CN103718948B - 观赏石斛新种质的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种观赏石斛新种质的培育方法，发明人选择肿节石斛优良单株为母本、大苞鞘石斛优良单株为父本进行人工种间杂交，通过人工授粉、授粉后的管理，果实采收、果实表面灭菌，萌发培养、增殖分化培养、壮苗生根培养和炼苗移栽等步骤，获得了大量生长健壮的杂交子代成苗。该批种间杂交子代苗集合了其父母本各自的优良遗传背景，为培育自主知识产权的观赏石斛品种提供了新种质。本发明克服了前述两种石斛种间杂交亲和性较低、杂交种子萌发率低、增殖难的问题，为进一步培育茎花俱美、综合性状优良的观赏石斛新品种打下了基础，为观赏石斛新品种选育提供了有效的途径。
Description
技术领域
本发明属于植物育种技术领域，尤其涉及一种观赏石斛新种质的培育方法。
背景技术
石斛(Dendrobium spp.)是兰科石斛属植物的总称，具有重要的观赏价值，其花形花姿优美、花色鲜艳、花期长，许多种类具有芳香，既可作切花，也可盆栽观赏，深受人们的喜爱，被誉为“四大观赏洋兰”之一，在国际兰花市场上具有重要地位。目前，国内栽培生产的石斛品种大都从国外引进，国内尚无自主知识产权的石斛新品种。
肿节石斛（Dendrobium pendulum Roxb.），附生，株型中等，长30－50cm，假鳞茎节间距短，节肿大呈优美的算珠状，总状花絮生于落叶茎上部，花径5－6cm，花期3－4月，具有清香，适应性强，综合性状优良，是石斛杂交育种重要的亲本。大苞鞘石斛（Dendrobiumwardianum Warner），附生，株型大，长50－85cm，假鳞茎圆柱形，叶薄革质，凋落，总状花序生于落叶茎上部，花径6－10cm，花期3－4月，花瓣椭圆形，白色带紫色先端，唇盘金黄色，基部具2个紫黑色斑块，单花性状突出，作为父本可提供重要的遗传基因。肿节石斛与大苞鞘石斛进行杂交，可望集合父母本各自的优良性状，是培育茎、花俱美的观赏石斛新品种的有效途径。
目前，关于石斛专利和文献的报道较多，主要集中在资源分布、无菌播种、组织培养以及药用成分和药理作用等，关于石斛的育种研究较少，未见肿节石斛与大苞鞘石斛种间杂交培育观赏石斛新种质的方法。同时，由于石斛种间杂交亲和性的原因，杂种胚存在发育不全，无菌播种不萌发或萌发率极低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种观赏石斛新种质的培育方法，所得新种质集合了肿节石斛和大苞鞘石斛的优良遗传性状，克服了前述两种石斛种间杂交亲和性较低、杂交种子萌发率低、增殖难的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：观赏石斛新种质的培育方法，包括以下步骤：
（1）杂交亲本选配：选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
（2）人工授粉：母本植株的待授粉花朵开放后2天至10天为授粉适宜时期，父本植株供粉花朵开放后的2天至5天为采集花粉块的适宜时期；杂交授粉于晴天上午9:00～11:00或下午16:30～17:30进行；
（3）授粉后的管理：授粉后24小时以内，母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常管理；
（4）果实采收：杂交授粉后150至300天，在果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂前，适时采收；
（5）果表面灭菌：未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
（6）萌发培养：灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中，暗培养7天后转为光培养40-55天；播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤0.1～0.6mg/L；
（7）增殖分化培养：萌发的种子转接到增殖分化培养基上，培养60至75天；增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2～3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+土豆150g/L+香蕉50g/L+6-苄氨基嘌呤0.1～0.6mg/L+奈乙酸0.05～0.2mg/L；
（8）壮苗生根培养：生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天；壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨2～3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+土豆100g/L+香蕉50g/L+奈乙酸0.05～0.3mg/L+IBA0.05～0.3mg/L；
（9）炼苗移栽：将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后，打开瓶盖继续炼苗1至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡10min，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理。
肿节石斛优良单株株型中等，节肿大呈明显算珠状、节间距短，花朵具突出的清香味，综合性状优良，生长良好；大苞鞘石斛优良单株花多，花径大，花朵紧凑，唇瓣斑眼色泽艳丽，单花性状特别突出。
人工授粉按以下操作进行：使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵。
授粉后的管理按以下操作进行：交替施用花多多平衡肥和高钾肥，施用浓度均为0.1%；座果后及时去除硫酸纸袋。
花多多平衡肥配比为N：P：K=20：20：20，高钾肥配比为N：P：K=5：11：26
步骤（9）炼苗移栽中基质由刨花、松树皮、木屑、木炭按体积比2:2:1:1混合而成；其中，刨花、松树皮和木屑预先以沸水煮1小时，木炭以太阳暴晒。
MS培养基的配方为KNO31900mg/L，NH4NO31650mg/L，KH2PO4170mg/L，MgSO4·7H2O370mg/L，CaCl2·2H2O440mg/L，KI0.83mg/L，H3BO36.20mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.60mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，Na2·EDTA·2H2O37.30mg/L，FeSO4·7H2O27.80mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.00mg/L，盐酸硫胺素0.10mg/L，盐酸吡哆醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L；
