3叶片花叶、或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常株高的1/2。计算防治效果公式如下：
病情指数＝∑(病级数×病株数)/(最高病级×各处理总株数)×100
防治效果＝(对照病指—处理病指)/对照病指×100％
结果见表1。
表1：小茴香提取物抗病毒剂对TMV的保护效果
Figure BDA0002479398690000091
注：防效之间的显著性差异通过SPSS软件中Duncan多重范围检验(DMRT)，不同的字母表示数据之间在0.05水平上存在显著差异性。
由表1可知，小茴香提取物抗病毒剂展示了非常可观的保护效果。相对于空白对照，小茴香提取物药剂处理组的防治效果为42.40％～69.90％。其中10％小茴香提取物可溶性粉剂活性最好，对TMV的抑制率分别达到69.90％。60％可溶性粉剂、10％水分散粒剂、60％水乳剂、60％水分散粒剂、10％水乳剂和10％可溶性液剂对TMV的抑制率分别为69.10％、61.99％、57.09％、56.79％、55.36％和54.34％，优于对照药剂宁南霉素的抑制率48.19％。60％可溶性液剂的抑制率为42.40％，略低于宁南霉素的防效。
(2)对普通烟的诱导抗病效果
选取普通烟(K326)进行诱导烟草抗TMV活性验证。选取长势一致的4～5叶期的普通烟，用小茴香提取物抗病毒剂稀释液(稀释倍数如表2)分别进行下部3叶喷雾，在24小时后接种TMV至每株烟草的上部第1叶。空白对照为清水处理，阳性对照为宁南霉素1000倍液。每个处理包括10株烟草，整个试验重复3次。15天后统计普通烟的病情指数，计算防治效果，公式同上。结果见表2。
表2：小茴香提取物抗病毒剂诱导烟草抗TMV的效果
Figure BDA0002479398690000101
注：抑制率之间的显著性差异通过SPSS软件中Duncan多重范围检验(DMRT)，相同的字母表示数据之间在0.05水平上不存在显著差异性。
由表2可知，小茴香提取物抗病毒剂展示了良好的诱导烟草抗TMV效果。相对于空白对照，小茴香提取物药剂处理组的防治效果为44.36％～57.81％，与阳性对照宁南霉素的抑制率48.78％之间无显著性差异。结果说明局部使用小茴香提取物抗病毒剂可以诱导烟草全株产生抗病性，实现了对TMV的抗性。
实施例11小茴香提取物抗病毒剂引起烟草防御酶POD的活性变化
将1000倍的60％小茴香提取物抗病毒剂喷洒到烟草叶片后分别在第0、6、12、24、48、72、96小时取叶片，检测防御酶POD的活性变化。
称取植物叶片0.5g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂、分2～3次加入总量为5mL的0.1mol/L，pH5.5的乙酸～乙酸钠缓冲液。研磨成匀浆后于4℃12，000r/min离心15min，上清液即为粗酶提取液。取试管加入3mL 25mmol/L创愈木酚和0.5mL酶提取液，再加入200μL 0.5mol/L小时2O2溶液迅速混合启动反应。以蒸馏水为参比，在反应15s时开始记录反应体系在波长470nm处的值，每隔1min记录一次，连续测定，连续获取6个点的数据。试验重复三次。
酶活性计算公式
OD470＝OD470F～OD470I/tp～ti
式中OD470F-反应液终止值；OD470I-反应液初始值；tp-反应终止时间，min；ti-反应起始时间，min。
以每克样品每min吸光度变化值增加1时为1个过氧化物酶活性单位，单位是ΔOD470/min·g。计算公式：
Figure BDA0002479398690000111
结果见图2：60％的小茴香提取物抗病毒剂处理烟草后，引起了烟草体内POD活性增加。在药剂处理12-24小时后，POD的活性增加达到最高值，是对照组的1.97-2.41倍。结果说明小茴香提取物处理后可以引起烟草防御能力的增加。
实施例12小茴香提取物抗病毒剂引起烟草防御酶SOD的活性变化
将1000倍的60％小茴香提取物抗病毒剂喷洒到烟草叶片后分别在第0、6、12、24、48、72、96小时取叶片，检测防御酶SOD的活性变化。
取烟草叶片0.5g置于预冷的研钵中，加入5mL预冷的PBS液(50mmol/L、pH8.8的磷酸缓冲液)在冰浴上研磨成浆，于4℃下10,000g离心15min，得到上清液测定其体积(VT)后作为SOD粗提液备用。
取10mL试管7支，3支为测定管，4支为对照管(3支为最大光还原管，1支为参比管)，按表3分别依次加入各溶液。反应体系总体积3mL混匀后将1支对照管置于暗处，其他各管于4000lx日光下反应20min。以不照光的对照管作参比，分别在560nm波长下测定其他各管的吸光度值。
表3 各试管中试剂加入次序和加入量
Figure BDA0002479398690000112
Figure BDA0002479398690000121
SOD酶活力计算公式如下：
Figure BDA0002479398690000122
式中V1为测定时样品用量mL。
结果见图1：60％的小茴香提取物抗病毒剂处理烟草后，引起了烟草体内SOD活性增加。在药剂处理24小时后，POD的活性增加达到最高值，是对照组的1.83-2.12倍。结果说明小茴香提取物处理后可以引起烟草防御能力的增加。
实施例13小茴香提取物抗植物病毒剂对烟草花叶病毒的田间小区药效试验
