CN103721271B

CN103721271B - 用于肝癌多模态影像和光热治疗的多功能纳米探针及应用

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Publication number: CN103721271B
Application number: CN201310695697.4A
Authority: CN
Inventors: 刘景丰; 刘小龙; 黄爱民; 张达
Original assignee: FUZHOU INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL
Current assignee: FUZHOU INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL
Priority date: 2013-12-17
Filing date: 2013-12-17
Publication date: 2015-06-17
Anticipated expiration: 2033-12-17
Also published as: CN103721271A

Abstract

本发明提供一种Au-ICG脂质体多功能纳米探针及其应用。该纳米探针由核和外壳构成；所述的核为表面包覆聚多巴胺层并吸附有吲哚箐绿的纳米金颗粒，所述的外壳为偶联有乳糖酸、且螯合有Gd³⁺离子的DSPE-PEG脂质体膜。本发明Au-ICG脂质体多功能纳米探针可用于肝癌的核磁成像（MRI），CT成像，近红外荧光成像等多种影像模式，患者只需承受一种造影剂给药，即可达到多种诊断效果；而且由于灵敏度的提高，可以降低造影剂用量，进一步减轻毒副作用。在808nm近红外光照射下，吸附的ICG分子能有效的将光能转化为热能，产生60～70℃的过高热，进而热杀伤肝癌细胞；因此该多功能纳米探针不仅可作为肝癌诊断的多模态造影剂，还可作为肝癌的光热治疗剂应用。

Description

用于肝癌多模态影像和光热治疗的多功能纳米探针及应用

（一）技术领域

本发明涉及一种用于肝癌的核磁、CT、和近红外成像的多模态影像，以及光热治疗的Au-ICG脂质体多功能纳米探针及其应用。

（二）背景技术

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是临床上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升的趋势。据统计，全球每年新增肝癌患者约60万，其致死率达到第3位，仅仅稍次于肺癌和胃癌。我国每年新增的肝细胞癌发病人数约占全球55%；肝癌防治的核心是早期发现、早期诊断和早期治疗。其中早期诊断最为关键，即在患者出现临床症状前或在癌症发生浸润前得以确诊，从而得到及时治疗，达到提高治愈率、降低死亡率的目的。然而由于肝癌发病具有高隐匿性，加上以组织、器官的器质改变为基础的传统影像学的局限性，目前还难以准确进行肝癌的早期诊断。分子影像学技术可作为早期诊断方法，它是在临床症状还未出现时就检测到肿瘤的早期生物学特性。

造影剂广泛用于非侵入成像，特别是用于肿瘤诊断；目前临床上广泛使用的非侵入式成像手段包括：核磁共振成像（MRI），计算机体层摄影术（CT），超声成像，近红外成像等。提高上述成像技术的灵敏度和特异性，实现在细胞或者分子水平上的诊断成像，是实现肝癌早期诊断的核心和关键。目前各类辅助造影增强剂已经被广泛的应用于临床，来增加上述成像技术的敏感性和特异性；如：基于Gd³⁺的金属络合物已被成功用于核磁成像（MRI），但其注射后可能导致组织渗透压上升、组织水肿等毒副作用。但目前临床上使用的大部分造影剂，其灵敏度均有待于进一步提高；低灵敏度将导致高剂量注射，增加毒副作用。同时，这些临床使用的造影剂只局限于一种特定的成像技术，而不能实现多模态，多角度成像；而现代医学通常需要综合不同影像学数据进行疾病的诊断；基于这种情况，患者可能需要多次承受不同的造影剂注射给药，方可达到最终确诊，这将增加患者所承受的造影剂毒副作用，可能导致患者健康的损坏，并会加重患者的经济负担。因此，迫切需要开发一种高灵敏度的多模态分子影像造影剂，以提高诊断的灵敏度、特异性，并期望能够实现多种临床影像的同时获取。

(三）发明内容

本发明目的是提供一种适用于肝癌的核磁成像（MRI），CT成像，近红外荧光成像以及靶向光热治疗的Au-ICG脂质体多功能纳米探针及其应用。

本发明采用的技术方案是：

一种Au-ICG脂质体多功能纳米探针，由核和外壳组成；所述的核为表面包覆聚多巴胺（polydopamine，PDA）层并吸附有吲哚箐绿（Indocyanine Green，ICG）的纳米金颗粒，所述的外壳为偶联有乳糖酸（Lactobionic acid，LA）、且螯合有Gd³⁺离子的DSPE-PEG（聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺）脂质体膜。

