CN103717200A - 新的磷酸脂或硫酸脂化合物、含有它的组合物及其局部使用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种新的磷酸脂或硫酸脂化合物、含有它的组合物及其局部使用，该化合物具有下列研制分子式IX：式中：X=PO（OH）2；SO2（OH）；PO（OH）（Xaa）m或SO2（Xaa）m；A=H；OH；NH2或akyl（1-6C）；n=1到4；Y=-CO-OR2；-CO-NR3R4；-O-CO-R2；-C＝CR2；R2=具有1到24个碳原子的烷基、芳基、芳烷基、酰基、磺酰基、糖或烷氧基链，可以是直链、支链或环链，有或没有取代基，饱和或不饱和，羟基化或未羟基化，硫化或未硫化；R5=OH，O-alk（1-6C），（Xaa）m，NH2或NH-烷基（1-6C）；Xaa=m个氨基酸的肽Xaa，m从1到10；此化合物最好是磷酸酯，从苹果酸中获得，具有下列研制分子式：

Description

新的磷酸脂或硫酸脂化合物、含有它的组合物及其局部使用
技术领域
本发明的主题是一种新的硫酸脂或磷酸脂化合物、含有它们的组合物、及其使用；例如，在化妆品、个人护理产品和皮用药物等领域。 
本发明涉及哺乳动物、动物或人体的皮肤与附器（比如头发、睫毛、眉毛、指甲、毛发等）护理的化学、医疗或化妆品工业。 
背景技术
化妆品工业一直在不断地寻找新的活性化合物，提议将其用于配制新的化妆品。业界正在寻找越来越多的化合物；它们必须在若干个标靶上有活性，以便改善皮肤的整体条件；也就是说，首先是其水合程度，还有其机械性质和/或其亮度。另外，能够寻找一种最特殊的新的活性配料；它能美化皮肤和附器，比如通过增大体积、澄清肤色、减轻体重等。本发明的目的就是满足此需求。 
发明内容
为了这个目标，我们提出具有下列研制分子式I的化合物： 
Figure BDA00001893485400011
R1是一种脂链/亲脂性链 
X=PO（OH）2或SO2（OH） 
n=1到4。 
因此，本发明针对下列两类化合物： 
具有下列研制分子式II的磷酸酯化合物： 
Figure BDA00001893485400012
具有下列研制分子式III的硫酸酯化合物： 
根据本发明，脂链/亲脂性链R1被列举为R1=OR2或NR3R4。R2是具有1到24个碳原子的烷基、芳基、芳烷基、酰基、磺酰基、糖或烷氧基链，最好是至少有4个碳原子；可以是直链，带支链或环链；有或没有取代基；饱和或不饱和，羟基化或未羟基化，硫化或未硫化。R3和R4相互独立，可以是氢或R2链，即具有1到24个碳原子的烷基、芳基、芳烷基、酰基、磺酰基、糖或烷氧基链，最好是至少有4个碳原子；可以是直链，带支链或环链；有或没有取代基；饱和或不饱和，羟基化或未羟基化，硫化或未硫化。R3和R4之一是R2型链。 
根据使用的pH值，本发明的化合物能够以盐或酸的形式使用，或者是它们二者的混合物。 
利用本发明的化合物获得了体外和体内试验结果，表明它极有可能在化妆品或皮用药物中得到应用。 
根据首选特点： 
-R1=OR2，其中R2=具有至少4个碳原子的烃链，和/或 
-本发明的化合物是磷酸酯，X为PO（OH）2和/或 
-n=1 
更加可取的是，本发明的化合物是从苹果酸获得，或者从其衍生物之一获得，或者是以类似物作为原材料。这样，本发明的首选化合物就是2-磷酸-琥珀酸-4-十四烷基酯；它具有下列研制分子式IV，因此在下文中称为“磷酸苹果酸脂”： 
其中n=1，X=PO（OH）2，R1=OC14H29。 
使用苹果酸作为原材料之一的优势非常明显，使得制造过程既简单，又能给出高的产出率。具体描述如下。 
其它商业二酸能方便地适用于获得本发明的化合物，例如具有下列研制分子式V的酒石酸（2，3-酒石酸）： 
Figure BDA00001893485400022
根据进一步的特点：化合物能够在-（CH2）n-链上包含一个取代基，例如在OH、NH2或烷基链中选择；最好是较低的烷基链，和/或可以将羰基官能团替换成双键类似官能团，如下列研制分子式VI中所示，和/或： 
Figure BDA00001893485400031
本发明的化合物的COOH羧酸官能团能够以衍生形式存在，例如酯的形式。有利的是，本发明的化合物能够耦合m个氨基酸Xaa（其中m是从1到10）的任何肽，以获得具有下列研制分子式VII的化合物；耦合的实现是通过与本发明化合物COOH的肽式接合： 
Figure BDA00001893485400032
和/或与X取代基的一个OH耦合。这样，本发明的化合物就变成耦合到肽上的传统脂链的磷酸酯或硫酸酯替代品，就像棕榈酰、elaidoyle或biotinoyle链、具有官能团的脂或亲脂性R1，以改善肽的biodisponibiliy（生物扩散性）、及其皮肤穿透能力。 
本发明包含由编码的、天然或非天然的、衍生的和类似的氨基酸（编码的氨基酸：丙氨酸A Ala，精氨酸R Arg，氨羰丙氨酸N Asn，天冬氨酸或天门冬氨酸D Asp，Cystein［孕尿翳］C Cys，谷氨酸E Glu，谷氨酰胺Q Gln，甘氨酸G Gly，组氨酸H His，异亮氨酸I Ile，白氨酸L Leu，赖氨酸K Lys，甲硫氨酸M Met，酚基丙氨酸F Phe，脯氨酸P Pro，丝氨酸S Ser，苏氨酸T Thr，色氨酸W Trp，酪氨酸Y Tyr，缬氨酸，V Val）组成的肽（Xaa）m。例如，可引用的内容包括、但不限于，氨基酸K，T，C，M，MO（其硫被氧化的甲硫氨酸），MO2（其硫是二氧化硫的甲硫氨酸），二肽KT，KC，KP，VW，KK，TT，YR，NF，DF，EL，CL，AH，YR，肉碱，三肽RKR，HGG，GHK，GKH，GGH，GHG，KFK，GKH，KPK，KMOK，KMO2K，KAvaK，四肽RSRK（序列表：1），GQPR（序列表：2）或KTFK（序列表：3），五肽KTTKS（序列表：4），六肽GKTTKS（序列表：5），VGVAPG（序列表：6）等。 
至于其他的例子，也会提到下列市场销售肽的氨基酸顺序：VialoxTM，Syn-akeTM或Syn-CollTM（Pentapharm；译注，可能是前面产品的制造商名称，下同），Hydroxyprolisilane CNTM（Exsymol），ArgirelineTM，LeuphasylTM，AldenineTM，TrylgenTM，EyeserylTM，SerilesineTM或DecorinylTM（Lipotec），CollaxylTM或QuintescineTM（Vincience），BONT-L-肽TM（lnfinitec Activos），CytokinolTM LS（实验室Serobiologiques/Cognis），KollarenTM，IP2000TM或MelipreneTM（lnstitut Européen de Biologie Cellulaire），NeutrazenTM（Innovations），ECM-ProtectTM（Atrium Innovations），Timp-肽TM或ECM ModulineTM（lnfinitec Activos），以及在下文中提到的肽。当超过十个氨 基酸、氨基酸的衍生物或类似物时，肽一般会太大，不能用于化妆品应用；而且也太贵，不适合制造。出于这些原因，耦合的肽最好限制在n=6（六肽）。 
本发明的化合物也可以是双硫酸脂，或者是双或三磷酸脂。下面的研制分子式VIII展示了本发明的这个特征，例如，作为双磷酸脂的本发明的化合物： 
Figure BDA00001893485400041
本发明的化合物能用下列通用分子式IX表示，组合了上面披露的所有可能的变体： 
式中： 
X=PO（OH）2；SO2（OH）；PO（OH）（Xaa）m或SO2（Xaa）m； 
A=H；OH；NH2或akyl（1-6C）； 
n=1到4； 
Y=-CO-OR2；-CO-NR3R4；-O-CO-R2；-C＝CR2； 
R2=具有1到24个碳原子的烷基、芳基、芳烷基、酰基、磺酰基、糖或烷氧基链，可以是直链、支链或环链，有或没有取代基，饱和或不饱和，羟基化或未羟基化，硫化或未硫化；最好是至少4个碳原子的链； 
R3和R4相互独立，可以是氢原子或R2链； 
R5=OH，O-alk（1-6C），（Xaa）m，NH2或NH-烷基（1-6C）； 
Xaa=m个氨基酸的肽Xaa，m是从1到10。 
在研制分子式I中， 
Figure BDA00001893485400043
X=PO（OH）2或SO2（OH） 
R5=OH 
A=H 
n=1到4， 
Y=-CO-R1，其中R1=OR2或NR3R4。 