Ｎ6培养基的配方为KNO32830mg/L，NH4SO4463mg/L，KH2PO4400mg/L，MgSO4·7H2O185mg/L，CaCl2·2H2O166mg/L，KI0.80mg/L，H3BO31.60mg/L，MnSO4·4H2O4.4mg/L，ZnSO4·7H2O1.5mg/L，Na2·EDTA·2H2O37.30mg/L，FeSO4·7H2O27.80mg/L，甘氨酸2.00mg/L，盐酸硫胺素1.00mg/L，盐酸吡哆醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L。
培养条件为光照2000-3000lux、10-12h/d，温度24±2℃。
结合肿节石斛和大苞鞘石斛的观赏性状优良、互补性强的特点，发明人选择肿节石斛优良单株为母本、大苞鞘石斛优良单株为父本进行人工种间杂交，建立了本发明观赏石斛新种质的培育方法。该法根据观赏石斛育种目标选配杂交亲本，选择综合性状优良的单株、适宜的授粉时间进行人工授粉，并在授粉后开展合理的水肥管理，解决了石斛种间杂交亲和性较低的问题，促进杂交果实的发育，杂交结实率可达22%；针对杂种胚发育不全、无菌播种萌发率低的问题，适时采收果实，并选择适宜的培养基为杂种胚提供营养，显著提高了杂种胚萌发率，种子萌发率可达90%，增殖倍数达5-8倍。本发明从人工授粉、经无菌播种到成苗移栽的最短周期约为12个月，显著缩短了观赏石斛种间杂交新种质的培育周期，并获得了大量生长健壮的杂交子代成苗，它集合了父母本各自的优良遗传背景，为培育自主知识产权的观赏石斛品种提供了新种质，为进一步培育茎花俱美、综合性状优良的观赏石斛新品种打下了基础，为观赏石斛新品种选育提供了有效的途径。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明，其中：
肿节石斛优良单株株型中等，节肿大呈明显算珠状、节间距短，花朵具突出的清香味，综合性状优良，生长良好；大苞鞘石斛优良单株花多，花径大，花朵紧凑，唇瓣斑眼色泽艳丽，单花性状特别突出。
步骤（9）炼苗移栽中基质由刨花、松树皮、木屑、木炭按体积比2:2:1:1混合而成；其中，刨花、松树皮和木屑预先以沸水煮1小时杀菌并除去有害物质，木炭以太阳暴晒杀菌。
MS培养基的配方为KNO31900mg/L，NH4NO31650mg/L，KH2PO4170mg/L，MgSO4·7H2O370mg/L，CaCl2·2H2O440mg/L，KI0.83mg/L，H3BO36.20mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.60mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，Na2·EDTA·2H2O37.30mg/L，FeSO4·7H2O27.80mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.00mg/L，盐酸硫胺素0.10mg/L，盐酸吡哆醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L；
Ｎ6培养基的配方为KNO32830mg/L，NH4SO4463mg/L，KH2PO4400mg/L，MgSO4·7H2O185mg/L，CaCl2·2H2O166mg/L，KI0.80mg/L，H3BO31.60mg/L，MnSO4·4H2O4.4mg/L，ZnSO4·7H2O1.5mg/L，Na2·EDTA·2H2O37.30mg/L，FeSO4·7H2O27.80mg/L，甘氨酸2.00mg/L，盐酸硫胺素1.00mg/L，盐酸吡哆醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L。
美国施可得公司生产花多多平衡肥和高钾肥，配比分别为N：P：K=20：20：20和N：P：K=5：11：26。
培养条件为光照2000-3000lux、10-12h/d，温度24±2℃。
实施例1
所用培养基配方如下：
播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤0.1mg/L；
增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+土豆150g/L+香蕉50g/L+6-苄氨基嘌呤0.1mg/L+奈乙酸0.05mg/L；
壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+土豆100g/L+香蕉50g/L+奈乙酸0.05mg/L+IBA0.05mg/L；
（1）杂交亲本选配：选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
（2）人工授粉：2012年3月17日（母本植株的待授粉花朵开放后2天，父本植株供粉花朵开放后的2天），晴，上午9:00～10:30进行杂交授粉；使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵，挂牌标明父母本和授粉时间。授粉花朵数共计11朵。
（3）授粉后的管理：授粉后24小时，授粉母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常浇水施肥；交替施用花多多平衡肥和高钾肥，促进果实发育，施用浓度均为0.1%，避免水肥直接喷施于授粉花朵上；座果后及时去除硫酸纸袋；雨季注意防雨，高温高湿季节注意控水和通风管理，以免造成落果；
（4）果实采收：授粉120天，座果数为2，座果率为18%；杂交授粉后150天后，采收蒴果（果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂）；
（5）果表面灭菌：未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
（6）萌发培养：灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中培养，先暗培养7天后转入光下培养；培养10～14天，种胚膨大变绿；培养40-55天，形成绿色锥形球茎，种子萌发率达88%；
（7）增殖分化培养：萌发的种子形成的绿色锥形球茎转接到增殖分化培养基上，培养60至75天，苗高2～3cm，叶片1～2片，叶色深绿，增殖率达5倍；