选取长势良好的烟草田进行小区试验。小区种植水平、土壤肥力、田间管理一致，各处理间及试验区周围要设保护行，小区面积60m2，试验重复3次。用8种小茴香提取物抗植物病毒剂的稀释液(稀释倍数如表4)分别进行叶面常量喷雾，以8％的宁南霉素水剂1000倍液和清水分别为阳性对照和阴性对照进行叶面喷雾。所有供试药剂必须进行二次稀释。自普通烟烟苗4～5叶期喷药，后每隔7天喷1次，共3次。最后一次喷药2天后取顶部整叶摩擦接种TMV，每株接种1叶。接病毒21天后调查各处理病情指数，计算防效，计算方式同实施例10，结果见表4。
表4：小茴香提取物抗病毒剂田间抗TMV的效果
Figure BDA0002479398690000123
Figure BDA0002479398690000131
注：防效之间的显著性差异通过SPSS软件中Duncan多重范围检验(DMRT)，相同的字母表示数据之间在0.05水平上不存在显著差异性。
由表4可知，小茴香提取物抗病毒剂展示了良好的田间抗TMV效果。相对于空白对照，小茴香提取物药剂处理的病毒抑制率为51.07％～60.45％，与阳性对照宁南霉素的抑制率52.30％之间无显著性差异。
实施例14小茴香提取物抗植物病毒剂对黄瓜花叶病毒的田间小区药效试验
选取长势良好的黄瓜田进行小区试验。小区种植水平、土壤肥力、田间管理一致，各处理间及试验区周围要设保护行，小区面积40m2，试验重复3次。用8种小茴香提取物抗植物病毒剂的稀释液(稀释倍数如表5)分别进行叶面常量喷雾，以8％的宁南霉素水剂1000倍液和清水分别为阳性对照和阴性对照进行叶面喷雾。所有供试药剂必须进行二次稀释。自黄瓜苗移栽后，每隔7天喷1次，共3次。最后一次喷药15天后调查各小区内病情指数，计算防效，病情分级标准为：0级：全株无病症；1级：叶出现少数褪绿斑或心叶明脉；3级：中、上部叶片花叶；5级：中、上部叶片重花叶，极少数叶片皱缩或畸形；7级：多数叶片重花叶，部分叶片皱缩、畸形或有坏死斑点，植株稍矮化；9级：多数叶片重花叶、畸形或有坏死斑点，植株明显矮化甚至死亡。计算方式同实施例10，结果见表5：
表5：小茴香提取物抗病毒剂田间抗CMV的效果
Figure BDA0002479398690000132
注：防效之间的显著性差异通过SPSS软件中Duncan多重范围检验(DMRT)，不同的字母表示数据之间在0.05水平上存在显著差异性。
由表5可知，小茴香提取物抗病毒剂展示了优良的田间抗CMV效果。相对于空白对照，小茴香提取物药剂处理的病毒抑制率为61.42％～79.96％。其中，60％可溶性粉剂和60％小茴香水分散粒剂防效分别为79.96％和76.85％，优于宁南霉素的防效74.02％。除了10％水乳剂防效为61.42％，效果略差于宁南霉素，剩余所有的小茴香提取物处理组与宁南霉素处理组无显著性差异。
实施例15小茴香提取物抗植物病毒剂对马铃薯病毒病的田间小区药效试验
供试马铃薯品种为青薯168。选取长势良好的马铃薯田进行小区试验。小区种植水平、土壤肥力、田间管理一致，各处理间及试验区周围要设保护行，小区面积40㎡，试验重复3次。用8种小茴香提取物抗植物病毒剂稀释液(稀释倍数如表6)分别进行叶面常量喷雾，以8％的宁南霉素水剂1000倍液和清水分别为阳性对照和阴性对照进行叶面喷雾。所有供试药剂必须进行二次稀释。各处理在马铃薯病毒病发病初期(出现中心病株)开始喷施，每隔7天喷1次，连喷3次，第3次喷药后15天按马铃薯花叶病毒病分级标准调查发病率，统计病情指数，计算防效。马铃薯花叶病毒病分级标准：0级，无任何症状；1级，植株大小与健株相似，叶片平展但嫩叶或多或少有大小不等的黄绿斑驳；2级，植株大小与健株相似或稍矮，上部叶片有明显的花叶或轻微皱缩，有时有坏死斑；3级，植株矮化，全株分枝减少，多数叶片重花叶、皱缩或畸形，有时有坏死斑；4级，植株明显矮化，分枝少，全株叶片严重花叶、皱缩或畸形，有的叶片坏死、下部叶片脱落，甚至植株早死。计算方式同实施例10，结果见表6：
表6：小茴香提取物抗病毒剂田间抗马铃薯病毒病的效果
Figure BDA0002479398690000141
注：防效之间的显著性差异通过SPSS软件中Duncan多重范围检验(DMRT)，不同的字母表示数据之间在0.05水平上存在显著差异性。
由表6可知，小茴香提取物抗病毒剂展示了优良的田间抗马铃薯病毒病效果。相对于空白对照，小茴香提取物药剂处理的病毒抑制率为50.25％～68.04％。其中，60％小茴香水分散粒剂防效为68.04％，显著优于宁南霉素的防效56.32％。剩余7种试剂的防效与宁南霉素相当，无显著性差异。
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (1)

1.一种抗植物病毒剂，其特征在于，所述的抗植物病毒剂为可溶性粉剂，由以下原料按重量百分比配制：
小茴香提取物10%～60%，填料：10%～60%，分散剂：0～10%，稳定剂：0～5%，表面活性剂：5%～20%，原料的重量百分比之和为100%；
所述的抗植物病毒剂用于防治黄瓜花叶病毒；
所述的小茴香提取物为：粒径为1～5 mm的小茴香粉末以1:10（w/v）的比例加入提取溶剂，提取溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的任意一种或两种以上的混合物，室温静置24小时；再在温度为40℃和频率为100Hz下超声提取60min，过滤后将残渣重复提取2次，合并三次滤液，滤液经减压浓缩后得到植物提取物浸膏即得。
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