本发明的目的还有一种用于化妆品或皮肤医药的局部组合物（其特点是，它在生理上可接受的介质中包含了上述化合物），该组合物在化妆品或皮用药物中的使用，以改善皮肤的总体条件，例如：处理固有的和非固有的皮肤老化痕迹，处理皮肤松驰，改善皮肤的张力、稳固性和弹性，处理皮肤萎缩，改善真皮和表皮的密度，处理皮肤脱水，处理脱发，模拟脂肪组织的膨胀，使皮肤发亮，处理皮肤中分子的糖化，处理痤疮，处理由于氧化效应造成的皮肤退化，以及处理炎性条件。因此，它所涉及的应用范围可以包括：增湿剂，清洁剂，抗老化剂，抗氧化剂，防护剂，恢复剂（手，足，唇），轮廓（面部，眼睛，颈部，唇），皮肤及其附器的化妆护理，包括睫毛、唇用产品、防晒产品、重新塑造、膨胀、重新填充（例如手，胸围，乳房），头发护理等。 
尤其重要的是，详细描述中给出的体外和体内试验结果显示，该组合物适用于预防或处理皮肤老化痕迹，预防或处理皮肤脱水，改善皮肤的柔软性，处理稳固性损失，处理细线和皱纹，模拟脂肪组织的膨胀和使皮肤发亮。 
根据其它有利特点，本发明的化妆品或皮肤医药用组合物可以结合一种或多种附加活性配料，从而积极地提供具有更广泛性质的化妆品或皮肤医用产品，或者强化本发明化合物的性质。例如，附加活性配料的选择范围可以是：发亮，防发红，遮光剂，增湿，湿润剂，防脱皮，抗老化，抗皱纹和细线，模拟胶原蛋白和/或弹性蛋白合成，变丰满，弹性改善，防痤疮，消炎药，抗氧化剂，抗自由基、或色素原脱色剂，脱毛剂，防再次生长或促进生长剂，肽，维生素等。这些活性配料可以从植物材料获取；比如植物提取物，或者来自植物细胞培养或发酵的产物。 
尤其特别的是，本发明的化合物能够与从下列化合物中选择的至少一种化合物进行组合：维生素B3，烟酰胺类化合物或生育酚，松香油，去氧苯经妥，α-硫辛酸，白藜芦醇或DHEA或N-乙酰基-酪氨酸-精氨酸-O-十六烷基，Pal-VGVAPG（序列表：7），Pal-KTTKS（序列表：8），Pal-GHK，Pal-KMO2K和Pal-GQPR（序列表：9）肽；它们都是在常规化妆品或皮肤医药局部组合物中使用的活性配料。 
具体实施方式
在本发明当中，术语“生理介质”的意思是，不受限制的水基或醇基溶液，水在油中的乳液，油在水中的乳液，微乳液，水基凝胶，无水凝胶，血清，泡囊的分散液。“生理上可接受的”意思是，发现的组合物或化合物适合于接触哺乳动物、尤其是人体的粘膜、指甲、头皮、头发、毛发和皮肤，没有毒性、不兼容性、不稳定性、变态反应等其它风险。 
当存在于组合物中时，本发明化合物的数量在组合物总重量中所占的比例范围是0.000001%到15%，更加可取的范围是0.0001%到5%；具体数量取决于组合物的预定目标，以及宣布的期望效果的高低。如未另外规定，这里使用的所有百分比和比例都针对组合物的总重，所有测量都是在25°C的基准温度下进行。 
一般情况下，在只含本发明化合物和用作增溶剂的赋形剂（生理介质）的本发明组合物当中，例如，形成用于将来制备化妆品组合物的“活性配料”，包含的化合物的数量将在0.00005%到0.05%之间。 
组合物赋形剂的选择根据与本发明的化合物相关的约束条件（稳定性，溶解性等）；而且，如果根据剂型，那么考虑为组合物。 
本发明的化合物在水中的溶解度根据它们的准确化学性质而变化。这样，本发明的化合物就能通过使用水基溶液而结合到组合物中；另外，不溶于水的物质能够利用以化妆品形式、制药形式或生理意义上可接受的常规增溶剂来实现稳定化，例如下面的列表（并不只限于此）：乙醇，丙醇，异丙醇，丙二醇，甘油，丁二醇，聚乙二醇，或者是它们的任意组合。使用乳化剂来溶解本发明的化合物也可能会很有趣，例如，含磷的乳化剂，比如磷酸酯。 
附加配料 
CTFA国际化妆品配料辞典与手册（2010年第13次修订）（由华盛顿特区的美容品、化妆品和香水协会有限公司出版）描述了能够在本发明组合物中作为附加配料使用的、通常在护肤工业中使用的、品种无限繁多的化妆用和制药用配料。这些配料类别的示例包括，但不限于：愈合剂，皮肤抗老化剂，抗皱纹剂，抗萎缩剂，皮肤增湿剂，皮肤光滑剂，抗菌剂，杀虫剂，抗寄生物剂，抗真菌剂，杀真菌剂，抑真菌剂，灭菌剂，抑菌剂，抗微生物剂，消炎剂，抗湿疹剂，外用麻醉剂，抗病毒药物，去角质剂，自由基清除剂，抗皮脂溢剂，去头屑剂，皮肤分化、增生或着色调节剂，渗透加速剂，脱皮剂，黑色素合成刺激或抑制剂，增白或脱色剂，色素原剂，自鞣剂，NO-合酶抑制剂，抗氧化剂，自由基清除剂和/或防大气污染剂，反应性羰基物种清除剂，抗糖化剂，收紧剂，刺激真皮或表皮大分子的合成和/或能够抑制或防止它们退化的试剂，比如胶原蛋白合成-刺激剂，弹性蛋白合成-刺激剂，核心蛋白聚糖合成-刺激剂，层粘连蛋白合成-刺激剂，防卫素合成-刺激剂，陪伴合成-刺激剂，水通道蛋白合成刺激剂，透明质酸合成-刺激剂，粘连蛋白合成刺激剂，乙酰化酶合成-刺激剂，角质层（神经酰胺、脂肪酸等）的类脂与组分的合成刺激剂，胶原蛋白退化抑制剂，抑制弹性蛋白退化的其它试剂，丝氨酸蛋白酶（如组织蛋白酶G）抑制 剂，成纤维细胞增生刺激剂，角质化细胞增生刺激剂，脂肪细胞增生刺激剂，黑素细胞增生刺激剂，角质化细胞分化刺激剂，脂肪细胞分化刺激剂，乙酰胆碱酯酶抑制剂，皮肤松驰剂，葡糖胺聚糖合成-刺激剂，抗表皮角化病剂，粉刺溶解剂，抗牛皮癣剂，DNA修补剂，DNA保护剂，稳定剂，止痒剂，过敏性皮肤治疗和/或护理剂，固化剂，挤拉伸标记剂，粘结剂，皮脂生产调节剂，脂解剂或脂解刺激剂，瘦身剂，止汗剂，合拢刺激剂，协作愈合剂，表皮再植刺激剂，协作表皮再植剂，细胞生长因子，镇定剂，消炎剂，麻醉药物，毛细管循环和/或微循环作用剂，血管生成刺激剂，血管通透性抑制剂，迷走神经过敏剂，细胞代谢作用剂，真皮-表皮接合改良剂，毛发生长诱导剂，毛发生长抑制或阻滞剂，肌肉松驰剂；抗污染和/或抗自由基剂；脂解剂，迷走神经过敏剂，减肥剂，抗脂肪剂，微循环作用剂；细胞能量代谢作用剂；清洁剂，毛发调节剂，头发定型剂，毛发生长促进剂，遮光剂和/或防晒化合物，化妆剂，除垢剂，医药药品，乳化剂，润肤剂，杀菌剂，除臭活性物质，皮肤学上可接受的载体，表面活性剂，研磨剂，吸附剂，美学组分，比如香水，染色/着色剂，香精油，皮肤感觉剂，化妆收敛剂，防痤疮剂，防结块剂，消泡剂，抗氧化剂，粘合剂，生物添加剂，酶，酶抑制剂，酶诱导剂，辅酶，螯合剂，植物提取物，植物衍生物，植物组织提取物，植物种子提取物，植物油，植物性药材，植物性药材提取物，香精油，海洋提取物，生物发酵过程获得的试剂，矿物盐，细胞提取物和遮光剂（对紫外A和/或B射线有效的有机或矿物光保护剂），神经酰胺，肽，缓冲剂，填充剂，螯合剂，化学添加剂，着色剂，化妆用杀生物剂，变性剂，药物收敛剂，外部镇痛剂，成膜剂或材料，例如，用于帮助组合物成膜性质和直接性的聚合物，第四纪衍生物，直接性增加剂，遮光剂，pH调节剂，推进剂，还原剂，多价螯合剂，皮肤漂白和发亮剂，皮肤鞣剂，皮肤调节剂（例如，湿润剂，包括杂项和堵塞的），皮肤安慰和/或愈合剂及衍生物，皮肤处理剂，增稠剂，及相关维生素和衍生物，剥离剂，保湿剂，治疗剂，木脂素，防腐剂，UV吸收剂，细胞毒素，抗肿瘤剂，脂溶性活性剂，悬浮剂，粘度改良剂，染料，不挥发的溶剂，稀释剂，珍珠般光泽助剂，泡沫促进剂，疫苗，以及它们的混合物。 
附加配料可以从包含下列物质的组群中选择：糖胺类，葡糖胺，D-葡糖胺，N-乙酰基葡糖胺，N-乙酰基-D-葡糖胺，甘露糖胺，N-乙酰基甘露糖胺，氨基半乳糖，N-乙酰基氨基半乳糖，维生素B3及其衍生物，烟酰胺，脱氢醋酸钠，脱氢乙酸及其盐类，植物甾醇，水杨酸化合物，去氧苯经妥，二烷醇羟基脯氨酸化合物，大豆提取物及衍生物，牛尿酚，异黄酮，类黄酮，植烷三醇，金合欢醇，香叶醇，肽及它们的衍生物，二-、三-、四-、五-和六肽及它们的衍生物，KTTKS（序列表：4），PalKTTKS（序列表：8），肌肽，N-酰基氨基酸化合物，类维生素A，视黄基酯，松香油，棕榈酸视黄醇，视黄基酯，视网膜，视黄酸，水溶性维生素，抗坏血酸盐，维生素C，抗坏血酸，抗坏血酸葡萄糖苷，抗坏血酸棕榈 酸酯，磷酸镁，磷酸钠，维生素及它们的盐和衍生物，前维生素及它们的盐和衍生物，乙基醇，维生素B，维生素B衍生物，维生素B1，维生素B2，维生素B6，维生素B12，维生素K，维生素K衍生物，泛酸及其衍生物，泛醇乙醚，泛醇及其衍生物，右泛醇，生物素，氨基酸及它们的盐和衍生物，水溶性氨基酸，天冬酰胺，丙氨酸，吲哚，谷氨酸，非水溶性维生素，维生素A，维生素E，维生素F，维生素D，单-、双-和三-萜类化合物，β-紫罗兰，雪松醇及它们的衍生物，非水溶性氨基酸，酪氨酸，色胺，二丁基羟基，二丁基羟基，尿囊素，生育酚烟酸盐，生育酚，生育酚酯，pal-GHK，植物甾醇，含氧酸，乙醇酸，乳酸，乳糖酸，酮酸，丙酮酸，植酸，溶血磷脂酸，苯乙烯，肉桂，白藜芦醇，激动素，玉米素，二甲基氨基乙醇，天然肽，大豆肽，糖酸的盐类，Mn葡糖酸盐，Zn葡糖酸盐，颗粒材料，色素，天然色素，吡罗克酮乙醇胺，3,4,4'-三氯N碳酰苯胺，三氯卡班，吡啶硫酮锌，对苯二酚，曲酸，抗坏血酸，抗坏血酸磷酸镁，抗坏血酸葡萄糖苷，维生素B6，芦荟，萜醇，尿囊素，没药醇，甘草精，甘油酸，山梨酸，山梨酸，吡咯烷酮酸及其盐，二羟基丙酮，藓，甘油醛，酒石酸甲醛，丁香油，薄荷脑，樟脑，桉树油，丁香酚，乳酸薄荷酯，金缕梅精华，二十碳烯和乙烯基吡咯烷酮共聚物，磺丙基丁氨基甲酸酯，多糖，必需脂肪酸，水杨酸，甘草次酸，类胡萝卜素，神经酰胺和拟-神经酰胺，脂质复合物，一般天然来源的油类，比如牛油果油，杏仁油，onagre，桃油，棕榈油，滋润油，HEPES，丙环司坦，O-辛酰基-6-D-麦芽糖，甲基甘氨酸乙酰乙酸的二钠盐，类固醇，比如薯蓣皂苷配基和DHEA、DHEA或脱氢异雄甾酮的衍生物，和/或前体或化学或生物衍生物，N-乙氧羰基-4-对-氨基酚，欧洲越桔提取物；植物激素；酵母（酿酒酵母）提取物，海藻提取物，大豆、羽扇豆、玉米和/或豌豆的提取物，阿尔维林及其盐，尤其是乙双苯丙胺枸橼酸，屠夫扫帚和七叶树的提取物，以及它们的混合物，金属蛋白酶抑制剂。 