本发明在金纳米颗粒表面形成一层聚多巴胺（PDA），其聚多巴胺表面带有大量的-NH₂根离子在酸性条件下带正电，而吲哚箐绿（ICG）为一种带负电的近红外荧光分子，可通过静电力的作用吸附在包被有聚多巴胺（PDA）的金纳米颗粒表面；从而有效提高ICG的生物分散性，降低因ICG聚集而导致其荧光猝灭及水相不稳定性。上述构建的Au-PDA-ICG纳米颗粒可利用808nm近红外光激发，用于近红外荧光成像；且Au纳米颗粒具有分子量大（高于医用碘海醇）、X-射线吸收能力强（高于医用碘海醇），血液清除缓慢（低于医用碘海醇），因此可有效提高CT的空间分辨率、降低X-射线辐射剂量以及延长CT显像时间；在808nm近红外光照射下，吸附的ICG分子能有效的将光能转化为热能，产生60～70℃的过高热，进而可以用于热杀伤肝癌细胞。

为提高Au-PDA-ICG纳米颗粒的体内循环时间，降低网状内皮系统（Reticuloendothelial system）的吞噬作用，本发明在Au-PDA-ICG表面包被一层多功能DSPE-PEG（聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺）脂质体膜。DSPE-PEG已被FDA认证，可用脂质体药物制剂等医药领域应用，并可有效提高药物体循环时间。本发明为提高造影剂的肝癌特异性识别，弥补CT成像对软组织定性诊断困难等问题，利用靶向肝癌细胞表面高表达的脱唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor）的配体——半乳糖残基偶联DSPE-PEG，并与螯合Gd³⁺的DSPE-PEG-DOTA以等比例混合，制成多功能脂质体膜。其膜表面含有大量Gd³⁺与水分子充分接触，可提高MRI的灵敏性及T1加权成像功能。因此本发明的脂质体颗粒外壳除了具有对肝癌细胞MRI成像功能，还具有特异靶向肝癌细胞能力。

因此，本发明构建的Au-ICG-脂质体多功能纳米颗粒同时具备对肝癌的核磁、CT和近红外成像的多模态影像的功能，可提高CT空间对比度，增加MRI的T1加权成像信号强度，并且兼有对肝癌的特异靶向热疗功能。

优选的，所述Au-ICG脂质体多功能纳米探针直径为5～50nm。

具体的，所述Au-ICG脂质体多功能纳米探针可由如下方法制备得到：（1）将金纳米颗粒分散于多巴胺溶液中，调节pH8.5，搅拌4～6h后，7000～8000rpm离心并洗涤1～2次，得到表面包覆聚多巴胺层的金纳米颗粒，再吸附吲哚箐绿，得到Au-PDA-ICG纳米悬液；所述纳米金颗粒可按本领域常规方法进行制备，具体如下：将氯金酸悬液加热至150℃，沸腾5min后加入柠檬酸三钠溶液，并伴随强烈搅拌，并持续加热20min后，停止加热，搅拌至室温，形成金纳米颗粒悬液，在12000rpm离心15min后，收集得到金纳米颗粒，其直径约为10～16nm；

（2）将DSPE-PEG-NH₂（聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺）与乳糖酸（Lactobionic acid，LA）进行酰胺偶联反应，得到DSPE-PEG-LA（二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-半乳糖残基）；将DSPE-PEG-NH₂和DOTA-NHS（1,4,7,10-四乙酸-N-羟基琥珀酰亚胺）进行酰胺偶联反应，并耦合Gd³⁺离子，得到DSPE-PEG-Gd^3+DOTA（二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-1,4,7,10-四乙酸钆）；再将制得的DSPE-PEG-Gd^3+DOTA、DSPE-PEG-LA和氢化大豆磷脂、胆固醇混合，制得到单层脂质体膜；

具体过程如下：

DSPE-PEG-NH₂与EDC室温反应30min，加入NHS，后加入LA，4℃反应12h，用100KDa的超滤管离心后，获得DSPE-PEG-LA；DSPE-PEG-NH₂与DOTA-NHS在DMSO中，室温反应1h，转移到4℃反应4～6h，后用100000的超滤管离心后获得DSPE-PEG-DOTA，之后在DMSO溶液中加入GdCl₃粉末，强烈震荡12h后，后用100KDa超滤管离心，获得DSPE-PEG-Gd^3+DOTA；将DSPE-PEG-Gd^3+DOTA、DSPE-PEG-LA和氢化大豆磷脂、胆固醇按一定比例混合，之后利用烧瓶旋转蒸干，即可得单层脂质体膜；

