CN103725779A - 一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物及其应用 - Google Patents

一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及基因工程及肿瘤学领域，公开了一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物及其应用，该血清/血浆miRNA标志物为SEQ-1 miR-328、SEQ-2miR-339、SEQ-3 miR-1254、SEQ-4 miR-574-5p、SEQ-5 miR-21、SEQ-6 miR-200c中的任意一种或多种组合，该血清/血浆miRNA标志物可用于制备诊断试剂盒或治疗非小细胞肺癌的药物，该标志物区别于传统生物标志物，不仅稳定、微创、易于检测，且定量精确，将大大提高疾病诊断的敏感性和特异性。

Description

一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物及其应用
技术领域
本发明涉及一种基因工程及肿瘤学领域，具体是一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物及其应用。
背景技术
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球范围内肺癌死亡率都属恶性肿瘤之首。肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。已有的研究证明：长期大量吸烟者患肺癌的概率是不吸烟者的10～20倍，开始吸烟的年龄越小，患肺癌的几率越高。此外，吸烟不仅直接影响本人的身体健康，还对周围人群的健康产生不良影响，导致被动吸烟者肺癌患病率明显增加。城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。因此应该提倡不吸烟，并加强城市环境卫生工作。
从临床特征的角度看，目前国际上倾向于将肺癌分为小细胞肺癌Small cell lungcancer(SCLC)和非小细胞肺癌Non small cell lung cancer(NSCLC)。非小细胞肺癌占肺癌的85％以上，而非小细胞肺癌中85％以上又都属中晚期肺癌而失去根治性手术治疗的机会。在我国肺癌病死率升高的主要原因是由于目前肺癌早期缺乏有效的筛选和诊断，所以80％的肺癌患者在确诊已经是晚期，失去了最佳的治疗时间。因此对非小细胞肺癌的诊断，尤其是早期诊断显得尤其重要。
microRNA是一类约22nt的小分子RNA，调控基因表达。目前有研究显示，microRNA能以沉默复合体的形式稳定存在于人类的血清/血浆中。癌症患者由于细胞破损，会释放一部分癌症特异的microRNA进入循环系统中，这部分microRNA就能作为生物标志物进行肿瘤的早期诊断。
发明内容
本发明的目的在于提供一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物，该miRNA标志物为SEQ-1miR-328、SEQ-2 miR-339、SEQ-3 miR-1254、SEQ-4 miR-574-5p、SEQ-5 miR-21、SEQ-6miR-200c中的任意一种或多种组合。
所述的非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物在制备诊断试剂盒或治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。
所述的非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物的引物，该引物包括SEQ-1miR-328的正向引物和逆向引物、SEQ-2 miR-339的正向引物和逆向引物、SEQ-3 miR-1254的正向引物和逆向引物、SEQ-4 miR-574-5p的正向引物和逆向引物、SEQ-5 miR-21的正向引物和逆向引物、SEQ-6 miR-200c的正向引物和逆向引物。
所述的任意一对或多对非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物的引物在制备诊断试剂盒或治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。
一种非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，该试剂盒含有血清/血浆miRNA中SEQ-1miR-328、SEQ-2 miR-339、SEQ-3 miR-1254、SEQ-4 miR-574-5p、SEQ-5 miR-21、SEQ-6miR-200c中的任意一种或多种miRNA的引物。
所述的非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，该试剂盒含有任意一对或多对权利要求3所述非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物的引物。
所述的非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，该试剂盒还包括PCR技术常用的试剂，所述PCR技术常用的试剂包括逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水和Taq酶。
所述的非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，该试剂盒还包括标准品和/或对照品。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明阐明和提供了的血清/血浆微小核糖核酸(microRNAs/miRNAs)标志物作为非小细胞肺癌预后辅助判断和治疗决策的标志物的优越性在于：
(1)血清/血浆miRNAs是一种新型生物标志物，区别于传统生物标志物，不仅稳定、微创、易于检测，且定量精确，将大大提高疾病诊断的敏感性和特异性，该类小分子RNA生物标志物的成功开发将为NSCLC的优化治疗开创全新局面，为其他疾病生物标志物的研制提供借鉴；
(2)血清/血浆miRNAs试剂盒是一种系统全面的诊断和监测试剂盒，可用于非小细胞肺癌患者的预后判断，疗效评价及对病情发展的动态监测，有助于了解非小细胞肺癌患者疾病进展情况，反映患者的疾病状态，为临床医生快速准确掌握患者病情，及时采取更具个性化的防治方案提供支持；
(3)通过多个特征性的非小细胞肺癌miRNA诊断标志物的检测能够更好的提高检出效率，提高生存质量。并且仅仅从血液提取样品能够减少病人的痛苦，方向与快速，进一步方便其检测，提高检测速度。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的用途、方法和试剂盒可有效用于肿瘤治疗方案选择和/或预后评估，从而提供了一种新颖的肿瘤诊断剂和/或治疗剂，具有一定的临床应用前景。具体实施步骤如下：
(1)Q-PCR的反应体系与条件
Figure BSA0000099223030000031
Figure BSA0000099223030000041
(2)Q-PCR的配置
Figure BSA0000099223030000042
(3)扩增将miRNA反转录和qPCR定量两个过程放在一个管子中进行。
Figure BSA0000099223030000043
*注：内参的这条引物用DEPC-H2O代替
(4)实时定量PCR反应程序
Figure BSA0000099223030000044
Figure BSA0000099223030000051
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Figure ISA0000099223040000011

Claims (8)

1.一种非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物，其特征在于，该miRNA标志物为SEQ-1 miR-328、SEQ-2 miR-339、SEQ-3 miR-1254、SEQ-4 miR-574-5p、SEQ-5 miR-21、SEQ-6 miR-200c中的任意一种或多种组合。
2.根据权利要求1所述的非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物在制备诊断试剂盒或治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物的引物，其特征在于，该引物包括SEQ-1 miR-328的正向引物和逆向引物、SEQ-2 miR-339的正向引物和逆向引物、SEQ-3 miR-1254的正向引物和逆向引物、SEQ-4 miR-574-5p的正向引物和逆向引物、SEQ-5 miR-21的正向引物和逆向引物、SEQ-6 miR-200c的正向引物和逆向引物。
4.根据权利要求3所述的任意一对或多对非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物的引物在制备诊断试剂盒或治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。
5.一种非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有血清/血浆miRNA中SEQ-1 miR-328、SEQ-2 miR-339、SEQ-3 miR-1254、SEQ-4 miR-574-5p、SEQ-5miR-21、SEQ-6 miR-200c中的任意一种或多种miRNA的引物。
6.根据权利要求5所述的非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有任意一对或多对权利要求3所述非小细胞肺癌早期诊断血清/血浆miRNA标志物的引物。
7.根据权利要求5所述的非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括PCR技术常用的试剂，所述PCR技术常用的试剂包括逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水和Taq酶。
8.根据权利要求5所述的非小细胞肺癌预后辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括标准品和/或对照品。
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