关于特别有用的其它皮肤护理和头发护理活性配料，请参考SEDERMA（司达玛）公司商业文献，或者请登录网站www.sederma.fr。 
不过，在本发明的任何具体化当中，此处有用的附加配料能按照它们提供的好处、或通过它们的假想行动模式来分类。不过，需要理解的是，此处有用的附加配料在某些情况下能提供不止一个好处，或者能以不止一种行动模式发挥作用。因此，此处所做的分类只是为了方便，并不打算将附加配料限制于该具体应用或列出的应用。 
作为示例，可以提出下列已知活性物质：甜菜碱，甘油，Actimoist Bio 2TM（Active organics），AquaCacteenTM（Mibelle AG Cosmetics），AquaphylineTM（Silab），AquaregulKTM（Solabia），CarcilineTM（Greentech），CodiavelaneTM（Biotech Marine），DermafluxTM（Arch Chemicals，Inc），Hydra'FlowTM（Sochibo），Hydromoist LTM（Symrise），RenovHyalTM（Soliance），SeamossTM（Biotech Marine），EssenskinTM （Sederma），Moist24TM（Sederma），ArgirelineTM（Lipotec公司的乙酰基六肽-3的商品名），千日菊酰胺或Acmella oleracea提取物，其著名的名称是Gatuline ExpressionTM（EP1722864），名称为BoswellinTM的Boswellia serrata提取物，Deepaline PVBTM（Seppic），Syn-AKETM（Pentapharm），AmelioxTM，BioxiliftTM（Silab）或它们的混合物。 
在能够与本发明的化合物组合的植物提取物当中，特别具有重要意义的是下列物质的提取物：常春藤，尤其是英国常春藤（Hedera Helix），柴胡（Bupleurum chinensis），银柴胡，山金车油（Arnica Montana L），迷迭香（Rosmarinus officinalis N），金盏花（Calendula officinalis），鼠尾草（Salvia officinalis L），人参（Panax ginseng），银杏叶，圣约翰的麦芽汁（Hyperycum Perforatum），屠夫扫帚（Ruscus aculeatus L），欧洲绣线菊（Filipendula ulmaria L），大花亚尔瓦茶（Orthosiphon Stamincus Benth），藻类（Fucus Vesiculosus），桦树（Betula alba），绿茶，可乐果（Cola Nipida），七叶树，烟草，铲叶（Centella asiatica），石南花，墨角藻，柳树，鼠耳草，七叶树皂角素，苍术，chrysanthellum野菊，Armeniacea类、苍术桔梗、青藤属、牛子、千斤拔属的植物，锦紫苏，比如C.Forskohlii，C.blumei，C.esquirolii，C.scutellaroides，C.xanthantus和C.Barbatus，比如彩叶石竹的根提取物，Ballote的提取物，Guioa，骨碎补，榄仁，玉蕊属，Trema，antirobia，古比天蚕，argania，山药，比如Dioscorea opposita（山药）或Mexican，阿米芹、崩大碗和豨莶属的提取物，尤其是豨莶，杜鹃花科的植物提取物，尤其是欧洲越桔提取物（Vaccinium angustifollium）或熊果属熊果叶，芦荟，植物甾醇类（例如，植物甾醇），Manjistha（提取自茜根属植物，尤其是茜草），以及Guggal（提取自没药属植物，尤其是印度没药），可乐果提取物，白花春黄菊，红三叶草提取物，胡椒提取物（来自SEDERMA的卡法根（FR2 771 002和WO 99/25369），假马齿苋提取物（来自SEDERMA的BacocalmineTM，WO99/40897）和海鞭子提取物，光果甘草，桑葚，白千层属灌木（茶树），拉雷亚樱桃，冬凌草，纤细眼虫，天仙藤蛭，查帕拉尔高粱，太阳花提取物，Enantia chlorantha，Spermacocea属的Mitracarpe，Buchu barosma，指甲花，Adiantium Capillus-Veneris L.，白屈莱，普通丝瓜，日本桔子（柑桔变种温州蜜柑），中国茶，白茅，海罂粟属黄花杓兰，柏杉，多花黄精，雪胆，黑接骨木，金甲豆，百金花属植物（龙胆科），巨藻，达米阿那白花蛇舌草，知母，马齿苋科，蛇麻草，小粒咖啡和巴拉圭茶的提取物。 
从植物中提取可以使用传统工艺进行，比如苯酚提取，从植物的任何部分，比如花、种子、果实、根、小块茎、叶、果皮，以及最好是根茎。提取溶剂可以从下列物质中选择：水，丙二醇，丁二醇，甘油，PEG-6辛酸/癸酸甘油酯，聚乙二醇，甲酯和/或乙酯，二甘醇，环状多甘醇，乙氧基化的或丙氧基化的二甘醇，醇类（甲醇，乙醇，丙醇和丁醇）或这些溶剂的任意混合物。本发明的植物提取物也可以通过其它工艺获得，比如浸渍，简单煎 煮，浸提回流提取，用CO2超临界提取，超声波或微波提取，或逆流技术，或者通过植物细胞培养工程和/或发酵。这个列表没有限制。 
合适的肽能够包括，但不限于，二-、三-、四-、五-和六-肽及其衍生物。在一种具体化中，在附加肽的重量基础上，组合物中所含的数量是从大约1x10-7%到大约20%，更加可取的是从大约1x10-6%到大约10%，甚至更加可取的是从大约1x10-5%到大约5%。 
当在此处使用时，“肽”指的是含有十个或更少氨基酸的肽和它们的衍生物，异构体，以及与其它物种的络合物，比如金属离子（例如，铜，锌，锰，镁等等）。当在此处使用时，肽同时包括天然形成的和合成的肽。天然形成的和商场上可买到的含肽组合物在此处也适用。此处使用的合适的二肽包括、但不限于：肌肽（β-AH），YR，VW，NF，DF，KT，KC，CK，KP，KK或TT。此处使用的合适的三肽包括、但不限于：RKR，HGG，GHK，GKH，GGH，GHG，KFK，GKH，KPK，KMOK，KMO2K或KAvaK。此处使用的合适的四肽包括、但不限于：RSRK（序列表：1），GQPR（序列表：2）或KTFK（序列表：3）。此处使用的合适的五肽包括、但不限于KTTKS（序列表：4）。此处使用的合适的六肽包括、但不限于GKTTKS（序列表：5），VGVAPG（序列表：6）以及在FR 2854897和US2004/0120918中发明的类型。 
此处使用的其它合适的肽包括、但不限于：肽的亲油性衍生物，最好是棕榈酰衍生物，以及上述物质的金属络合物（例如，三肽His-Gly-Gly的铜络合物）。首选的二肽衍生物包括N-棕榈酰-β-Ala-His，N-乙酰基-Tyr-Arg-十六烷基酯（来自SEDERMA公司的CALMOSENSINETM，地址：法国，WO 9807744，US 6,372,717）。首选的三肽衍生物包括N-棕榈酰-Gly-Lys-His，（来自法国SEDERMA的Pal-GKH，WO 0040611），Pal-KMO2K，来自Sigma、以lamin名称销售的His-Gly-Gly的铜衍生物，lipospondin（N-Elaidoyl-Lys-Phe-Lys）及其保守取代基的类似物，N-乙酰基-Arg-Lys-Arg-NH2（肽CK+），N-Biot-Gly-His-Lys（来自SEDERMA的N-Biot-GHK，WO0058347）及其衍生物。此处使用的合适的四肽衍生物包括、但不限于N-棕榈酰-Gly-Gln-Pro-Arg（序列表：9）（来自法国的SEDERMA公司）。此处使用的合适的五肽衍生物包括、但不限于N-棕榈酰-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser（序列表：8）（可从法国SEDERMA公司获得，商品名为MATRIXYLTM，WO 0015188和US6,620,419），N-棕榈酰-Tyr-Gly-Gly-Phe-X，其中的X是Met（序列表：10）或Leu（序列表：11）或它们的混合物。此处使用的合适的六肽衍生物包括、但不限于N-棕榈酰-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly（序列表：7）和它们的衍生物。 