（3）以步骤（1）制备的Au-PDA-ICG纳米悬液水化步骤（2）所得单层脂质体膜，剧烈搅拌后离心，即得所述Au-ICG脂质体多功能纳米探针。

优选的，步骤（2）中DSPE-PEG-Gd^3+DOTA、DSPE-PEG-LA和氢化大豆磷脂、胆固醇的混合摩尔比为：3～7：3～7：60～75：30～50，更为优选的摩尔用量之比为3:3:75:50。

优选的，步骤（1）得到的表面包覆聚多巴胺层的金纳米颗粒悬浮于超纯水中，调节pH为5.5～6.5后，加入ICG至ICG浓度为20～30μg/mL，避光室温震荡2～3h后，静止2～3h，离心、洗涤1～2次，去除未吸附的ICG分子，所得颗粒悬浮于超纯水中制成Au-PDA-ICG纳米悬液。

本发明还涉及所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针在制备用于肝癌多模态成像的造影剂中的应用。所述造影剂可同时用于MRI磁共振成像，CT成像或近红外荧光成像等。

本发明还涉及所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针在制备肝癌靶向热疗的药物中的应用。

本发明以多巴胺包裹金纳米颗粒并吸附ICG形成的Au-ICG为核心，以独特的设计方案，在Au-ICG表面包被一层具有生物相容性的多功能脂质体膜，并利用多功能脂质体膜表面的半乳糖残基靶向肝癌细胞表面的脱唾液酸糖蛋白受体（ASGPR），构建得到一种具有多模态成像及靶向光热治疗的Au-ICG脂质体多功能纳米探针。优选的Au-ICG脂质体多功能纳米探针具有5～50nm的直径，其等同于存在于人和动物机体中的一些蛋白和生物有机化合物的尺寸，由此便于造影剂在关注区域的输送和吸收。

本发明所构建的Au-ICG脂质体多功能纳米探针可以不同的剂量给药，这取决于成像的肝癌细胞，组织及肝癌患者的临床状况。本发明的造影剂和光热药物的给药剂量和浓度，可由临床医生例行确定。用药方案取决于各种因素，例如成像的肝癌细胞，组织或肿瘤是分散还是局部，患者的健康程度，年龄等。通过参照其他造影剂的用药方案，本领域技术人员能够确定本发明药物的最佳有效剂量及浓度。

本发明的所构建的Au-ICG脂质体多功能纳米探针可通过任何已知的递送方法方式给药：全身递送（静脉注射），动脉内，肿瘤内，胃肠外，肺腔内，局部、或局部给药的区域递送形式。如动脉内注射能够被用来“局域效果”成像及特定区域靶向区域热疗。

本发明Au-ICG脂质体多功能纳米探针可用于肝癌的核磁成像（MRI），CT成像，近红外荧光成像（Near-infrared(NIR)fluorescenceimaging）等多种影像模式，只需承受一种造影剂给药，即可达到多种诊断效果；而且由于灵敏度的提高，可以降低造影剂用量，进一步减轻毒副作用。在808nm近红外光照射下，吸附的ICG分子能有效的将光能转化为热能，产生60～70℃的过高热，进而热杀伤肝癌细胞；因此该多功能纳米探针不仅可作为肝癌诊断的多模态造影剂，还可作为肝癌的光热治疗剂应用。

（四）附图说明

图1为金纳米颗粒及Au-ICG脂质体多功能纳米探针的透射电镜图像及晶体衍射图像。A为金纳米颗粒的透射电镜图像；B为单个金纳米颗粒的透射电镜图像（5nm标尺）。白色箭头表示金纳米颗粒表面的晶格；C表示Au-ICG脂质体多功能纳米探针透射电镜图像；D表示Au-ICG脂质体多功能纳米探针的晶体衍射图。

图2为Au-PDA-ICG，Au-PDA+ICG，ICG的紫外可见近红外吸收光谱和荧光发射光谱。A表示（—）Au-PDA-ICG，（-----）Au-PDA+ICG，（......）ICG的紫外可见近红外吸收光谱曲线图；B表示(-■-)Au-PDA-ICG，（...△...）Au-PDA的荧光发射光谱曲线图；