（8）壮苗生根培养：生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天，苗高6～8cm，茎粗0.2～0.3cm，叶片3～4片，根数5～7条，叶色深绿，健壮植株；
（9）炼苗移栽：将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后，打开瓶盖继续炼苗1至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡10min，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理，并注意保持温度和湿度，做好遮荫、控温、保湿和防病防虫工作，成活率达90%以上。
实施例2
所用培养基配方如下：
播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤0.2mg/L；
增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+土豆150g/L+香蕉50g/L+6-苄氨基嘌呤0.3mg/L+奈乙酸0.1mg/L；
壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+土豆100g/L+香蕉50g/L+奈乙酸0.1mg/L+IBA0.1mg/L；
（1）杂交亲本选配：选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
（2）人工授粉：2012年3月18日（母本植株的待授粉花朵开放后3天，父本植株供粉花朵开放后的3天），晴，下午16:30～17:30进行杂交授粉；使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵，挂牌标明父母本和授粉时间。授粉花朵数共计9朵。
（3）授粉后的管理：授粉后24小时，授粉母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常浇水施肥；交替施用花多多平衡肥和高钾肥，促进果实发育，施用浓度均为0.1%，避免水肥直接喷施于授粉花朵上；座果后及时去除硫酸纸袋；雨季注意防雨，高温高湿季节注意控水和通风管理，以免造成落果；
（4）果实采收：授粉120天，座果数为2个，座果率为22%；杂交授粉后210天后，采收蒴果（果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂）；
（5）果表面灭菌：未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
（6）萌发培养：灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中培养，先暗培养7天后转入光下培养；培养10～14天，种胚膨大变绿，45-60天，形成绿色锥形球茎，种子萌发率达90%；
（7）增殖分化培养：萌发的种子形成的绿色锥形球茎转接到增殖分化培养基上，培养60至75天，苗高2～3cm，叶片1～2片，叶色深绿，增殖率达8倍；
（8）壮苗生根培养：生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天，苗高6～8cm，茎粗0.2～0.3cm，叶片3～5片，根数6～8条，叶色深绿，健壮植株；
（9）炼苗移栽：将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后，打开瓶盖继续炼苗1至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡10min，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理，并注意保持温度和湿度，做好遮荫、控温、保湿和防病防虫工作，成活率达90%以上。
实施例3
所用培养基配方如下：
播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤0.6mg/L；
增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+土豆150g/L+香蕉50g/L+6-苄氨基嘌呤0.6mg/L+奈乙酸0.2mg/L；
壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+土豆100g/L+香蕉50g/L+奈乙酸0.3mg/L+IBA0.3mg/L；
（1）杂交亲本选配：选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
（2）人工授粉：2012年3月26日（母本植株的待授粉花朵开后10天，父本植株供粉花朵开后的5天），晴，上午9:00～11:00进行杂交授粉；使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵，挂牌标明父母本和授粉时间。授粉花朵数共计12朵。
（3）授粉后的管理：授粉后24小时，授粉母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常浇水施肥；交替施用花多多平衡肥和高钾肥，促进果实发育，施用浓度均为0.1%，避免水肥直接喷施于授粉花朵上；座果后及时去除硫酸纸袋；雨季注意防雨，高温高湿季节注意控水和通风管理，以免造成落果；
（4）果实采收：授粉300天，座果数为2，座果率为16%；杂交授粉后300天后，采收蒴果（果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂）；
（5）果表面灭菌：未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
（6）萌发培养：灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中培养，先暗培养7天后转入光下培养；培养10～14天，种胚膨大变绿，45-60天，形成绿色锥形球茎，种子萌发率达85%；
（7）增殖分化培养：萌发的种子形成的绿色锥形球茎转接到增殖分化培养基上，培养60至75天，苗高2～3cm，叶片1～2片，叶色深绿，增殖率达7倍；
（8）壮苗生根培养：生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天，苗高6～8cm，茎粗0.2～0.3cm，叶片3～4片，根数6～8条，叶色深绿，健壮植株；