市场上可买到的含三肽或衍生物的首选组合物包括SEDERMA的生物肽-CLTM（WO0143701）、SEDERMA的MaxilipTM（WO 0143701）、SEDERMA的BiobustylTM。市场上可买到的四肽首选源的组合物包括RIGINTM（WO0043417）、EYELISSTM （WO03068141）、MATRIXYLTM RELOADED、以及MATRIXYL 3000TM；它们含有50到500ppm的棕榈酰-Gly-Gln-Pro-Arg（序列表：9），以及载体，制造商是法国的SEDERMA（US2004/0132667）。 
除了附加活性配料以外，也能提入下列市场上销售的肽：VialoxTM，Syn-akeTM或Syn-CollTM（Pentapharm），Hydroxyprolisilane CNTM（Exsymol），ArgirelineTM，LeuphasylTM，AldenineTM，TrylgenTM，EyeserylTM，SerilesineTM或DecorinylTM（Lipotec），CollaxylTM或QuintescineTM（Vincience），BONT-L-肽TM（lnfinitec Activos），CytokinolTMLS（实验室Serobiologiques/Cognis），KollarenTM，IP2000TM或MelipreneTM（lnstitut Européen de Biologie Cellulaire），NeutrazenTM（Innovations），ECM-ProtectTM（Atrium Innovations），Timp-肽TM或ECM ModulineTM（lnfinitec Activos）。 
组合物制备 
本发明的组合物可用常规方法制备，比如已知的局部和口服组合物与注射用组合物的制备工艺。此类方法通常能够分一步或多个步骤执行，带或不带加热、冷却等等。 
本发明组合物的物理形态并不重要：它们可以是任何格林制剂形式，例如面霜，乳液，牛奶或霜软膏，凝胶，乳剂，分散剂，溶液，悬浮液，清洁剂，基底，无水制剂（条状，尤其是唇油、身体和沐浴油），淋浴和沐浴凝胶，洗发水和头皮治疗药水，用于皮肤或毛发护理的乳剂或洗液，去除化妆品的洗液或乳剂，遮阳洗液，奶剂或乳剂，人工晒黑洗液，乳剂或奶剂，剃须前、剃须中或剃须后用的乳剂，泡沫，凝胶或洗液，化妆品，口红，染睫毛油或指甲油，皮肤“香精”，血清，粘结或吸附材料，透皮补丁、或粉末，软化剂洗液，用于身体和沐浴的奶剂或乳剂、喷涂材料、油，基础色彩底基，发油，乳液，胶体，压实的或固体悬浮液，画笔、可喷涂或可刷的配方，脸红，红色，眼线笔，唇线笔，唇彩，面用或体用粉末，造型泡沫或凝胶，指甲调理剂，润唇膏，皮肤调理剂，增湿剂，头发喷雾剂，肥皂，身体去角质成分，收敛剂，脱毛剂和永久性烫发波浪溶液，去屑配方，防出汗和防排汗组合物，鼻喷剂等等。这些组合物的呈现形式也可以是口红，打算用来给嘴唇上色，或防止它开裂；或者是用于眼睛的化妆品，以及用于面部的着色和着色基底。本发明的组合物包括化妆品、个人护理产品和药物制剂。本发明也可以应用于动物皮肤和/或附器。组合物也能考虑采用泡沫形式，或者采用气溶胶的组合物形式，其中包括带压力的推进剂。 
本发明的化妆品组合物也能用于口腔牙齿方面，例如，牙膏。在此情况下，组合物可以包含供口腔使用的组合物的常规佐剂和添加剂，以及（尤其是）表面活性剂，增稠剂，增湿剂，磨光剂，比如二氧化硅，各种活性物质，比如氟化物，尤其是氟化钠，以及在可能时还有甜味剂，比如糖精钠。 
本发明的化合物可呈现的形式有溶液、悬浮液、乳液、糊膏或粉末，单独存在或在载体中预混合，单独存在或者在媒介物中预混合，比如大型-、微型-、或毫微囊剂，大型-、微型-或毫微球体，脂质体、油质体或乳糜微粒，大型-、微型或毫微海绵体，孢子或外膜，微或毫微乳液，或者吸附在有机聚合物粉末、滑石粉、膨润土、或其它无机或有机载体上。本发明的化合物可以通过可能存在的任何形式来使用，采用结合到或组合、或吸附在大型-、微型-和毫微颗粒、或大型-、微型-和毫微囊剂之上或之内的形式，用于处理织物、天然或合成纤维，羊毛，以及打算用于与皮肤接触的白天或夜晚穿着的衣物或内衣的任何材料，手帕或布子，以便通过这种皮肤/织物接触来呈现出它们的化妆效果，并允许持续的局部释放。 
局部化妆品或皮肤医药处理的方法 
本发明也关系到为改善皮肤总体条件的局部处理过程，涉及按照前文描述，将有效数量的本发明组合物在皮肤上的局部涂抹应用。更特别的是： 
-预防和/或处理固有的和非固有的皮肤老化迹象； 
-预防和/或处理皮肤脱水； 
-预防和/或处理皮肤松驰，和/或改善皮肤的紧张性和/或稳固性、和/或弹性和/或柔软性； 
-预防和/或处理皮肤萎缩，和/或改善真皮与表皮的密度； 
-给出或恢复真皮与表皮的体积； 
-刺激脂肪组织的膨胀； 
-使皮肤光亮； 
-预防和/或处理皮肤粗糙度； 
-预防和/或处理氧化造成的皮肤退化； 
-预防和/或处理脱发； 
-预防和/或处理皮肤中分子的糖化； 
-预防和/或处理痤疮； 
-预防和/或处理炎性状态。 
可以将本发明的组合物涂抹在面部、唇、颈、领口、手、脚、头或身体的局部区域。本发明的主要优点之一在于，通过这种局部的、非侵入性应用方法，在必要时或希望时，随时能够应用局部选择性的“轻柔”处理。例如，如果用于抗皱纹，就可以使用注射器或微导管进行非常局部的应用。 
不过，也可以考虑将含有本发明化合物的组合物进行皮下注射。 
根据其它特点，本发明的处理方法能够组合一种或多种以皮肤为对象的其它处理方法，比如光疗、芳香疗法或热疗。 
根据本发明，可以提议用具有若干个隔间或套件的装置来应用上述方法；例如，它可以包括、但不限于：第一个隔间中装包括本发明硫酸脂或磷酸脂化合物的组合物，第二个隔间中装含另一种活性配料和/或赋形剂的组合物；在此情况下，上述第一和第二个隔间中所含的组合物可考虑为用于同步、单独或分步及时使用的组合物的组合，尤其是中上述处理方法之一中。 
示例 
下列示例描述和展示了本发明范围内的各个方面。给出的示例仅供演示用途，不得认为是对本发明的限制。另外，出于演示目的，将描述若干个化妆品配方。这些配方是本发明的代表，而不是限制。 
1．根据本发明，获取磷酸苹果酸脂（2-磷酸盐-琥珀酸的4-十四烷基酯）的制造方法示例：
根据下列合成示意图，2-磷酸盐-琥珀酸4-十四烷基酯（具有第2号参考的最终产品）的合成分4个线性步骤来实现： 
Figure DEST_PATH_IMAGE001
（2,2-二甲基-5-氧-[1,3]二氧戊环-4-yl）-醋酸（参考上述示意图中标号5）的合成： 
在2,2-二甲氧基丙烷存在的条件下，将市场上销售的DL-苹果酸（参考上述示意图中标号4）在甲苯回流中以二氧戊环的形式保护。反应是定量的。获得的产品（参考上述示意图中标号5）直接进入下一步骤。 
（2,2-二甲基-5-氧-[1,3]二氧戊环-4-yl）-醋酸十四烷基酯（参考上述示意图中标号7）的合成： 
在有DCC（二环己基碳二亚胺）和催化剂数量的DMAP3（4-二甲基氨基吡啶）存在的条件下，利用1-十四醇，对自由含羧基的官能团进行酯化。获得化合物（参考上述示意图中标号7）直接进入下一步骤。 
琥珀酸4-十四烷基酯（参考上述示意图中标号8）的合成： 
十六烷基物（参考号7）在酸性介质中水解，以导入酸中。在环己烷中净化和结晶后，离析出的产品收率是71%。 
2-磷酸盐-琥珀酸4-十四烷基酯（参考号2）的合成
在80°C温度下，在催化剂数量的二月桂酸二丁基锡存在下，利用磷酸对自由醇官能团进行磷酸化。获得所需的磷酸苹果酸脂（参考号2），收率为46%，物态为白色固体。 
2．含有本发明化合物的活性配料的配方示例
这种活性配料在化妆品工业中用于制备化妆品，比如乳剂、凝胶等。 
首先将固体磷酸苹果酸脂溶解在糖酯（月桂酸盐和/或油酸山梨醇）和磷酸酯（油烯基和/或二油烯基磷酸酯）的混合物中，然后，分散在软化剂中。 
一般情况下，这种活性配料中磷酸苹果酸脂的数量约为200ppm。 
3．体外评估结果
对于这些评估试验，当溶解磷酸苹果酸脂时，它符合上面的第2条。 
中间丝相关蛋白是在表皮上部发现的一种蛋白质。依靠它在形成、然后稳定皮肤隔层（角质层）、以及在形成自然增湿因子（NMF）中的关键角色，它是水均匀性方面的关键因素。
中间丝相关蛋白的生成是通过形式为聚合前体的颗粒层-表皮的最后有生命力的物质：丝聚合蛋白源。后者是1到12个中间丝相关蛋白单体的链。它的磷酸化率控制其不溶性、溶菌和在角质透明蛋白颗粒中的填充，其兜甲蛋白和角蛋白为1和10. 