图3为Au-ICG脂质体多功能纳米探针的T1磁共振加权成像图和Au-ICG脂质体多功能纳米探针的CT成像图。A表示Au-ICG脂质体多功能纳米探针的MRI图像；B表示Au-ICG脂质体多功能纳米探针的CT图像；

图4为Au-ICG脂质体多功能纳米探针的光热转化曲线。（—）表示水溶液的升温曲线，（.......）表示Au-ICG脂质体多功能纳米探针的升温曲线。

图5为共聚焦检测Au-ICG脂质体多功能纳米探针及ICG分子的肝癌细胞摄取实验。A：为空白对照；B:为ICG被肝癌细胞摄取后的共聚焦荧光图片;C：为Au-ICG脂质体多功能纳米探针被肝癌细胞摄取后的共聚焦荧光图片；。

图6为Au-ICG脂质体多功能纳米探针对肝癌细胞的光热杀伤。

图7为Au-ICG脂质体多功能纳米探针对肝癌细胞的细胞毒性。

（五）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

将1ml浓度为1M的氯金酸悬浮于49ml的Milli-Q超纯水（美国Millipore公司）中，将混匀的50ml氯金酸悬液盛放到100ml体系的洁净三口烧瓶中，在油浴及回流装置下，加热到150℃至刚刚沸腾，待沸腾5min后，向其中快速加入6ml浓度为0.015g/ml的柠檬酸三钠溶液，并伴随强烈搅拌，并持续加热20min后，停止加热，搅拌至室温，形成金纳米颗粒悬液，其金纳米颗粒直径约为10～16nm，并在12000rpm离心15min后，收集金纳米颗粒备用。

实施例2：

将上述沉淀悬于新配制的含2mg/ml多巴胺（DA，Sigma公司）的10mM tris-HCl溶液中，pH调节为8.5，并温和搅拌约6h，在7000～8000rpm下离心15min及洗涤2次，收集包被后的Au-PDA纳米颗粒，悬浮于Milli-Q超纯水中，得到Au-PDA悬液。此时的多巴胺经氧化及光照自聚合形成PDA聚多巴胺层，用于修饰Au纳米颗粒表面，并暴露大量氨基于Au纳米颗粒表面，易于后期修饰。

实施例3：

吸取20μl含12.5mg/ml ICG（吲哚箐绿，日本同仁化学研究所(上海)）的DMSO溶液，并悬于400μl的Milli-Q超纯水中，然后取100μl前述溶液，加入到实施例2制备的3ml的Au-PDA悬液中，调节pH为6.5后，避光室温震荡2h后，静止2h，7000～8000rpm离心10min，洗涤2次，去除未吸附的ICG分子，所得纳米颗粒悬浮于Milli-Q超纯水中，配制成3ml的0.02M的Au-PDA-ICG纳米悬液备用，上述Au-PDA-ICG纳米悬液已经具备了CT成像、近红外荧光成像及光热转化功能。

实施例4：

利用电子天平称取4.2mg的DSPE-PEG-NH₂（聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，Nanocs公司）白色粉末和4.2mg的DOTA-NHS白色粉末（钆离子螯合剂，Macrocyclic公司）白色粉末，溶解在盛有1ml DMSO（二甲基亚砜）的1.5ml的离心管中，室温震荡反应1h后，转移到4℃冰箱，震荡反应5h，后用100KDa的超滤管过滤，收集DSPE-PEG-DOTA-NHS，之后向其中加入60mg的GdCl₃（三氯化钆，百灵威试剂公司）白色粉末，强烈震荡12h后，先2000rpm离心，去除沉淀后，再利用100KDa的超滤管过滤，收集DSPE-PEG-Gd^3+DOTA并溶于1ml的Milli-Q超纯水备用。

另称取4.2mg的DSPE-PEG-NH₂粉末和18mg EDC（碳化二亚胺，，Sigma公司）粉末溶于盛有1ml Milli-Q超纯水的1.5ml的离心管中，并在30℃下活化30min，再向其加入9mg的NHS（N-N-羟基琥珀酰亚胺，Sigma公司）粉末以及42mg的乳糖酸（LA，百灵威试剂公司）粉末，在4℃震荡反应12h，经100KDa的超滤管过滤，收集DSPE-PEG-LA，并溶于1ml的Milli-Q超纯水备用。