（9）炼苗移栽：将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后，打开瓶盖继续炼苗1至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡10min，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理，并注意保持温度和湿度，做好遮荫、控温、保湿和防病防虫工作，成活率达90%以上。
Claims (6)
1.一种观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)杂交亲本选配：选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
(2)人工授粉：母本植株的待授粉花朵开放后2天至10天为授粉适宜时期，父本植株供粉花朵开放后的2天至5天为采集花粉块的适宜时期；杂交授粉于晴天上午9:00～11:00或下午16:30～17:30进行；
(3)授粉后的管理：授粉后24小时以内，母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常管理；
(4)果实采收：杂交授粉后150至300天，在果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂前，适时采收；
(5)果表面灭菌：未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75％的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
(6)萌发培养：灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中，暗培养7天后转为光照培养40-55天；播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤0.1～0.6mg/L；
(7)增殖分化培养：萌发的种子转接到增殖分化培养基上，培养60至75天；增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2～3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+土豆150g/L+香蕉50g/L+6-苄氨基嘌呤0.1～0.6mg/L+奈乙酸0.05～0.2mg/L；
(8)壮苗生根培养：生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天；壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨2～3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+土豆100g/L+香蕉50g/L+奈乙酸0.05～0.3mg/L+IBA0.05～0.3mg/L；
(9)炼苗移栽：将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后，打开瓶盖继续炼苗1至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1％的多菌灵浸泡10min，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理；所述基质由刨花、松树皮、木屑、木炭按体积比2:2:1:1混合而成；其中，刨花、松树皮和木屑预先以沸水煮1小时，木炭以太阳暴晒；
所述培养条件为光照2000-3000lux、10-12h/d，温度24±2℃。
2.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于：所述肿节石斛优良单株株型中等，节肿大呈明显算珠状、节间距短，花朵具突出的清香味，综合性状优良，生长良好；所述大苞鞘石斛优良单株花多，花径大，花朵紧凑，唇瓣斑眼色泽艳丽，单花性状特别突出。
3.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于所述人工授粉按以下操作进行：使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵。
4.根据权利要求3所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于所述授粉后的管理按以下操作进行：交替施用花多多平衡肥和高钾肥，施用浓度均为0.1％；座果后及时去除硫酸纸袋。
5.根据权利要求4所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于：所述花多多平衡肥配比为N：P：K＝20：20：20，高钾肥配比为N：P：K＝5：11：26。
6.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于：
所述MS培养基的配方为KNO31900mg/L，NH4NO31650mg/L，KH2PO4170mg/L，MgSO4·7H2O370mg/L，CaCl2·2H2O 440mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO36.20mg/L，MnSO4·4H2O 22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.60mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O 0.025mg/L，Na2·EDTA·2H2O 37.30mg/L，FeSO4·7H2O 27.80mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.00mg/L，盐酸硫胺素0.10mg/L，盐酸吡哆醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L；
所述N6培养基的配方为KNO32830mg/L，NH4SO4463mg/L，KH2PO4400mg/L，MgSO4·7H2O185mg/L，CaCl2·2H2O 166mg/L，KI 0.80mg/L，H3BO31.60mg/L，MnSO4·4H2O 4.4mg/L，ZnSO4·7H2O 1.5mg/L，Na2·EDTA·2H2O 37.30mg/L，FeSO4·7H2O 27.80mg/L，甘氨酸2.00mg/L，盐酸硫胺素1.00mg/L，盐酸吡哆醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L。
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2013
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