依次地，而且随着它朝着表皮顶层的上升，丝聚合蛋白原将经历： 
-蛋白水解，导致生成中间丝相关蛋白的单体。在这个蛋白水解过程中涉及到蛋白裂解酶； 
-得益于转谷氨酰胺酶，在角蛋白中间丝（KIF）上的束缚； 
-通过肽酰deiminase（去亚氨基）来减少束缚，中间丝相关蛋白的de-imination（去亚氨基化），并导致中间丝相关蛋白单体的再现，以及 
-通过身份不明的蛋白酶，中间丝相关蛋白退化成中间丝相关蛋白碎片。 
在角质层的下部，在半胱天冬酶-14的作用下，脱水触发中间丝相关蛋白碎片的完全蛋白水解。这种蛋白水解导致了吸湿性氨基酸的生成。这些氨基酸构成大约40%的自然增湿因子（NMF），部分负责维持表皮的良好水合作用。 
表皮的良好水合作用是一种复杂现象，涉及维持不同蛋白质的高等级受压：中间丝相关蛋白，转谷氨酰胺酶，兜甲蛋白，蛋白裂解酶和半胱天冬酶14。这通过在培养物中人体角质化细胞上或皮肤外植体上的应用而实现。 
通过角质层中防止水分损失的特殊防渗脂质膜的存在，也能保证皮肤的合适水合作用。 
3.1-人体角质化细胞上中间丝相关蛋白合成的研究（免疫荧光法） 
协议：将人体角质化细胞一直培养到融合。然后，将细胞放置为与溶解的磷酸苹果酸脂接触/不接触达21天。在这个接触期结束时，使用特定抗体，在细胞层上执行公用于中间丝相关蛋白和丝聚合蛋白原的示踪。在照片上分析示踪强度（n=15张照片），与针对阴性控制和10-7M处维生素而获得的照片进行对比，用作阳性分化控制。 
表1：在有溶解的磷酸苹果酸脂存在下，人体角质化细胞上中间丝相关蛋白和丝聚合蛋白原的生成 
Figure BDA00001893485400161
维生素D3（10-7M）：+221%（p<0.01） 
使用的阳性控制强烈地诱导细胞中的丝聚合蛋白源和中间丝相关蛋白合成。与此同时，增大溶解磷酸苹果酸脂的浓度以取决于剂量的方式刺激这种生成。与控制样品相比，当存在5ppm的溶解磷酸苹果酸脂时，记录的增量为+259%（p<0.01）。 
3.2-在有溶解的磷酸苹果酸脂存在的条件下，强调外植人体皮肤上中间丝相关蛋白/丝聚合蛋白原合成的增加 
中间丝相关蛋白/丝聚合蛋白原合成已经在外植人体皮肤上得到确认。高度现实的这种模型证实了在单层培养物上获得的结果。 
实验协议：在它们准备后的这天（从脂肪组织上取下），将含5ppm溶解磷酸苹果酸脂的乳剂局部涂抹到直径为8mm的皮肤小块，每天一次，共5天（利用上面第2条中的活性配料制备的乳剂）（n＝3个皮肤小块)。与此同时，将空白对照乳剂涂抹到控制皮肤（n＝3）。应用之后，将皮肤小块固定，冻结，然后使用低温切片机切割。利用与前面相同的抗体，对获得的玻片进行示踪。针对含磷酸苹果酸脂的乳剂获得的荧光中间丝相关蛋白/丝聚合蛋白原标记通过图像分析（n＝30张照片，对于每个案例）进行量化，然后与利用空白对照剂浮剂获得的内容进行比较。 
在第二个系列的实验中，将皮肤小块提前轻轻剥离（4次连续的剥离），以改善活性渗透，然后经历与前面相同的过程。 
结果：照片显示了在涂抹了含溶解磷酸苹果酸脂的乳剂或空白对照乳剂后人体皮肤表皮上层中间丝相关蛋白/丝聚合蛋白原的数量变化。 
表2：由磷酸苹果酸脂诱导的人体皮肤上中间丝相关蛋白和丝聚合蛋白原的生成 
Figure BDA00001893485400171
与接收了空白对照乳剂的皮肤相比，在已经接收了5ppm溶解磷酸苹果酸脂乳剂的皮肤上，观察到中间丝相关蛋白荧光信号的明显增大。 
类似地，剥离皮肤记录的分析结果显示，与控制样品相比，含5ppm溶解磷酸苹果酸脂的乳剂能够将中间丝相关蛋白/丝聚合蛋白原生成刺激到一个相当明显的程度。有趣的是，我们注意到，不论是否使用剥离，利用空白对照剂均获得相同数量的中间丝相关蛋白。因此，通过促进其渗透，化合物应用之前的剥离改善了溶解的磷酸苹果酸脂的效率。 
连同在培养的角质化细胞上进行的一项研究，这两项研究显示，溶解的磷酸苹果酸脂能增加表皮中中间丝相关蛋白/丝聚合蛋白原的数量。 
3.3-半胱天冬酶-14和蛋白裂解酶合成的研究 
这两种酶负责丝聚合蛋白原和中间丝相关蛋白的代谢。 
使用了在示例1.2中披露的方法。 
结果
表3：通过免疫示踪（n=15张照片)，在溶解磷酸苹果酸脂存在的条件下，培养的人体角质化细胞中蛋白裂解酶和半胱天冬酶-14的生成 
Figure BDA00001893485400181
维生素D3（10-7M）：+239%和+571%（p<0.01） 
结果显示，在角质化细胞层中，蛋白裂解酶按照与中间丝相关蛋白类似的模式增加。诱导是明显的，剂量取决于溶解磷酸苹果酸脂的数量，在5ppm时达到+304%。 
利用5ppm的溶解磷酸苹果酸脂，也注意到半胱天冬酶-14合成的诱导（+229%；p<0.01）。与蛋白裂解酶的情况一样，注意到了与中间丝相关蛋白合成增加的平行性。 
因此，可以看出，中间丝相关蛋白形成现象不仅只受溶解磷酸苹果酸脂的促进，而且也受酶的促进；酶在裂开的中间丝相关蛋白上产生湿润组分，也被刺激，而且是以类似的比例。 
3.4-兜甲蛋白合成的研究 
兜甲蛋白是形成角膜被膜的关键因素之一。它通过谷氨酰胺转移酶附着到外皮蛋白上（voir1.1）；谷氨酰胺转移酶能构成刚性的、不溶解的结构。使用了1.2中描述的方法。 
表4：通过免疫示踪（n＝15张照片)，在溶解磷酸苹果酸脂存在的条件下，培养的人体角质化细胞中兜甲蛋白的生成 
Figure BDA00001893485400182
维生素D3（10-7M）：+206%（p<0.01） 
与前面的三种蛋白质一样，也观察到了溶解的磷酸苹果酸脂对兜甲蛋白合成的高度刺激。 
3.5-谷氨酰胺转移酶的转录和活性研究 
对于谷氨酰胺转录酶的研究，是使用通过m-RNA、qRT-PCR的转录和通过酶学分析的活性。 
通过qRT-PCR：将人体角质化细胞放置成与溶解的磷酸苹果酸脂接触/不接触状态，持续14小时。在接触期结束时，停止培养；使用RT-PCR方法，对允许生成谷氨酰胺转录酶-1蛋白质的m-RNA进行定量分析。 
在m-RNA的提取和净化后，使用逆转录酶(RT)技术，在DNA中进行复制。此后，在一系列的放大循环期内，使用专门针对转谷氨酰胺酶的基因和酶的两种寡核苷酸(称为引物)，将给定m-RNA(此处指转谷氨酰胺酶)的副本数量放大(PCR＝聚合链反应)；每个循环期使存在的副本数量增倍。通过荧光来测量这种放大的结果。Ct是达到给定荧光等级(随意设定)所需的循环次数。显然，起始培养物中存在的给定基因的m-RNA越多，达到规定荧光等级所需的循环次数(Ct)越少。 
通过酶学：在14天接触期结束时，将细胞放置成与荧光合成谷氨酰胺转录酶基质相接触。基质通过谷氨酰胺转录酶的新陈代谢将允许胞内蛋白质基体中的固定。漂洗后，未固定的荧光基质被除去，对细胞中被酶固定的荧光进行定量分析。 
表5：在溶解磷酸苹果酸脂存在的条件下，在角质化细胞(n＝5)中，谷氨酰胺转录酶-1m-RNA和谷氨酰胺转录酶活性变异的生成 
Figure BDA00001893485400191
维生素D3(10-7M)： 
Figure BDA00001893485400192
和酶学 
Figure BDA00001893485400193
(p＜0.01) 
*一个Ct单位对应于大约100％的变异。 
**通过《整理内务》基因正常化之后，浓度不变，有或没有溶解的磷酸苹果酸脂。 
这些结果显示，在转录等级(m-RNA)和蛋白质活性等级上，谷氨酰胺转录酶都受到溶解磷酸苹果酸脂的诱导。在两种情况下，增量接近+100％(p＜0,01)。 
此外，DNA-矩阵研究已经显示，在溶解磷酸苹果酸脂存在的条件下，谷氨酰胺转录酶-1和外皮蛋白基因与角化层形成必不可少的其它基因一起在网状结构中过度受压。 
溶解磷酸苹果酸脂对转谷氨酰胺酶合成的诱导完成了对形成皮肤隔层必不可少的蛋白质的这个刺激过程。本发明中值得注意的是，在溶解磷酸苹果酸脂存在的条件下，对这五个各自都对水合作用都至关重要的蛋白质的刺激是同步进行的。 
3.6-磷酸苹果酸脂对复合脂类合成的影响评估 
皮肤由若干层细胞组成，通过各种手段使我们免受外部入侵的伤害。其中的一个主要手段是角质层中的脂质隔层；它是皮肤的最外层，主要包括神经酰胺、胆固醇和脂肪酸，允许皮肤维持其水合作用。我们研究了在培养的人体角质化细胞上，磷酸苹果酸脂对胆固醇和神经酰胺合成的影响。 
-胆固醇（免疫示踪）
在略微富含钙的介质中，将融合状态的培养人体角质化细胞放置成与磷酸苹果酸脂接触，以促进胞间接合的建立，从而改善分化细胞与基本细胞的锚固。在相同介质中执行了阴性控制。在7天接触期后，利用胆固醇特定的荧光法对这个层进行示踪。在照片上分析示踪强度，与利用阴性控制获得的结果进行比较（表6）。 
磷酸苹果酸脂案例的照片显示了在显微镜之下可看到的标记分化的开始。这些细胞联接成大的内聚束，有时就像通过网络一样互相联接起来。利用相同时期的阴性控制样品，没有观察到此现象。 
除了通过免疫示踪的量化分析以外，还使用高性能薄层层析法（简称为HPTLC）进行了胆固醇量化。 
-胆固醇（薄层层析法）
遵照与前面相同的协议；但是，因为仪器探测的局限性，在这种情况下使用了大量的角蛋白。7天后，漂洗这些层，利用溶剂萃取脂质物；然后，使用自动化装置，将它沉积在薄层层析板上。在迁移和探测后，基于在相同板上沉积的标准脂质的范围，对波段进行分析和量化。 
表6：通过免疫示踪和HPTLC法，测量与溶解的磷酸苹果酸脂接触后角质化细胞中胆固醇数量的变化 
Figure BDA00001893485400201
利用两种不同方法获得的这两个结果显示，磷酸苹果酸脂能在角质化细胞分化期间刺激胆固醇的生成。 
-神经酰胺
在HPTLC胆固醇化验的同时，在提取物上执行了对羟基化和未羟基化神经酰胺的化验。 
表7：与溶解磷酸苹果酸脂接触后，通过HPTLC方法测定角质化细胞中神经酰胺数量的变化 
Figure BDA00001893485400211
*：次数。 
这些数据清楚地显示，在它们的分化期间，磷酸苹果酸脂诱导了角质化细胞中胆固醇和各种类型神经酰胺的生成。在成纤维细胞或黑素细胞中，没有观察到磷酸苹果酸脂造成的这种脂质生成。因此，它是在其分化期间与角质化细胞的代谢有关的一种特定效应。 
所有这些信息都清楚地显示，在培养的人体角质化细胞中，磷酸苹果酸脂能触发对水合作用与皮肤隔层的引入和均匀性至关重要的元素的生成。这样，对于充满交联蛋白质基体的角层细胞的生成及其基础脂质的生成而言，多个合成聚集在一起，以创建角质化细胞被膜。中间丝相关蛋白、半胱天冬酶-14和蛋白裂解酶构成了水自动平衡生成的基础；外皮蛋白、兜甲蛋白和谷氨酰胺转录酶是角层细胞形成的关键因素；神经酰胺和胆固醇完成了水-脂质隔层形成的这个概念。 
3.7-透明质酸及其受体CD44的合成 
由于在皮肤弹性中的参与，引用透明质酸的主要作用是它作为皮肤表皮增湿剂和抗皱纹剂的角色。透明质酸存在于基底层和棘层的、主要是中间棘层的胞间空间内，但在上层（颗粒和角质）中不存在。因此，其水合作用角色被定位于表皮的下部层中，和前面提到的位于表皮上部层中的效果不同。 
-人体角质化细胞humains对透明质酸合成的影响
协议：人体角质化细胞是在MW24板中培养了24小时的humains。细胞与磷酸苹果酸脂接触或不接触，持续3天。获取培养物上层清液，实现对透明质酸数量的分析。使用视黄酸作为阳性控制。 
表8：在人体角质化细胞上，磷酸苹果酸脂造成的透明质酸的增加（ELISA）（n＝5） 
Figure BDA00001893485400221
视黄酸（阳性控制）1μM=+190%；p<0.01. 