将以上获得的0.5ml的DSPE-PEG-Gd^3+DOTA和0.5ml的DSPE-PEG-LA的超纯水溶液盛放到50ml体系的烧瓶中混合并真空干燥，以DSPE-PEG-Gd^3+DOTADSPE-PEG-LA：氢化大豆磷脂（HSPC，上海艾韦特医药科技有限公司）：胆固醇（cholesterol，百灵威试剂公司）摩尔比例3:75:50混合，并向其中加入10ml的氯仿甲醛混合溶液中（氯仿：甲醛=1:3，v/v），之后利用50ml体系的烧瓶在50～70℃下旋转蒸干。上述形成的单层脂质体膜已经具备了MRI成像及靶向肝癌细胞的功能。

实施例5：

取10ml的0.02M的Au-PDA-ICG水溶液，在50℃下，水化上述旋转蒸干的单层脂质体膜，并强烈搅拌2h，在6000rpm离心15min后，获得单层膜包被的Au-ICG脂质体多功能纳米探针，并配置成0.02M的Au-ICG脂质体多功能纳米探针。所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针的粒子直径约15～20nm，并具备了MRI、CT、近红外成像，光热转化及靶向肝癌细胞的功能。

使用透射电子显微镜（TEM）、紫外－可见分光光度计（UV-Vis-NIR）、MRI-CT成像，光热转化曲线，共聚焦显微镜，MRI核磁成像仪，micro-CT成像仪等方法表征上述制备的Au-ICG脂质体多功能纳米探针，具体测试结果如下：

（1）透射电子显微镜（TEM）

透射电镜图像表示金纳米颗粒及Au-ICG脂质体多功能纳米探针的形貌、纳米尺寸及晶格。参照图1，A表示在200nm的标尺下，检测纳金纳米颗粒的分布及形貌，其说明柠檬酸三钠法合成的金纳米颗粒尺寸均一，形貌一致。B图表示单个金纳米颗粒载5nm标尺下的透射电镜图像，其晶格明显，表明合成的金纳米粒子具有较高的结晶度及晶体结构。C为Au-ICG脂质体多功能纳米探针的形貌，其外缘的具有较低衬度的膜层，为多巴胺及包被的单层脂质膜。D为Au-ICG脂质体多功能纳米探针的晶体衍射图。其衍射圈清晰，说明Au-ICG脂质体多功能纳米探针具有良好的结晶度。

（2）紫外-可见-近红外分光光度计（UV-Vis-NIR），荧光分光光度计

紫外-可见-近红外吸收光谱和荧光发射光谱，表示Au-PDA-ICG合成的特征光谱。参照图2，A（—）Au-PDA-ICG表示Au-PDA吸附ICG离心后的吸收光谱，（----）Au-PDA+ICG表示Au-PDA吸附ICG未离心的吸收光谱，（....）ICG表示ICG分散在超纯水溶液中的吸收光谱；其中Au-PDA-ICG在518nm及780nm分别具有Au-PDA的特征吸收峰及ICG的特征吸收峰，表明ICG已经成功的吸附于Au-PDA表面。B表示（-■-）Au-PDA，（..△...）Au-PDA-ICG的荧光发射光谱。Au-PDA-ICG在633nm激发下，具有ICG的特征荧光发射峰，表示ICG已成功吸附于Au-PDA表面。

（3）MRI磁共振成像和micro-CT成像

MRI磁共振成像和micro-CT图像，显示Au-ICG脂质体多功能纳米探针具有磁共振成像和CT成像功能,参照图3，A图为不同浓度Au-ICG脂质体多功能纳米探针T1磁共振图像，随着编号7～1，其浓度分别为0.0003125，0.000625，0.00125，0.0025，0.005，0.01，0.02M，其Au-ICG脂质体多功能纳米探针的T1信号强度随浓度的增加而增强。B图为不同浓度的Au-ICG脂质体多功能纳米探针的CT成像图，左侧为0.000625M，右侧为0.00125M，表明Au-ICG脂质体多功能纳米探针具有CT成像功能。

（4）热转化曲线

光热曲线表示Au-ICG脂质体多功能纳米探针能够将光能转换成热能。参照图4，所示在相同的功率2W/cm²180s的激光照射下，5μg/mlAu-ICG脂质体多功能纳米探针溶液相对于水，有明显的升温性能，并且Au-ICG脂质体多功能纳米探针可在较短的时间内由26.9℃激增到62.5℃，并未出现平台，说明还可继续光热转化高温；而水溶液在相同的功率及时间照射下，温度从26.9℃升温到31.2℃。因此，表明Au-ICG脂质体多功能纳米探针相对于水，高出31.3℃，并远高于人体正常体温，因此可以用于肝癌的热杀伤。

（5）共聚焦成像实验

共聚焦成像实验，表明肝癌细胞可有效摄取Au-ICG脂质体多功能纳米探针。参考图5，图A为空白对照；图B表示，5μg/ml ICG与肝癌细胞共抚育5个小时后的荧光图像；图C表示，5μg/ml Au-ICG脂质体多功能纳米探针与肝癌细胞共抚育5个小时后的荧光图像；表明肝癌细胞可有效摄取Au-ICG脂质体多功能纳米探针。

（6）细胞杀伤能力；

利用不同浓度Au-ICG脂质体多功能纳米探针，如0.2，0.4，0.6，0.8μg/ml与肝癌细胞抚育，并在808nm近红外激光器照射5min后，利用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK8）（日本同仁化学研究所（上海））检测。参考图6，随着Au-ICG脂质体多功能纳米探针的浓度增加，其细胞的存活率明显下降，说明经808nm近红外激光器照射后的Au-ICG脂质体多功能纳米探针可有效进行光热转化，产生过高热，对肝癌的进行热杀伤。

（7）细胞毒性；

利用不同浓度Au-ICG脂质体多功能纳米探针如0.2，0.4，0.6，0.8mM与肝癌细胞抚育24h，利用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK8）检测。参考图7，Au-ICG脂质体多功能纳米探针与肝癌细胞抚育24h，并未对细胞造成损伤或凋亡，说明Au-ICG脂质体多功能纳米探针不具有细胞毒性，也说明Au-ICG脂质体多功能纳米探针的杀伤肝癌细胞主要通过光热转化，产生过高热，进而杀伤肝癌细胞。

Claims

1.一种Au-ICG脂质体多功能纳米探针，由核和外壳构成，其特征在于：所述的核为表面包覆聚多巴胺层并吸附有吲哚箐绿的纳米金颗粒，所述的外壳为偶联有乳糖酸、且螯合有Gd³⁺离子的DSPE-PEG脂质体膜；所述Au-ICG脂质体多功能纳米探针由如下方法制备得到：

(1)将金纳米颗粒分散于多巴胺溶液中，调节pH 8.5，搅拌4～6h后，7000～8000rpm离心并洗涤1～2次，得到表面包覆PDA的金纳米颗粒，再吸附ICG，得到Au-PDA-ICG纳米悬液；

(2)将DSPE-PEG-NH₂与乳糖酸进行酰胺偶联反应，得到DSPE-PEG-LA；将DSPE-PEG-NH₂和DOTA-NHS进行酰胺偶联反应，并耦合Gd³⁺离子，得到DSPE-PEG-Gd^3+DOTA；将前述得到的DSPE-PEG-Gd^3+DOTA、DSPE-PEG-LA和氢化大豆磷脂、胆固醇混合，制得单层脂质体膜；其中DSPE-PEG-Gd^3+DOTA、DSPE-PEG-LA和氢化大豆磷脂、胆固醇的混合摩尔比为：3～7：3～7：60～75：30～50；

(3)以步骤(1)制备的Au-PDA-ICG纳米悬液水化步骤(2)所得单层脂质体膜，剧烈搅拌后离心，即得所述Au-ICG脂质体多功能纳米探针。

2.如权利要求1所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针，其特征在于所述Au-ICG脂质体多功能纳米探针直径为5～50nm。

3.如权利要求1所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针，其特征在于步骤(1)得到的表面包覆聚多巴胺层的金纳米颗粒悬浮于超纯水中，调节pH为5.5～6.5后，加入ICG至ICG浓度为20～30μg/mL，避光室温震荡2～3h后，静止2～3h，离心、洗涤1～2次，去除未吸附的ICG分子，所得颗粒悬浮于超纯水中制成Au-PDA-ICG纳米悬液。

4.如权利要求1所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针在制备用于肝癌多模态成像的造影剂中的应用。

5.如权利要求4所示的应用，其特征在于所述造影剂用于MRI磁共振成像，CT成像或近红外荧光成像。

6.如权利要求1所述的Au-ICG脂质体多功能纳米探针在制备肝癌靶向热疗的药物中的应用。