存在本发明的磷酸苹果酸脂的条件下，观察到了人体角质化细胞中透明质酸合成的取决于剂量的和明显的刺激。 
-角质化细胞对CD44合成的影响
协议：在35mm盒子中，将人体角质化细胞培养到融合。细胞与磷酸苹果酸脂接触或不接触，持续22天。在这个接触期结束时，将细胞固定，使用特定抗体进行CD44的免疫示踪。 
表9：有磷酸苹果酸脂存在时，人体角质化细胞中CD44合成的增加 
Figure BDA00001893485400222
存在本发明的磷酸苹果酸脂的条件下，观察到了角质化细胞CD44取决于剂量的和明显的刺激。 
3.8-人体角质化细胞对层粘连蛋白合成的影响 
层粘连蛋白分子在皮肤-表皮接合（DEJ）的水平上是重要的。它保证基础角质化细胞在基底膜上的合适锚固，负责表皮的柔软性。在老化的细胞中，它不再能象年轻细胞中那样有效地被置换，从而需要刺激生物合成，才能获得改善的更新。 
协议：人体角质化细胞是在MW24板中培养了24小时的humains。细胞与磷酸苹果酸脂接触或不接触，持续3天。获取培养物上层清液，实现对层粘连蛋白数量的分析。使用TGF-β1作为阳性控制。 
表10A：在人体角质化细胞上，磷酸苹果酸脂造成的层粘连蛋白的增加（ELISA）（n＝5） 
Figure BDA00001893485400231
TGF-β1（阳性控制）10-6%=+361%；p<0.01 
存在本发明的磷酸苹果酸脂的条件下，观察到了角质化细胞中层粘连蛋白合成的取决于剂量的和明显的刺激。 
这使得本发明的磷酸苹果酸脂特别好地适用于抗老化，尤其是针对抗皱纹和紧致应用。 
3.9-胶原蛋白I在人体真皮成纤维细胞上的合成 
将正常人体成纤维细胞（NHF）在MW24板中培养24小时。在各种浓度下，细胞与本发明的磷酸苹果酸脂接触或不接触，持续7天。然后，通过在使用特定抗体的层上固定的免疫示踪，量化细胞产生的胶原蛋白I的合成。然后，采用图像分析法，在照片上进行量化。 
使用TGF-β1作为阳性控制。 
对数据进行方差分析（将处理过的案例与未处理的案例进行比较）。对于方差的同一性，然后对平均值进行学生试验。 
结果： 
表10B：成纤维细胞中胶原蛋白I的合成增加（n=15个文件/案例） 
Figure BDA00001893485400232
AFU=任意荧光参数单位 
存在本发明的磷酸苹果酸脂的条件下，观察到了真皮成纤维细胞中胶原蛋白I合成取决于剂量的和明显的刺激。 
这使得本发明的磷酸苹果酸脂特别好地适用于预防和修护皮肤损坏，包括损失皮肤的机械性质（丧失稳固性）、细线和皱纹。 
3.10-磷酸苹果酸脂在脂肪形成方面的研究 
有些化妆用化合物设计用于激励皮下脂肪的安置，以实现较好的美感和较大的体积。从这个角度来看，增加脂肪细胞分化是在体外试验中考虑的，（具有关键标号G3PDH）在前脂肪细胞培养物上；而且类似地，考虑了这些培养物中的脂肪生成刺激。 
-磷酸苹果酸脂对G3PDH活性的影响
协议：将3T3-L1细胞培养到亚融合状态；然后，利用有或没有不同浓度磷酸苹果酸脂的合适混合物，诱导到分化。在3天孵化后，在有或没有磷酸苹果酸脂存在的条件下，将分化混合物替换成新维持的培养介质。在3天孵化后，收集细胞层，化验G3PDH的活性。 
表11：
Figure BDA00001893485400241
吡格列酮（阳性控制）10μM：+593%；p<0.01 
结果显示，前脂肪细胞的分化取决于剂量，受到磷酸苹果酸脂的显著刺激。 
-磷酸苹果酸脂对甘油三酯合成的影响
协议：将3T3-L1细胞培养到亚融合状态；然后，利用有或没有不同浓度磷酸苹果酸脂的合适混合物，诱导到分化。在3天孵化后，在有或没有磷酸苹果酸脂存在的条件下，将分化混合物替换成新维持的培养介质。在3天孵化后，用酶催法测量胞内甘油三酯的数量。
表12：
Figure BDA00001893485400242
吡格列酮（阳性控制）10μM：+174%；p<0.01 
-3T3-L1细胞对脂质掺入的刺激
协议：播种3T3-L1细胞，培养4天（繁殖）。接着是分化阶段（利用经典分化混合物孵化），然后在有或没有不同浓度磷酸苹果酸脂存在条件下的成熟阶段（利用成熟混合物）。这个时期结束时，对细胞进行洗涤、固定，并用油红上色。将细胞层拍摄成数码照片，通过图像分析来量化红色。建立下表中报告的红油的表面百分比，与未处理的控制细胞比较；通过与分化刺激的阳性控制吡格列酮（10μM）进行比较来验证试验。 
表13：
Figure BDA00001893485400251
吡格列酮（阳性控制）10μM：+323%；p<0.01 
结果显示，在前脂肪细胞上，磷酸苹果酸脂以取决于剂量的方式刺激甘油三酯的分化与合成。通过类似于化妆脂肪植入的效应，磷酸苹果酸脂能促进身体体积。 
3.11-黑素生成研究 
协议：播种人体黑素细胞，与磷酸苹果酸脂接触5天。在孵化期结束时，测量细胞匀浆中的残余酪氨酸酶活性。 
表14：与磷酸苹果酸脂接触5天后，人体黑素细胞中酪氨酸酶活性的变化 
Figure BDA00001893485400252
熊果苷（阳性控制）0.03%=-45%；p<0.01 
在磷酸苹果酸脂存在的条件下，观察到了酪氨酸酶活性明显的、取决于剂量的减少。 
因此，本发明的磷酸苹果酸脂对于使皮肤发亮很有用。 
所有这些结果显示，本发明的磷酸苹果酸脂是能够作用于不同水平上的试剂：水合作用，机械性质（稳固性、柔软性），细线和皱纹，给予或恢复真皮的体积，老年斑的褪色等。能够为本发明的化合物宣布这些性质之一，或作为全面抗老化剂。 
4．Galenic（盖伦医学）
下面，使用上述第1条中描述的活性配料（含大约200ppm的磷酸苹果酸脂）来配制化妆品。 
4.1/水合凝胶
Figure BDA00001893485400261
操作规程：
步骤1：称取物相A，不用搅拌，允许它膨胀30分钟。 
步骤2：称取物相B，混合均匀。 
步骤3：然后，将物相B添加到物相A中，混合均匀。 
步骤4：在75°C的水浴中，加热物相A+B。 
步骤5：称取物相C，在75°C的水浴中加热。混合均匀。 
步骤6：称取物相D，混合均匀。 
步骤7：在物相A+B中添加物相C，然后是物相D；搅拌速度v=1000rpm，搅拌均匀。 
步骤8：立即添加预热到60°C的物相E。 
步骤9：然后添加物相F，彻底搅拌均匀。 
步骤10：在55°C左右，添加物相G，彻底搅拌均匀。 
4.2/水合乳剂
操作规程：
步骤1：称取物相A，不用搅拌，允许它膨胀30分钟。 
步骤2：在75°C的水浴中，加热物相A。 
步骤3：称取物相B，混合均匀。 
步骤4：然后，在75°C的水浴中，将物相B添加到物相A中。 
步骤5：称取物相C，在75°C的水浴中加热。混合均匀。 
步骤6：将物相C添加到物相A+B中，搅拌速度v=1000rpm，彻底搅拌均匀。 
步骤7：立即添加预热到60°C的物相D。 
步骤8：然后添加物相E，彻底搅拌均匀。 
步骤9：以35°C以下，利用物相E，将pH值调节到6。 
步骤10：然后添加物相F，彻底搅拌均匀。 
4.3/水合/抗老化乳剂：将本发明的化合物磷酸苹果酸脂（主要考虑其水合性质）和 活性物质（由Applicant公司销售，考虑其抗老化性）进行组合。 
Figure BDA00001893485400282
将巩固本发明化合物的抗老化性。 
Figure BDA00001893485400283
是钙α-羟基蛋氨酸和高牛磺酸的共生体。 
Figure BDA00001893485400284
Figure BDA00001893485400291
操作规程：
步骤1：将Ultrez 10喷洒到水中，允许它膨胀30分钟。 
步骤2：在75°C的水浴中加热物相A。 
步骤3：称取物相B，彻底混合。在75°C的水浴中，将物相B喷洒到物相A中，搅拌速度v=300rpm。允许它均匀30分钟。 
步骤4：称取并混合物相C。在75°C的水浴中，将物相C添加到物相A+B中。 
步骤5：称取物相D，在75°C的水浴中加热。 
步骤6：将物相E添加到物相D中。 
步骤7：在水浴外面，将物相D+E倒入物相A+B+C中，搅拌速度v=1000rpm。 
步骤8：立即添加物相F。 
步骤9：通过调节pH值，利用物相G缓慢地中和，允许它膨胀1小时。 
步骤10：在35°C以下，检查pH=+/-6.00。 
步骤11：将物相H添加到前一物相中，彻底混合。 
步骤12：将物相I添加到前一物相中，混合均匀。 
4.4/稳固/水合抗老化乳剂：将本发明的化合物（主要考虑其水合性质）和 
Figure BDA00001893485400292
活性物质（由Applicant公司销售，考虑其稳固/抗松驰性质）进行组合。 
Figure BDA00001893485400293
含有脂二肽N-乙酰基-酪氨酰-精氨酰-O-十六烷基酯。它是能够刺激弹性纤维合成的活性物质，在面部皮肤上具有抗重力效应。脂肽也以其镇静和抗肌肉松驰性质而著名。 
Figure BDA00001893485400294
操作规程：
步骤1：将卡波姆分散到水中，搅拌速度v=300rpm。允许它膨胀1小时。 
步骤2：混合物相B。 
步骤3：然后，将物相B添加到物相A中。混合均匀。加热。 
步骤4：称取物相C，混合，在75°C的水浴中加热。 
步骤5：将物相D添加到前一物相中。 
步骤6：将物相E添加到物相A+B中。 
步骤7：将物相C+D添加到物相A+B+E中，搅拌速度v=300rpm。 
步骤8：然后，将物相F添加到前一物相中，搅拌速度v=300rpm。允许它均匀1小时。 
步骤9：利用物相G中和，搅拌速度v=500rpm，温度约50°C。 
步骤10：然后在55°C左右添加物相H，彻底搅拌均匀。 
5．水合作用的体内评估结果
原理：为了展示本发明的磷酸苹果酸脂化合物的体内功效，在两个学科小组上进行了研究：一个女性小组，一个男性小组。 
在这个研究过程中，联合了若干种互补的方法： 
-通过刺激天然湿润剂的合成，研究皮肤水合作用的改善： 
Figure BDA00001893485400302
和Moisturemeter-DTM；对一个星期后的剩余影响进行研究。 
-通过测量 
Figure BDA00001893485400311
上的透皮水损失（TEWL）、并通过监视润湿力，评估保护隔层的自动平衡的改善。 
-通过化验半胱天冬酶-14和甘油，评估水均匀性过程的改善。在胶粘剂上的体外方法。 
协议： 
专门针对此研究的包括与排除准则：包括了具有干性皮肤、或皮肤容易干燥的女人和男人。在试验前的3个月和试验期间，女人必须呈现持续的激素水平。研究期间只使用专供的化妆品。因此，在研究前两个星期内和研究期间，禁止治疗应用。 
研究类型和持续时间：使用非侵入方法对比空白对照剂点，在单盲之下进行了两次研究；因此，志愿者充当他自己的控制样品。 
-第一次是21天的短期研究，在17名志愿者身上进行（平均年龄44岁[19到61岁]）。 
-第二次为期2个月的较长研究，在38名志愿者身上进行（平均年龄47岁[19到68岁]）。 
给每个试验小组分发上面示例4.2中的乳剂、及其各自的空白对照乳剂；将这些乳剂按摩到脸的一侧，每天两次，持续规定的天数。 
对于 
Figure BDA00001893485400312
和润湿性试验，将乳剂涂抹到小臂上，将空白对照乳剂涂抹到另一侧手臂上。 
研究大纲可按照下图汇总： 
T0： 
Figure BDA00001893485400313
MoisturemeterTM， 
Figure BDA00001893485400314
皮肤润湿性； 
T21天： 
Figure BDA00001893485400315
MoisturemeterTM； 
T2月： 
Figure BDA00001893485400316
MoisturemeterTM， 
Figure BDA00001893485400317
皮肤润湿性； 
T2月+1星期： MoisturemeterTM。 
-水合作用的评估
使用两台互补装置来记录对水合作用的测量： 
Figure BDA00001893485400319
CM825（Courage&Khazaka公司）和MoistureMeter-DTM（Delfin公司）。两台装置均使用皮肤的电气性质，记录与皮肤水含量直接相关的阻抗测量。它们提供皮肤各个深度上的信息。 
在这些技术的每一个中，记录的信号随深度非常快速的减小。因此，角质层和浅层表皮主要利用 
Figure BDA000018934854003110
进行探讨；此仪器理论上能记录到100μm的最大深度。与此类似，浅层表皮和深层表皮倾向于利用MoistureMeter-DTM（探头XS5）进行探讨；尽管此仪器具有的理论最大深度是500μm。 
首先进行第一次测量，以评价磷酸苹果酸脂在脸上的重新构造和重新平衡效应。 
在最后一次涂抹之后一晚上，获取21天后的测量值。表15显示只在21天应用之后含磷酸苹果酸脂的乳剂与空白对照乳剂对比的显著影响。 
表15：在面部涂抹了含磷酸苹果酸脂的乳剂之后皮肤均匀性的改善，利用 
Figure BDA00001893485400321
测量。（在N=17志愿者上记录的平均值，n=3次测量/志愿者） 
Figure BDA00001893485400322
*：最大：9个最好反应者的平均值 
nsd：不明显的差值；学生试验 
利用 
Figure BDA00001893485400323
测量，对于含磷酸苹果酸脂乳剂的区域和空白对照乳剂区域之间的平均值（p<0.04），面部前几层角质层的水合作用变化明显地达到13.1%；对于9个最好反应者，这个差异达到+44,6%。 
在利用含本发明磷酸苹果酸脂的乳剂处理过过的面部一侧，利用MoistureMeter-DTM也记录到了水合作用的明显增加；这种增加值几乎为17%（p<0.05，与空白对照剂对比），而9个最好反应者的差异达到+44.0%。 
表16：在面部涂抹了含本发明磷酸苹果酸脂的乳剂后，利用MoistureMeter-DTM测量的皮肤均匀性改善（N=17名志愿者的平均值，n＝3次测量/志愿者) 
Figure BDA00001893485400324
Figure BDA00001893485400331
*：最大：9个最好反应者的平均值 
nsd：不明显的差值；学生试验 
对于两个月的长期研究，与前面一样，在最后一次涂抹之后一晚上进行测量。利用 获得的结果证明了已经利用短期研究获得的积极趋势；还有，这些结果显示，与空白对照剂相比，在涂抹本发明乳剂的一侧，面部的平均水合作用明显增大。 
这样，对于作为整体的试验小组（N＝38），T0和T2月之间的增加达到+30.4%的数量级；与这个间隔内没有变化的空白对照剂相比，这个增加非常明显（p<0.01）。对于19个最好反应者，这种差异达到+58.0%。 
特别值得注意的是，男性小组的结果显示，T0和T2月之间的平均增加为+38.4%（p<0.01，与空白对照剂相比；表17）。对于9个最好反应者，这个差异达到+59.0%。 
表17：在面部涂抹了含本发明磷酸苹果酸脂的乳剂后，利用 
Figure BDA00001893485400333
测量的皮肤均匀性改善（N=38名志愿者的平均值*，包括16名男性 
Figure BDA00001893485400334
n=3次测量/志愿者） 
*N＝38；nsd：不明显的差值；学生试验 
→最大：最好反应者的平均值 
为了补充这个结果，利用MoistureMeter-DTM在更大深度上实现的测量值显示了类似的倾向。事实上，利用含磷酸苹果酸脂的乳剂，面部的水合作用在整个试验小组上都明显增加（+28.6%；p<0.01）。对于19个最好反应者，这种差异达到+48.5%。 
和前面一样，与变化不明显的空白对照剂相比，此处在男性身上的增加也比较大（+34.3%；p<0.01）。对于9个最好反应者，这个差异达到+53.6%（表18）。 
表18：在面部涂抹了含本发明磷酸苹果酸脂的乳剂后，利用MoistureMeter-DTM测量的皮肤均匀性改善（N=38名志愿者的平均值，包括16名男人 
Figure BDA00001893485400341
n=3次测量/志愿者） 
Figure BDA00001893485400342
*N=38；不明显的差值；学生试验 
→最大：最好反应者的平均值 
这些结果清楚地显示，利用本发明含磷酸苹果酸脂的乳剂，在21天时观察到的趋势在2个月后得到强化。正如水合作用协议中所示，在最后一次应用后一晚上，志愿者的皮肤均匀性提高。 
因此，表皮看起来已经获得增湿或湿润剂的储液囊；它们没有链接到乳剂的组合物上，因为在空白对照剂侧未观察到变化。 
-残余效果研究
在最后一次应用后一星期，记录了对部分志愿者试验人员的新测量值（n＝27名志愿者，16个女性，11个男性）。利用 
Figure BDA00001893485400343
和MoistureMeter-DTM获得的结果显示，与空白对照剂相比，在用含本发明磷酸苹果酸脂的乳剂处理过的部位上，记录的抗干燥能力明显增强（表19和20）。 
表19：停止应用一星期后，面部皮肤均匀性改善的残余，利用 
Figure BDA00001893485400344
测量。（N=27名志愿者的平均值，n=3次测量/志愿者） 
Figure BDA00001893485400351
（）*：1/2试验小组=14个最好反应者。 
表20：停止应用一星期后，面部皮肤均匀性改善的残余，利用MoistureMeter-DTM测量。（N=27名志愿者的平均值，n=3次测量/志愿者） 
Figure BDA00001893485400352
（）*：1/2试验小组=14个最好反应者。 
结果显示，在停止应用一星期后，本发明的含磷酸苹果酸脂的乳剂触发了非常有趣的残余效应。皮肤水合作用从而维持在一个高水平（+23%，p<0.01在试验小组的所有志愿者身上；+35%（p<0.01），试验小组中的一半）。 
-评估水脂质隔层的均匀性
从2个不同的角度，评价隔层的强化： 
-在隔层中的剥离诱导的破裂之后，通过测量透皮水损失，对隔层进行动态评估。 
-通过测量其润湿性，对隔层进行外观评估 
TEWL测量
水脂质皮肤隔层的建立和维持对于器官来说至关重要。在下面报告的分析中，评估在通过重复剥离而触发的破裂之后这个隔层的重新建立。 
在T0天，使用具有密室的装置 
Figure BDA00001893485400361
（Delfin），测量小臂的透皮水损失（简称为TEWL）。然后，以受控方式进行一系列的剥离，以尝试轻微地破坏隔层均匀性。在稳态下，测量TEWL中的破坏引起的增加。此方法允许评估隔层的抵抗力。 
在涂抹了本发明含磷酸苹果酸脂的乳剂或空白对照乳剂后，遵照与在T0上使用的完全相同的协议。这便于评估抵抗力的潜在改善。 
表21：均匀性中断后TEWL中的平均增加（在N=38名志愿者身上记录的平均值，n=3次测量/志愿者）。 
Figure BDA00001893485400362
*剥离破裂之前和之后TEWL的平均差值。 
**100x（空白对照剂-本发明的乳剂）/空白对照剂；nsd：不明显的差值；学生试验 
在应用了本发明乳剂的部位和应用了空白对照剂的部位，观察到T0的破坏使TEWL增加大约6.5个单位（即均匀性破裂）。与之相反，在2个月的处理后，反应差异非常大，取决于所试验的产品。 
·对于空白对照剂来说，均匀性的破裂与T0时相比不明显，主要是由于按摩效应，但TEWL的增加仍然高（3.40个单位）；即，与T0相比有2.96个单位的差异。 
·利用本发明含磷酸苹果酸脂的乳剂，T2月的破坏只导致均匀性的轻微破裂（1.70个单位），与T0相比的增益为5.03。两种情况之间的差异非常大，有利于本发明的乳剂。本发明的乳剂使隔层改善+54.2%（p<0.01）。 
润湿性测量
通过测量皮肤润湿性，能获得对皮肤隔层条件的初始测量。皮肤上沉积的一滴水与皮肤相互作用的方式会截然不同；这取决于隔层的条件，从而也就是取决于组合物。 
从物理-化学的观点来看，如果皮肤是憎水性的（干燥，过敏性皮肤，由于肥皂造成脂质枯竭），皮肤上沉积的一滴水将只会轻微扩散。我们将其润湿性称为差。与之相反，角质层质量的改善能改善皮肤的润湿性。 
使用这个性质，我们以可再现的方式将一微滴水（10μL）沉积到皮肤上，使用视频显微镜（Scalar）和图像分析软件测量其扩散能力。虽然不完善，原因是它没有接触角测量那么详细，同样也不太准确，但是，测量水滴在皮肤上占据的表面积仍然是皮肤润湿性的良好指示。 
表22：应用了本发明含磷酸苹果酸脂的乳剂后，小臂上水滴润湿性的平均变化（在N=37名志愿者身上记录的平均值，n=3次测量/志愿者）。 
Figure BDA00001893485400371
nsd：不明显的差值；学生试验 
如结果所示，在用含磷酸苹果酸脂的乳剂处理过的部位，水滴占据的表面积明显地增加了+33.9%（p<0.05），从而指示较好的润湿性。这表明水脂质膜较厚。空白对照剂部位也呈现出润湿性增大，但不明显。空白对照乳剂很可能会给角质层的外面几层提供某些软化性，这影响了润湿性结果。 
-评估湿润剂的均匀性
通过测量利用剥离获得的两个关键因素，评估角质层内部较好平衡的恢复： 
-评估半胱天冬酶-14的活性， 
-评估内源代谢甘油的生成。 
由于需要收集大量样品（剥离），所以这些评估只在由15名男性志愿者组成的试验小组身上进行。 
半胱天冬酶-14分析
在体外部分，我们看到本发明的磷酸苹果酸脂在培养的角质化细胞和重建表皮中诱导了基因压缩和半胱天冬酶-14合成。我们已经开发了一种原始方法，用于化验从志愿者小臂上收集到的试片上这种酶的活性。这些试片（总共6 
Figure BDA00001893485400381
）在中性pH缓冲溶液中经历萃取。然后，将此溶液放置成与通过半胱天冬酶-14开裂的合成基质相接触；使用荧光记录器，记录此过程产生的荧光。 
表23：分析从小臂上剥离的试片提取的半胱天冬酶-14的活性（N=15名志愿者的平均值，6个试片/志愿者） 
Figure BDA00001893485400382
nsd：不明显的差值；学生试验 
这些结果显示，与空白对照剂侧相比，在用含磷酸苹果酸脂的乳剂处理过的一侧，半胱天冬酶-14的活性平均增加了+34.8%（p<0.02）。 
上部几层角质层中这种活性的增加证实了在分子生物学和免疫荧光中观察到的这种酶生成的增加。 
内源代谢甘油分析
平行于半胱天冬酶-14分析，我们使用相同的提取物，评估应用本发明含磷酸苹果酸脂的乳剂或空白对照乳剂之前与之后上层表皮中存在的甘油数量。本方法允许化验游离甘油；这得益于酶反应的级联，最终给出着色反应，在540nm下对它进行化验。 
表24：分析从小臂上剥离的试片提取的甘油（在N=15名志愿者身上记录的平均值，6个试片/志愿者） 
nsd：不明显的差值；学生试验 
这些结果显示，与空白对照剂侧相比，在用含磷酸苹果酸脂的乳剂处理过的一侧，角质层中发现的甘油数量平均增加了+328%(p<0.01）。 
探测到的数量与文献中报导的数量一致。 
对于皮肤水合作用至关重要的这个组分的增加关系到分子生物学中观察到的LIPE脂肪酶的引入，这就是我们已知的角质化细胞中的水解三酰基甘油、单-和双-甘油酯、以及胆固醇酯；因此，这种脂肪酶将允许细胞中的甘油盐析，以及它在角层细胞中的随后积累。 
在涂抹了含磷酸苹果酸脂的乳剂或空白对照乳剂的志愿者身上记录的所有这些结果显示，通过促进对于皮肤中水均匀性至关重要的化合物的合成，含磷酸苹果酸脂的乳剂能提高皮肤的水均匀性。因此，中间丝相关蛋白及其关键的酶（比如半胱天冬酶-14）为细胞提供了其蛋白质起源的湿润剂。还有，能够使复合脂类增加，比如神经酰胺或胆固醇；它们的作用是建立隔层机能。最后，多核细胞内甘油（具有强烈增湿性的组分）的提高完成这个过程。 
Figure IDA00001893485900031

Claims (20)

1.一种化合物，其特征在于，具有下列通用分子式IX：
式中：
X=PO（OH）2；SO2（OH）；PO（OH）（Xaa）m或SO2（Xaa）m；
A=H；OH；NH2或akyl（1-6C）；
n=1到4；
Y=-CO-OR2；-CO-NR3P；-O-CO-R2；-C＝CR2；
R2=具有1到24个碳原子的烷基、芳基、芳烷基、酰基、磺酰基、糖或烷氧基链，可以是直链、支链或环链，有或没有取代基，饱和或不饱和，羟基化或未羟基化，硫化或未硫化；
R3和R4相互独立，可以是氢原子或R2链；
R5=OH，O-alk（1-6C），（Xaa）m，NH2或NH-烷基（1-6C）；
Xaa=m个氨基酸的肽Xaa，m从1到10；
2.依据权利要求1所述的化合物，具有下列研制分子式I：
Figure DEST_PATH_FDA00002212870800012
式中：
X=PO（OH）2或SO2（OH）
R5=OH
A=H
Y=-CO-Ri，其中Ri=OR2或NR3R4
3.依据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R1=OR2。
4.依据权利要求2或3所述的化合物，其特征在于，R2是具有至少4个碳原子的烃链。
5.依据权利要求1到4中任意一项所述的化合物，其特征在于，X=PO（OH）2。
6.依据权利要求1到5中任意一项所述的化合物，其特征在于，n=1。
7.依据权利要求1到6中任意一项所述的化合物，其特征在于，它是从苹果酸、或其衍生物或类似物之一获得的。
8.依据权利要求1到7中任意一项所述的化合物，具有下列研制分子式VI： 
Figure DEST_PATH_FDA00002212870800021
其中n=1，X=PO（OH）2，R1=OC14H29（磷酸苹果酸脂）。
9.依据权利要求1所述的化合物，其特征在于，X=PO（OH）（Xaa）m和/或R5=（Xaa）m。
10.一种组合物，其特征在于，其在生理上可接受的介质中包含了依据权利要求1到9中任意一项所述的化合物。
11.依据权利要求10所述的组合物，其特征在于，目的是供局部使用，以改善皮肤的总体条件。
12.依据权利要求11所述的组合物，其特征在于，用于预防或处理皮肤老化痕迹。
13.依据权利要求11或12所述的组合物，其特征在于，用于预防或处理皮肤脱水。
14.依据权利要求11到13中任意一项所述的组合物，其特征在于，用于预防或处理细线和皱纹。
15.依据权利要求11到14中任意一项所述的组合物，其特征在于，用于预防或处理稳固性损失。
16.依据权利要求11到15中任意一项所述的组合物，其特征在于，用于改善皮肤的柔软性。
17.依据权利要求11到16中任意一项所述的组合物，其特征在于，用于刺激脂肪组织的膨胀。
18.依据权利要求11到17中任意一项所述的组合物，其特征在于，用于使皮肤发亮。
19.依据权利要求11到18中任意一项所述的组合物，其特征在于，它包含至少一种附加的化妆品活性物质；其选择范围是：发亮，防发红，遮光剂，增湿，湿润剂，脱皮，抗老化，抗皱纹和细线，刺激胶原蛋白和/或弹性蛋白合成，变丰满，弹性改善，防痤疮，消炎药，抗氧化剂，抗自由基，或色素原脱色剂，脱毛剂，防再次生长或促进生长剂，肽，维生素等。
20.依据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述的附加的化妆品活性物质选择自：维生素化合物，尤其是维生素B3化合物，例如烟酰胺或生育酚，类维生素A化合物，例如松香油，hexamidin，a-硫辛酸，白藜芦醇，DHEA或N-乙酰基-Tyr-Arg-O-十六烷基，Pal-VGVAPG（序列标识号：7），Pal-KTTKS（序列标识号：8），Pal-GHK，Pal-KMO2K和Pal-GQPR（序列标识号：9）肽。 
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